内参基因1
关于内参基因的选择
关于内参基因的选择展开全文关于内参基因的选择实验内参，即是在检测细胞内分子表达变化时选择的参照物，其在细胞内的表达相对恒定，在处理因素作用条件下不会发生表达改变的基因。
内参同样可以校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
1、管家基因最普通的内参是内源性参照基因，也就是管家基因（持家基因，house keeping gene）。
管家基因是一类始终保持着低水平的甲基化并且一直处于活性转录状态的基因，高度保守并且在大多数情况下持续表达。
其表达水平受环境因素影响较小，而且是在个体各个生长阶段的大多数，或几乎全部组织中持续表达，或变化很小，因此常存在于生物细胞核的常染色质中。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因维持细胞最低限度功能所不可少的基因, 如编码组蛋白基因、编码核糖体蛋白基因、线粒体蛋白基因、糖酵解酶的基因等。
这类基因在所有类型的细胞中都进行表达，因为这些基因的产物对于维持细胞的基本结构和代谢功能是必不可少的。
部分人类管家基因列表2、内参基因选择的条件1、不存在假基因，以免基因组DNA的扩增；2、高度或中度表达，避免太高或太低的丰度；3、稳定表达于不同类型的细胞和组织中，表达量无明显差异；4、表达水平与细胞周期、活化等无关；5、不受外源性或内源性因素的影响。
3、不同管家基因在选择管家基因作为内参时，首先要按不同类型的分子选择正确的内参。
曾看到有人用检测miRNA时选择了GAPDH作为内参呢。
a、检测mRNA时的内参通常使用的是GAPDH、beta-actin、tubulin•GAPHDGAPDHGAPDH是糖酵解反应中的一个酶，由4个30－40kDa的亚基组成，分子量146kDa。
该酶基因为管家（house keeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提total RNA，poly(A)+ RNA，Western blot等实验操作的标准化的内参。
qPCR 内参基因选择
7.Haas M J, Plazarte M, Chamseddin A, et al. Inhibition of hepatic apolipoprotein AI gene expression by histamine[J]. European journal of pharmacology, 2018, 823: 49-57.
乳腺癌转BPI基因研究中，qPCR选择了18S rRNA作内参，而Western blot选择了GAPDH为 内参
➢内参基因使用示例 文献3
材料： 1. 人结肠癌组织 2. 人正常结肠粘膜组织 3. EGFR敲除和野生小鼠
小鼠结肠癌表皮生长因子下调miRNA的研究中，qPCR和weatern都选择β-actin作为内参 基因
5. Xu H, Bionaz M, Sloboda D M, et al. The dilution effect and the importance of selecting the right internal control genes for RT-qPCR: a paradigmatic approach in fetal sheep[J]. Bmc Research Notes, 2015, 8(1):1-15.
1rtpcr和qpcr实验内参基因选择内参基因概念和作用内参基因的选择参考示例目录加入标题入标题加入标题内参即为内部参照内参基因则是在检测目的基因从dna到mrna表达过程中可用来当作参照的基因
内参基因的概念
内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录PCR也和传统的mRNA定量方法如Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因DNA的扩增; 2,高度或中度表达，排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
内参基因的概念和作用.doc
内参基因的概念和作用内参即是内部参照 ,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定 ,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差 ,保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差 ,这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达 ,其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小 ,而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达 ,或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响 ,而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达 ,因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因 ,在细胞内组成稳定性表达 ,有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene) ,以避免基因 DNA的扩增; 2,高度或中度表达 ,排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞) ,而且其表达量是近似的 ,无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响 ,如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷 ,在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
内参基因_精品文档
内参基因摘要：内参基因是一类在基因表达研究中被广泛应用的基因，它们在细胞中的表达不受外界条件和实验干扰的影响，并在分析基因表达水平时被用作参照基因。
本文将介绍内参基因的定义、特点和选择方法，并讨论其在基因表达研究中的重要性和应用前景。
第一部分：引言内参基因是指在特定细胞或组织中表达稳定且没有明显变化的基因，它们的表达水平被广泛应用于基因表达研究的标准化和比较。
与实验条件和处理无关，内参基因在基因表达分析过程中能提供一个相对稳定的参照点，从而减小实验误差。
在过去的几十年中，内参基因已成为基因表达研究中不可或缺的重要因素。
第二部分：内参基因的特点1. 表达稳定性：内参基因的表达水平相对稳定，不受外界条件和实验干扰的影响。
这使得内参基因成为一个可靠的参照标准。
2. 丰度适中：内参基因的表达水平应适中，既不能太高，也不能太低。
如果表达水平过高，会导致内参基因的扩增曲线过早饱和，影响定量结果的准确性。
3. 表达均匀性：内参基因的表达在不同样本中应该是均匀的。
这意味着在不同组织或条件下，内参基因的表达水平不会发生明显的变化。
第三部分：内参基因的选择方法内参基因的选择是基因表达研究中的一个关键环节。
目前常用的方法包括基于文献综述、生物信息学分析和实验验证等。
以下是一些常用的内参基因选择方法：1. 综合评估：通过综合考虑内参基因的表达稳定性、丰度适中性和表达均匀性等因素，从候选基因中筛选出最适合的内参基因。
2. 基因表达稳定性分析：利用统计学方法，比较多个候选内参基因的表达数据，选取具有最小变异的基因作为内参基因。
3. 基因表达数据库：利用公开的基因表达数据库，比如GEO数据库和TCGA数据库，分析不同基因在不同样本中的表达水平，选择表达稳定的基因作为内参基因。
4. 实验验证：通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）或实时定量PCR等技术，验证候选基因的表达稳定性和适用性。
第四部分：内参基因的应用前景内参基因在基因表达研究中的应用前景广阔。
鼠李糖乳杆菌内参基因
鼠李糖乳杆菌内参基因
鼠李糖乳杆菌内参基因是一种常用的内参基因，它在基因表达研究中具有重要的作用。
内参基因是指在实验中不受处理影响，表达稳定的基因，用于标准化实验结果，以消除实验误差。
鼠李糖乳杆菌内参基因的选择是基于其在不同条件下表达稳定的特性。
鼠李糖乳杆菌是一种革兰氏阳性菌，广泛存在于自然界中。
它是一种重要的乳酸菌，可以用于制作酸奶、酸乳等乳制品。
鼠李糖乳杆菌内参基因的选择是基于其在不同条件下表达稳定的特性。
研究表明，鼠李糖乳杆菌内参基因gyrB、rpoB、recA、atpD、ldh等在不同条件下表达稳定，可以作为内参基因使用。
在基因表达研究中，内参基因的选择非常重要。
如果选择不当，会导致实验结果的误差，影响实验的可靠性和准确性。
因此，在选择内参基因时，需要考虑多个因素，如基因表达稳定性、表达水平、特异性等。
鼠李糖乳杆菌内参基因的选择是基于其在不同条件下表达稳定的特性，可以保证实验结果的准确性和可靠性。
总之，鼠李糖乳杆菌内参基因是一种常用的内参基因，具有表达稳定的特性，在基因表达研究中具有重要的作用。
在选择内参基因时，需要考虑多个因素，以保证实验结果的准确性和可靠性。
RT-PCR的内参基因
RT-PCR的内参基因RT-PCR（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）是一种常用于检测RNA 分子的技术方法。
在进行RT-PCR实验时，为了准确测量目标基因的表达水平，通常需要选择一个合适的内参基因作为参照。
内参基因是在不同条件下表达稳定的基因，其表达水平相对不会受到实验条件和样本差异的影响，因此可以作为一个相对稳定的标准来校正目标基因的表达水平。
内参基因的选择是RT-PCR实验中一个非常关键的步骤。
一般来说，内参基因应满足以下几个条件：1.广泛表达：内参基因应在所研究的样本中广泛表达，以确保其在不同条件下的表达水平相对稳定。
此外，内参基因的表达水平还应适中，不过高也不过低，以便在实验中能够得到可靠的PCR信号。
2.稳定表达：内参基因的表达水平不应受到实验条件和样本差异的影响。
可以通过文献综述和实验验证来确定内参基因的稳定性。
常用的内参基因包括GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）、β-actin、18S rRNA等。
3.没有相关性：内参基因与目标基因之间应尽量没有相关性，以避免内参基因的表达水平受到目标基因表达的影响。
为了评估目标基因和内参基因之间的相关性，可以使用统计学方法分析它们的表达水平之间的关系。
在选择内参基因时，还应避免使用过多的内参基因。
过多的内参基因可能会增加实验的复杂性，并且在数据分析中会带来更多的变量。
一般来说，使用2-3个合适的内参基因就可以获得较为可靠的结果。
此外，为了验证所选择的内参基因在实验条件下的稳定性，还应进行合适的实验控制。
例如，可以比较不同处理组的内参基因表达水平，或者在同一组样品中进行RT-PCR 实验的重复。
通过这些控制实验，可以评估内参基因的表达水平是否受到实验条件的影响。
总之，选择合适的内参基因是进行RT-PCR实验中一个至关重要的步骤。
常见内参基因
常见内参基因Prepared on 21 November 2021β-ActinActin即“肌动蛋白”，是的一种重要骨架蛋白。
同时Actin在细胞分泌、吞噬、β-Actin移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。
Actin在不同物种之间高度保守，以至于很难获得较好的针对actin的抗血清。
Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，包括α-skeletalmuscleactin，α-cardiacmuscleactin，α-smoothmuscleactin，和γ-smoothmuscleactin；其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin(β-non-muscle)和γ-non-muscleactin。
不同的actin之间同源性大于90%，但在N-terminal同源性仅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的。
β-Actin是肌纤维中的一种主要成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。
具有收缩功能，分布广泛。
β-Actin用途β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是WesternBlot很好的内参指数。
内参即是内部参照（InternalControl），对于表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。
它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）等。
因此β-Actin抗体、β-Tubulin 抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。
β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。
Beta-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
关于内参基因的选择
关于内参基因的选择实验内参，即是在检测细胞内分子表达变化时选择的参照物，其在细胞内的表达相对恒定，在处理因素作用条件下不会发生表达改变的基因。
内参同样可以校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
1、管家基因最普通的内参是内源性参照基因，也就是管家基因（持家基因，house keeping gene）。
管家基因是一类始终保持着低水平的甲基化并且一直处于活性转录状态的基因，高度保守并且在大多数情况下持续表达。
其表达水平受环境因素影响较小，而且是在个体各个生长阶段的大多数，或几乎全部组织中持续表达，或变化很小，因此常存在于生物细胞核的常染色质中。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA 聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因维持细胞最低限度功能所不可少的基因, 如编码组蛋白基因、编码核糖体蛋白基因、线粒体蛋白基因、糖酵解酶的基因等。
这类基因在所有类型的细胞中都进行表达，因为这些基因的产物对于维持细胞的基本结构和代谢功能是必不可少的。
2、内参基因选择的条件1、不存在假基因，以免基因组DNA的扩增；2、高度或中度表达，避免太高或太低的丰度；3、稳定表达于不同类型的细胞和组织中，表达量无明显差异；4、表达水平与细胞周期、活化等无关；5、不受外源性或内源性因素的影响。
3、不同管家基因在选择管家基因作为内参时，首先要按不同类型的分子选择正确的内参。
曾看到有人用检测miRNA时选择了GAPDH作为内参呢。
a、检测mRNA时的内参通常使用的是GAPDH、beta-actin、tubulinGAPHDGAPDHGAPDH是糖酵解反应中的一个酶，由4个30－40kDa的亚基组成，分子量146kDa。
该酶基因为管家（house keeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提total RNA，poly(A)+ RNA，Western blot等实验操作的标准化的内参。
内参基因筛选原理
内参基因筛选原理
内参基因是一种普遍存在于各种生物中的基因，其主要作用是参与细胞内基本代谢和生命活动过程。
在基因筛选中，内参基因往往被用作参照基因，以确保实验结果的准确性和可靠性。
内参基因筛选原理主要包括以下几个方面：
1. 选择稳定表达的基因：内参基因的表达水平应该相对稳定，
不受实验条件和处理影响，以确保筛选结果的可靠性和精度。
2. 确定表达水平：通过实时荧光定量PCR等技术，可以对内参
基因的表达水平进行定量分析，以确定其表达水平的稳定性和可靠性。
3. 比较不同内参基因的表达：在实验中，可以选择多个内参基因，比较其表达水平的差异和稳定性，以确定最适合的参照基因。
4. 优化实验条件：在实验中，应该尽可能控制各种因素的干扰，如反应体系、反应温度、酶浓度等，以确保内参基因的表达水平稳定、准确。
5. 验证筛选结果：在选择内参基因后，还需对其进行验证，以
确保其表达水平的稳定性和可靠性，避免在实验中产生误差和偏差。
总之，内参基因筛选的原理是通过选择稳定表达的内参基因，确定其表达水平的稳定性和可靠性，并优化实验条件，最终确定最适合的参照基因，以确保实验结果的准确性和可靠性。
- 1 -。
内参基因的概念和作用教学内容
内参基因的概念和作
用
内参基因的概念和作用
内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中，实时反转录PCR也和传统的mRNA 定量方法如Northern b lot 技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和cDNA 用量，弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别，使不同样本之间目的基因的比较成为可能，以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因，也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes) 生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
内参基因的概念
内参基因的概念 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因 DNA的扩增; 2,高度或中度表达，排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
内参基因的概念和作用(精)
内参基因的概念和作用内参即是内部参照,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差,这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因:又称持家基因(house-keeping genes生物体各类细胞中都表达,其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小,而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达,或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA 聚合酶相互作用的影响,而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达,因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因,在细胞内组成稳定性表达,有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件:1, 不存在假基因(Pseudogene,以避免基因DNA的扩增; 2,高度或中度表达,排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞,而且其表达量是近似的,无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响,如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现:这些常用内参基因均存在缺陷,在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
内参基因的概念
内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因 DNA的扩增; 2,高度或中度表达，排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
荧光定量pcr内参基因
荧光定量pcr内参基因
荧光定量PCR是一种常用的分子生物学技术，常用于测量目标
DNA的含量。
在PCR反应中使用内参基因来标准化目标基因的表达是
很重要的，因为它可以消除反应的效率差异和不同样品之间的差异性。
内参基因也被称为参比基因或标准基因，它们是稳定表达的基因，其
表达量在各个细胞和组织中基本不变。
通过选择一个稳定的内参基因，可以确保PCR反应的可靠性和准确性。
以下是一些常用的荧光定量PCR内参基因：
1. GAPDH：糖酵解途径中的酶，参与氧化糖分解过程，在多个细胞和
组织中表达水平稳定。
2. β-actin：负责细胞的细胞骨架形态维持，在多个细胞和组织中表达水平稳定。
3. 18S rRNA：核糖体组成部分之一，在不同种类的细胞和组织中表达
水平相对稳定。
4. HPRT：鸟嘌呤磷酸核苷酸转移酶，参与细胞DNA合成，在多个细
胞和组织中表达水平稳定。
5. Cyclophilin A：负责细胞免疫应答和蛋白质折叠，在不同种类的细胞
和组织中表达水平相对稳定。
选择合适的内参基因并进行相关实验前，需要充分了解目标基因和研究细胞/组织的特点。
同时，还要确定一个高质量的RNA样品并进行RNA纯化和浓度测定等步骤。
只有这样，荧光定量PCR才能提供可靠准确的分析结果。
基因组内参基因
基因组内参基因基因组是生物体最基本的遗传结构，其中记录着特定生物体所有进化过程中积累的特有信息。
它构成了生物体的遗传因子，负责控制和调节其生长发育、新陈代谢、受累过程和表型变化等等。
在基因组中有一类重要的基因，即参基因。
参基因（reference gene），也称为标准基因，指的是一种在不同器官、不同时间、不同处理条件下，表达量稳定的基因。
其主要作用是用来提供参照，和其他基因比较，检测后者表达改变的幅度和方向。
因此，参基因对于生物学实验的结果及解释起着重要的作用。
参基因的特性是在不同的生物系统中，表达量稳定。
其表达量的变化率处于某一范围之内，可以作为参考，用于比较两个器官或细胞的差别或差异。
它在植物、动物、微生物的基因组中都有广泛的应用，其表达量的变化稳定性是引物扩增法中质量控制的重要指标。
参基因的筛选主要是从基因组中全局进行搜索，从数量上而言，参基因通常是少数几十个，通常是在多个细胞类型中表达量相对稳定的基因，通常具有普遍的生物学功能、高度特异的表达模式与组织特异的表达模式。
另外，它们还应具有低的表达变异以及较低的标准偏差。
参基因的选择及应用是一个复杂的问题，它受多种因素的影响。
例如，运用的技术，研究对象的器官或细胞类型；它们的状态（活细胞和死细胞）；它们是否已受外界刺激等等。
因此，选择参考基因时，必须考虑研究对象的生物特征。
基因组内参基因的发掘有很多思路，包括对拟南芥基因组的全基因组测序的历史数据分析，利用新一代测序技术，不同生物样本的复杂性分析，借助量子计算等。
在基因组内参基因的发现和筛选上，将更多地应用分子生物学和计算机科学的知识，以及多学科之间的交叉合作。
参基因可以作为基础基因，为生物体的统一解读提供参照。
未来，参基因将成为基因组研究、转录组研究、蛋白质组研究和体外实验等领域的重要工具。
它能够帮助我们更深入地理解基因表达调控机制，实现基因组信息的有效分析，从而发掘更多的生物学信息、寻求有效的新药物目标。
内参基因
何为内参基因1、我记得常用的就是[color=magenta]GAPDH[/color]（3-磷酸甘油醛脱氢酶）和actin，至于什么是内参，可以打个比方，比如我们要比较两个不一样大的西瓜的含糖量，不好直接比较，那就找他们都有的东西来比较，就拿西瓜子嘛，假设西瓜子是均匀分布的，而且随着西瓜的变大，糖分的增多，西瓜子也变多，那么这个西瓜子就可以作为内参了！不知比方准确否，请高手指教，共同进步！2、内参基因一般会选管家基因，是维持细胞基本代谢活动所必须的基因，在各组织和细胞中的表达相对恒定，如：GAPDH、Actin、18S rRNA等3、内参基因,表达稳定，通常用的有GAPDH,beta-actin，18s rRNA等内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时使用绝对标准品，也可以使用相对标准品，而且相对标准品在实验操作上更为简便易行。
相对标准品是只知道样品中DNA或RNA的稀释比例而不需要知道其分子数目的标准品，典型的做法是将一个已知pg数的样品做一系列梯度稀释。
CT值比较法是利用CT值与起始DNA浓度的对数成反比的数学关系，来计算不同样本之间的相对百分比，其计算公式是绝对定量的数据易于理解，但是绝对标准品的制备和测定其DNA含量比较困难。
有许多商业性的标准品试剂盒供选购，可以解决这种困难。
相对定量的标准品容易在实验室里自己制备，但是数据处理比较麻烦，对实验数据的解释有一定难度。
定量PCR问题--标准曲线法相对定量的数据应该怎么处理？假设实验的目标是研究药物处理后0、24、48小时IL-2基因在某种组织中的表达量的变化，所用的内对照是18S RNA基因。
IL-2和18S RNA的测定结果都是总RNA的pg数，数据的处理方法见下表：定量PCR问题--什么是CT值比较法？数据怎么处理？CT值与起始DNA浓度的对数成反比：如果(1)不同管之间的PCR反应效率相同；(2)这些PCR的反应效率接近100%，可以从上面的公式推出相对含量(X01/X02) = 2 -ΔΔCT假设实验的目标是研究药物处理后0、24、48小时IL-2基因在某种组织中的表达量的变化，所用内对照是18S RNA基因。
内参基因的概念
内参基因的概念 Revised by Chen Zhen in 2021内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因 DNA的扩增; 2,高度或中度表达，排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
内参基因
内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达
水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，
保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样
半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改
变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b
lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本
纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内
源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物
是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解
酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的
基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、
或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA
聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数
情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的
功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因（Pseudogene），以
避免基因 DNA的扩增； 2,高度或中度表达，排除低表达； 3,稳定表达于不同类型
的细胞和组织（如正常细胞和癌细胞），而且其表达量是近似的，无显着性差别；
4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关；5, 其稳定的表达水平与目标基因
相似；6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.
近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织
细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通
常变异较大。
正确的选择内参基因, 很大程度上依赖所研究的细胞或组织, 不同的试验
需要寻找适合各自试验体系的特异性稳定表达的内参基因。
然而,合适内参基因的选择,
需要在各种类型的细胞或组织和各种试验条件下进行比较选择。
理想的内参基因应在
各种试验条件下,各种类型的组织和细胞中均恒定表达,而且其表达量是近似的,无显着
性差别。
另外要求不存在假基因以避免基因组的扩增。
常用的内参基因
包括GAPDH 、β- actin(BETA-actin) 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等。
1，在血清刺激条件下的基因表达定量研究中, B 22MG 和 18SrRNA 作为内参基因是合适的, 而 B 2act in 和GAP 2DH 则不适合。
2，大鼠是常用实验动物, 老年大鼠在阿尔茨海默症等模型研究中常用。
我们针对老年大鼠组织实时老年大鼠肾组织中相对表达最稳定的管家基因是ACTB; 心脏和肺组织中表达最稳定的内参基因是G3pd
3，内参基因sdha和hprt1适合用于校正目标基因的表达量，为研究幼龄小鼠小肠组织基因表达奠定基础。
4，对于枣树基因表达研究的内参基因,组蛋白 ZH j 3基因在不同器官、不同生长时期的结果枝及其顶端组织中有表达, 表达最稳定,最适宜用于枣树基因表达研究的内参基因。
5，HSV感染下用作标化内参基因排序其研究发现，在应用 pcDNA3.1 载体进行表达研究时，相比之下 GAPDH 作为内参效果更好更为适合和稳定
6，RT-PCR方法，检测乳腺肿瘤及其邻近乳腺组织中的IL-8mRNA及内参GAPDH的表达水平知乳腺癌组织高表达IL-8,可作为评价乳腺癌进展及判断预后的指标
7，H MBS 和 C- TBP两个看家基因适用于校正目标基因的表达量,为研究男性乙肝相关肝癌组织中目标基因的表达奠定基础
实时反转录 PCR研究应使用至少两个内参基因以确保结论可靠: 其一可以是某种核糖体 RNA(例如 18S r RNA), 用来对 RNA总量和转录步骤中可能发生的降解进行必要校正; 第二个内参基因应和目的基因 mRNA表达水平接近。
Arb p 细胞丰度相对最低、表达相对最稳定且在不同组织间差异最小,相对较适用于老年大鼠组织间 mRNA 表达变化分析。