中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验.

中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围

本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。

本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。

2 引用标准

GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂

3 设备和材料

3．1 温箱：36±1℃。

3．2 水浴：36±1℃。

3．3 显微镜。

3．4 离心机。

3．5 试管架。

3．6 灭菌平皿。

3．7 灭菌小试管。

3．8 载玻片。

3．9 灭菌吸管：1 mL、10 mL。

3．10 灭菌镊子。

3．11 均质器。

3．12 酒精灯。

3．13 接种环。

4 培养基和试剂

4．1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。4．2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定。

4．3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28 中4.62 规定。

4．4 血琼脂平板：按GB 4789.28 中4.6 规定。

4．5 人血浆。

4．6 0.25%氯化钙。

4．7 灭菌生理盐水。

4．8 杆菌肽药敏纸片（含 0.04 单位）。

5 检验程序

6 操作步骤

6．1 样品处理

称取 25 g 固体检样；称取25 mL 液体检样，加入 225 mL 灭菌生理盐水，

研成匀浆制成混悬液。

6．2 一般培养

将上述混悬液吸取 5 mL，接种于 50 mL 葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接

种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经 36±1℃培

养 24 h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血

情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。

6．3 形态与染色

本菌呈球形或卵圆形，直径 0.5～1 μm，链状排列，链长短不一，短者4～8

个细胞组成，长者 20～30 个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体

培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。

6．4 培养特性

该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中

生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5～0.75 mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2～4 mm 界限分明、无色透明的溶血圈。

6．5 链激酶试验

致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶（即溶纤维蛋白酶），此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。

吸取草酸钾血浆0.2 mL，加 0.8 mL 灭菌生理盐水，混匀，再加入 18～24 h36 ±1℃培养的链球菌培养物0.5 mL 及 0.25%氯化钙0.25 mL（如氯化钙已潮解，

可适当加大至 0.3%～0.35%），振荡摇匀，置于 36±1℃水浴中 10 min，血浆混合物自行凝固（凝固程序至试管倒置，内容物不流动）。然后观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如 24 h 后不溶解即为阴性。

草酸钾人血浆配制：草酸钾 0.01 g放入灭菌小试管中，再加入 5 mL人血，

混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。

6．6 杆菌肽敏感试验

挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有 0.04 单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于 36±1℃培养 18～24 h，如有抑菌带出现即为阳性。同时用已知阳性菌株作为对照。