第五章 体内药物分析.ppt

2020-12-11
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血浆的制备：采集的静脉血液置含有抗凝剂的试管中，混 合后，以25003000r/min离心510min使与血球分离， 所得淡黄色上清液即为血浆。
抗凝剂—最常用的是肝素（heparin），肝素是体内正常 成分，因此不会改变血样的化学组成或引起药物的变化， 一般不会干扰药物的测定。通常1ml血液需用肝素 0.10.2mg或20IU(1mg126IU)。可不必准确控制
现文献所指血药浓度为血浆或血清中药物总浓度（游离 的和血浆蛋白结合的总浓度）。
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血浆与血清的区别
血清比血浆只是少一种纤维蛋白原 一般血浆中药物浓度与血清中药物浓度相当 血浆比血清的分离快，而且制取量约为全血的50%~60%
（血清为全血的50%左右），多数用血浆进行分析。 若血浆中含有的抗凝剂对药物浓度测定有影响时，则应
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（一）、去除蛋白质
是测定血浆、血清、全血及组织匀浆等样品中药物时的 最先处理步骤。 1、加入可与水混溶的有机溶剂（体积比、pH值） 破坏蛋白质分子内及分子间的氢键。常加入乙腈、甲醇、 乙醇等，能使与蛋白结合状态的药物释放，将混合物超 速离心，取上清液作为样品。
使用血清样品 。
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（二）尿样：
尿样测定主要用于药物剂量回收研究、药物肾清除率和生 物利用度等研究，以及测定代谢物类型等。体内药物清除 主要是通过尿液排出，药物可以原型（母体药物）或代谢 物及其缀合物形式排出。尿样常需加入防腐剂。
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成人一日排尿量为15L。尿样包括随时尿、晨尿、白 天尿、夜间尿及时间尿几种。因尿液浓度变化较大，所 以应测定一定时间内排入尿中的药物总量。一般采集时 间尿（规定时间内采集尿液体积和排入尿中的药物总 量）。
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（五）头发：
应用— 体内微量元素含量测定 — 用药史的估计 — 临床用药和药物非法滥用的区别 — 毒性药物检测
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头发样品的采集：采集枕部发样(带根部），微量元素在前 额部位的头发中含量最低，枕部含量最高。
头发样品的洗涤：除去外源性污染物，推荐使用丙酮-水-丙 酮；丙酮浸泡搅拌10min，自来水漂洗3次，再用丙酮浸 泡搅拌，自来水、蒸馏水各洗3次。
浓度。 2、介质复杂，干扰物多，待测物浓度低，须分离干扰物质、
富集待测药毒物 3、为了适应和符合测定方法所要求的灵敏度 4、为了防止分析仪器的污染、劣化，提高检测准确度、精
密度和选择性等。
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二、常用体内样品预处理方法 要考虑：药物的理化性质（极性、酸碱性、光谱
特性、挥发性、稳定性），药物测定的目的，选 用的生物体液和组织的类型，待测物的浓度范围， 样品制备与分析技术的关系。
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第一节、常用体内样品的制备与贮藏
一、体内样品的种类、采集与制备
（一）血样：血浆、血清 血浆：选用最多。因血浆中的药浓可反映药物在体内的状
况。而且血浆中药物浓度的数据报道较多，可供借鉴。血 浆是全血在加肝素、枸橼酸、草酸盐等抗凝剂的全血经离 心后分取，量约为全血的一半。
尿液中药物浓度的改变不能直接反映血药浓度，即与血 药浓度相关性较差、尿液量较大不易保存等。
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（三）、唾液：
唾液中的药物浓度通常与血浆浓度相关。样品易得， 取样无损害，尤易为儿童接收。有些可从药物唾液浓度推 定血浆中游离药物浓度。
唾液由腮腺、颌下腺和舌下腺三个主要的唾液腺分泌汇 集而成前两者分泌量占总量90%。两者中浓度大致相当。
取样：在潄口后15min，安静状态下采集口腔内然流出 的唾液；也可在刺激下快速采样(需注意干扰) 。如口嚼石 腊片或将柠檬酸、维生素C等置于舌尖，弃去初始部分后 采集。刺激后采集的为混合唾液。
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（四）组织：
药物在脏器组织中的分布情况，常用胃、肝、肾、 肺、心等。 制备：测定之前一般需制成匀浆 组织样品的处理：沉淀蛋白法、酸水解法、酶水 解法 （蛋白水解酶）
其它抗凝剂EDTA、枸橼酸盐、草酸盐等，是与血液中 的钙离子结合的试剂，它们可能引起被测组分发生变化或 干扰某些药物的测定，不常使用。
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血清的制备：采集的静脉血液置试管中，于37℃或室温 放置30min1h。血液凝固后，用细竹棒或玻璃棒轻轻 剥去试管壁上的血饼，再在25003000 r/min离心 510min，上层淡黄色液体即为血清。
头发样品的处理：直接甲醇提取、酸水解、碱水解、酶水解 （葡萄糖醛酸酶）
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三、体内样品的贮存与处理
（一）冷藏与冷冻
血浆和血清需采集后及时分离，一般最迟不超过2h，分离 后再置冰箱或冷冻柜中保存（-20~-80℃）。
尿样应立即测定，若收集24h的尿液不能立即测定时，可加 入甲苯、氯仿、醋酸等防腐剂，一般可保存24~36h，也可 加入叠氮化钠较长时间保存。
唾液在保存过程中会放出二氧化碳使pH值升高。另唾液中 含有粘蛋白，须离心后冷藏或冷冻
பைடு நூலகம்
（二）去活性
终止酶的活性方法：快速冷冻、微波照射、加入酶活性阻
断剂等。
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第二节、体内样品的的前处理
分析方法与样品处理步骤的选择
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一、体内样品预处理的目的 1、使药物从缀合物及结合物中释放出来，以测定药物的总
第五章 体内药物分析
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生物样品特点
1、被测定的药物和代谢物的浓度低； 2、样品大多需要分离和净化； 3、样品量少，连续测定时，很难再度获得完全相同
的样品。 4、工作量较大， 5、要求很快地提供结果(毒物检测)
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体内药物分析：
样品制备：去除蛋白质、缀合物水解、化学衍生 化、分离浓集（液液萃取、固相萃取等）； 样品测定：光谱分析法、色谱分析法、免疫分析 法、生物学方法 方法验证：特异性、标准曲线和定量范围、定量 下限、精密度与准确度、稳定性、提取回收率