OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(中文翻译版)
质粒中提中文版(Omega)
中提质粒步骤材料准备：灭菌250或500mL三角瓶，托盘天平，5mL移液枪及枪头，卫生纸，废液缸，记号笔，50mL 圆底离心管，15mL尖底离心管步骤：1.集菌将100mL菌液分批倒入50mL圆底离心管中，室温12000rpm离心1min，弃流出液体，打开盖倒置吸水纸上控干。
2.加入2.5mL solution I（提前加入RNase，4℃保存），重悬细菌沉淀（可使用5mL移液枪吹打）。
3.加入2.5mL solution II，轻柔混匀（颠倒离心管7-10次），以获得清亮的裂解物，室温静置3-5min。
（此步主要是碱裂解细菌，使其中的蛋白质和DNA变性，反应时间不能太长，否则容易使大肠杆菌的基因组DNA断裂成小片段，污染质粒DNA）4.加入1.25mL Buffer N3，轻柔混匀（颠倒离心管7-10次），直至形成白色沉淀，室温静置2-3min。
5.4℃12000rpm离心10min，使白色沉淀沉于底部。
6.取出一个Lysate Clearance Filter Syringe，抽出活塞，小心将5中液体全部转移至注射器中（注射器可不放活塞直接直立于4中的离心管中，液体不会出来），室温静置2min。
7.将6中注射器放置于一新的15mL离心管，轻推注射器活塞，使液体流入离心管中。
8.加入0.1倍体积的ETR（约600uL）至过滤后的液体中，混匀（颠倒离心管7-10次），冰浴20min，期间颠倒离心管几次。
（此期间准备一个Hind-Bind DNA midi Column加入2mL GPS Buffer，室温静置10min，4000rpm离心5min）9.42℃温浴5min，溶菌液变浑浊，室温4000rpm离心5min，则ETR沉入底部。
10.小心将上层液体转移至一新的15或10mL离心管中，加入0.5倍体积的EtOH（约2.5mL），轻柔混颠倒5-6次，室温静置2min。
11.将10中液体加入柱子中，室温4000rpm离心5min，弃液体，重新装好柱子，直至液体全部滤过。
omga质粒提取试剂盒_说明书_翻译
omgaE.Z.N.A.质粒试剂盒操作规程说明书（译版）1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的2-5ml的LB或YT培养基进行培养。
37℃强力摇动（~300rpm）孵育20-24h。
使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。
强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。
此类菌株包括DH5α和JM109。
2. 将1.5-5.0ml细菌菌液室温13,000 g离心3min。
轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。
3. 加入200μl 的溶液Buffer T 1/Rnase A重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。
充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。
4. 加入200μl溶液Buffer T 2，倒置、转动试管5-10次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。
室温孵育5min。
不要用力混合，以免使染色体DNA断裂，减低质粒的纯度。
该步反应不要超过5min。
溶液II不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。
5. 加入200μl溶液Buffer T 3，立即倒置试管15-20次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。
冰上孵育5min。
为避免形成局部沉淀，加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。
6. 4℃13,000 g离心10分钟。
白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。
7. 小心翼翼的吸取上清液，加入到新的1.5ml离心管（不是试剂盒提供的）中。
加入200ul 用异丙醇稀释的BAC 结合液（缓冲液），颠倒3-5次充分混匀。
BAC 结合液使用前必须用96%-100%的异丙醇稀释，详细的说明见瓶壁或第三页说明书8.加入样本DNA（HiBind DNA MicroElute）到提供的2ml收集管中。
9. 室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
10. 将收集柱放回收集管并加入750ul SPM buffer（用乙醇稀释），室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
OMEGArna提取试剂盒中文说明
E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps)步骤A ． 真核细胞和组织自己需要的材料：β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC 水配置）、除RNase 的枪头和EP 管。
材料的最佳量想得到最佳的产量和好的Hibind RNA 柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。
Hibind RNA 柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。
最大的结合能力是100ug 的RNA 。
TRK 裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg 的组织。
细胞的步骤1． 用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP 管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入20ul 的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。
完全吸去培养基后直接加TRK 裂解缓冲液至细胞中。
加700ul 的TRK 到T35细颈瓶或10cm 的培养皿中，更小的培养器加500ul 的TRK 。
将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。
将裂解产物转移至1.5mlEP 管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g ）*5min ，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀。
2． 匀浆化裂解产物“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min 。
不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA 的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s ，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm 直径），至少吹打5次是样品匀浆化。
注射器要除RNase 。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column 中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。
将离心收集的流出液转移到新的EP 管中。
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(无内毒)
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(中文翻译版)1、将携带目的质粒的大肠杆菌接种于含10~15ul基础培养基/氨苄西林培养介质的50ml培养瓶中。
2、室温下500×g离心10min。
3、弃去上清，剩余沉淀物中加入500ul的SolutionⅠ/RNase A，彻底混匀。
4、将混悬液移至新的2ml离心管中，加入500ul SolutionⅡ，轻柔彻底混匀，可得清亮的细菌裂解物，室温下孵育2min（混匀时用力过大，可破碎出染色体DNA，使目的质粒纯度下降）。
5、向4中液体加入250ul预冷的Buffer N3，轻柔、彻底混匀，直到出现白色絮状沉淀，4℃≥12000×g离心10min（可室温，最好4℃）（Buffer应彻底混匀，若混合物粘稠呈棕色或呈球状，应多混匀几次以中和溶液，溶液的彻底中和对于获得好的产出是必要的）。
6、小心吸取并将上清液转移进新的1.5ml离心管1：0.1的比例向上清液中加入ETR Solution 混匀溶液并于冰上孵育10min，孵育过程中颠倒几次以混匀（加入ETR Solution后，细菌裂解物将出现浑浊，但冰上孵育后将变澄清）（勿用2ml离心管收集上清，因为2ml离心管中有太多液体时，ETR Solution将悬浮于溶液中）。
7、将6中液体于42℃孵育5min，溶液将再次变浑。
室温下12000×g离心3min，ETR Solution 将于离心管底部形成蓝色层。
8、将上层水相转移入新的2ml离心管中，按1：0.5的比例加入无水乙醇（室温，96~100％），轻柔混匀，室温下孵育1~2min。
9、将8中的溶液取700ul到柱子中，组装收集管，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中通过柱子的液体，柱子和收集管重复利用。
10、重复9中步骤，直到收集的细菌裂解物全部用完。
11、将500ul Buffer HB加入柱子中，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中废液（目的：将残存的蛋白污染物除去，是获得高质量DNA所必需的）。
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤以下是使用OMEGA小提试剂盒提取质粒的步骤：1. 打开Omega小提试剂盒，并将试剂瓶放置在室温下15-30分钟，以使其达到室温。
同时，将所需试剂加热至37°C，并准备其他必要的材料和试剂。
2.使用无菌技术，取出含有目标质粒的菌落并转移到15mL离心管中。
注射100-500µL的STET缓冲液（一种细胞裂解缓冲液）至离心管中。
3. 使用无菌技术，将质粒菌落悬浮液均匀涂布到2% Made by Omicron小鼠胚胎或其他适当的琼脂糖琼脂糖板（SD盘）上。
将板培养在37°C的培养箱中，24-48小时。
4.在培养后，用移液器或吸管轻轻吹气将质粒菌落悬浮液从SD盘转移到1.5mL（或2mL）离心管中。
5.离心细胞，以将固体与培养上清分离。
将离心条件设置为13,000×g，4°C，5分钟。
6.丢弃上清液并用1mLSTET缓冲液洗涤菌落。
在洗涤步骤中，轻轻上下振荡离心管，以确保洗涤液均匀地覆盖菌落。
7.离心细胞，以将液体与固体分离。
将离心条件设置为13,000×g，4°C，5分钟。
丢弃上清液。
8.重新悬浮菌落，使用约200-500µLSTET缓冲液，并轻轻振荡离心管，直到完全悬浮。
9. 取1.5 mL离心管中的样品，加入等体积的Lysis Buffer G2，并快速倒置混合，以完全裂解细胞，并将细胞内容物释放到溶解液中。
10. 加入等体积的N3 Buffer，并轻轻倒置混合，以中和裂解反应。
11. 加入等体积的G3 Buffer，并轻轻倒置混合。
此时，样品已经准备好进行DNA纯化。
请注意，上述步骤仅提供了OMEGA小提试剂盒提取质粒的基本步骤。
根据具体实验要求和试剂盒的使用说明，步骤可能会有所不同。
在开始实验之前，请仔细阅读并遵守试剂盒的使用说明。
omega质粒提取试剂盒原理
omega质粒提取试剂盒原理
omega质粒提取试剂盒是一种快速提取质粒的试剂盒，原理基于离心法和碱裂解法。
质粒提取步骤如下：
1.细菌菌落挑选：选择莱茵氏或理光法制备的菌落，接种到含有复性2倍YT培养基中的管中，温育至15-18小时，使生长到中期即可。
2.洗涤菌体：离心收集菌体细胞，使用TE液洗涤菌体，通过离心去除菌体细胞内部的杂质。
3.裂解细胞：用离心的菌体用Alkali Lysis Buffer裂解细胞。
使得细胞壁和细胞膜破裂，游离出细菌的质粒和基因组DNA。
此时保持碱性能稳定质粒。
4.中和试剂添加：使用HCl溶液中和裂解碱的催化活性，维持实验体系pH值在7.0左右。
5.离心收集DNA：用NaCl把DNA从碱性溶液中析出，并通过离心将DNA沉淀下来。
6.洗涤DNA：用乙醇洗涤钠盐，去除残留的离子，甘油可保持溶液中的DNA
稳定性。
7.重悬质粒：将去除干扰物后的纯质粒在TE缓冲液中重悬，即可用于下一步实验。
质粒小提试剂盒提取质粒
质粒小提试剂盒提取质粒
（1）柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μL的平衡液BL，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；
（2）取1-5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000rpm离心1分钟，尽量吸除上清；
（3）向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液P1（先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀；
（4）向离心管中加入250μL溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解；
（5）向离心管中加入350μL溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。
12,000rpm离心10分钟，此时在离心管中底部形成沉淀；
（6）将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中，注意尽量不要吸出沉淀。
12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中；
（7）向吸附柱CP3中加入600μL漂洗液PW（先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中；
（8）重复操作步骤（8）；
（9）将吸附柱CP3放入收集管中，12,000rpm离心2分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液除去；
（10）将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100μL洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000rpm离心2分钟将质粒溶液收集到离心管中。
小提质粒实验方案及详细步骤
2、
3、Leabharlann 4、 5、 6、 7、Solution Ⅱ Solution Ⅲ TE 缓冲液 酚-氯仿
无水乙醇 70%乙醇 其他准备 2、具体操作步骤 1、 取 1.5ml 培养液加入 EP 管中，12000rpm 离心 2min，弃上清，将离心管倒 置于滤纸上 1~3min，使液体尽可能流尽。将细菌沉淀重悬于 100μl 预冷的 SolutionⅠ中，吹打混匀，剧烈振荡，使菌体分散均匀。打开盖子，室温 下放置 3~5min。 加 200μl 新鲜配制的 solutionⅡ，盖紧管口，颠倒 3~5 次混匀，动作温和， 裂解细胞使 DNA 变性后将离心管放置于冰上冰浴 5min(破坏氢键)， （溶液 Ⅱ为裂解液，故离心管中菌液逐渐变清） 加入 150μl 预冷的 solution Ⅲ，将管温和颠倒 5~10 次混匀，使 DNA 复性， 见白色絮状沉淀，在冰上放置 5min。12000rpm 离心 10min。复性时间不 宜过长，否则会有基因组 DNA 污染。 （solution Ⅲ为中和溶液，此时质粒 DNA 复性，染色体和蛋白质不可逆变性，形成不可溶复合物，同时 K+使 SDS- 蛋 白 复 合 物 沉 淀 。 ）根据菌体的量调节三种溶液的比例，保证 solution1：solution2：solution3=1:2:1.5 将上清液移入干净 EP 管中，加入 450μl 的苯酚/氯仿/异戊醇，振荡混匀， 4℃,12000rpm 离心 5min 将上清液移入另一干净 EP 管中， 加入 2.5 倍体积预冷的无水乙醇混匀 （轻 柔） ，置于-20℃冰箱放置 20min，4℃下 12000rpm 离心 10min。 弃上清，用 1ml 预冷的 70%乙醇洗涤沉淀 1-2 次，4℃离心 8000rpm,5min， 弃上清，将 EP 管倒扣与滤纸上流尽水分。静置一会儿使乙醇挥发干净。 向沉淀中加入 50μl TE 缓冲液，使 DNA 完全溶解，-20℃保存备用。 高压灭菌锅，冷冻离心机，移液枪，EP 管，滤纸，枪头，提前制冰。
promega质粒提取试剂盒操作说明（中文）
promega质粒提取试剂盒操作说明（中⽂）注意:所有纯化和洗脱步骤均在室温下进⾏。
1. 将转化⼤肠杆菌细胞在最佳培养条件下培养50-250ml过夜(16 - 21h)。
注意:本⽅案优化为过量培养50-250ml，OD600 = 2-4。
2. 将细菌收集起来，5000 g离⼼10分钟，弃上清。
⽤纸⼱除去多余的介质。
表1 解液所需的溶液体积。
3. 在细胞重悬液中重悬细菌。
4. 加⼊细胞裂解液和轻轻混合翻转管3-5次或混合裂解液轻轻滚动。
室温下孵育3分钟。
注:如果细胞裂解液过冷，可能会发⽣SDS沉淀，导致细胞裂解不良。
如果有沉淀形成，将细胞裂解液加热到37°C，并轻轻摇晃。
5. 在溶解细胞中加⼊中和液，盖住并轻轻翻转5-10次。
6. 15000g室温离⼼15分钟。
这种离⼼法将使颗粒化⼤量的细菌碎⽚。
使⽤PureYield™清除柱清除剩余碎⽚。
要区分PureYield™Clearing和PureYield™Binding列，请注意过滤管是蓝⾊的，⽽结合柱是⽩⾊的。
7. 通过在PureYield™顶部嵌套⼀个PureYield™(蓝⾊)组装。
如图1所⽰，将组装好的柱堆放在真空泵上。
图1所⽰。
蓝⾊清除列插⼊⽩⾊绑定列。
8. 将澄清的裂解液倒⼊PureYield™澄清柱中。
不要让颗粒状的碎⽚落⼊管内。
9. 启动真空泵。
裂解液将通过PureYield™澄清柱中的澄清膜，并且 DNA将在PureYield™结合柱中结合到结合膜上。
继续抽吸所有的液体都通过了两个柱。
注意:所有纯化和洗脱步骤均在室温下进⾏。
10. 在进⾏前，从过滤装置中缓慢释放真空。
移除PureYield™清除柱，将PureYield™结合⾊谱柱留在泵上。
注意:如果真空释放得太快，膜可能会从柱上分离。
如结合膜脱落，⽤带⼿套的⼿指或1.0ml⽆菌溶液的⼤端轻轻轻拍移液器尖端，或打开真空，让压⼒重新安置膜。
11. 向柱中加⼊5.0ml的内毒素清除液，让真空泵将溶液穿过。
OMEGArna提取试剂盒中文说明
OMEGArna提取试剂盒中文说明E.Z.N.A. T otal RNA Kit I (R6834-01 50 preps)步骤A ．真核细胞和组织自己需要的材料：β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC 水配置）、除RNase 的枪头和EP 管。
材料的最佳量想得到最佳的产量和好的Hibind RNA 柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。
Hibind RNA 柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。
最大的结合能力是100ug 的RNA 。
TRK 裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg 的组织。
细胞的步骤1．用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP 管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入20ul 的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。
完全吸去培养基后直接加TRK 裂解缓冲液至细胞中。
加700ul 的TRK 到T35细颈瓶或10cm 的培养皿中，更小的培养器加500ul 的TRK 。
将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。
将裂解产物转移至1.5mlEP 管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g ）*5min ，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀。
2．匀浆化裂解产物“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min 。
不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA 的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s ，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm 直径），至少吹打5次是样品匀浆化。
注射器要除RNase 。
3．将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column 中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。
将离心收集的流出液转移到新的EP 管中。
无内毒素质粒大提取试剂盒中文操作指南
无内毒素质粒大提取试剂盒中文操作指南（omega）详细内容：E.Z.N.A. ® Fastfiler Endo-free Plasmid MaxiprepProtocol(无内毒素质粒大抽提)1. 在1-4升的培养瓶中加入200-500ml LB培养基,然后加入菌种于37℃摇床培养12-16小时；Tip:为获得最好的结果，请接种1ml培养过夜的菌种（12-16hr）。
并强烈推荐使用E.coli(endA-)品系用于常规的质粒提取，如DH5a和JM109。
注意：菌液的培养时间不能超过16小时；2. 收集200ml培养基至适当的离心管，室温下，3,500-5,000×g离心10分钟沉淀；3. 吸尽并去除培养基，用干净的吸水纸吸尽壁上多余的液体。
加12.0ml Solution I/RNase A到细菌培养物中，涡旋和枪头抽打细菌以重悬细胞；注：充分重悬细菌沉淀物对获得高产量的质粒是相当关键的。
充分重悬后溶液是均匀的，不存在小块物质；请尽量吸弃残余的培养基以防止稀释加入的溶液；4. 加入12.0ml SolutionII，轻轻颠倒旋转混匀7-10次至获得澄清的裂解液；室温放置3-5分钟可以有是必须的。
避免剧烈振荡混匀而打断染色体DNA，降低质粒的纯度。
（Solution II使用后请盖紧盖子且于室温保存）；5. 将取出Lysate Clearance Filter Syrine活塞，将其放置于架子上；6. 加入12 ml Neutralization Buffer，轻轻颠倒混匀几次至出现絮状沉淀。
这可能需要放置2-3分钟并间断颠倒混匀；7. 立即将裂解液转移到lysate Clearance Filter Syrine中，垂直放置5分钟。
这时白色的絮状沉淀物会漂上溶液的上层，裂解液可能开始流出过滤器，用新的50ml管子收集细菌裂解液，并将活塞轻轻插入过滤器中；8. 握住过滤器，轻轻推动活塞将裂解液打到收集管中；注意不要将任何杂质打到收集管中；9. 加入0.1体积的ETR Solution（蓝色）到收集液中，轻轻颠倒旋转混匀7-10次，冰浴放置20分钟；注意：加入ERT Solution后，溶液应变得浑浊，但冰浴静置后溶液应是澄清的。
OMEGA质粒提取试剂盒操作步骤
OMEGA质粒提取试剂盒操作步骤1.预处理：将待测细菌液培养在含有适当抗性选择性的LB培养基中，并在适宜条件下培养至细菌达到对数期。
使用适当的离心参数和时间离心，使得细菌达到沉淀准备。
2.应激液制备：向OMEGA质粒提取试剂盒中的应激液瓶中加入8mL已过滤的异丙醇试剂A，并充分混合。
此时，应激液瓶中的液体会变成粉红色。
注意：应激液不能加入异丙醇试剂A之前。
3.柱洗液制备：向OMEGA质粒提取试剂盒中的柱洗液瓶中加入25mL已过滤的异丙醇试剂B，并充分混合。
此时，柱洗液瓶中的液体会变成黄色。
注意：柱洗液不能加入异丙醇试剂B之前。
4.提取液制备：将OMEGA质粒提取试剂盒中的提取液瓶取出，充分振荡混合，使其中的液体变为均匀的浑浊状态。
5.细菌沉淀：使用离心机将培养好的细菌培养物离心，设置好适当的离心参数和时间，使细菌达到沉淀。
6.破细胞：将上述离心后的细菌沉淀转移到50mL离心管中，加入10mL提取液，并用转粉棒均匀悬浮细菌。
细菌悬浮液较黏稠，加入提取液后需充分混匀。
7.混合物平衡：将OMEGA质粒提取试剂盒中的A离心管插入破细胞悬浮液，盖上盖子，轻轻翻转转动10次，使混合物均匀。
8.吸附：将A离心管放置于试剂离心机上，以最大转速离心3-5分钟，使质粒DNA吸附到离心管壁上。
离心后离心管内会有质粒DNA沉积在管壁上，上清液中几乎没有DNA。
9.液体除去：将上清液倒出（若有残留无形的DNA，不会影响测量质粒DNA浓度和纯度）。
10.洗涤：向吸附质粒DNA的A离心管中加入0.8mL柱洗液，并放入离心机中以最大转速离心1分钟将柱洗液完全通过。
注意：此步骤中重要的是将柱洗液完全通过以去除杂质。
11.干燥：向A离心管中加入0.8mL柱洗液（保险柱)，并通过离心室加热器以60℃加热干燥10-30分钟，使水分从柱中蒸发。
注意：此过程必须在脱水状态下进行。
12.质粒DNA洗脱：向A离心管中加入50μL的去离子水，并计时5分钟，使质粒DNA从固相柱上洗脱出来。
OMEGA质粒提取试剂盒操作步骤
OMEGA质粒提取试剂盒操作步骤1．在10-20ml试管中，将携带有所需质粒的接种到5ml LB培养基LB（含氨苄青霉素50μg/ml），37℃振荡培养12-16h。
需特别指出的是：endA阴性的菌株用于常规质粒提取，如DH5α和JM109.2．取~5ml菌液室温10000×g离心1min3．去上清，加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。
4．加入250µl溶液Ⅱ，温和颠倒离心管4~6次，获得澄清的裂解液。
最好室温孵育2min，剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度。
(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5．加350µl溶液Ⅲ，温和颠倒数次混合，至出现白色絮状沉淀6. 室温13000×g离心10min.7．特别小心吸取上清，移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。
要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。
室温10000×g离心1min，至裂解物完全通过吸收柱8．弃滤过液，加500µl Buffer HB，10000×g离心1min，清洗吸收柱，除去残余蛋白质保证DNA的纯度。
如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高，如酶消化法等其它筛选方法，此步可省略9．弃滤过液，再用100%乙醇稀释的700µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g离心1min.注意：Wash Buffer浓缩液用前必须用纯乙醇稀释，方法见标签，如果经过冷冻，用前必须恢复室温10．此步可选：再加700µl Wash Buffer清洗吸收柱11.必须将吸收柱13000×g离心2min确保乙醇被去除，乙醇会影响下面的步骤。
12.将吸收柱放入干净离心管，加30-50µl(取决于需要的终浓度)无菌去离子水或TE缓冲液在滤膜上，13000×g离心1min，一次可洗脱75-80%附着DNA（可进行再洗脱，但会降低DNA浓度）。
E.Z.N.A.试剂盒小提质粒 中文说明
E.Z.N.A.凝胶回收试剂盒操作步骤GDS8000凝胶成像系统操作说明E.Z.N.A.试剂盒小提质粒2009-03-04 21:36:08| 分类：分子克隆|字号订阅1. 在无菌条件下，从转化成功的培养板上挑取单个菌落接种于5ml含有适当抗生素的LB液体培养基，37℃、约300rpm振荡培养12~16h。
2. 菌种的保存：取菌液1ml，加入0.5ml浓度为15-20%的灭菌甘油,混匀，分装于无菌的EP管中，冻存于-70℃。
将剩余菌液分装到2个EP管中，每管1.5ml菌液。
10000g 室温下离心1min，轻轻吸掉上清，尽可能吸尽。
3. 在EP管中各加入250μl Solution Ⅰ/RNase A，吹打（或涡旋）至细胞完全悬浮。
4. 加入250μl Solution Ⅱ，轻轻颠倒混匀数次（其间旋转EP管），得到澄清的裂解液。
然后温育2min（避免剧烈混合造成染色体DNA断裂以降低质粒纯度，裂解反应不能超过5min）5. Solution Ⅱ不用时应盖紧盖子，避免空气中CO2的酸化）。
6. 加入350μl Solution Ⅲ，立即上下颠倒数次直至白色絮状沉淀生产（混匀要完全、即时，避免局部出现沉淀）。
7. 室温下13000g离心10min，出现紧密的白色沉淀，立即进行下一步。
8. 将HiBind Miniprep Column柱装到2ml收集管中，小心吸取上清，加至柱子中，确保不要扰动沉淀，以免把细胞碎片带入柱子中。
室温下10000g离心1min，使裂解液完全过柱。
9. 移开柱子，弃去收集管中的液体，并将柱子重新插入收集管中，加入500μl Buffer HB，静置2min，10000g室温离心1min，使溶液完全过柱（此步骤确保残留的蛋白被除去）。
10. 弃去收集管中的液体，重新将柱子装好，加入700μl DNA Wash Buffer（加过无水乙醇的），静置2min，10000g室温离心1min使溶液完全过柱，弃掉收集管中的液体。
OMEGA试剂盒操作步骤
1.称取500 mg玻璃珠于2 mL离心管中，加入0.2~0.5 g的土壤样品（最好不要超过0.3 g）。
加入1 mL SLX Mlus Buffer。
快速研磨仪65 Hz研磨2 min（时间还需要摸索调整）。
2.加入100 μL DS Buffer涡旋混匀。
3.70 ℃水浴10 min，在水浴过程中快速涡旋一下。
对于一些难以溶解的菌体，提高温度到90 ℃。
(一般将水浴温度设定为80 ℃。
)4.常温下3000 rpm 离心 3 min。
将800 μL上清液移取到2 mL 离心管中，加入270 μL SP2 Buffer，涡旋彻底混匀。
5.冰浴5 min，4 ℃ 13000 x g 离心5 min。
6.小心吸取上清液移至2 mL 离心管中，加入0.7倍体积的异丙醇。
反复颠倒20~30次混匀，将样品置于-20 ℃下 1 h。
7. 4 ℃ 13000 x g 离心10 min，沉淀DNA。
8.小心弃去上清液，确保没有丢失DNA颗粒。
将离心管倒置在吸水纸上1 min，除干液体。
9.加入200 μL Elution Buffer，涡旋10 s。
65 ℃水浴10~20 min 溶解DNA。
（具体时间根据离心管底部沉淀决定。
）10.加入50~100 μL HTR Reagent（由溶液颜色深度决定），涡旋10 s彻底混匀。
注意：HTR Reagent使用前需要摇晃瓶子使其混匀。
11.室温下静置2 min。
13000 x g 离心2 min。
12.将清澈的上清液移至2 mL 管中。
注意：如果上清液一直是土壤的暗色的话，重复步骤10~12 HTR的处理。
13.加入等体积的 XP2 缓冲液，涡旋混匀。
例如：如果第12步处理完溶液体积为250 μL，则加入250 μL XP2 缓冲液。
14.将第13步所得的液体涂到已装上收集管HiBind DNA Column 上。
10000 x g 室温离心1 min。
弃去流下的液体，收集管可以重新使用。
OMEGA Total RNA 提取试剂盒中文步骤
动物细胞总RNA提取步骤：注：所有的离心操作在室温中进行一般操作设备：1、完全乙醇（96~100%）2、无菌的移液枪头和1.5ml的离心管3、可选：14.3Mβ-mercaptoethanol (β-ME, 2-mercaptoethanol)4、14000Xg的微型离心机5、加入70%乙醇的DPEC水6、一次性手套二、样品破坏和均化设备1、omega均化柱2、注射器具3、研钵和碾槌4、转子定子均化器三、实验前准备：可选：每一毫升TRK Lysis Buffer加入20ul的2-mercaptoethanol)制成工作溶液。
混合液可在室温下保存一个星期。
1、hibind柱最大能收集100ug的RNA2、TRK Lysis Buffer能操作的最大细胞数为1X10^7Source Number of Cells RNA Yield (μg)IC21 1 x 106 12Hela 1 x 106 15293HEK 1 x 106 10HIN3T3 1 x 106 15四、收集细胞1、收集悬浮细胞:细胞数数，500g离心5分钟沉淀细胞，吸掉上清，继续下一步2，收集单层细胞（1）直接溶解细胞：细胞数数，吸掉全部的完全培养基，继续下一步（2）胰蛋白酶消化收集细胞细胞数数，吸掉培养基，PBS洗几遍。
用加了0.1~0.25%的胰蛋白酶的PBS消化细胞，当细胞从培养皿分离，加入培养基终止消化。
500g离心5分钟，吸掉上清，继续下一步。
五、用TPK Lysis Buffter 破坏细胞1对于细胞团，摇晃收集管使细胞团松散，按下表加入适量的TRK Lysis Buffer,振荡混匀。
2、对于在培养板上的单层细胞，按下表加入适量的TRK Lysis Buffer,，用rubber policeman 收集细胞并转移至1.5ml的离心管中，振荡或吹打混合。
六、按以下其中一种方法匀浆化和破坏组织1、Rotor-Stator 匀浆机：用匀浆机使样品完全均匀。
OMEGA Plasmid Mini Kit I 中文说明书(官方原版)
离心操作方案 1. 将带有质粒的E.coli 接种于5ml LB/抗生素培养液中，37°C搖床培养12~16 h； 2. 取1.0~5.0ml的菌液，室温下10,000xg离心1min收集细菌。 3. 倒弃培养基。加入250ul Solution I/RNaseA混和液，漩涡振荡使细胞完全悬浮。 4. 往重悬混和液中加入250ul Solution II，轻轻颠倒混匀4-6 次。此操作避免剧烈混匀裂
洗脱:30-50ul Elution Buffer或无菌水
菌液用量 最大结合力
1-5 mL
30 µg
5-15 mL
70 µg
15-50 mL 50-250 mL
250 µg 1.0 mg
货号和次数
D6942/3-00(5) D6942/3-01(50) D6942/3-02(200)
D6945-00(5) D6945-01(50) D6945-02(200)
E.Z.N.A.TM Plasmid Mini Kit I
Cat. No: D6942,D6943
快速流程图
重悬:250ul Solution I 裂解:250ul Solution II 中和:350ul Solution III
离 心( 1 0 , 0 0 0 x g , 1 0 m i n )去 除 沉 淀
解液且裂解反应不要超过5 min。 5. 加入350ul Solution III，温和颠倒数次至形成白色絮狀沉淀。 6. 室温下，≥10,000xg离心10min。 7. 转移上清液至套有2ml收集管的HiBind DNA结合柱中，室温下，10,000xg离心1 min，
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤（中文翻译版）
质粒提取（小提，mini kit）1、将携带目的质粒的大肠杆菌接种于含10~15ul基础培养基/氨苄西林培养介质的50ml培养瓶中。
2、室温下5000×g离心10min。
3、弃去上清，剩余沉淀物中加入500ul的SolutionⅠ/RNase A，彻底混匀。
4、将混悬液移至新的2ml离心管中，加入500ul SolutionⅡ，轻柔彻底混匀，可得清亮的细菌裂解物，室温下孵育2min（混匀时用力过大，可破碎出染色体DNA，使目的质粒纯度下降）。
5、向4中液体加入250ul预冷的Buffer N3，轻柔、彻底混匀，直到出现白色絮状沉淀，4℃≥12000×g离心10min（可室温，最好4℃）（Buffer应彻底混匀，若混合物粘稠呈棕色或呈球状，应多混匀几次以中和溶液，溶液的彻底中和对于获得好的产出是必要的）。
6、小心吸取并将上清液转移进新的1.5ml离心管1：0.1的比例向上清液中加入ETR Solution 混匀溶液并于冰上孵育10min，孵育过程中颠倒几次以混匀（加入ETR Solution后，细菌裂解物将出现浑浊，但冰上孵育后将变澄清）（勿用2ml离心管收集上清，因为2ml离心管中有太多液体时，ETR Solution将悬浮于溶液中）。
7、将6中液体于42℃孵育5min，溶液将再次变浑。
室温下12000×g离心3min，ETR Solution将于离心管底部形成蓝色层。
8、将上层水相转移入新的2ml离心管中，按1：0.5的比例加入无水乙醇（室温，96~100％），轻柔混匀，室温下孵育1~2min。
9、将8中的溶液取700ul到柱子中，组装收集管，室温下1000×g 离心1min，弃去收集管中通过柱子的液体，柱子和收集管重复利用。
10、重复9中步骤，直到收集的细菌裂解物全部用完。
11、将500ul Buffer HB加入柱子中，室温下10000×g离心1min，弃去收集管中废液（目的：将残存的蛋白污染物除去，是获得高质量DNA所必需的）。
Omega真菌RNA提取试剂盒R6840说明书(中文翻译版)
实验概要Omega真菌RNA提取试剂盒中文说明书(E.Z.N.A. Fungal RNA Kit)。
实验前准备高速离心机、无核酸酶的微量离心管（DEPC灭菌EP管）、β-巯基乙醇、无水乙醇、液氮（冷冻/破碎样品）、灭菌的研钵、65℃预热的DEPC水（每个样品100μl）。
实验前要用DEPC浸泡过夜并高压灭菌的东西有：蓝枪头、黄枪头、白枪头、5ml枪头及各枪头盒，小瓶（用来装乙醇等），EP管、玻棒、纱布（用来过滤菌丝）。
研钵用锡纸包裹180℃烘箱6h。
1. 取适量RB裂解液，按1ml裂解液加入20ul 2-疏基乙醇。
该混合液可于室温放置一周。
2. 用DEPC水配置一小瓶70%乙醇。
3. 按下表用无水乙醇稀释RNA Wash Buffer II，并于室温保存。
R6840-00: 加入8ml无水乙醇R6840-01: 加入48ml无水乙醇R6840-02: 每瓶加入48ml无水乙醇实验步骤1. 称取50-100mg经液氮研磨成粉末状的真菌样品至1. 5ml离心管，立即加入500ul RB/2-Me, 剧烈涡旋。
2. 转移液体至匀浆柱（试剂盒中提供的绿色柱子）中。
大于13,000×g离心5min。
3. 转移收集管中的上清(注意不要吸到沉淀)至新离心管，加入0. 5倍体积无水乙醇或，涡旋混匀15秒。
这一步如果发现有沉淀用注射器吹打或上下震荡10-15次。
(一般可转移450ul的上清液，可加入225ul 无水乙醇)。
这一步如果发现有沉淀用注射器吹打或上下震荡10-15次。
4. 把RNA柱套在新收集管，转移所有的混合液（即使有沉淀）至RNA柱子。
室温10,000×g离心30秒，弃去滤液。
如果出现堵柱现象，提高离心速度至14, 000xg。
(可选)膜上DNase消化:1) 加入300ul RNA Wash Buffer I至柱子中，按上柱条件离心，弃滤液；2) 配制DNase消化液( Digestion Buffer，73.5ul；RNase-Free DNase I，1.5ul)，混匀。
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质粒提取（小提，mini kit）
1、将携带目的质粒的大肠杆菌接种于含10~15ul基础培养基/氨苄西林培养介质的50ml培养瓶中。
2、室温下5000×g离心10min。
3、弃去上清，剩余沉淀物中加入500ul的SolutionⅠ/RNase A，彻底混匀。
4、将混悬液移至新的2ml离心管中，加入500ul SolutionⅡ，轻柔彻底混匀，可得清亮的细菌裂解物，室温下孵育2min（混匀时用力过大，可破碎出染色体DNA，使目的质粒纯度下降）。
5、向4中液体加入250ul预冷的Buffer N3，轻柔、彻底混匀，直到出现白色絮状沉淀，4℃≥12000×g离心10min（可室温，最好4℃）（Buffer应彻底混匀，若混合物粘稠呈棕色或呈球状，应多混匀几次以中和溶液，溶液的彻底中和对于获得好的产出是必要的）。
6、小心吸取并将上清液转移进新的1.5ml离心管1：0.1的比例向上清液中加入ETR Solution 混匀溶液并于冰上孵育10min，孵育过程中颠倒几次以混匀（加入ETR Solution后，细菌裂解物将出现浑浊，但冰上孵育后将变澄清）（勿用2ml离心管收集上清，因为2ml离心管中有太多液体时，ETR Solution将悬浮于溶液中）。
7、将6中液体于42℃孵育5min，溶液将再次变浑。
室温下12000×g离心3min，ETR Solution将于离心管底部形成蓝色层。
8、将上层水相转移入新的2ml离心管中，按1：0.5的比例加入无水
乙醇（室温，96~100％），轻柔混匀，室温下孵育1~2min。
9、将8中的溶液取700ul到柱子中，组装收集管，室温下1000×g 离心1min，弃去收集管中通过柱子的液体，柱子和收集管重复利用。
10、重复9中步骤，直到收集的细菌裂解物全部用完。
11、将500ul Buffer HB加入柱子中，室温下10000×g离心1min，弃去收集管中废液（目的：将残存的蛋白污染物除去，是获得高质量DNA所必需的）。
12、向柱子中加入混有乙醇的700ulDNA Wash Buffer，室温下10000×g离心1min，弃去收集管中液体。
13、重复12中的步骤。
14、弃去收集管中液体，空管在最大转速（≥13000×g）离心3min 以干燥柱子（对于移除柱子中残留的乙醇是必须的）。
15、将柱子放入新的1.5ml离心管中，直接向柱子中的白色网状物上加入Endotoxin-Free Elution Buffer 80~100ul（依终产物浓度而定，可每次30ul×2次），室温下放置2min，≥13000×g离心1min，以洗提DNA（将提取约70~85％柱子中收集的DNA，可再重复一次以提取完全，但因再次加入洗提液，会使终产物浓度下降）。
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