纤维素酶提取灵芝多糖的单因素
超声波法和超声波酶法提取灵芝多糖的条件研究_郑静
文章编号 :1005 - 9873(2006)01 - 0048 - 05
超声波法和超声波酶法提取灵芝多糖的条件研究
郑 静 , 常 滔* , 林 英 , 程 晖 (农业部北方农作物病害免疫重点开放实验室 ;沈阳农业大学植保学院 , 沈阳 110161)
C 酶量 D 时间
B pH
C Quantity of cellulase (%)1)
D T ime (m in)
1
45 6. 0 1. 5 10
2
50 6. 5 2. 0
15
3
55 7. 0 2. 5
20
1)Ex pr essed as a pe rcentag e relativ e to the amo unt o f
图 3 温度对多糖提取率和多 糖含量的影响 Fig. 3 Effect of treatment temperature on polysaccharide extrac-
tion rates and the polysaccharide contenHale Waihona Puke of crude extract
2. 2 超声波法最佳提取条件的确定 正交试验结果见表 3 。极差 R 分析表明 , 三 因素影响多糖提取率的主次关 系依次是提取温 度(C) >提取时间(A)>料液比(B)。 为了进一
表 1 超声波法正交试验因素和水平 Table 1 Factors and levels in the orthogonal test of the
ultrasound extraction method
水平 Level
A 时间
纤维素酶提取藜蒿多糖的工艺优化
纤维素酶提取藜蒿多糖的工艺优化付 明,颜素贞,向 萍,王明利(怀化学院生命科学系,湖南怀化418008)摘要:用纤维素酶提取藜蒿多糖,通过单因素和正交试验优选出最佳提取工艺,结果表明,藜蒿多糖的最佳提取工艺为:酶浓度1.2g /L 、酶解温度40 、p H 值5.5、酶解时间120m i n ,在此条件下藜蒿多糖的得率为9.75%;以上因素对多糖得率影响由大到小的顺序为:酶解时间、酶浓度、p H 值、酶解温度。
关键词:藜蒿;多糖提取;正交试验;纤维素酶中图分类号:T S202.3 文献标志码:A 文章编号:1002-1302(2009)02-0229-02收稿日期:2008-10-08基金项目:怀化学院资助科研课题(编号:2007)。
作者简介:付 明(1966 ),女,湖北荆门人,副教授,从事药用植物的开发与利用研究。
Te:l (0745)2833539;E -m ai:l f m6988@ 。
藜蒿(Arte m isia selengensis Turcz)是一种传统野生蔬菜,别名芦蒿、蒌蒿、柳蒿等,为菊科蒿属多年生草本植物[1],分布在中国、日本、朝鲜、俄罗斯等国家。
我国的江西、安徽、湖北、江苏、云南等省有同属的栽培种。
藜蒿富含胡萝卜素、钾、钙和10多种氨基酸,营养丰富;少病虫害、生命力顽强,所以很少受农药和化肥污染,加之有特殊香气,是备受推崇的放心菜,地上嫩茎和地下匍匐茎可供食用;中医认为其味甘、性平、无毒[2],有止血、消炎、镇痛、化痰之功效[3],能降血压、抗肿瘤等[4]。
藜蒿含有黄酮、生物碱、多糖等多种生物活性物质。
植物多糖有抗肿瘤活性;增强肌体免疫系统功能,促进胃溃疡愈合,抗辐射、降血脂、抗衰老、抗病毒和治疗肿瘤和糖尿病;多糖还可以改善食品的食用品质、外观特性,可抑制脂质氧化,也可作为乳化剂等,近年来多糖在食品工业上有着广泛应用。
植物多糖的提取方法很多[5-9],传统的水提醇沉法多糖得率不高,CO 2超临界萃取成本高,应用超滤膜技术必须知道多糖的相对分子质量。
纤维素酶提取灵芝多糖的单因素研究
振荡摇匀 ， 加人 ６ ． ０ ｍ ｌ 的浓硫酸 ． 迅速振摇混匀 ． 于室温放置 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 后
４ ９ ０ ｎ ｍ处测 Ａ。
２ ． ２ ． ２ ． ４ 灵芝 总糖量计算 根据标 准曲线计算 出样品液 中总糖的浓度后按下式计算总糖量 灵芝 总糖量＝ 浓度 ｘ 体积ｘ 稀释倍数 ２ ． ２ － ３ 多糖提取率 的计算 方法
【 摘 要】 利用纤维素酶从灵芝子实体中提取灵芝多糖， 通过单因素实验研究酶量、 酶解时间、 料液比、 酶解温度对灵芝多糖提取率的影响。
实验 结果表 明： 纤维素酶能 够显著提 高灵芝 多糖的提取率 ， 提取的最佳工艺条件为酶量 ２ ． ０ ％ 酶解 时间 ９ ０ ｍ ｉ ｎ ， 料 液比 １ ： ３ ０ ， 温度 ５ ０ ￣ Ｃ 。
，
【 关键词 】 灵芝 多糖 ； 提取 ； 纤维素酶 。 引言
灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体 ． 素有 “ 仙 草” 之美 誉ｆ １ ＿ 。古今药理与临床研究均证明 ． 灵芝有防病治病延年益寿之功效 而灵芝多糖是灵 芝的主要活性成 分 ， 具有免疫 调节 、 抗肿 瘤、 抗氧化 、 抗辐射 、 抗衰老 以及 活血化瘀等 广泛的药理 活性 ． 因此灵 芝多糖也 是 目前灵芝研究的一个热点 灵芝多糖存在 于子实体 的细胞壁 内壁 ． 而子实体结构 紧密 ． 在提 取过程 中传质阻力 比较大 ， 且灵 芝多糖相对分 子量很大 ． 仅 靠单纯 的 扩散原理的传统提取方法的提取效率较低 。 而酶法是一种通过酶解破 坏细胞 结构来 强化有 效成分 的传质 过程 ． 能最 大限度 提取中药有效成 分的方法 ， 越来越 受到重视 。故本 试验选取灵芝 作为酶法 提取的对 象， 试 图破坏灵芝 的细胞壁结构 ． 来提高灵芝多糖提取效率 ． 对于实际 应用有 着现实的意 义
211126667_纤维素酶法提取决明子粗多糖的工艺优化及其抗氧化活性
蒋德旗，许焯彬，罗云，等. 纤维素酶法提取决明子粗多糖的工艺优化及其抗氧化活性[J]. 食品工业科技，2023，44（9）：183−189.doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022060262JIANG Deqi, XU Zhuobin, LUO Yun, et al. Optimization of Cellulase Extraction Process of Crude Polysaccharide from Semen Cassiae and Study on Its Antioxidant Activity[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(9): 183−189. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022060262· 工艺技术 ·纤维素酶法提取决明子粗多糖的工艺优化及其抗氧化活性蒋德旗，许焯彬，罗 云，李子强，肖家宝，莫 烨，李盈盈，蒋丽林*，陈晓白（玉林师范学院生物与制药学院，广西高校亚热带生物资源保护与利用重点实验室，广西农产资源化学与生物技术重点实验室，广西玉林 537000）摘 要：目的：优化纤维素酶法提取决明子粗多糖的工艺，并研究决明子粗多糖的体外抗氧化活性。
方法：在单因素实验的基础上，以酶解时间、酶解温度、酶用量、液料比及酶解pH 为自变量，多糖得率为响应值，利用Box-Behnken 响应面法进行工艺优化。
以对DPPH 自由基和羟自由基清除率的大小为指标考察决明子粗多糖的体外抗氧化活性。
结果：纤维素酶法提取决明子粗多糖最佳工艺为酶用量1.4%、酶解时间50 min 、液料比24:1 mL/g 、酶解pH5.4、酶解温度48 ℃，此条件下决明子多糖得率为11.67%，与回归模型的理论预测值11.91%误差小于5%。
酶法在中药提取中的应用和进展
华 东 理 工 大 学
中药现代化工程中心 韩 伟
酶法在中药提取中的应用和进 展
概 述 酶法提取的原理 酶法提取的优点 酶法提取的工艺 酶法在中药提取中的应用 酶法提取灵芝多糖的研究 展 望
一 概
述
中药所含的成分十分复杂，既有有效成分， 中药所含的成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成 分和有毒成分。 分和有毒成分。 为了提高中药的治疗效果，降低毒副作用， 为了提高中药的治疗效果，降低毒副作用，选用合理的 提取工艺是非常重要的。传统提取方法( 如煎煮法、 提取工艺是非常重要的 。 传统提取方法 ( 如煎煮法 、 回 流法、浸渍法、渗漉法等) 在提取中药有效成分方面， 流法 、 浸渍法 、 渗漉法等 ) 在提取中药有效成分方面 ， 存在着损失大、周期长、工序多、提取率不高等缺点。 存在着损失大、周期长、工序多、提取率不高等缺点。 20世纪 年代中期以后 20世纪90年代中期以后，我国陆续有研究报道将酶用于 世纪90年代中期以后， 中药提取，并且取得较好的效果。酶法为中药提取提供 中药提取，并且取得较好的效果。酶法为中药提取提供 了一种新的途径，具有较大的应用前景。 了一种新的途径，具有较大的应用前景。
4.2 酶法提取的影响因素和优化
酶法提取的工艺条件及其优化： 酶法提取的工艺条件及其优化：
酶是一类生物催化剂 反应的pH值 温度、酶的浓度、 酶是一类生物催化剂，反应的pH值、温度、酶的浓度、 生物催化剂， 配比和作用时间、 配比和作用时间、 激活剂和抑制剂等都会对酶的活性 产生影响，从而影响整个提取过程。 产生影响，从而影响整个提取过程。 根据实验来对酶反应的工艺条件进行优化 根据实验来对酶反应的工艺条件进行优化 ， 确定各参 优化， 数的最佳值。 数的最佳值。
灵芝多糖的研究及其提取工艺
灵芝多糖提取工艺1、灵芝多糖简介灵芝多糖是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质。
不溶于高浓度的酒精 , 微溶于低浓度的酒精及冷水 , 在热水中能全部溶解。
目前已分离到的有200多种，其中大部分为β–葡聚糖，少数为α–葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成，是一种螺旋状立体构形物，其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间主要以氢键固定，分子量从数百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。
灵芝多糖都存在于灵芝的细胞壁内壁。
灵芝多糖中除含有葡萄糖外 , 大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖 , 但含量较少。
单糖间糖苷键连接有1,3、 1,4 和 1, 6 数种。
大多为β型结构 , 少数为α- 型结构。
α-型多糖没有药理活性 ( 药效 ) 。
多数多糖链有分枝 , 部分多糖链含有小分子肤链。
多糖链分枝密度高或含有肤链的其药理活性也高。
灵芝多糖在水溶液中多糖链一般由三股糖链组成 , 在 o. 1 摩 / 升氢氧化纳溶液中时多糖链的三股糖链离解为单股单糖链。
多糖的药理活性与单糖间糖苷键的结合形式有关。
单糖间以β- 1 , 3 、 1, 6 或β-1,4 、 1, 6-糖苷键连接是有效的即具有药理活性 , 而纯β_-1 ,4- 糖背键连接的则没有药理活性。
此外 , 多糖的药理活性还与其立体构形有关 , 若螺旋形立体结构被破坏 , 其活性则大大下降。
淀粉、纤维素、糊精也是多糖 , 但其构形与灵芝多糖 ( 或其他真菌多糖 ) 不同。
淀粉、纤维素等多糖没有螺旋形立体结构 , 单糖间的连接全是β- 1,4-连接。
纤维素是β-型多糖 , 淀粉、糊精是α-型多糖。
由于其构形不同 , 所以淀粉、糊精、纤维素都没有药理活性。
灵芝多糖是灵芝的最有效成分之一 ,已分离到的灵芝多糖有 200 多种 , 其中有数十种的结构已被搞清 , 分子量已被测定。
现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤、抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质能力，延长寿命，灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性的特性。
灵芝活性多糖的提取工艺研究
灵芝活性多糖的提取工艺研究【摘要】目的确立水提醇沉法与超声提取法相结合提取灵芝活性多糖的最佳工艺。
方法以脾细胞代谢MTT活力为评价指标，采用正交试验对超声时间、水提温度和水提时间等因素进行考察，寻求最佳的提取工艺。
结果各因素对灵芝多糖脾细胞代谢MTT活力的影响大小排列为: 超声时间>水提温度>水提时间,超声时间对灵芝多糖活性影响显著。
提取最佳工艺为：超声提取时间20 min，水提取温度80 ℃，水提取时间2 h。
结论本工艺为提取活性灵芝多糖提供了一定的参考。
【关键词】灵芝多糖;脾细胞;提取工艺;正交试验Abstract:Objective To explore an optimum extraction procedure(water extraction–alcohol precipitation and ultrasonic extraction method) of active polysaccharides from Ganoderma lucidum.Methods By using colorimetric methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay of splenic cells of mice as evaluation indicator,orthogonal test was conducted to evaluate ultrasonic extraction time,water extraction temperature,and water extraction time to explore the optimal extraction procedure.Results The main influencing factors of colorimetric methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay of splenic cells of mice were ultrasonic extraction time，water extraction temperature，and water1extraction time in turn. The optimal conditions of orthogonal experiment：ultrasonic extraction for 20 minutes,water extraction at 80 ℃for 2 hours. Ultrasonic extraction time had significant effect on extraction of active polysaccharides from Ganoderma lucidum.Conclusion The technology provided references for extraction of active polysaccharides from Ganoderma lucidum.Key words:Ganoderma lucidum polysaccharides;splenic cells;extraction procedure;orthogonal experiments灵芝是我国传统的补益中药，现代研究表明灵芝多糖是其主要活性成分之一，灵芝多糖具有抗肿瘤及免疫调节作用[1，2]。
超声波酶法提取灵芝多糖的研究
超声波酶法提取灵芝多糖的研究吕京宁浙江大学材料与化学工程学院 高分子化工研究所摘要：灵芝古称瑞草,在我国作为药物有2000多年的历史。
临床和药理研究表明,灵芝具有多种生理活性与药理作用。
而灵芝多糖则是其最主要的有效成分,尤其它还具有抗肿瘤的活性功能。
灵芝多糖的常规提取方法已有报道,这些方法不仅费时,而且收率很低。
目前,超声技术已广泛应用于中药有效成分的提取,本文介绍了采用超声波酶法方法提取灵芝多糖的原理、工艺条件以及应用，与普 通方法相比，该法具有水解效率高，产品质量好等特点，同时还能缩短提取周期，并使反应条件更加温和。
关键词：灵芝多糖 提取 超声波酶法 纯化0 引言多糖因其具有多种生物活性已越来越硬起人们的重视，近年来，对真菌多糖的研究进展很快，灵芝多 糖作为一类非特异性免疫增强剂，具有抗血栓、抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、免疫调节、保肝、降压等作用， 因此在医药领域中具有很高的开发应用前景。
目前分离到的灵芝多糖达200种之多，大部分为β型葡聚糖， 分子量从数千到数万不等，不溶于高浓度乙醇，可在热水中溶解。
但提取灵芝多糖的传统工艺，生产周期 长，工艺复杂，从而增大了生产成本，并受资源来源的影响，使生产和临床应用受到限制。
因此如何有效 提取和分离纯化灵芝多糖是目前工作的重点 [1] 。
现代生物技术已广泛应用于许多领域，迄今为之，一批发酵工程产物已由实验室走向工业化生产，此 过程中，分离提纯技术起到了关键作用。
随着科学技术的发展，超临界萃取、超声波、微波、超滤、凝胶 电泳分离、新型吸附剂层析分离、真空冷冻干燥提取分离等技术，已经应用到中药及其天然植物研究及生 产领域中。
天然植物药用成分大多为细胞内产物，提取时多需进行细胞破碎，而现有的机械和化学方法有 时难于取得理想的破碎效果。
本研究表明，利用超声波产生的强烈振动、超高的速度、强烈的空化效应、 搅拌作用等，可加速药物有效成分进入溶剂 [2,3] ，具有提高得率，缩短提取时间，节约溶剂，有利于保护 有效成分等优点，此技术在中药有效成分提取、分离与制备工艺中已广泛应用 [4,5] 。
酶法提取灵芝多糖的工艺研究
灵芝(Ganoderma lucidum)是我国医学宝库中的 一味珍贵中药，含有多种有效药用成分，其中灵 芝多糖是一种非特异性免疫刺激剂，具有强化人 体免疫功能、抗肿瘤、抗衰老及清除自由基等生 理功能[1-3]。灵芝多糖的提取方法有水提法[4]、碱提 法、醇提法和酶提法等[5-7]，其中酶提法是利用酶 对细胞结构的破坏作用，使存在于细胞内部的多 糖释放出来，从而提高了多糖的得率。本文采用 纤维素酶、果胶酶和植物蛋白水解酶对灵芝进行 水解作用，研究灵芝多糖的最佳提取工艺，并探
2.2 酶法提取灵芝多糖的效应
2.2.1 酶浓度对多糖提取的影响 控制纤维素酶、
果胶酶和植物蛋白水解酶 pH 为 4.5、4.5 和 5.0，
酶 解 时 间 80 min， 温 度 50 ℃ ， 酶 浓 度 分 别 为
0.1%、0.5%、1.0%、2.0%、4.0%。酶浓度对提取
多糖含量的影响结果见图 1。
200
180
160
140
120
100
80
纤维素酶
60
果胶酶
40
植物蛋白水解酶
20
0
15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
温度/℃ 图 3 酶解温度对灵芝多糖提取的影响
从图 3 可以看出，纤维素酶和植物蛋白水解 酶酶解温度为 55 ℃时，多糖含量最高，分别为 192.56 mg/100 mL 和 169.87 mg/100 mL，因此选择 纤维素酶和植物蛋白水解酶最适反应温度为 55 ℃； 果胶酶酶解温度为 40 ℃时，多糖含量最高，为 163.56 mg/100 mL，因此选择果胶酶最适反应温度 为 40 ℃。 2.2.4 pH 对多糖提取的影响 控制纤维素酶酶浓 度 0.5%，时间 80 min，温度 55 ℃时， pH 值选择 3.5、 4.0、 5.0、 6.0； 果 胶 酶 和 植 物 蛋 白 水 解 酶 酶 浓度分别为 0.5%、1.0%，时间分别为 80、60 min， 温 度 分 别 为 40、 55 ℃ 时 ， pH 值 选 择 3.5、 4.5、 5.5、6.5。pH 对提取多糖含量的影响结果见图 4。
灵芝中有效成分提取方法
灵芝中有效成分提取方法作者：任奕来源：《农业科技与装备》2019年第06期摘要：根据灵芝多糖提取研究进展，综述热水提取法、超声波提取法、微波提取法、超声辅助酶解提取法、高压热水提取法、连续动态逆流提取法等提取方法的原理、特点和工艺条件，为开展灵芝有效成分提取提供借鉴。
关键词：灵芝多糖;提取工艺;热水;超声波中图分类号：R284.2文献标识码：A文章编号：1674-1161（2019）06-0047-02灵芝（GanodermaLucidumKarst）是孔菌科真菌灵芝的子实体，为我国传统的药食兼用的大型真菌，其孢子、菌丝和子实体均可利用，具有祛病延年、滋补强壮的作用。
现代研究表明：灵芝多糖是灵芝属真菌菌丝体的次生代谢产物，存于灵芝属真菌的菌丝体和子实体中，具有清除体内自由基、提高机体免疫力、降血糖等功效，是灵芝扶正固体的主要活性成分。
根据灵芝多糖提取研究进展，对灵芝多糖的提取工艺进行总结归纳，为灵芝多糖的开发利用提供借鉴和参考。
1 灵芝多糖的提取1.1 热水提取法热水提取法是提取灵芝多糖传统方法，提取时间长、能耗大、得率低、活性差。
杜鹏瑶探讨热水提取法提取树舌灵芝多糖的最佳提取工艺。
在单因素试验的基础上，运用响应面法优化提取的树舌灵芝多糖（GASP）各项参数。
提取时间、提取温度、液料比均对树舌灵芝多糖提取率有显著影响，顺序为提取时间>液料比>提取温度。
最佳工艺条件为：提取温度77℃、提取時间138min、液料比27∶1（mL∶g），多糖提取率为2.57%±0.05%。
王会宾等以超临界CO2萃取过灵芝孢子油后的灵芝孢子粉为原料，利用响应面设计试验优化灵芝孢子多糖的热水浸提工艺条件。
在单因素试验的基础上，以多糖提取率为响应值，利用Box-Behnken试验确定最佳提取工艺：提取温度91℃，提取时间3.3h，液料比15.8∶1（mL∶g），多糖提取率达3.69%，与理论值相对误差0.33%。
灵芝多糖快速提取工艺
正交实验法优化灵芝多糖快速提取工艺目的: 对灵芝多糖的快速提取工艺方法进行了优化，为工业化生产提供可靠的实验数据和理论依据。
方法: 采用正交试验设计提取方法，氧化酶反应比色法测定多糖含量。
结果最佳提取工艺为A3B2C3。
影响因素的大小依次为：脉冲数、料液比、电场强度。
此法提取的灵芝中多糖含量为0.416% ，得膏率达6.23%。
结论: 本提取工艺可行，经济、省时、回收率高。
灵芝提取物含有灵芝多糖、三萜类、蛋白质、微量元素、氨基酸等成分。
多糖能强化人体的免疫系统，是灵芝治疗各种疾病的主要成分[1]。
灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一。
因此，也特别受到医药科技工作者的重视，研究报道也最多。
现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力、提高机体耐缺氧能力、消除自由基、抑制肿瘤、抗辐射、延长寿命等。
灵芝多糖的提取方法多为加热浸提或超声提取等，费时、费力，耗能较大。
本试验以灵芝多糖和浸膏得率为指标，采用正交试验法优化高频电场提取工艺，具有快速、节能、低温提取等特点。
1 仪器与试药1.1 仪器LDT-100/4-25.2型中药高压脉冲电场提取装置（长春华迪生物科技开发有限公司）；OSB-2000旋转蒸发器（日本东京理化株式会社）；电子天平ALC-210.4（Sartorius group）；DZKW-D恒温数显水浴锅（河北黄骅市航天仪器厂）；101-3C型烘箱（上海实验仪器厂）；754型紫外可见分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司）1.2 试药灵芝购于吉林市，经中国农业科学院特产研究所常维春研究员鉴定为赤芝；所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 正交实验2.1.1 因素水平设计从安全性和灵芝多糖的特性考虑，采用水为提取溶剂；由于是连续流动进样提取，不需考虑提取温度、提取时间和提取次数的影响；又因为流速与脉冲数成相关，所以影110响提取的因素主要有：电场强度、脉冲数、料液比。
采用L9(34)正交表优化提取条件，重点考察上述3个因素，以浸膏得率和灵芝多糖为考察指标，见表1。
灵芝有效成分如何提取
2023-11-07•灵芝的简介•灵芝有效成分的种类•灵芝有效成分的提取方法•灵芝有效成分提取的工艺流程•灵芝提取物的应用和效果目•研究展望与挑战录01灵芝的简介灵芝的形态特征灵芝的形态各异，通常呈伞形或云状，颜色有深有浅，包括红、紫、黄、棕等颜色。
灵芝的菌盖通常有光泽，边缘通常平滑，有时会有锯齿状边缘。
灵芝的菌柄通常粗壮，表面有环状棱纹。
灵芝的生长环境灵芝不能在严寒或炎热的环境中生长，适宜的生长温度通常在20℃-30℃之间。
灵芝需要充足的湿度和适量的光线来生长，过于干燥的环境不利于其生长。
灵芝喜欢生长在温暖、湿润、有机物丰富的环境中，如森林的树根、树枝上或其他有机物上。
灵芝的药理作用灵芝具有免疫调节作用，能够增强人体的免疫力，提高抵抗力。
灵芝具有抗炎作用，能够减轻炎症反应，缓解疼痛和不适。
灵芝具有抗肿瘤作用，能够抑制肿瘤细胞的生长和扩散。
灵芝还具有抗衰老、抗疲劳、降血糖等多种药理作用。
02灵芝有效成分的种类灵芝多糖具有广泛的生理活性，如增强免疫力、抗肿瘤、抗衰老等。
灵芝多糖的提取方法包括热水浸提、有机溶剂沉淀、离子交换层析等。
提取条件如温度、时间、pH等都会影响灵芝多糖的提取效果。
灵芝多糖灵芝三萜灵芝三萜是灵芝中的重要活性成分之一，具有抗肿瘤、抗炎、保肝等作用。
灵芝三萜的提取方法包括有机溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、高速逆流色谱法等。
不同提取方法对灵芝三萜的纯度和得率都有一定影响。
灵芝腺苷灵芝腺苷是灵芝中的一种重要活性成分，具有改善记忆、抗衰老、保护神经等作用。
灵芝腺苷的提取方法包括放射免疫法、高效液相色谱法等。
提取条件如温度、时间、pH等都会影响灵芝腺苷的提取效果。
除了上述三种主要成分，灵芝中还含有多种其他活性成分，如灵芝酸、核苷、生物碱等。
这些成分也具有广泛的生理活性，如抗过敏、抗炎、抗肿瘤等。
提取方法根据不同成分的性质而定，如有机溶剂萃取法、吸附层析法等。
其他有效成分03灵芝有效成分的提取方法步骤将灵芝粉碎后，加入适量的有机溶剂，如乙醇、乙醚等，进行浸泡或搅拌，然后过滤掉杂质，得到含有有效成分的提取液。
纤维素酶在中药提取中的研究进展
纤维素酶在中药提取中的研究进展摘要：目的：对纤维素酶提取中药中有效成分的研究进行综述。
方法：查阅文献，纤维素酶提取中药材有效成分时，其工艺只比原工艺多了一步对原药材饮片的酶解处理。
结果：在纤维素酶的作用下，提高了中药材有效成分的收率，两种方法对比有显著性差异。
结论：酶法提取，具有高效、快速、省时、操作简便等优点。
关键词：纤维素酶酶解技术中药提取研究进展Abstract: Objective: This paper has summarized the research progress of effective components of Chinese herbs in cellulase extraction.Methods:Though literature review that cellulase on extracting effective components in traditional Chinese medicinal materials, the new process is one more step than the previous one which is enzyme treatment in the original Chinese herbal slices.Results: With the action of cellulase, improve the effective components in traditional Chinese medicinal materials yield, it had significant difference by comparing the two methods.Conclusion: Enzymatic extraction is high efficiency, fast, time-saving, easy operating etc..Key words :cellulase; enzyme technology; the extraction of traditional Chinese medicine; research progress中药酶解技术就是根据植物药材细胞壁是由纤维素构成，利用酶反应所具有的高效专一性，选择相应的酶，将细胞壁的组成成分水解或降解，破坏细胞壁结构，使其有效成分暴露出来，并溶解于溶剂中，从而达到提取细胞内有效成分的一种制剂新技术。
灵芝、香菇、黄芪、枸杞提取物中多糖的含量测定
的黄酮含量差异具有显著性!"#$%$$&’()讨论植物药的细胞壁是由纤维素构成*植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内(纤维素由+,-,葡萄糖以&*.,+,葡萄糖苷键连结*用纤维素酶酶解可以破坏+,-,葡萄糖键*使细胞壁破坏(实验中经过纤维素酶处理后再进行水回流提取*总黄酮含量比直接水提提高/0%12*这可能是由于纤维素酶可充分破坏竹叶以纤维素为主的细胞结构(植物中总黄酮的含量测定方法大多是采用提取液直接经显色反应后测定吸光度*然后计算含量(本实验对竹叶总黄酮的含量测定方法做了改进*提取液经过聚酰胺树脂纯化后再显色测定(提取液经过聚酰胺柱*水洗可以去除极性大的杂质*如糖类3多酚类等*使显色反应干扰减小*从而使测得的总黄酮含量准确度提高(456575895:;<&=>?@A BC D E F G H I J KL A@A F I L M I H@F I N JO P@Q F I L AI AR@S R L LT J@N J K @A H I F KQ@U@Q I F V F L K Q@N J A B J@Q F I N JL M V B J A P@H I Q@T K<W=%X Y Z[\]]^_‘!竹子研究汇刊’*&a a b*&1!0’;&c,/.%</=>?@A B C*dG e f*C G>C D g L S U@P I K L A K F G H V L A F L F@T O T@N L A L I HQ L A F J A F@A H@A F I O P J JP@H I Q@T@Q F I N JL O F?JT J@N J KL O R@S R L L*"h i j j]‘k Z l h i‘m n o p Z*@A Hq n m r o]\n j]\Z<W=%s h n m ZX s h n mtZ k_p t_u!中国中药杂志’*/$$/*/c!.’;/1.,/1c%<0=e I A Be v*w@W C*C Gx v*_k Z j D y U U T I Q@F I L AL O Q J T T G T@K J I A J M F P@Q F I L A L OF L F@TO T@N L A L I H L O^Z u n z"{_p Z p n Z_<W=%s h n m |p Z u n k}_p\-p{o‘!中草药’*/$$&*0/!&’;0c,0~%<.=w@!!D"P I S@P VK F G H VL O Q J T T G T@K J@U U T I J HI Ag?I A J K J H P G B K# J M F P@Q F I L A<W=%s h n m|p Z u n k}_p\-p{o‘!中草药’*&a a.*/1 !0’;&/0%灵芝3香菇3黄芪3枸杞提取物中多糖的含量测定张立*马琼*何永利*张朋涛$!西安高科实业股份有限公司天诚医药生物工程分公司*陕西西安c&$$c1’研究发现许多药用植物及真菌的多糖成分具有独特的生物活性;香菇多糖有抗肿瘤作用*灵芝多糖有调血糖和抗衰老的作用*枸杞多糖能提高机体免疫力并能抗衰老*黄芪多糖有双向调节血糖的作用(苯酚,硫酸法是比较经典的多糖含量测定方法*本实验优化了显色条件*统一了样品处理条件*同时测定了灵芝3香菇3黄芪3枸杞提取物中多糖含量*得到了稳定的检测结果(%仪器与试药&’(/&$&"g紫外,可见分光光度计!日本岛津’*)f(/1$超声波清洗仪!昆山淀山湖仪器厂’(葡萄糖等为分析纯*水为蒸馏水*灵芝3香菇3黄芪3枸杞提取物由本公司提供(*方法与结果/%&标准曲线制备;精密称取&$1+干燥至恒重的葡萄糖对照品约1$S B于1$S,量瓶中*加水溶解并加至刻度(分别精密移取该溶液&%$*/%$*0%$* .%$*1%$S,于1$S,量瓶中*加水稀释并加至刻度(各取&%$S,于/1S,具塞刻度试管中*分别加入12苯酚溶液&%$S,*摇匀*加入1%$S,浓硫酸!加入浓硫酸时*勿沿壁加入*应将移液管口悬于试管口*使浓硫酸垂直冲入液面’*立即摇匀(沸水浴加热&$S I A*冰水浴冷却*放至室温*以蒸馏水同法做空白参比*在.~1A S处测吸光度!-’(以-为横坐标*浓度为纵坐标*绘制标准曲线*得线性方程./ a.%a0*p/$%a a~~(线性范围;/$1&/$2B3S,( /%/供试品溶液的制备;精密称取提取物约/$$S B*置&$$S,量瓶中(按/$$S B加入&$$S,的比例*计算并加入~$2乙醇溶液*超声振荡/?(放置至室温*滤过*弃去滤液*用~$2乙醇溶液洗涤残渣0次(将残渣连同滤纸一同移入原&$$S,量瓶中*加入沸水共约~$S,*超声振荡&?*放置至室温定容*摇匀*滤过*取续滤液1%$S,于1$S,量瓶中!适于含量&$21b$2的样品*对于含量过低或过高样品*应适当改变移取体积’*加水定容*即得( /%0精密度试验;分别精密吸取.种供试品溶液&%$S,于/1S,具塞试管中*依/%&项下方法显色*测定-值*求得其4E5分别为$%c~2*$%1.2* &%$02*$%b/2!m/1’(/%.显色稳定性;将.种供试品溶液完成显色后*/ ?内连续测定*得其-值为一定值不变(/%1重现性试验;取.品种供试品*分别精密称取1份*制备供试品溶液并测定多糖含量*结果灵芝3香菇3黄芪3枸杞多糖的含量分别为&0%~c2*6cb&6中草药g?I A J K J!P@H I F I L A@T@A Hx J P R@T5P G B K第01卷第/期/$$.年/月$收稿日期;/$$0,$.,$~!!"#$%&$’"()%&’"**%&+,-分别为*"($%& $".’%&*"#!%&$"//%012’34/")回收率试验5取已知含量的#种供试品溶液&分别加入一定量的葡萄糖对照品溶液&混匀后取$"*67于/’67具塞试管中&依/"$项下方法显色&测定吸光度&计算回收率4结果灵芝8香菇8黄芪8枸杞的平均回收率及其+,-分别为$**")%& $"!)%012’39$*$"$%&/"$!%012#39(("’)%& /"#:012’39$*/".%&/"*$%012’34/":样品的测定5按上述/"$&/"/项下方法操作&测定了.批样品中的多糖&结果见表$4表;提取物中多糖含量测定结果0<2=3>?@A B;C D A E F?G G H?I J K B J LB M N I?G N F0<2=3样品多糖含量O%+,-O%灵芝*$$!P*)*P)’*/$/P!!$P/$枸杞*$’P#/*P::*/’P))*P#’黄芪*$$.P##$P$’*//*P!)*P.)香菇*$#*P):$P*’*/!’P/’$P*$=讨论!"$检测波长的选择Q$&/R5取反应溶液&以蒸馏水同法做空白&在!**S:**T6做吸光度扫描&得其最大吸收波长为#.’T64!"/水浴条件选择5取对照品溶液与供试品溶液做不同水浴时间及水浴方式的实验&结果表明水浴时间及方式对反应影响不大4!"!浓硫酸加入方式的选择5试验发现&加入浓硫酸的操作方法是影响显色结果的主要因素4常规试剂加入方法引起显色结果不平行4采取U移液管悬空&垂直加入浓硫酸&立即摇匀V的方式和U缓慢沿壁加入浓硫酸&分层&静置一定时间后摇匀V的加入方式&都能得到稳定的显色结果4但是不同操作方法显色结果不同4灵芝8枸杞8黄芪8香菇样品与葡萄糖对照品都在U垂直加入浓硫酸8立即摇匀V的操作条件下显色反应最充分4故选择该操作步骤为实验条件4 !"#对照品的选择Q!R5本实验对灵芝8枸杞8黄芪8香菇多糖样品和葡萄糖8果糖对照品都做了不同浓硫酸加入方式的实验4结果发现&灵芝8枸杞8黄芪8香菇样品和葡萄糖对照品现象一致&所以选择葡萄糖做为检测灵芝8枸杞8黄芪和香菇样品的对照品4 !"’供试品溶液制备条件的选择5采用.*%乙醇超声除去样品中的单糖&则方法平行性差4通过实验&确定了U根据实际称样量按比例加入.*%乙醇&超声振荡/W V的条件&得到了稳定的检测结果4 !")灵芝8香菇8黄芪8枸杞提取物是组成较复杂的粗多糖产品&本方法以葡萄糖做对照&检测结果以葡萄糖计&得到稳定的检测结果4X B Y B I B L G B F5Q$R-Z T[\&]W^T[7_&‘a T[b c P dZ e f g f^eh W^T Z i j k l i g l m f n a n f e 6^o W Z eg Z me^o^m6f T a o f Z TZ go W^n Z T o^T oZ gZ i f[Z j a T eh Z i p j k a n n W a m f e^k Q b R"q r s1t r u v w x0中国药学杂志3&$(()&!$ 0(35’’*j’’!"Q/R_l y&-f T[z\&_l,&{|u}P~W^6^o W Z e m^k^a m n W Z g i^T o f T a Te^o^m6f T a o f Z T Q b R"q r s1ut!"}s#${u}|r0中国公共卫生3&/***&$)0!35/#’j/#)"Q!R7f T_&%l_d&%l%&{|u}P~W^a n n l m a n pm^k^a m n WZ g e^o^m6f T a o f Z TZ g k l[a m k f TT a o l m a i h m Z e l n o k Q b R"&u|t v’(){* +{,0天然产物研究与开发3&$(()&.0!35’j:"女宝胶囊的显微特征与薄层色谱鉴别王勋久&王益平-0重庆市万州区药品检验所&重庆#*#***3女宝胶囊质量标准收载于.中华人民共和国卫生部药品标准/中药成方制剂第五册4处方由人参8川芎8鹿胎粉8银柴胡8牡丹皮8阿胶8龟甲8鳖甲8白芍8肉桂8白术8泽泻8杜仲8荆芥穗8鹿茸等#’味中药组成&标准中只有工艺制法及检查项4本实验采用显微观察&对荆芥穗8白芍8人参8杜仲8泽泻8白术8肉桂8鹿茸.味药进行显微鉴别&采用薄层色谱法对处方中的人参8白芍8白术贵重药进行定性鉴定4 ;材料与试剂女宝胶囊由吉林省四平市好得快药业有限公司生产&批号/**/*.*$9对照品8对照药材均由中国药品生物制品检定所提供9硅胶z0青岛海洋化工厂生.)$0中草药y W f T^k^~m a e f o f Z T a i a T e1^m2a i-m l[k第!’卷第/期/**#年/月-收稿日期5/**!j*#j$$灵芝、香菇、黄芪、枸杞提取物中多糖的含量测定作者：张立， 马琼， 何永利， 张朋涛作者单位：西安高科实业股份有限公司天诚医药生物工程分公司,陕西,西安,710075刊名：中草药英文刊名：CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS年，卷(期)：2004，35(2)被引用次数：28次1.Dong Q.Zheng L Y.Fang J N Modified phenol-sulfuric acid method for determination of the content of oligo- and poly- saccharides 1996(09)2.Yu C.Ding G Q.Yu S The method 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从灵芝的深层发酵菌丝体中提取灵芝多糖的方法[发明专利]
![从灵芝的深层发酵菌丝体中提取灵芝多糖的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/50327ddb5a8102d277a22f39.png)
专利名称：从灵芝的深层发酵菌丝体中提取灵芝多糖的方法专利类型：发明专利
发明人：安德荣,宋双
申请号：CN201210109007.8
申请日：20120414
公开号：CN102643364A
公开日：
20120822
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种从灵芝的深层发酵菌丝体中提取灵芝多糖的方法，将灵芝的深层发酵菌丝体与其重量2-4倍的纯净水混合，调整pH值至4后加温，当温度上升至40-50℃时加入由木瓜蛋白酶、果胶酶、纤维素酶组成的复合酶，一个小时后升温至60-70℃，此时用NaOH调整pH值至7-8，每分钟以8-10转搅拌，浸提2-4次，每次2-3小时，将2-4次浸提液合并过滤，减压浓缩至总体积30％，用乙醇沉淀浓缩液，过滤得上清液，上清液用超过滤分离装置脱盐，经反复加水稀释和超过滤操作，获得灵芝多糖浓缩液，浓缩液经冷冻干燥或喷雾干燥得灵芝多糖纯度达到97％以上的灵芝多糖粉末。
该方法避免使用任何有机溶剂，无污染物质排放，适合大规模工业化生产。
申请人：西北农林科技大学
地址：712100 陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号
国籍：CN
代理机构：西安恒泰知识产权代理事务所
代理人：李郑建
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50ml，取 1.0ml 稀 释 液 于 25ml 比 色 管 ，后 加 入 5%的 苯 酚 溶 液 1.0ml，
振荡摇匀，加入 6.0ml 的浓硫酸，迅速振摇混 匀 ，于 室 温 放 置 30min 后
490nm 处测 A。
2.2.2.4 灵芝总糖量计算
根据标准曲线计算出样品液中总糖的浓度后按下式计算总糖量。
1 仪器与试药
HY-02 型 高 速 粉 碎 机 （北 京 环 亚 天 元 机 械 技 术 有 限 公 司 ），上 海 菁华 754 分光光度计，电子天平，HH-S 型恒温水浴 锅 （江 苏 国 盛 实 验 仪 器 厂 ），循 环 式 多 用 真 空 泵 SHZ-IIIB（临 海 市 谭 氏 真 空 设 备 有 限 公 司）。
灵芝子实体（江苏农林职业技术学院食用菌研究所）；纤维素酶活 力≥400U/mg ；浓 硫 酸 、苯 酚 、无 水 葡 萄 糖 、乙 醇 均 为 国 产 分 析 纯 。
关系良好。
2．2.2.3 样品溶液总糖浓度的测定
将 得 到 的 提 取 溶 液 定 容 到 100ml， 精 密 移 取 2.0ml 稀 释 定 容 至
纤维素酶提取灵芝多糖的单因素研究
吕兴萍 杨薇红 马春娇 （江苏农林职业技术学院，江苏 句容 212400）
【摘 要】利用纤维素酶从灵芝子实体中提取灵芝多糖，通过单因素实验研究酶量、酶解时间、料液比、酶解温度对灵芝多糖提取率的影响。 实验结果表明：纤维素酶能够显著提高灵芝多糖的提取率，提取的最佳工艺条件为酶量 2.0％，酶解时间 90min，料液比 1:30，温度 50℃。
灵芝总糖量=浓度×体积×稀释倍数
2.2.3 多糖提取率的计算方法
灵
芝多
糖提
取率=
灵
芝总
糖量-还原糖 供试品量
量
*100%
2.3 单因素试验
2.3.1 酶量
固定其他因素， 分别考察加酶量为 0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%
时灵芝多糖的提取率。
2 方法与结果
2.1 多糖的提取方法
干燥的灵芝切片在高速粉碎机下粉碎至一定粒度， 精密称取
0.25g 的灵芝粉及适量的纤维素酶加入去离子水在一定温度水浴下进
行酶解提取，后在沸水浴中灭酶 4 分钟，抽滤得提取液。
2.2 多糖的含量测定方法
2.2.1 还原糖的测定-DNS 法[7]
2.2.1.1 试液的制备
对照溶液的制备： 精确称取在 105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品
25mg，置 100ml 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
样品溶液的制备：灵芝多糖提 取 液 定 容 至 100ml，移 取 50ml 减 压
蒸馏浓缩后加蒸馏水至 10ml，备用。
2.2.1.2 样品还原糖的测定方法
精密吸取样品液 1ml，对照品溶液 1ml，分别置于 25ml 容量瓶中，
各加 1.5mlDNS 试剂，摇匀置沸水浴中加热 5min，迅速用凉水冷却。 分
1.0ml 置 于 25ml 比 色 管 中 ， 一 次 添 加 水 至 1.0ml， 加 入 5% 的 苯 酚
1.0ml，摇 匀 ，加 入 6.0ml 的 浓 硫 酸 ，迅 速 振 摇 混 匀 ，于 室 温 放 置 30 min
后 490nm 处测吸光度。 以葡萄糖溶液的浓度 mg/ml 为横坐标，
对 照 品 溶 液 的 制 备 ： 精 密 称 取 10mg 干 燥 至 恒 重 的 无 水 葡 萄 糖,
加水使之溶解，定容至 100ml，即得 0.1mg/ml 葡萄糖对照品溶液。
2.2.2.2 标准曲线的绘制
分 别 精 密 量 取 0.1mg/ml 葡 萄 糖 对 照 品 溶 液 0、0.2、0.4、0.6、0.8、
图 2 酶解时间对多糖提取率的影响 由图 2 可见，随着酶解时间的增加，灵芝多糖的提取率也增加，到 90min 以 后 ，多 糖 得 率 几 乎 不 增 大 ，故 选 择 90min 为 最 合 适 的 酶 解 时 间。 2.3.3 料液比 固定其他因素，分别考察料液比为 1:10、1:20、1:30、1:40 条件下灵 芝多糖的提取率。
灵芝多糖存在于子实体的细胞壁内壁，而子实体结构紧密，在提 取过程中传质阻力比较大，且灵芝多糖相对分子量很大，仅靠单纯的 扩散原理的传统提取方法的提取效率较低。 而酶法是一种通过酶解破 坏细胞结构来强化有效成分的传质过程，能最大限度提取中药有效成 分的方法[6]，越来 越 受 到 重 视 。 故 本 试 验 选 取 灵 芝 作 为 酶 法 提 取 的 对 象，试图破坏灵芝的细胞壁结构，来提高灵芝多糖提取效率，对于实际 应用有着现实的意义。
别加水至刻度， 摇匀。 以水 1ml 按同样方法操作所得溶液作空白，在
520nm 分别测定吸光度值。
2.2.1.3 样品还原糖量的计算方法
还
原
糖量=
样
品
液
吸光度值×每
ml 对照品中所含糖的克数×样品稀释倍数 标准品吸光度值
2.2.2 总糖含量的测定—苯酚-硫酸法
2.2.2.1 试液的制备
5%苯 酚 溶 液 的 制 备 ：精 密 称 取 5g 苯 酚(重 蒸 馏)，加 水 使 之 溶 解 ，
为纵坐标，绘制标准曲线。 求得标准曲线回归方程为 y=6.9650x+0.0057，
r=0.9999，在 0.02-0.10mg/ml 范 围 内 ，葡 萄 糖 曲 线 C 与 吸 光 度 A 线 性
图 1 酶量对多糖提取率的影响 由图 1 可知，在加酶量为0.5％～2.0％之间 时 ，随 着 酶 量 的 增 加 ，整 个体系中酶浓度上升，同一时间内酶与底物的接触机会增加，被酶水 解的底物分子数增加，致使灵芝多糖能更多更快地提取出来。 当酶量 超 过 2.0％时 ，灵 芝 多 糖 的 提 取 率 略 有 增 加 ，但 考 虑 成 本 等 因 素 ，选 择 2.0％的 酶 量 较 为 合 理 。 2.3.2 酶解时间 固 定 其 他 因 素 ， 分 别 考 察 酶 解 时 间 为 30min、60min、90min、 120min 时灵芝多糖的提取率。
【关键词】灵芝多糖；提取；纤维素酶
0 引言
灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，素有“仙草”之美 誉[1]。 古今药理与临床研究均证明，灵芝有防病治病延年益寿之功效 。 而灵芝多糖是灵芝的主要活性成分，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、 抗 辐 射 、抗 衰 老 以 及 活 血 化 瘀 等 广 泛 的 药 理 活 性 , [2-5] 因 此 灵 芝 多 糖 也 是目前灵芝研究的一个热点。