纤维素酶提取灵芝多糖的单因素

50ml，取 1.0ml 稀 释 液 于 25ml 比 色 管 ，后 加 入 5%的 苯 酚 溶 液 1.0ml，
振荡摇匀，加入 6.0ml 的浓硫酸，迅速振摇混 匀 ，于 室 温 放 置 30min 后
490nm 处测 A。
2.2.2.4 灵芝总糖量计算
根据标准曲线计算出样品液中总糖的浓度后按下式计算总糖量。
灵芝总糖量=浓度×体积×Baidu Nhomakorabea释倍数
2.2.3 多糖提取率的计算方法
灵
芝多
糖提
取率=
灵
芝总
糖量-还原糖 供试品量
量
*100%
2.3 单因素试验
2.3.1 酶量
固定其他因素， 分别考察加酶量为 0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%
时灵芝多糖的提取率。
2 方法与结果
2.1 多糖的提取方法
干燥的灵芝切片在高速粉碎机下粉碎至一定粒度， 精密称取
0.25g 的灵芝粉及适量的纤维素酶加入去离子水在一定温度水浴下进
行酶解提取，后在沸水浴中灭酶 4 分钟，抽滤得提取液。
2.2 多糖的含量测定方法
2.2.1 还原糖的测定-DNS 法[7]
2.2.1.1 试液的制备
对照溶液的制备： 精确称取在 105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品
25mg，置 100ml 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
1.0ml 置 于 25ml 比 色 管 中 ， 一 次 添 加 水 至 1.0ml， 加 入 5% 的 苯 酚
1.0ml，摇 匀 ，加 入 6.0ml 的 浓 硫 酸 ，迅 速 振 摇 混 匀 ，于 室 温 放 置 30 min
后 490nm 处测吸光度。 以葡萄糖溶液的浓度 mg/ml 为横坐标，吸光度 A
灵芝多糖存在于子实体的细胞壁内壁，而子实体结构紧密，在提 取过程中传质阻力比较大，且灵芝多糖相对分子量很大，仅靠单纯的 扩散原理的传统提取方法的提取效率较低。 而酶法是一种通过酶解破 坏细胞结构来强化有效成分的传质过程，能最大限度提取中药有效成 分的方法[6]，越来 越 受 到 重 视 。 故 本 试 验 选 取 灵 芝 作 为 酶 法 提 取 的 对 象，试图破坏灵芝的细胞壁结构，来提高灵芝多糖提取效率，对于实际 应用有着现实的意义。
图 2 酶解时间对多糖提取率的影响 由图 2 可见，随着酶解时间的增加，灵芝多糖的提取率也增加，到 90min 以 后 ，多 糖 得 率 几 乎 不 增 大 ，故 选 择 90min 为 最 合 适 的 酶 解 时 间。 2.3.3 料液比 固定其他因素，分别考察料液比为 1:10、1:20、1:30、1:40 条件下灵 芝多糖的提取率。
样品溶液的制备：灵芝多糖提 取 液 定 容 至 100ml，移 取 50ml 减 压
蒸馏浓缩后加蒸馏水至 10ml，备用。
2.2.1.2 样品还原糖的测定方法
精密吸取样品液 1ml，对照品溶液 1ml，分别置于 25ml 容量瓶中，
各加 1.5mlDNS 试剂，摇匀置沸水浴中加热 5min，迅速用凉水冷却。 分
为纵坐标，绘制标准曲线。 求得标准曲线回归方程为 y=6.9650x+0.0057，
r=0.9999，在 0.02-0.10mg/ml 范 围 内 ，葡 萄 糖 曲 线 C 与 吸 光 度 A 线 性
图 1 酶量对多糖提取率的影响 由图 1 可知，在加酶量为0.5％～2.0％之间 时 ，随 着 酶 量 的 增 加 ，整 个体系中酶浓度上升，同一时间内酶与底物的接触机会增加，被酶水 解的底物分子数增加，致使灵芝多糖能更多更快地提取出来。 当酶量 超 过 2.0％时 ，灵 芝 多 糖 的 提 取 率 略 有 增 加 ，但 考 虑 成 本 等 因 素 ，选 择 2.0％的 酶 量 较 为 合 理 。 2.3.2 酶解时间 固 定 其 他 因 素 ， 分 别 考 察 酶 解 时 间 为 30min、60min、90min、 120min 时灵芝多糖的提取率。
【关键词】灵芝多糖；提取；纤维素酶
0 引言
灵芝为多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，素有“仙草”之美 誉[1]。 古今药理与临床研究均证明，灵芝有防病治病延年益寿之功效 。 而灵芝多糖是灵芝的主要活性成分，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、 抗 辐 射 、抗 衰 老 以 及 活 血 化 瘀 等 广 泛 的 药 理 活 性 , [2-5] 因 此 灵 芝 多 糖 也 是目前灵芝研究的一个热点。
灵芝子实体（江苏农林职业技术学院食用菌研究所）；纤维素酶活 力≥400U/mg ；浓 硫 酸 、苯 酚 、无 水 葡 萄 糖 、乙 醇 均 为 国 产 分 析 纯 。
关系良好。
2．2.2.3 样品溶液总糖浓度的测定
将 得 到 的 提 取 溶 液 定 容 到 100ml， 精 密 移 取 2.0ml 稀 释 定 容 至
别加水至刻度， 摇匀。 以水 1ml 按同样方法操作所得溶液作空白，在
520nm 分别测定吸光度值。
2.2.1.3 样品还原糖量的计算方法
还
原
糖量=
样
品
液
吸光度值×每
ml 对照品中所含糖的克数×样品稀释倍数 标准品吸光度值
2.2.2 总糖含量的测定—苯酚-硫酸法
2.2.2.1 试液的制备
5%苯 酚 溶 液 的 制 备 ：精 密 称 取 5g 苯 酚(重 蒸 馏)，加 水 使 之 溶 解 ，
1 仪器与试药
HY-02 型 高 速 粉 碎 机 （北 京 环 亚 天 元 机 械 技 术 有 限 公 司 ），上 海 菁华 754 分光光度计，电子天平，HH-S 型恒温水浴 锅 （江 苏 国 盛 实 验 仪 器 厂 ），循 环 式 多 用 真 空 泵 SHZ-IIIB（临 海 市 谭 氏 真 空 设 备 有 限 公 司）。
纤维素酶提取灵芝多糖的单因素研究
吕兴萍 杨薇红 马春娇 （江苏农林职业技术学院，江苏 句容 212400）
【摘 要】利用纤维素酶从灵芝子实体中提取灵芝多糖，通过单因素实验研究酶量、酶解时间、料液比、酶解温度对灵芝多糖提取率的影响。 实验结果表明：纤维素酶能够显著提高灵芝多糖的提取率，提取的最佳工艺条件为酶量 2.0％，酶解时间 90min，料液比 1:30，温度 50℃。
定容至 100ml，棕色瓶保存。
对 照 品 溶 液 的 制 备 ： 精 密 称 取 10mg 干 燥 至 恒 重 的 无 水 葡 萄 糖,
加水使之溶解，定容至 100ml，即得 0.1mg/ml 葡萄糖对照品溶液。
2.2.2.2 标准曲线的绘制
分 别 精 密 量 取 0.1mg/ml 葡 萄 糖 对 照 品 溶 液 0、0.2、0.4、0.6、0.8、