响应面法优化枯草芽孢杆菌产蛋白酶的发酵条件

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枯草芽孢杆菌产蛋白酶的发酵培养基优化

在国内外蛋白酶研究领域中，在不同发酵工艺下，同菌株或同一菌株的酶活也有较大的差异，不酶活的高低直接影响着酶的应用效果。因此，高蛋白提酶酶活的研究是很有必要的，近几年，内对提高最国蛋白酶酶活的研究有了较大进展，卓林霞等艮的道枯草芽孢杆菌，发酵酶活力可达６８／；继平等其４Ｕｇ郭
方进行优化，定了影响Ｂ一确ＤＴ３菌株发酵液含菌量的３个重要因子依次为玉米粉、白胨和淀粉；这３个因子进蛋对行爬坡路径试验，过响应面分析法确定了主要影响因子的最佳条件。优化后的发酵液酶活力为５．ＯｍＬ相比通５Ｕ／，９采用初始发酵培养基提高了１．９１％。４关键词：草芽孢杆菌；酵培养基；应面法；白酶枯发响蛋中图分类号：９９７Ｑ３．９文献标识码：Ａ文章编号：６４５６２１）４０７ — ０５１７ — ０Ｘ（０１Ｏ — ０７００
Ｔｃｎｌｇ，Ｗｕａ３０８Ｃｉａｅｈｏｏｙｈｎ４０６，ｈｎ）
ＡｂｔａｔＰａｋｔ— ｒｎｄｓｇｎｅｐｎｅｓｒｃｎｌｓｓｗｅｅｓｄｏｐｉｚｈｅｍｅｔｔｎｍｅｉｍｆｓｒｃ：ｌｅｅｔＢｕｍａｅｉｎａｄｒｓｏｓｕｆｅａａｙｉａｒｕｅｔｏｔｍｉｅｔｅｆｒｎａｉｄｕｏｏＢａｉｕｕｔｉＢｃｌｓｓｂｉｓＤＴ－．ＢｓｄｏｈｅｕｔｏｌｃｅｔＢｒｎｄｓｇ，ｏｔｎａｔｒｆｅｔｇｔｅｙｅｄｏａｉｕｌｌ３ａｅｎｔｅｒｓｌｆＰａｋｔ－ｕｍａｅｉｎｉｓｍｐｒｔｆｃｏｓａｆｃｉｈｉｌｆＢｃｌｓａｎｌｓｂｉｓｕｔｉｌＢＤ－ｗｒＯＩｌｕ，ｅｔｎ，ｓｒｈＴｅ，ｅｈｅｆｃｏｓｗｅｅｕｔｅｐｉｚｄｓｎｒｓｏｓｓｒａｅＴ３ｅｅＣＩｌｏｒｐｏｅｔｃ．ｈｎｔｔｒｅａｔｒｒｆｒｒｏｔｆｐａｈｈｍｉｕｉｇｅｐｎｅｕｆｃｅａａｙｉ．ｈｈｅａｔｒｅｅｆｒｈｒｏｔｚｄｕｉｇｒｓｏｓｕｆｃｎｌｓｓＴｅｅｚｍｅａｔｉｆｒｏｔｍｉａｉｎｆｒｎｌｓｓｔｅｔｒｅｆｃｏｓｗｒｕｅｐｉｅｓｎｅｐｎｅｓｒｅａａｙｉ．ｈｎｙｃｉｔａｔｐｉｚｔｏｔｍｉａｖｙｅｏ５．０／，ｉｈｗａ．９ｈｇｅａｎｔｌｍｅｉｍ．５９ＵｍＬｗｈｃｓ１４％ｉｈｒｔｎｉｉａｄｕ１ｈｉ

响应面法优化芽孢杆菌LJ-7发酵产酯酶条件

响应面法优化芽孢杆菌LJ-7发酵产酯酶条件齐勇;王际辉;叶淑红;王晗;陈富远【期刊名称】《大连工业大学学报》【年(卷),期】2012(031)003【摘要】为了获得海洋芽孢杆菌LJ-7发酵产酯酶的最佳条件,采用响应面法对其发酵条件进行了优化.首先,通过单因素试验选出对酯酶产量影响较显著的3个因素,即发酵温度、初始pH和发酵时间.在单因素试验的基础上,采用Box-Benhnken中心组合方法进行三因素三水平的试验设计,以酶活为响应值,利用响应面分析法进行进一步优化,确定最佳发酵条件为:发酵时间42.81h,发酵温度29.40℃,pH为6.21,此时预测的酯酶酶活为24.91U/mL.在此最佳条件下,平行试验测得实际酶活为24.63U/mL,达到理论预测值的95％以上.该模型较好地预测了实际发酵情况,得到的优化条件具有实际应用价值.【总页数】4页(P177-180)【作者】齐勇;王际辉;叶淑红;王晗;陈富远【作者单位】大连工业大学辽宁省食品生物技术重点实验室,辽宁大连 116034;大连工业大学辽宁省食品生物技术重点实验室,辽宁大连 116034;大连工业大学辽宁省食品生物技术重点实验室,辽宁大连 116034;大连工业大学辽宁省食品生物技术重点实验室,辽宁大连 116034;大连础明集团有限公司,辽宁大连 116021【正文语种】中文【中图分类】TS201.25;TQ920.6【相关文献】1.响应面法优化解淀粉芽孢杆菌产细菌纤维素发酵条件 [J], 林伟铃;朱宏阳;饶雪娥;杨宏芳;李泳宁2.响应面法优化甲基营养型芽孢杆菌J2B-74代谢产细菌素的发酵条件 [J], 王松;游玲;陈杰;邓小娅;王涛3.响应面法优化多黏类芽孢杆菌BD3736发酵脱脂乳产α-葡萄糖苷酶抑制剂的工艺条件 [J], 冯华峰4.响应面法优化枯草芽孢杆菌MX-6产纳豆激酶发酵条件 [J], 满丽莉; 向殿军5.响应面法优化枯草芽孢杆菌发酵玉米秸秆产腐植酸条件 [J], 陈勇强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

响应面法优化生防枯草芽孢杆菌B579固相发酵工艺

响应面法优化生防枯草芽孢杆菌B579固相发酵工艺作者：孙冰冰杨秀荣郝永娟李伟魏军田涛来源：《山东农业科学》2016年第05期摘要：为提高生防芽孢杆菌的发酵水平，利用响应面法对生防枯草芽孢杆菌B579进行固相发酵条件优化，以建立一套适合生防芽孢杆菌的固相发酵技术体系。

首先通过Plackett-Burman试验筛选出对发酵产量影响显著的重要因素，然后进行最陡爬坡试验逼近最大菌体产量值区域，通过Box-Behnken和响应面试验设计，得到回归模型，并对回归模型进行回归分析和实践验证。

结果表明：对发酵产量影响显著的3个重要因素为牛肉膏、玉米粉和可溶性淀粉，当其浓度分别为15.1、10.3 g/kg和9.14 g/kg时，发酵水平达到最高，为1.93×1011cfu/g，比液相发酵水平提高了15倍；经验证该模型准确可靠。

关键词：生防芽孢杆菌；固相发酵；响应面法中图分类号：S482.2+92文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）05-0062-05Abstract To enhance the fermentation level of biocontrol Bacillus， the solid-state fermentation conditions of Bacillus subtilis B579 were optimized using response surface methodology to establish the related technology system. Firstly， the Plackett-Burman experiment was applied to screen the importan influential factors， and then the path of steepest ascent was used to approach the biggest region of the cell yield. Moreover， the Box-Benhnken experimental design and response surface methodology were employed to get the regression model， which was proved through regression analysis and practice verification. The results showed that the three factors affecting fermentation production were beef extract， corn meal and soluble starch. The fermentation production reached the highest as 1.93×1011cfu/g， when the content of beef extract， corn meal and soluble starch were 15.1， 10.3 and 9.14 g/kg respectively. Under the optimized fermentation conditions， the solid fermentation production of biocontrol Bacillus increased by 15 times compared to the liquid fermentation. The regression model was verified to be accurate and reliable.Key words Biocontrol Bacillus； Solid-state fermentation； Response surface methodology一直以来，化学农药及肥料的使用对于植物病虫害防治和提高农作物产量品质起到重要作用，但大量有害化合物的使用造成了土壤和地下水的严重污染，对生物及人类的生存也造成了严重危害。

响应面法优化植物乳杆菌代谢产细菌素的发酵条件

响应面法优化植物乳杆菌代谢产细菌素的发酵条件陈琳，孟祥晨*(东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨 150030)摘要：为提高一株分离自内蒙古传统发酵稀奶油“焦克”中的植物乳杆菌KLDS1.0391代谢产细菌素量，以中性蛋白酶水解脱脂乳为培养基，以枯草芽孢杆菌为指示菌，以抑菌圈直径为考察指标，在单因素试验的基础上，采用响应面法优化发酵pH 值、温度以及接种量。

结果表明：对该菌代谢产细菌素的活性影响大小依次为：发酵pH 值＞接种量＞发酵温度；最优发酵条件为：pH5.1、发酵温度33℃、接种量1%。

在此条件下，发酵液的抑菌圈直径为15.00mm ，细菌素的效价为601.32IU/mL ，较优化前提高了43.08%。

在最优发酵条件下获得的实验结果与模型预测值吻合，说明所建立的模型是切实可行的。

关键词：响应面；细菌素；植物乳杆菌；焦克Optimization of Fermentation Conditions of Lactobacillus plantarum for Bacteriocin Production by ResponseSurface MethodologyCHEN Lin ，MENG Xiang-chen*(Key Laboratory of Dairy Science, Ministry of Education, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China)Abstract ：The fermentation condition of Lactobacillus plantarum KLDS1.0391 isolated from Jiaoke , a traditional fermented cream from Inner Mongolia in China, were optimized for bacteriocin production. Skim milk hydrolyzed by neutral protease was used as the medium; Baicillus subtilis was used as indicator bacteria and diameter of inhibition zone was used as evaluation index of antibacterial activity. Based on the single factor tests, the optimal fermentation conditions for producing antibacterial components with high yield in this strain was explored by response surface methodology with three variables of fermentation pH, fermentation temperature and inoculation amount. Results indicated that the order for affecting the yield of antibacterial components from strong to weak was fermentation pH, inoculation amount and fermentation temperature. The optimal fermen-tation conditions were pH 5.1, inoculation amount of 1% and fermentation temperature of 33 ℃. Under these optimal conditions,the diameter of inhibition zone reached up to 15.00 mm. The antibacterial activity was increased by 43.08% and reached up to 601.32 IU/mL. Therefore, it is feasible for the established model due to the consistent results between the prediction and experiments.Key words ：response surface ；bacteriocin ；Lactobacillus plantarum ；Jiaoke中图分类号：TQ920.6 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2011)03-0176-05收稿日期：2010-04-16基金项目：黑龙江省留学归国科学基金项目(LC2009C30)；国家“863”计划项目(2008AA10Z335)作者简介：陈琳(1985—)，女，硕士研究生，主要从事食品微生物研究。

响应面法优化枯草芽孢杆菌产γ-PGA的条件

（．ＮｒｅｓＡｃｌｒｌｎｖｒｔ，Ｈｒｉ５００Ｃｉａ２－ｅｂｎＵｉｒｉｆｏｍｒｅａｂ５０６Ｃｉａ１ｏｈａｔｕｔａＵｉｅｓｙａｂｎ１０３，ｈｎ；．ＩａｒｉｎｖｓｙｏＣｍｅｃ，Ｈｒｉ１０７，ｈｎ）ｔｕｉｌｅｔｎ
范洪臣，艳华梁金钟王立群李，，
（．东北农业大学生命科学学院，尔滨１０３；．哈尔滨商业大学食品ｚ￣ｑ院，１哈５００２＿－哈尔滨１０７）５０６
摘
要：对枯草芽孢杆菌液体发酵产．聚谷氨酸［ｐｌ（ｌｔｉａｉ）一Ｇ条件进行了优化。首先采用单因一ｏｇａｃｃｄ，ＰＡ］ｙｕｍ
ｍｉｅ．Ｕｓｎｉｇｅｆｃｏｉｌｘｅｍｅｔ，ｓｕｒｅｆｃｒｏｚｄｉｇｓｎｌａｔｒａｅｐｒｎｓｏｃｓｏａｂｎ，ｎｔｏｅｎｉｏｇｎｃｉｎｗｅｅｅｅ — ｉｉｒｇｎａｄｎｒａｉｏｓｒｄｔｒ
胨、氨酸钠和ＮＣ的最佳质量分数分别为０５％，．３和０９％。优化后液体发酵液 —Ｇ产量提高到谷ａ１．４８１％．６ＰＡ２．ｏＬ比初始．Ｇ９０，ＰＡ产量１．０Ｌ提高了２倍。４１
ｂｅｐｏｅｓｒａｅｍｅｈｏｏｏｙｙｒｓｎｓｕｆｃｔｄｌｇ
ＦＡＮｎ —ｈｎＬｎｈａ，ＩＨｏｇｃｅ，ＩＹａ — ｕＬＡＮＧＪｎｚｏｇ，ＡＮＧｉｑｎｉ —ｈｎＷＬ— ｕ

枯草芽孢杆菌发酵制备花生饼粕、花生茎叶混合饲料条件优化研究

辽宁农业科学㊀2021(3):49~53Liaoning Agricultural Sciences文章编号:1002-1728(2021)03-0049-05㊀㊀㊀㊀㊀㊀doi:10.3969/j.issn.1002-1728.2021.03.011枯草芽孢杆菌发酵制备花生饼粕㊁花生茎叶混合饲料条件优化研究∗迟吉捷,石太渊(辽宁省农业科学院食品与加工研究所,辽宁沈阳㊀110161)摘要:以花生饼粕㊁花生茎叶混合饲料为原料,筛选最佳枯草芽孢杆菌培养条件为目标,研究料液比㊁接种量㊁发酵温度㊁发酵时间等因素对枯草芽孢杆菌培养的影响㊂结果表明,最优培养条件:加水量(料液比) 1ʒ0.83㊁培养时间62h㊁接菌量0.78g㊁培养温度30ħ,在该条件下所得枯草芽孢杆菌芽孢数为(195.222ʃ0.003)㊂关键词:花生饼粕;花生茎叶;枯草芽孢杆菌;芽孢数中图分类号:S816.46;TS201.3文献标识码:B㊀㊀花生是我国主要的油料作物,国家统计局信息显示2019年我国花生年产量约1750万t,居世界首位,花生在油料产业具有重要的地位㊂花生富含油脂㊁蛋白㊁维生素及多种矿物质,营养全面,具有保护心脑血管㊁降脂㊁降糖㊁抗癌㊁抗衰老等保健作用㊂近几年,我国花生用于食品加工的比例在逐年提升,已接近年产量的50%㊂目前,我国花生仍以榨油为主,花生种植㊁加工过程中会产生大量的花生粕㊁花生红衣㊁花生壳㊁根茎等副产物,其中花生饼粕850万t/年㊁花生茎叶1800万t/年以上,这些副产物中富含酚类㊁蛋白质㊁糖类等营养成分,但目前利用率却较低㊂对这些副产物进行综合利用及精深加工,不仅可以延长产业链,提高花生的经济价值,还可以减少资源浪费,避免因副产物废弃而造成环境污染[1~3]㊂花生饼粕的营养价值比较高其代谢能量是所有饼粕类饲料中最高的,粗蛋白质含量接近大豆粕,高达45%以上,粗纤维7%左右㊂精氨酸含量高达5.2%,是所有动㊁植物饲料中最高的㊂赖氨酸含量只有大豆饼粕的50%左右,蛋氨酸㊁赖氨酸㊁苏氨酸含量都较低㊂通过添加合成氨基酸或是添加其他的蛋白质饲料而使氨基酸得到平衡,畜禽的生长性能也可达到理想水平[4~6]㊂花生茎叶中营养物质丰富,花生茎叶中含有12.9%粗蛋白质㊁2%粗脂肪㊁46.8%碳水化合物,其中花生叶的粗蛋白质含量高达20%㊂花生秧中的粗蛋白质含量是豌豆秧的1.6倍㊁稻草的6倍,畜禽采食1kg花生秧产生的能量相当于0.6kg 大麦所产生的能量㊂花生饼粕以及花生茎叶很容易感染黄曲霉菌而产生黄曲霉毒素㊂黄曲霉毒素种类较多,其中毒性最大的是黄曲霉毒素B1㊂蒸煮㊁干热对去除黄曲霉毒素无效,因此,对花生粕中黄曲霉毒素含量应进行严格的检测,国家卫生标准规定黄曲酶毒素的允许量需低于0.05mg/kg㊂黄曲霉菌毒素易使猪的肝脏受到损害㊂少量的黄曲霉毒素就可对猪的生长性能产生显著的影响㊂花生饼粕和花生茎叶中的黄曲霉毒素及蛋白质组分的不理想,在复合饲料中添加量一般在10%左右,限制了饲料中的高效利用㊂因此,提高花生粕和花生茎叶的质量安全和品质,才能饲料行业中充分利用㊂目前,在豆粕饲料中利用枯草芽孢杆菌研究营养和安全方面研究很多,但对花生粕㊁花生茎叶的相关研究较少[7~9]㊂本研究以花生饼粕和花生茎叶为原料,采用固态发酵法,研究了枯草芽孢杆菌对花生粕和花生茎叶的发酵条件,得到最佳工艺,这对花生饼粕和花生茎叶在饲料行业中进一步利用提供理论数据㊂1㊀材料与方法1.1㊀材料与设备1.1.1㊀材料㊀枯草芽孢杆菌1389中国农业微生物菌种保藏中心提供;热榨花生饼粕和花生茎叶市场购买㊂1.1.2㊀培养基㊀枯草芽孢杆菌斜面培养基:蛋白胨10g/L,牛肉膏3g/L,NaC15g/L,琼脂2g/L,pH值7.0;∗收稿日期:2020-08-11作者简介:迟吉捷(1980-),男,助理研究员,主要从事食品营养与质量安全工作㊂通讯作者:石太渊(1965-),男,研究员,从事食品营养与质量安全工作㊂辽宁农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀2021年枯草芽孢杆菌液体活化培养基:蛋白胨10g/L,牛肉膏3g/L,NaC15g/L,pH值7.0;枯草芽孢杆菌芽孢平板计数培养基:酵母浸粉2.5g/L蛋白胨5g/L,葡萄糖1.0g/L,琼脂1.5g/L,pH 值7.0㊂固体培养基:用植物粉碎机粉碎花生粕和花生茎叶,颗粒大小为120目㊂按每250ml培养瓶中加入25g固体(20g花生饼粕+5g花生茎叶)㊂以上培养基均121ħ下灭菌20min备用㊂1.2㊀试验方法1.2.1㊀固态发酵工艺流程㊀花生饼粕粉+花生茎叶粉ң灭菌ң冷却ң接菌ң发酵ң烘干ң平板培养ң芽孢数量ң最佳发酵条件㊂1.2.2㊀芽孢培养计数方法㊀取0.5g发酵物干燥产品加入到4.5ml无菌水中,在80ħ恒温水浴中,经10min灭枯草芽孢杆菌后3000r/min,离心10min,上清液稀释106倍,取200μl菌液涂板培养15h后检测枯草芽孢杆菌芽孢数㊂1.2.3㊀单因素试验设计㊀调查以不同的料液比㊁接种量㊁发酵温度㊁发酵时间和花生茎叶量为因素对枯草芽孢杆菌芽孢数目的影响㊂1.2.3.1㊀料液比对枯草芽孢杆菌芽孢数的影响㊀取20g花生饼粕和5g花生茎叶,加2g菌样,发酵温度为30ħ,发酵时间为72h,每隔12h搅拌1次,分别加15㊁20㊁25㊁30㊁35ml,料液比分别为1ʒ0.56,1ʒ0.74,1ʒ0.92,1ʒ1.11,1ʒ1.30测定样品的芽孢数㊂1.2.3.2㊀接菌量对枯草芽孢杆菌芽孢数的影响㊀取20g花生饼粕和5g花生茎叶,发酵温度为30ħ,发酵时间为72h,每隔12h搅拌1次,加25ml水,分别接种0.25g(接菌量为0.50%)㊁0.50g(接菌量为1.0%)㊁1.00g(接菌量为2.0%)㊁1.5g(接菌量为3.0%)㊁2.0g (接菌量为4.0%)㊁2.5g(接菌量5.0%)(枯草芽孢杆菌芽孢数为1.2ˑ108个/g)菌量,测定样品的芽孢数㊂1.2.3.3㊀培养时间对枯草芽孢杆菌芽孢数的影响㊀取20g花生饼粕和5g花生茎叶,加0.5g菌样和25ml水,培养温度为30ħ,每隔12h搅拌1次,分别培养24㊁36㊁48㊁60㊁72㊁84h枯草芽孢杆菌,测定样品芽孢数㊂1.2.3.4㊀培养温度对枯草芽孢杆菌芽孢数的影响㊀取20g花生饼粕和5g花生茎叶,加0.5g菌样和25ml水,培养时间为72h,每隔12h搅拌1次,分别在24㊁26㊁28㊁30㊁32㊁34ħ下培养,测定样品的芽孢数㊂1.2.3.5㊀花生茎叶含量对枯草芽孢杆菌芽孢数的影响㊀取20g花生饼粕,加0.5g菌样和25ml水,培养时间为72h,培养温度为30ħ,每隔12h搅拌1次,分别加0㊁2.5㊁5.0㊁7.5㊁10g的花生茎叶粉,测定样品的芽孢数㊂1.2.4㊀响应面法试验设计㊀以单因素试验数据为依据,采用Box-Behnken试验设计方法,对料液比(A)㊁接种量(B)㊁培养温度(C)和培养时间(D)等4个因素,设计4因素3水平的试验方案[10~15]㊂2㊀结果与分析2.1㊀单因素试验2.1.1㊀料液比对枯草芽孢杆菌芽孢数量的影响㊀由图1中可以看出,料液比对花生饼粕中的枯草芽孢杆菌发酵有较大影响,料液比1ʒ0.92(加水量为25ml)时枯草芽孢杆菌芽孢数量最高(芽孢数118.6ˑ107个/g)㊂这很可能是因为枯草芽孢杆菌是好氧菌,料液比大时水中氧气含量偏低,满足不了枯草芽孢杆菌生长,导致枯草芽孢杆菌芽孢数量减少㊂相反,料液比小虽然可以满足枯草芽孢杆菌氧气需求,但营养物质浓度过小,也影响枯草芽孢杆菌生长㊂图1㊀料液比对枯草芽孢杆菌芽孢数量的影响Figure1㊀Influence of the ratio of feed to liquid on the spore quantity of Bacillus subtilis2.1.2㊀接菌量对枯草芽孢杆菌芽孢数量的影响㊀由图2可以看出,随着接菌量的增加,发酵后的花生饼粕混合料中的芽孢杆菌芽孢数量呈现先增后降的趋势,接菌量0.5g时产生的草芽孢杆菌芽孢数量最多,达到2.3ˑ107个/g,随着接菌量增大,反而抑制枯草芽孢杆菌的繁殖㊂图2㊀接菌量对枯草芽孢杆菌芽孢数量的影响Figure2㊀The influence of inoculation amount on the spore quantity of Bacillus subtilis2.1.3㊀枯草芽孢杆菌种培养时间对芽孢数量的影响㊀由图3看出,枯草芽孢杆菌种培养时间对芽孢杆菌芽孢繁殖有明显的影响,随着培养时间延长枯草芽孢杆菌芽孢数量呈现先增后降的趋势,培养时间在24~36h之间㊃05㊃第3期㊀㊀㊀㊀㊀迟吉捷等:枯草芽孢杆菌发酵制备花生饼粕㊁花生茎叶混合饲料条件优化研究时,枯草杆菌繁殖缓慢,芽孢数量也较少,随着培养时间的增长,枯草芽孢杆菌的繁殖速度明显提高,培养时间到72h时达到高峰,枯草杆菌芽孢数为4.53ˑ107个/g,芽孢杆菌进入衰亡期,芽孢数量明显下降㊂图3㊀接菌量对枯草芽孢杆菌芽孢数量的影响Figure3㊀The influence of temperature on the spore quantity of Bacillus subtilis2.1.4㊀发酵温度对枯草芽孢杆菌芽孢数量的影响㊀由图4可以看出,培养温度对枯草芽孢杆菌芽孢数量有明显的影响,随着培养温度升高枯草芽孢杆菌的繁殖先增后降的趋势,芽孢数目呈现先升高后培养温度在30ħ范围内时,枯草芽孢杆菌芽孢数量最高,达到枯草杆菌芽孢数为28.5ˑ107个/g㊂图4㊀温度对枯草芽孢杆菌芽孢数量的影响Figure4㊀The influence of temperature on the spore quantity of Bacillus subtilis2.1.5㊀花生茎叶含量对枯草芽孢杆菌芽孢数量的影响㊀由图5可以看出,花生茎叶含量对枯草芽孢杆菌繁殖有一定影响,但不明显㊂花生茎叶添加含量5g时枯草芽孢杆菌芽孢数量最多,达到0.42ˑ107个/g㊂这可能与不同的花生茎叶含量改变枯草芽孢杆菌生长环境有关㊂适合地添加花生茎叶改善了发酵花生饼粕的透气性和碳㊁氮含量,有利于芽孢杆菌生长,否则花生茎叶添加量过多或过少都不利于枯草芽孢杆菌繁殖㊂2.2㊀响应面法培养条件优化在花生饼粕以及茎叶的枯草芽孢杆菌培养单因素试验基础上,采用Box-Behnken组合设计,以枯草芽孢杆菌芽孢数为响应值,以加水量㊁培养时间㊁接菌量㊁培养温度为自变量因素,进行响应面试验,优化花生饼粕以及茎叶的枯草芽孢杆菌培养条件,试验设计和分析采用应用De-sign-Expert8.0.6数据分析软件,试验设计与结果见表2㊂图5㊀花生茎叶含量对枯草芽孢杆菌芽孢数量的影响Figure5㊀The influence of Stem and leaf content of pea-nut on the spore quantity of Bacillus subtilis表1㊀响应面分析因数与水平试验设计Table1㊀Response surface analysis factors and horizon-tal test design水平加水量培养时间(h)接菌量培养温度(ħ)-11ʒ0.74480.252801ʒ0.92600.503011ʒ1.1172 1.0032表2㊀响应面试验设计与结果Table2㊀Response surface test design and results试验序号X1X2X3X4芽孢数107个110-10412-10-10883001-151400-1-1795010-113960011149700001808-100114590-10-1391010011911-1010161120-1108413011014614010111915-1-1001381600001801710104318000017019000018620-100-1562100-117922100-1672300001792401-1010025-1100135261-10023270-10110228110082290-1-10104㊃15㊃辽宁农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀2021年㊀㊀枯草芽孢杆菌芽孢数所得回归方程为:Y =179.00-37.33X 1+19.25X 2+11.92X 3+15.17X 4+15.50X 1X 2-17.75X 1X 3-34.25X 1X 4+16.50X 2X 3-20.75X 2X 4+24.50X 3X 4-55.96X 12-29.33X 22-40.08X 32-50.21X 42由表3可看出, Prob>F 值小于0.01,表明回归方程极显著,而且各因数之问差异很显著,说明该试验方法是可靠有效的㊂模型R 2值为0.9730,失拟项P 值为0.0534大于0.05,说明回归方程拟合程度良好,试验误差小,可以利用该方程预测枯草芽孢杆菌芽孢数的理论数值㊂通过比较回归方程中的各因数显著性分析,可判断各因数的作用大小,枯草芽孢杆芽孢数影响的大小依次为加水量㊁培养时间㊁培养温度㊁接菌量㊂由图6可知,响应面曲线越陡,相互作用的因素对花生饼粕㊁花生茎叶混合饲料中培养枯草芽孢杆菌芽孢数的影响越显著,该结果与方差分析结果一致㊂通过回归方程可以得到最优的预测值,即加水量(料液比)1ʒ0.83㊁培养时间时间62.15h㊁接菌量0.78㊁培养温度30.76ħ,此条件下枯草芽孢杆菌芽孢数理论值195.225㊂结合实际工作,优化工艺参数,即加水量(料液比)1ʒ0.83㊁培养时间62h㊁接菌量0.78㊁培养温度30ħ,枯草芽孢杆菌芽孢数为195.222ʃ0.003,所得参数比较为可靠㊂表3㊀枯草芽孢杆菌芽孢数量回归方程方差分析Table 3㊀Variance analysis of the regression equation of Bacillus subtilis spore quantity方差来源偏差平方和自由度均方F 值P 值显著性模型72950.47145210.7536.010.0001∗∗X 116725.33116725.33115.570.0001∗∗X 24446.7514446.7530.730.0001∗∗X 31704.0811704.0811.780.0041∗∗X 42760.3312760.3319.070.0006∗∗X 1X 2961.001961.00 6.640.0219∗X 1X 31260.2511260.258.710.0105∗X 1X 44692.2514692.2532.42<0.0001∗∗X 2X 31089.0011089.007.520.0159∗X 2X 41722.2511722.2511.900.0039∗∗X 3X 42401.0012401.0016.590.0011∗∗X 1220311.36120311.36140.35<0.0001∗∗X 225581.2615581.2638.57<0.0001∗∗X 3210421.67110421.6772.01<0.0001∗∗X 4216351.63116351.63112.99<0.0001∗∗残差2026.0814144.72失拟项1894.0810189.41 5.740.0534不显著纯误差132.00433.00总偏差74976.5528R20.9730㊀㊀注:∗∗表示显著极差异(P <0.01);∗表示差异显著(P <0.05)㊀㊀Note:∗∗indicated significant extreme difference (P <0.01);∗indicated significant difference(P <0.05)图6㊀工艺参数对枯草芽孢杆菌芽孢数量影响的响应面Figure 6㊀Response surface diagram of the influence of process parameters on Bacillus subtilis spore㊃25㊃第3期㊀㊀㊀㊀㊀迟吉捷等:枯草芽孢杆菌发酵制备花生饼粕㊁花生茎叶混合饲料条件优化研究3㊀结论3.1㊀在单因素试验的基础上,结合响应面分析法优化了各参数,并确定了花生饼粕㊁花生茎叶混合饲料中培养枯草芽孢杆菌的最优培养条件:加水量(料液比)1ʒ0.83㊁培养时间时间62h㊁接菌量0.78g㊁培养温度30ħ,在该条件下所得枯草芽孢杆菌芽孢数为(195.222ʃ0.003)㊂3.2㊀实验结果表明,对培养枯草芽孢杆菌芽孢数影响的大小依次为加水量㊁培养时间㊁培养温度㊁接菌量㊂3.3㊀优化枯草芽孢杆菌在花生饼粕㊁花生茎叶混合饲料中培养工艺效果好,培养枯草芽孢杆菌芽孢数量较多㊂为以后的花生饼粕和花生茎叶的利用提供理论依据㊂参考文献:[1]㊀乔治林.中国花生产业布局的影响因素分析[J].农业经济,2016(2):55~56.[2]㊀孙杰,张初署,毕洁,等.枯草芽孢杆菌发酵制备花生粕饲料条件优化[J].核农学报,2014,28(1):101~107. [3]㊀石太渊,叶春苗,于淼,等.低温压榨花生饼粕中蛋白质提取功能性质研究[J].食品工业,2017,38(12):111~113. [4]㊀Allen L H.Priority areas for research on the positionand health effects of tree nuts and peanuts[J].Journal of Nutri-tion.2008,138(9):1763~1765.[5]㊀YU J,Ahmedna M,Goktepe I.Peanut protein concentrate:pro-duction and functional properties as affected processing[J].Food Chemistry,2007,103(1):1121~1129.[6]㊀梅娜,周文明,胡晓玉.花生粕营养成分分析[J].西北农业学报,2007,16(3):96~99.[7]㊀刘劲松,王刚,董超,等.开花生茎叶化学成分研究[J].中成药,2008,30(3):419~420.[8]㊀组晓艳,王玮琼,熊光权,等.花生茎叶多糖提取工艺优化及抗氧化性研究[J].粮食与油脂,2017,30(7):99~102. [9]㊀焦昆鹏,马丽苹,朱文学,等.响应面法优化花生茎叶黄酮的提取工艺及其抗氧化活性研究[J].中国粮油学报, 2018,33(2):89~94.[10]㊀田莉,卢轶男,朱建,等.产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌发酵条件的响应面优化[J].武汉工程大学学报,2018,40(6):619~625.[11]㊀饶犇,周荣华,闵勇,等.枯草芽孢杆菌的发酵培养基优化研究[J].湖北农业科学,2018,57(21):127~129. [12]㊀刘文龙,刘胜利,王兴吉,等.枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化[J].化学与生物工程,2019,36(1):47~52.[13]㊀郑强,位南南.枯草芽孢杆菌培养条件的优化[J].化工设计通讯,2018,44(10):117~118.[14]㊀张源洁,胡迎芬,马爱国,等.纳豆杆菌固态发酵花生粕的工艺条件研究[J].中国油脂,2017,42(3):99~102. [15]㊀张友维,张晖,王立,等.枯草芽孢杆菌发酵制备花生多肽及其自由基清除活力的研究[J].中国油脂,2017,36(10):25~29.Optimization of Peanut Meal and Peanut Stem and Leaf Mixed Feedby Fermentation of Bacillus subtilisCHI Ji-jie,SHI Tai-yuan(Liaoning Academy of Agriculture Sciences,Food and Processing lnstitute,Shenyang,Liaoning㊀110161) Abstract:Taking peanut meal and peanut stem and leaf mixed feed as raw materials,screening the best Ba-cillus subtilis culture conditions as the goal,to study the influence of factors such as the ratio of material to liq-uid,inoculum,fermentation temperature,and fermentation time on the culture of Bacillus subtilis.The results showed that the optimal culture conditions:water addition(material-to-liquid ratio)1ʒ0.83,culture time62 h,inoculation amount0.78g,culture temperature30ħ,the number of Bacillus subtilis spores obtained un-der these conditions is(195.222ʃ0.003).Key words:Peanut cake meal;Peanut stems and leaves;Bacillus subtilis;Spore number㊃35㊃。

枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶条件的研究

枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋⽩酶条件的研究枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋⽩酶条件的研究摘要：利⽤单因素法对枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋⽩酶的培养基成分进⾏优化，确定发酵培养基各成分最适宜配⽐。

最后确定了该菌株的最适发酵培养基配⽅为(g/ 100 mL) :棉籽饼粉3.0 ,酵母浸粉1.75 ,麦芽糊精10 ,柠檬酸钠0.13 ,CaCl2 0.13 。

K2HPO4 1.0 ;最适摇瓶发酵条件为:接种量2 % ,装液量50 mL/ 250 mL ,摇床转速200 r/ min ,34 ℃,发酵54 h ,碱性蛋⽩酶的发酵单位可达1648.8u/ mL。

此外,还进⾏了5 L 罐放⼤实验,在5 L 罐所确定的最适⼯艺条件下,发酵单位可达520.2 u/ mL 。

关键词：碱性蛋⽩酶；枯草芽孢杆菌；发酵；培养基引⾔碱性蛋⽩酶是指在碱性条件下⽔解蛋⽩质肽键的酶类,主要应⽤于⽣产加酶洗涤[1] ,另外,在制⾰、丝绸、医药、⾷品、饲料和⽣物化学试剂等领域也有应⽤。

我国在20 世纪70 年代初期就成功开发了碱性蛋⽩酶,并实现了⼯业化⽣产[2]。

⽬前,我国⽤于⽣产的菌种为国内学者⾃⾏筛选诱变的菌株———枯草芽孢杆菌,其发酵单位在10 000 u/ mL ,与国外先进⽔平相差甚远[3]。

本实验所采⽤的产碱性蛋⽩酶菌株为枯草芽孢杆菌,其实验发酵单位为22 000 u/ mL,与国外⼤型酶制剂公司所报道的⽣产⽔平30 000 u/ mL 相差较⼤[4]。

本实验对该菌株的发酵培养基利⽤单因素实验确定其基本成分，选择出适合该菌株发酵的最适培养基，从⽽使其酶活有⼀定的增长,为其⼯业化⽣产奠定基础。

1 材料与⽅法1.1 菌株枯草芽孢杆菌(Baci11us subti1is)。

1.2 试剂及仪器酪氨酸、福林酚试剂、三氯⼄酸、⽆⽔碳酸钠、⼲酪素; 棉籽饼粉;酵母浸粉;麦芽糊精;柠檬酸钠;CaCl2;K2HPO4;KCl由实验室提供。

pH计、722 分光光度计、恒温⽔浴锅、离⼼机。

枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化LIU Wenlong;WANG Xingji;WANG Kefen;WANG Shuai【摘要】选用玉米粉、豆饼粉、KH2 PO4及Na2 HPO4为基础配方,通过单因素实验对枯草芽孢杆菌发酵产中性蛋白酶的培养基组分及培养条件进行优化.确定了优化的发酵培养基为:20 g·L-1甘油,30 g·L-1豆饼粉,2 mmol·L-1氯化钙,0.3 g·L-1 KH2 PO4,4 g·L-1 Na2 HPO4;优化的发酵条件为:温度30℃,接种量5％.调控发酵培养基pH值7.0控制发酵,发酵周期40 h,最终的酶活达到7344 U·mL-1.进行甘油补料流加实验,培养温度30℃,发酵过程控制pH值7.0,调整转速和风量控制溶氧30％～35％,接入5％种子,经过40 h发酵,最终酶活达到10654 U·mL-1,较未补料提高了45％.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2019(036)001【总页数】6页(P47-52)【关键词】枯草芽孢杆菌;中性蛋白酶;液体发酵;酶活性【作者】LIU Wenlong;WANG Xingji;WANG Kefen;WANG Shuai【作者单位】;;;【正文语种】中文蛋白酶是一类在生理及商业上都有非常重要地位的水解酶类，能催化肽键水解成氨基酸或短肽，其销售量约占酶制剂市场的一半以上[1]。

按蛋白酶作用的最适pH值可分为酸性、中性和碱性蛋白酶。

中性蛋白酶是最早被应用的蛋白酶之一，能在中性pH值范围内将大分子蛋白质水解成相对分子量在5 000以下的多肽[2]，普遍存在于细菌和真菌中，在pH值7～8时活性最大[3]。

目前，中性蛋白酶高产菌株主要通过自然界筛选、人工诱变和分子生物学改造获得[4-8]。

近年来，国外研究侧重于基因结构特性研究、定点突变改变蛋白酶的特性、稳定性的提高、与医学相关的蛋白酶的分离鉴定、蛋白酶的应用等[9-12]。

枯草芽孢杆菌产 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的响应面优化

Ventilation (vvm)
X2Biblioteka 0.51.01.5
pH
X3
4
5
6
2 结果与讨论
2.1 摇瓶发酵产 β-1,3-1,4-葡聚糖酶通过对碳源、氮源、初始 pH 值等优化, 在最
佳发酵培养条件下培养 72 h, 枯草芽孢杆菌 D-6 发酵产 β-1,3-1,4-葡聚糖酶的最高酶活力可达 2 800 U/mL。产酶历程如图 1 所示。与大多数芽
表 1 试验因素水平及编码
Table 1 Process variables and their
levels for BBD experiments
自变量 Independent
varuables
因子 Symbol
水平 Coded levels
−1
0
1
Speed (r/min)
X1
300 400 500
(2. College of Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China)
Abstract: [Objective] [Methods] The fermentation parameters on the β-1,3-1,4-glucanase production by Bacillus subtilis D-6 in a batch fermentor (5 L) were optimized by statistical
2013, Vol.40, No.4
analysis using response surface methodology (RSM) based on Box-Behnken design (BBD) analysis of variance (ANOVA). [Results] The results showed that under the optimized conditions, with agitation, aeration, and pH at 500 r/min, 1.05 vvm and 5.08, respectively, the highest β-1,3-1,4-glucanase activity of 2 294.4 U/mL was obtained after 22 h of cultivation. [Conclusion] This study proved that RSM could efficiently be applied for modeling of β-1,3-1,4-glucanase production in submerged fermentation.

枯草芽孢杆菌发酵豆粕产蛋白酶活性的研究

１蛋白酶活力测定方法．５
本．适合工业化生产微生物发酵法以大豆蛋白或０、不．ｇ琼脂２、５．ｇ蒸馏水１０ｍｌＨ值７０００，ｐ．。
菌种，本文采用食品级的枯草芽孢杆菌种直接发酵豆
粕粉生产大豆肽，代替了传统的酶法水解蛋白方法．
斜面培养基：白胨１ｇ牛肉提取物０３ｇＮＣ蛋、．、ａ１液体种子培养基ｆ营养肉汁培养基）蛋白胨１、：牛ｇ肉提取物０、ａ１．ｇ蒸馏水１０ｍ，Ｈ值７。．ｇＮＣ５、３００ｌｐ．０发酵培养基：５ｌ在２０三角瓶中豆粕装量为５ｌｍ０ｍ灭菌后接入液体菌种．振荡培养
下降．活力也随之逐渐降低选择４酶８ｈ为最佳
发酵时间
其它影响微生物发酵的主要因素与蛋白酶酶活
维普资讯
篁选釜；垄芏茎垫堑董垒垦量鱼堕量：堑塞
的关系如图２所示。
维普资讯
《饲料工业》２０・０８年第２卷鼋４
摘
要
采用枯草芽孢杆菌１８３９发酵豆粕，究其所产的蛋白酶的活力。运用响应面分析法优研
化影响发酵的主要因素：接种量、始ｐ初Ｈ值、酵培养基浓度，用多元二次回归方程拟和上述３因发采
基于枯草芽孢杆菌是日本传统食品纳豆的主要
低温脱脂豆粕：山东万得福集团生产。
．菌种２食品、医学、日用化工等领域中显示出了良好的开发１

响应面法优化枯草芽孢杆菌发酵玉米秸秆产腐植酸条件

响应面法优化枯草芽孢杆菌发酵玉米秸秆产腐植酸条件作者：***来源：《福建农业科技》2021年第10期摘要：为探索枯草芽孢杆菌发酵玉米秸秆产腐植酸的最佳条件。

以玉米秸秆与麸皮配比、尿素添加量、培养基初始pH为试验因素，以发酵产物腐植酸含量为指标，根据单因素试验结果选定因素水平，采用Box-Benhnken试验设计法，研究各因素交互作用及其对发酵产腐植酸的影响，拟合获得二次多项式回归模型。

结果表明：枯草芽孢杆菌发酵玉米秸秆产腐植酸的最佳条件为玉米秸秆与麸皮配比0.95∶1、尿素添加量0.81%、培养基初始pH 6.1，在37℃条件下发酵7 d，发酵产物腐植酸含量为19.58%，较优化前腐植酸含量提高了38.3%。

关键词：腐植酸;玉米秸秆;枯草芽孢杆菌;响应面法;副产物综合利用中图分类号：S 816.6 文献标志码：A 文章编号：0253-2301（2021）10-0047-05DOI： 10.13651/ki.fjnykj.2021.10.010Optimization of Humic Acid Production from Corn Straw Fermented byBacillus Subtilis Based on Response Surface MethodologyCHEN Yong-qiang（Fujian Main Station of Agricultural Product Processing and Promotion， Fuzhou， Fujian 350003， China）Abstract： In order to explore the best conditions for humic acid production from corn straw fermented by Bacillus subtilis， the proportion of corn straw and bran， the additive amount of urea and the initial pH of culture medium were taken as the experimental factors， and the content of humic acid was taken as the index. The factor levels were selected according to the results of single factor experiment， and the method of Box-Benhnken experimental design was used to study the interaction of various factors and their effects on humic acid， thus to obtain the quadratic polynomial regression model. The results showed that the optimal conditions of humic acid production from corn straw fermented by Bacillus subtilis were as follows： the proportion of corn straw and bran was0.95∶1， the additive amount of urea was 0.81%， and the initial pH of culture medium was 6.1. After 7 days of fermentation at 37℃， the humic acid content of the fermentation products was19.58%， which was 38.3% higher than that before the optimization.Key words： Humic acid; Corn straw; Bacillus subtilis; Response surface methodology; Comprehensive utilization of by-products玉米是我國重要粮食作物，每年产生大量玉米秸秆，如何提高这一农业废弃物的综合利用水平，减少环境污染和资源浪费，实现变废为宝、化害为利，具有非常重要的意义[1-3]。

枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化

枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件优化焉兆萍，宋士良，陆克文(上海邦成生物工程有限公司，上海 201506)中图分类号：TQ920.6 文献标志码：A文章编号：1001-0769(2019)01-0051-05枯草芽孢杆菌是嗜温、好氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，且不污染环境；能产生多种抗菌物质和酶，具有广谱抗菌活性。

该菌已被我国农业农村部列入饲料添加剂目录名单，越来越多地被研制成微生物制剂，其制剂作为“绿色”饲料添加剂，在畜牧养殖业、饲料加工业中得到广泛应用，成为现代养殖业的一种常规添加剂，具有广阔的发展前景[1]。

枯草芽孢杆菌在动物肠道内具有较强的生物夺氧能力，这对动物的营养物质利用、生长、防病起到重要作用[2]；其还可以通过产生抗体和提高嗜菌作用等，刺激免疫，激发体液免疫与细胞免疫，从而提高动物的生产性能和饲料利用率[3]。

由于枯草芽孢杆菌生长速度快、营养需求简单、易于存活、无致病性，具有良好的发酵基础，国内外已有众多学者对此菌进行了大量研究[4]。

本文通过单因素试验与正交试验，对枯草芽孢杆菌的发酵培养基和发酵条件进行了研究，确定其最佳发酵培养基和最适发酵条件，以最大限度地提高枯草芽孢杆菌的发酵菌数，降低生产成本，满足工业化发酵生产的要求。

1 材料与方法1.1 供试菌种枯草芽孢杆菌，由上海邦成生物工程有限公司菌种保藏室提供。

1.2 培养基LB固体培养基：蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、葡萄糖5 g、氯化钠10 g、琼脂粉20 g、水1 000 mL，pH 7.2。

LB液体种子培养基：蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、葡萄糖5 g、氯化钠10 g、水 1 000 mL，pH 7.2。

1.3 种子液的制备将菌种接种于LB固体培养基中，37 ℃恒温培养箱活化18 h后，挑取单菌落接入装有100 mL LB液体种子培养基的250 mL三角瓶中，37 ℃条件下180 r/min振荡培养24 h。

枯草芽孢杆菌产角蛋白酶条件优化

枯草芽孢杆菌产角蛋白酶条件优化大家好，今天我要和大家聊聊一个“毛茸茸”的话题——枯草芽孢杆菌产角蛋白酶条件优化。

说起角蛋白酶，大家可能会有些陌生，但它可是个厉害角色哦！这货可是可以帮助我们消化食物的酶，谁家的胃里没有它可是憋屈了。

而枯草芽孢杆菌是一个很热门的生物工程“小明星”，它可以通过发酵的方式产生角蛋白酶，天然无公害，绿色环保，真是走在了科技的前沿呢！1.1 问题背景不过，虽然这两货看起来强大无比，但是它们产生角蛋白酶的条件可不是那么简单，有点“苛刻”呢！所以我们急需对这个酶的产生条件进行优化，让这两个家伙开开心心地产酶，不要再委屈它们了！1.2 研究意义为了进一步促进生物工程领域的发展，优化枯草芽孢杆菌产角蛋白酶的条件就显得尤为重要。

如果我们能够找到最适合它们产酶的条件，不但可以提高产酶效率，还能节约资源，更环保，科技救地球啊！二、材料与方法2.1 实验材料首先我们需要准备好实验材料，包括枯草芽孢杆菌菌种、培养基、试剂等等。

得有吃的、有喝的，别到时候缺了东西，搞巧克力不给糖的尴尬局面。

2.2 实验方法然后我们要好好琢磨一下实验方法了，这个可是关键啊！我们需要通过改变生长温度、培养基成分、搅拌速度等因素，来优化角蛋白酶的产生条件。

得用点脑子，动个手脚，让它们产酶的效率更高！三、结果与讨论3.1 实验结果终于到了揭晓实验结果的时刻了！经过我们的努力，我们找到了最佳的产酶条件，让枯草芽孢杆菌和它的“好基友”角蛋白酶达到了最佳状态，产酶效率提升了不少，看起来又充满了生机！3.2 结果讨论通过对实验结果的分析和讨论，我们发现，生长温度对角蛋白酶的产生影响最大，而培养基成分和搅拌速度也起到了一定的作用。

所以在以后的研究中，我们可以更加关注这些因素，进一步提高产酶效率，让这两个“伙伴”更默契地合作！四、结论和展望通过本次研究，我们成功地优化了枯草芽孢杆菌产角蛋白酶的条件，取得了一定的成果。

尽管有许多地方还有待改进，但我们相信在未来的研究中，会有更多的收获和突破。

响应面法优化枯草芽孢杆菌NS178产芽孢发酵工艺

响应面法优化枯草芽孢杆菌NS178产芽孢发酵工艺作者：王西祥丁延芹杜秉海姚良同祁国振葛科刘凯来源：《山东农业科学》2015年第04期摘要：应用单因素设计法对影响内生枯草芽孢杆菌NS178发酵液菌落数的因子进行筛选，得到3个主要影响因子，分别为葡萄糖、（NH4）2SO4、K2HPO4。

采用Box-BehnkenDesign法对发酵培养基进行优化，通过响应面法分析获得最佳配方为葡萄糖2.29%、（NH4）2SO40.3%、K2HPO40.23%。

对温度、初始pH值、装液量3组培养条件进行优化，最佳条件为33℃、pH7.6、50mL。

在最佳配方和培养条件下，NS178发酵液菌溶数为34.50×108cfu/mL；培养72h时芽孢率达到75.8%；优化后比优化前发酵液抑菌圈直径增加67%。

关键词：枯草芽孢杆菌；芽孢；响应面；抑菌圈中图分类号：S144文献标识号：A文章编号：1001-4942（2015）04-0059-07微生物肥料又称菌肥或生物肥料，是一类以微生物生命活动及其代谢产物使农作物得到特定有益肥料效应的微生物活体制品[1]。

微生物肥料在培肥地力，保护环境，抑制农作物对硝态氮、重金属、农约的吸收，净化和修复土壤，促进农作物秸秆和城市垃圾的腐熟利用以提高生物质利用率、降低农作物病害发生，以及提高农作物产品品质和食品安全等方面已表现出不可替代的作用[2]，符合环境保护、食品安全和人类健康的需要[5]。

微生物肥料的施用能够调节土壤微生物生态，使其向着健康方向发展[4]，促进植株吸收营养元素，产生抗生素等多种物质抑制细菌或真菌性病害，诱导系统抗性间接促进植物生长，增强植物抗逆性，提高宿主的抗性和减缓pH值变化等能力[3]。

收稿日期：2014-12-18基金项目：农业部公益性行业科研专项经费项目（200903018）芽孢杆菌（Bacillussp.）在自然界广泛存在，其抑菌物质复杂多样，具有较广抑菌谱[6]。

枯草芽孢杆菌 CG24发酵条件优化

孙沙沙，夏振远，吴德喜
（１．云南农业大学植物保护学院，云南昆明６５０２０１；２．云南省烟草农业科学研究院，云南玉溪６５３１００）
摘要：枯草芽孢杆菌ＣＧ２４是一株烟草野火病菌拮抗菌，本文采用单因素实验和响应面法对该菌株发酵条件进行了优化。结果表明ＣＧ２４菌株在培养温度３２ ℃初始ｐＨ７．５装液量５０ｍＬ／１５０ｍＬ和接种量４％的ＮＡ培养
ＩＳＳＮ１００４ —３９０Ｘ；ＣＯＤＥＮＹＮＤＸＡＸ
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—３９０Ｘ（ｎ）．２０１３．叭．００７
枯草芽孢杆菌ＣＧ２４发酵条件优化术
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＳａｎａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃｂａｃｔｅｉｕｒｍｔｏｔｏｂａｃｃｏｗｉｌｄｉｆｒｅ．ＴｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｕｂｔｉｌｉｓＣＧ２４ｏｐｔｉｍｉｚｅｄｔｈｒｏｕｇｈｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｔｅｓｔａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ
云南农业大学学报

枯草芽孢杆菌产碱性蛋白酶液体发酵培养基优化及条件的研究

枯草芽孢杆菌产碱性蛋白酶液体发酵培养基优化及条件的研究摘要：通过单因素实验在摇瓶条件下对枯草芽胞杆菌产碱性蛋白酶的液体培养基进行优化，确定了最佳碳源为糊精。

进一步在5L的发酵罐上进行发酵并对发酵过程进行控制得到以下结论：枯草芽孢杆菌产碱性蛋白酶为生长相关型发酵类型，生长周期为38h，发酵到36h时酶活达到最大，酶活最大值为433U/mL，此时pH为8.35，OD600为1.158。

可以用pH是否超过8来当作发酵终点的表观特征。

关键词：枯草芽孢杆菌液体发酵培养基优化发酵条件引言：碱性蛋白酶(Alkaline protease) 广泛存在于微生物中,最早发现在猪的胰脏中[1 ] ，1913 年Rhom 首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用。

1945 年瑞士的Dr. J agg 等发现了微生物碱性蛋白酶，使其成为洗涤剂的主要添加剂之一。

碱性蛋白酶在丝绸、制革工业、饲料工业、动物食品加工中也有广泛用途，如添加到动物饲料中以提高饲料利用率；用于制作海鲜调味品；用于CGM(玉米渣) 的水解，以制取玉米肽饮料；水解大豆蛋白生产大豆多肽等。

由于市场的需求，高产、高效、耐高温、耐高碱的四高型碱性蛋白酶成为国内外当前研究的热点。

枯草芽孢杆菌是生产碱性蛋白酶的传统菌株，具有产蛋白酶量大，耐高温、高碱等特点，因此对枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究成为蛋白酶研究的热点[5]。

我国研究和生产的碱性蛋白酶的活力水平虽然不断提高，但大多数采用进口的碱性蛋白酶制剂，并且大规模工业生产中用的碱性蛋白酶还是主要依赖进口[6]。

本实验通过对枯草芽孢杆菌发酵培养基进行优化，并对发酵过程进行研究，以期进一步提高枯草芽孢杆菌产粗酶的活力及确定其最佳产粗酶的时间段。

1材料与设备仪器1.1菌株枯草芽孢杆菌(由实验室提供)1.2材料与试剂福林试剂、三氯乙酸（0.4mol/ L）、碳酸钠溶液（0.4mol/L）、干酪素溶液(10g/L)氢氧化钠溶液（0.5mol/L）、蔗糖、乳糖、葡萄糖、糊精、可溶性淀粉、柠檬酸钠、磷酸氢二钾、无水氯化钙。

响应面法优化枯草芽孢杆菌产γ-聚谷氨酸发酵工艺

响应面法优化枯草芽孢杆菌产γ-聚谷氨酸发酵工艺贺杨扬;曾伟;王青龙;王大芸;陈桂光;梁智群【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2014(035)009【摘要】以1株谷氨酸依赖型y-聚谷氨酸(poly-γ-glutamic acid,γ-PGA)产生菌Bacillus subtilis GXA-28为研究对象,利用响应面法系统优化其y-聚谷氨酸发酵培养基成分.通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验以及Box-Behnken试验构建响应方程,利用该方程预测得到最优培养基:蔗糖33.65 g/L、酵母膏0.4 g/L、NH4Cl 1.6 g/L、谷氨酸钠15 g/L、KH2PO4 0.4 g/L、K2HPO4·3H2O 1.68 g/L、MgSO4·7 H2O 0.1 g/L、MnSO4·H2O 0.04 g/L.利用优化培养基,在40.2℃、160 r/min条件下摇瓶发酵22 h,y-PGA产量达到16.63 g/L,底物谷氨酸钠转化率比优化前提高了20％,达到100％.【总页数】5页(P147-151)【作者】贺杨扬;曾伟;王青龙;王大芸;陈桂光;梁智群【作者单位】广西大学生命科学与技术学院,亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西南宁 530004;广西大学生命科学与技术学院,亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西南宁 530004;广西大学生命科学与技术学院,亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西南宁 530004;广西大学生命科学与技术学院,亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西南宁 530004;广西大学生命科学与技术学院,亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西南宁 530004;广西大学生命科学与技术学院,亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西南宁 530004【正文语种】中文【中图分类】TS201.3【相关文献】1.响应面法优化生防枯草芽孢杆菌B579固相发酵工艺 [J], 孙冰冰;杨秀荣;郝永娟;李伟;魏军;田涛2.响应面法优化枯草芽孢杆菌 NS178产芽孢发酵工艺 [J], 王西祥;丁延芹;杜秉海;姚良同;祁国振;葛科;刘凯3.纳豆芽孢杆菌TK-2产γ-聚谷氨酸发酵工艺优化 [J], 王振强; 贾俊伟; 王浩; 娄军晖4.满意度函数-响应面法优化枯草芽孢杆菌发酵工艺 [J], 李达;苗欣宇;孙慕白;牛红红;孙瑞悦;王景会5.响应面法优化Bacillus subtilis HD-F9产γ-聚谷氨酸发酵培养基 [J], 杜沛;朱丽娟;陈双喜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

响应面法优化芽孢杆菌CJPE209产角蛋白酶发酵培养基的研究

响应面法优化芽孢杆菌CJPE209产角蛋白酶发酵培养基的研究蒋彪;王常高;杜馨;林建国;蔡俊【摘要】采用响应面法对芽孢杆菌(Bacillus sp.) CJPE209产角蛋白酶的发酵培养基组分进行优化.在前期单因素优化的基础上利用Plackea-Burman试验设计筛选出影响产酶的2个显著性因素:羽毛粉、蔗糖.在此基础上,采用最陡爬坡试验确定中心复合试验的中心点,然后对其他不显著因素进行最低添加量试验以降低生产成本和简化培养基组分.利用中心复合试验,得到预测最佳培养基组成为羽毛粉5.6 g/L、蔗糖13.6 g/L、尿素5.0g/L、KH2PO40.4 g/L、MgSO41.44 g/L、CaC12 1.1g/L、NaC1 5.0g/L,预测角蛋白酶酶活为501.9 U/mL.用预测最佳培养基来进行发酵验证试验,结果实际角蛋白酶酶活为503.5 U/mL,表明模型能较好的预测发酵后酶活.%The formula of fermentation medium for keratinase production by Bacillus sp.CJPE209 was optimized by response surfacemethodology.Based on single factor experiments,two significant factors (feather meal,sucrose) that affected enzyme activity were screened by Plackett-Burman experiments.On that basis,the steepest ascent experiment was used to determine the center point of central composite design (CCD),and the minimum addition experiments were applied to confirm the minimum addition of other non-significant factors for reducing the cost and simplifying the medium components.Then the optimal medium formula was forecasted by CCD as follows:feather meal 5.6 g/L,sucrose 13.6 g/L,urea 5.0 g/L,KH2PO4 0.4 g/L,MgSO4 1.44 g/L,CaCl2 1.1 g/L,NaC1 5.0 g/L,and the forecasted keratinase activity was 501.9 U/ml.The actualkeratinase activity in verification tests reached 503.5 U/ml,which showed that the model could be used to predict keratinase activity after fermentation.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2017(036)005【总页数】5页(P76-80)【关键词】芽孢杆菌;角蛋白酶;响应面法;培养基优化【作者】蒋彪;王常高;杜馨;林建国;蔡俊【作者单位】湖北工业大学发酵工程教育部重点试验室工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068;湖北工业大学发酵工程教育部重点试验室工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068;湖北工业大学发酵工程教育部重点试验室工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068;湖北工业大学发酵工程教育部重点试验室工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068;湖北工业大学发酵工程教育部重点试验室工业发酵湖北省协同创新中心,湖北武汉430068【正文语种】中文【中图分类】Q815The formula of fermentation medium for keratinase production byBacillussp.CJPE209 was optimized by response surface methodology. Based on single factor experiments,two significant factors(feather meal,sucrose)that affected enzyme activity were screened by Plackett-Burman experiments.On that basis,the steepest ascent experiment wasused to determine the center point of central composite design(CCD),and the minimum addition experiments were applied to confirm the minimum addition of other non-significant factors for reducing the cost and simplifying the mediumcomponents.Then the optimal medium formula was forecasted by CCD as follows:feather meal 5.6 g/L,sucrose 13.6g/L,urea 5.0 g/L, KH2PO40.4 g/L,MgSO41.44 g/L,CaCl21.1 g/L,NaCl 5.0g/L,and the forecasted keratinase activity was 501.9 U/ml.The actual keratinase activity in verification tests reached 503.5 U/ml,which showed that the model could be used to predict keratinase activity after fermentation.Bacillussp.;keratinase;response surface methodology;medium optimization 角蛋白是一种不溶于水、盐、稀酸或稀碱，自然界中广泛存在的硬质蛋白，其蛋白结构中的多肽多由二硫键、氢键和疏水作用的其他化学键高度交联形成较为稳定的空间结构[1]。

响应面法优化促植物生长枯草芽孢杆菌CK15产芽孢条件

响应面法优化促植物生长枯草芽孢杆菌CK15产芽孢条件黄时海;盘慧群;黄广上;吴建飞;张溢峰;白先放【摘要】[目的]优化枯草芽孢杆菌CK15的发酵条件，提高其芽孢产量。

[方法]通过单因素试验优化碳源种类及浓度、氮源种类及浓度、无机盐种类、装液量、摇床转速、初始pH、温度、接种量，采用Plackett－Burman试验筛选出培养基中的显著因素，再利用Box－Behnken试验确定3个因素的最佳浓度。

[结果]在玉米粉10．7 g／L、豆粕粉24．4 g／L、CaCO37．4 g／L、NaCl 5．0 g／L、MnSO40．4 g／L、KH2 PO41．0 g／L、装液量50 mL／250 mL、转速为200 r／min、初始pH 7．2、温度30℃、接种量2．0％条件下，芽孢产量达到7．4×109 cfu／mL，比优化前提高了80．49％。

[结论]响应面法有效提高了枯草芽孢杆菌CK15的芽孢产量。

%Objective] To optimize the fermentation condition of Bacillus subtilis CK15 and to enhance the Spore Production yield.[ Method] Single factor test was used to optimize the type and concentration of carbon source, type and concentration of nitrogen source, the type of inor-ganic salt, loaded liquid volume, shaker speed, initial pH, temperature and inoculum size.The optimal concentrations of three factors were determined by Plackett-Burman design; and the optimal concentrations of three factors were obtained by Box-Behnken test.[ Result] The spore production was 7.4 ×109 cfu/mL under the conditions of 10.7g/L corn flour, 24.4 g/L soybean meal powder, 7.4 g/L CaCO3 , 5 g/L NaCl, 0.4 g/L MnSO4 , 1.0 g/L KH2 PO4 , 50 mL/250 mL loaded liquid volume, 200 r/min rotation speed, initial pH 7.2, 30 ℃ tempera-ture, and2 %inoculation amount.Thus, the spore production increased by80.49%than before.[Conclusion] The response surface method effectively improves the spore production of Bacillus subtilis CK15.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(044)020【总页数】5页(P25-29)【关键词】枯草芽孢杆菌;芽孢;响应面法【作者】黄时海;盘慧群;黄广上;吴建飞;张溢峰;白先放【作者单位】广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530004;广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530004;广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530004;广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530004;广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530004;广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530004【正文语种】中文【中图分类】S144微生物肥料能够增加土地肥力，净化修复土壤，抑制植物对有害物质的吸收，减少农作物病虫害发生，改善农产品品质[1]。

响应面法优化枯草芽孢杆菌BS-1101原生质体制备条件

响应面法优化枯草芽孢杆菌BS-1101原生质体制备条件姚建波;吴志军;陈志宝【摘要】The central composite design combined with response surface methodology was employed to optimize the protoplast formation conditions of Bacillus subtilis BS-1101.The critical parameters,such as lysozyme concentration,temperature,and contact time which affects the formation of protoplast of the Bacillus subtilis BS-1101 were studied using a novel technique named response surface methodology.Second-order multiple regression analysis was used to build a predicted model of the combined effects of independent variables（enzymeconcentration,temperature and effect time） for maximum the yield of protoplast of Bacillus subtilis BS-1101.The optimal parameters to obtain the highest protoplast yield were as followed： temperature was37.27 ℃,effect time was 88.8min,enzyme concentration was 5.152 mg·mL-1.The average experimental protoplast yield under the optimum conditions was found to be 77.02%,which agreed with the predicted value.The proposed method showed high degree of reproducibility.The central composite design was employed to optimize the protoplast formation conditions of Bacillus subtilis BS-1101.%实验以枯草芽孢杆菌BS-1101原生质体的制备率为目的,通过中心组合试验对影响枯草芽孢杆菌BS-1101原生质体的制备率的三个因素：酶解温度、酶解时间、酶浓度进行了研究评价,通过中心组合试验设计与响应面分析方法得到二次回归模型程,由回归方程得到,在酶解温度37.27℃、酶浓度为5.152 mg.mL-1、酶解时间88.8 min的条件下得到枯草芽孢杆菌BS-1101制备率为77.02%,与方程预测值为较接近。