临床微生物学检查PPT课件
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微生物学实验ppt课件
器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。
临床微生物学概论ppt课件
10
标本的处理
涂片光镜检查
诊断病原最基本和快速的方法：脑脊液 直接形态学检查 革兰染色或特殊染色
分离培养和鉴定
动物接种
免疫学检查
11
痰标本
主要病原菌：肺炎链球菌，克雷伯菌属，流感嗜血杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿 假单胞菌。 非病原菌：酵母菌，草绿色链球菌，凝固酶阴性葡萄球菌
病人需用水清洁口腔， 深咳肺部痰， 不要唾液 肺炎链球菌
8
试验菌的结果报告可用MIC（ug/ml ）或
用敏感(S)、中介(I)和耐药(R)报告。
16
多点接种仪
试管稀释法
试管稀释法
32
16
8
4
2
1
0.5
0.25
0.125
0.06
MIC＝1ug/ml
微量稀释法
微量稀释法
128 64 A B C D E F G H 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125 0.06
30
流感嗜血杆菌的卫星现象
31
菌种鉴定—鉴定到种
根据纯分细菌的形态、菌落特征，特征性的生化反应，选 择合适的细菌鉴定系统。
如手工的API条和半自动的ATB
肠杆菌科细菌：API 20E
非发酵革兰阴性杆菌：API 20NE 葡萄球菌属：Slidex Staph Plus、API Staph 链球菌属：Slidex Strepto Kit、API Strep 奈瑟菌属、嗜血杆菌属：API NH
流感嗜血杆菌
12
革兰染色评估呼吸道标本是否合格？
有代表性的好标本 中性粒细胞多
白细胞>25/低倍视野
标本的处理
涂片光镜检查
诊断病原最基本和快速的方法：脑脊液 直接形态学检查 革兰染色或特殊染色
分离培养和鉴定
动物接种
免疫学检查
11
痰标本
主要病原菌：肺炎链球菌，克雷伯菌属，流感嗜血杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿 假单胞菌。 非病原菌：酵母菌，草绿色链球菌，凝固酶阴性葡萄球菌
病人需用水清洁口腔， 深咳肺部痰， 不要唾液 肺炎链球菌
8
试验菌的结果报告可用MIC（ug/ml ）或
用敏感(S)、中介(I)和耐药(R)报告。
16
多点接种仪
试管稀释法
试管稀释法
32
16
8
4
2
1
0.5
0.25
0.125
0.06
MIC＝1ug/ml
微量稀释法
微量稀释法
128 64 A B C D E F G H 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125 0.06
30
流感嗜血杆菌的卫星现象
31
菌种鉴定—鉴定到种
根据纯分细菌的形态、菌落特征，特征性的生化反应，选 择合适的细菌鉴定系统。
如手工的API条和半自动的ATB
肠杆菌科细菌：API 20E
非发酵革兰阴性杆菌：API 20NE 葡萄球菌属：Slidex Staph Plus、API Staph 链球菌属：Slidex Strepto Kit、API Strep 奈瑟菌属、嗜血杆菌属：API NH
流感嗜血杆菌
12
革兰染色评估呼吸道标本是否合格？
有代表性的好标本 中性粒细胞多
白细胞>25/低倍视野
医学检验微生物ppt课件完整版x
个人防护措施及注意事项说明
实验服与护目镜
进入实验室需穿着实验服，佩戴合适的护目镜， 防止试剂飞溅或粉尘刺激。
手套与口罩
根据实验需要选择合适的手套和口罩，避免皮肤 接触有害试剂或吸入有害气体。
实验操作规范
规范实验操作，避免产生气溶胶或飞溅物，减少 交叉污染的风险。
实验废弃物处理及环保要求讲解
废弃物分类处理
医学检验微生物ppt课件完 整版x
目录
• 微生物学基础 • 医学微生物学概述 • 常见病原微生物介绍 • 微生物检验技术与方法 • 临床标本中常见病原微生物检测实例分析 • 实验室安全与防护措施
01 微生物学基础
微生物定义与分类
微生物定义
微生物是一类形体微小、结构简单、 必须借助光学显微镜或电子显微镜 才能看到的微小生物。
微生物生长与繁殖
01
微生物营养
微生物从外界环境中摄取和利用营养物质的过程称为营养。微生物营养
类型有光能自养型、光能异养型、化能自养型和化能异养型四类。
02 03
微生物生长
微生物在适宜的环境条件下，通过摄取营养物质、合成细胞物质、增加 细胞数量的过程称为生长。生长曲线可分为迟缓期、对数期、稳定期和 衰亡期四个时期。
通过对微生物基因组进行测序和 分析，了解其基因组成和功能， 为微生物的鉴定和分型提供准确
依据。
基因芯片技术
将大量特异性基因探针固定在芯 片上，通过与待测微生物DNA杂
交来鉴定其种类和型别。
宏基因组学技术
通过对环境中所有微生物的基因 组进行高通量测序和分析，了解 微生物群落的组成和功能，为环 境微生物检测和生态学研究提供
尿液标本中常见病原微生物检测实例分析
尿常规检查
临床微生物检验的标准化ppt课件
Interpretation / Reporting 结果解释/报告 Use of Laboratory Data 实验室数据使用
Equipment Maintenance & Calibration设备的维 护和校准 Internal Q.C.室内质控
Proficiency Testing 能力验证
5.1 人员
• 5.1.11 应制定员工能力评审的内容和方法 ，每年评审员工的工作能力；
– 对新进员工在最初2个月内应至少进行2次能 力评审（间隔为30天），保存评审记录。
– 当职责变更时，或离岗6个月以上再上岗时， 或政策、程序、技术有变更时，应对员工进 行再培训和再评审。
– 没有通过评审的人员需经再培训和再评审， 合格后才可继续上岗，并记录。
1:4000系列稀释 – 1ul环取10环 EBD原液至10ml蒸馏水, 吸光
度应与1:1000稀释液相符(10ul环-10 EBD100ml DH2O) – 重复4次,平均误差须≦20%.
5.1 人员
5.1.1 有颜色视觉障碍的人员不应从事涉及到辨色的微 生物学检验。
5.1.4 临床微生物学实验室（以下简称“实验室”）负责 人至少应具有以下资格：中级技术职称，医学、医 学检验专业背景，或相关专业背景经过医学检验培 训，3年临床微生物工作经验。 认可的授权签字人应至少具有中级以上专业技术职 称，从事申请认可授权签字领域专业技术工作至少3 年。
• Seeded BC studies • Parallel BC studies
Verification of unmodified FDA-Cleared Tests
• Seeded BC studies
– 至少20株代表菌株 – 使用临床病人分离株
Equipment Maintenance & Calibration设备的维 护和校准 Internal Q.C.室内质控
Proficiency Testing 能力验证
5.1 人员
• 5.1.11 应制定员工能力评审的内容和方法 ，每年评审员工的工作能力；
– 对新进员工在最初2个月内应至少进行2次能 力评审（间隔为30天），保存评审记录。
– 当职责变更时，或离岗6个月以上再上岗时， 或政策、程序、技术有变更时，应对员工进 行再培训和再评审。
– 没有通过评审的人员需经再培训和再评审， 合格后才可继续上岗，并记录。
1:4000系列稀释 – 1ul环取10环 EBD原液至10ml蒸馏水, 吸光
度应与1:1000稀释液相符(10ul环-10 EBD100ml DH2O) – 重复4次,平均误差须≦20%.
5.1 人员
5.1.1 有颜色视觉障碍的人员不应从事涉及到辨色的微 生物学检验。
5.1.4 临床微生物学实验室（以下简称“实验室”）负责 人至少应具有以下资格：中级技术职称，医学、医 学检验专业背景，或相关专业背景经过医学检验培 训，3年临床微生物工作经验。 认可的授权签字人应至少具有中级以上专业技术职 称，从事申请认可授权签字领域专业技术工作至少3 年。
• Seeded BC studies • Parallel BC studies
Verification of unmodified FDA-Cleared Tests
• Seeded BC studies
– 至少20株代表菌株 – 使用临床病人分离株
完整版医学微生物学ppt课件
01医学微生物学概述Chapter医学微生物学的定义与任务定义任务01020304包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌等不同类型的细菌。
细菌包括DNA 病毒、RNA 病毒等不同类型的病毒。
病毒包括酵母菌、霉菌等不同类型的真菌。
真菌包括原虫、蠕虫等不同类型的寄生虫。
寄生虫古代时期文艺复兴时期19世纪20世纪至今02细菌的基本形态与结构Chapter细菌的大小与形态细菌的大小细菌的形态01020304细胞壁细胞质细胞膜核质荚膜鞭毛菌毛芽孢03细菌的生理与遗传Chapter细菌的形态与结构细菌的理化特性细菌的分类与命名030201细菌的理化性质细菌的生长繁殖与代谢细菌的营养类型细菌的生长繁殖细菌的代谢细菌的遗传与变异细菌的遗传物质细菌的变异类型细菌遗传变异的机制细菌遗传变异的意义04细菌的分类与命名Chapter细菌的分类方法数值分类法传统分类法利用细菌的多种特性，通过计算机进行数值分析，确定细菌之间的相似性和差异性，从而进行分类。
分子分类法常见病原菌的分类与命名葡萄球菌属包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等，引起皮肤和软组织感染、败血症等。
链球菌属包括肺炎链球菌、化脓性链球菌等，引起呼吸道感染、脑膜炎、心内膜炎等。
肠杆菌科包括大肠杆菌、沙门氏菌等，引起肠道感染、泌尿道感染等。
观察细菌的形态、大小、排列方式等特征进行初步鉴定。
形态学鉴定生理生化鉴定免疫学鉴定分子生物学鉴定利用细菌对营养物质的需求、代谢产物的产生以及某些酶的活性等特性进行鉴定。
利用特异性抗体与细菌抗原的结合反应进行鉴定，如凝集试验、沉淀试验等。
基于细菌基因序列的分析和比较，采用PCR 技术、基因芯片技术等手段进行快速、准确的鉴定。
细菌的鉴定与识别05病毒的基本形态与结构Chapter病毒的大小与形态病毒的大小病毒的形态病毒形态各异，常见的有球形、杆状、砖形、丝状、蝌蚪状等。
这些形态与病毒的基因组类型、外壳蛋白的结构以及感染宿主的方式有关。
病毒的基本结构核衣壳包膜病毒的分类与命名病毒的分类病毒的命名06病毒的复制与遗传Chapter病毒的复制周期病毒通过特异性受体吸附于宿主细胞表面，然后将核酸注入细胞内。
临床微生物学检验标本课件
2020/11/14
46
常见病原体
20
◈真菌血症
病原体：真菌 特点：
☆多数伴有细菌感染 ☆主要发生于菌群失调患者 ☆常可播散累及肝、肺、和心内膜等
2020/11/14
21
脑脊液
采集方法
◈ 腰椎穿刺术 ◈ 小脑延髓池穿刺术 ◈ 脑室穿刺术
2020/11/14
22
采集量：1～3ml 送检要求
☆置无菌管内立即送检，不超过1h。 ☆特殊培养保温送检或床旁接种。
物的培养基 ◈ 间歇性寒战或发热：寒战或发热高峰到来之前
0.5～1h、寒战或发热后1h采血
2020/11/14
10
特殊的全身性和局部感染患者采血培养建议
♦ 可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨 髓炎、关节炎或肺炎，应在不同部位采集2～3份血 标本。
♦ 不明原因发热，先采集2～3份血标本，24～36h后 估计体温升高之前再采集2份以上。
39
◈ 烧伤创面感染最常见G-杆菌感染（如铜绿假单胞 菌）
◈ 急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌、溶血 性链球菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌感染导致
◈ 慢性化脓性骨关节炎、慢性骨髓炎常由结核分枝 杆菌感染引起
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40
痰液
标本采集
➢ 采集指征：有下列指征时，应采集痰标本
◈咳嗽、咳痰
乙型脑炎病毒
新型隐球菌
柯萨奇病毒A
白色假丝酵母菌
柯萨奇病毒B
钩端螺旋体
脊髓灰质炎病毒
新肠道病毒68～71
狂犬病毒
2020/11/14
24
临床意义
➢ 正常人脑脊液无菌 ➢ 病原体通过血脑屏障进入中枢神经系统引起
微生物感染的病原学检查 PPT精品课件
急性、恢复期 增高≥4倍有诊断意义 ☛ IgM:病毒感染早期
1.ELISA(间接法)
Ag+Ab?+抗球蛋白*+酶底物→显色
2. 蛋白印迹法（Western Blot）
病毒Ag→电泳(SDS-PAGE)→转移至硝酸纤 维素膜→加Ab?→加抗Ab*→加底物→显色
3.血凝抑制试验
原理:
[病毒(HA)+Ab?]+RBC→血凝抑制
第二节 病毒感染的微生物学检查法
☛ 病毒及其抗原检测 显微镜观察 分离培养与鉴定 Ab→Ag?
☛ 核酸检测 ☛ 特异性Ab检测
一、显微镜检查
1.电镜 /免疫电镜 2.光镜：
包涵体/ 多核巨细胞等
二、病毒的分离培养与鉴定
(一)动物接种
☛ 选敏感动物 ☛ 适宜途径
乙脑病毒→小白鼠脑内 牛痘苗病毒→家兔角膜
☛ 观察发病情况 ☛ 标本检测
(二)鸡胚培养
☛ 选择胚龄/接种途径 ☛ 标本检测
绒毛尿囊膜10~13d
羊膜腔10~12d 卵黄囊5~8d 尿囊腔 9~11d
（三）组织培养(器官/组织/细胞)
1.细胞培养类型
(1) 原代细胞培养
动物/鸡胚/人胚组织 ↓剪碎/胰酶
单个细胞 ↓培养液
单层细胞(原代细胞) ↓胰酶
☛干扰现象:病毒1(风疹病毒 ) ？
↓先感染 细胞（猴肾细胞） → CPE(-) ↑后感染 病毒2 (ECHO病毒)
☛意义：可检查不引起CPE/血凝/血吸的病毒
（5）空斑形成试验（test of plaque formation）
稀释病毒→单层细胞 →覆盖一层营养琼脂 ↓37℃，3~5d 空斑
测定病毒数量：
微生物感染的病原学检查
1.ELISA(间接法)
Ag+Ab?+抗球蛋白*+酶底物→显色
2. 蛋白印迹法（Western Blot）
病毒Ag→电泳(SDS-PAGE)→转移至硝酸纤 维素膜→加Ab?→加抗Ab*→加底物→显色
3.血凝抑制试验
原理:
[病毒(HA)+Ab?]+RBC→血凝抑制
第二节 病毒感染的微生物学检查法
☛ 病毒及其抗原检测 显微镜观察 分离培养与鉴定 Ab→Ag?
☛ 核酸检测 ☛ 特异性Ab检测
一、显微镜检查
1.电镜 /免疫电镜 2.光镜：
包涵体/ 多核巨细胞等
二、病毒的分离培养与鉴定
(一)动物接种
☛ 选敏感动物 ☛ 适宜途径
乙脑病毒→小白鼠脑内 牛痘苗病毒→家兔角膜
☛ 观察发病情况 ☛ 标本检测
(二)鸡胚培养
☛ 选择胚龄/接种途径 ☛ 标本检测
绒毛尿囊膜10~13d
羊膜腔10~12d 卵黄囊5~8d 尿囊腔 9~11d
（三）组织培养(器官/组织/细胞)
1.细胞培养类型
(1) 原代细胞培养
动物/鸡胚/人胚组织 ↓剪碎/胰酶
单个细胞 ↓培养液
单层细胞(原代细胞) ↓胰酶
☛干扰现象:病毒1(风疹病毒 ) ？
↓先感染 细胞（猴肾细胞） → CPE(-) ↑后感染 病毒2 (ECHO病毒)
☛意义：可检查不引起CPE/血凝/血吸的病毒
（5）空斑形成试验（test of plaque formation）
稀释病毒→单层细胞 →覆盖一层营养琼脂 ↓37℃，3~5d 空斑
测定病毒数量：
微生物感染的病原学检查
微生物检验ppt课件
微生物检验ppt课件
目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
目 录
• 微生物检验概述 • 微生物检验的基本原理与方法 • 微生物检验的样品采集与处理 • 微生物检验的常用技术与操作 • 微生物检验的质量控制与保证 • 微生物检验的挑战与发展趋势
01
微生物检验概述
微生物检验的定义与重要性
定义
微生物检验是对环境中的微生物进行定性、定量和鉴定的一种技术，通过特定 的方法和技术手段，对微生物的种类、数量、生理生化特性、遗传物质等进行 分析和研究。
。
04
微生物检验的常用技术与操作
显微镜技术
光学显微镜
01
利用可见光和光学透镜成像，可观察细菌、真菌等微生物的形
态和结构。
电子显微镜
02
利用电子束成像，能够观察更细微的结构，如病毒、细菌的超
微结构等。
相差显微镜
03
利用光的相位差原理，可观察无色透明的微生物，如支原体、
衣原体等。
培养基制备技术
01
补体结合试验
利用补体参与抗原抗体反 应，形成复合物并激活补 体系统，用于检测微生物 抗原或抗体。
微生物的分子生物学检测方法
PCR技术
应用聚合酶链式反应（PCR）技术扩 增微生物特异性基因片段，实现快速 、灵敏的微生物检测。
生物信息学分析
应用生物信息学方法对微生物基因组 数据进行挖掘和分析，揭示微生物种 类、进化关系等信息。
脱羧酶试验等。
酶活性检测
检测微生物产生的特定酶活性 ，如过氧化氢酶试验、氧化酶
试验等。
抗生素敏感性试验
检测微生物对抗生素的敏感性 ，以指导临床用药。
微生物的血清学试验
凝集试验
应用特异性抗体与微生物 抗原结合，形成可见的凝 集现象，用于鉴定微生物 种类。
临床微生物学检验-PPT课件
（一）医院感染标本的采集和 运送的基本原则
发现医院感染应及时采集微生物标本 作病原学检查，二、三级医院微生物 标本送检率不应低于70%。 尽量在抗菌药物使用之前采集标本。 标本采集时应严格执行无菌操作，减 少或避免机体正常菌群及其他杂菌污 染。 标本采集后应立即送至实验室，床旁 接种可提高病原菌检出率。
标本送检方法 --血液与骨髓
① 通常采血部位为肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时，以 肘动脉或股动脉采血为宜。切忌在静滴抗菌药物的静 脉处采取血标本。 ② 采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入 血培养基前，应过火消毒针头，最新资料显示更换针 头容易造成新的污染。血培养瓶应在避光室温中保存， 不必置冰箱保贮。 ③ 每次采血量成人5-10ml，婴幼儿l-5ml，培养基与血 液之比以 10：1为宜，以稀释血液中的抗生素、抗体 等杀菌物质。为提高阳性率，我们一般要求成人采血 不少于8 ml，儿童不少于3 ml，婴儿1-2 ml。
三、分析前的质量控制
分析前质量控制是我国目前临床实验室 诊断质量保证中较为薄弱的环节，严重影 响临床微生物学实验室对感染样本中致病 菌的分离培养的阳性率和医院感染病原体 监控，也影响临床诊断，合理选用抗菌药 物，降低耐药菌的产生和提高感染的治愈 率，而且对预测或及时发现医院感染的暴 发流行、杜绝感染蔓延、研究医院感染的 发病机制和环节、制定有效的医院感染控 制措施等，均具有十分重要的意义。严格 实施正确的微生物标本送检和检验方法， 是做与
脓液
① 无菌生理盐水擦洗病灶表面后用棉拭子取病 灶深部的脓液和分泌物，置运送培养基内送 检。 ② 对未渍破的脓肿宜用碘酒、酒精消毒皮肤后， 以无菌注射器抽取脓液送检：也可于切开排 脓时用无菌棉拭子采样。
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临床微生物学检查
1
言
微生物的分类？
❖ 原核细胞型：细菌、放线菌、螺旋体、支原体、衣原 体、立克次氏体。
❖ 真核细胞型：真菌 、原虫。 ❖ 非细胞型：病毒和亚病毒。
“一虫二毒三菌四体”
2
临床微生物学检查
❖ 利用微生物学相关检验技术，快速、准确检验 和鉴定临床标本中的病原微生物，并对引起感 染的微生物进行药物敏感性试验，指导临床合 理使用抗菌药物，为临床对感染性疾病诊断、 治疗、流行病学调查研究以及医院感染控制等 提供科学依据。
28
五、核酸检测
❖ 1、乙型肝炎病毒核酸检测 ❖ 2、丙型肝炎病毒核酸检测 ❖ 3、人乳头瘤病毒核酸检测 ❖ 3、衣原体核酸检测 ❖ 4、淋球菌核酸检测 ❖ 5、单纯疱疹病毒核酸检测 ❖ 6、结核分枝杆菌核酸检测
29
主要内容
1
标本采集、运送和保存
2 临床常用微生物学检查法
3 抗生素敏感试验和耐药性监测
WBC≥25个/低倍视野。 2 气管吸出物 ❖ 气管插管患者出现肺炎症状时 3 支气管肺泡盥洗液(BALF)
当下呼吸道感染患者伴有高热症状时 建议同时做血培养！
13
主要内容
1
标本采集、运送和保存
2 临床常用微生物学检查法
3 抗生素敏感试验和耐药性监测
崇德 精医 博爱 奉献
14
一、直接显微镜检查
❖ 形态学检查是微生物检验的重要方法之一， 根据其形态、结构和染色反应性等，做出快 速初步诊断，为临床治疗提供依据。
时弃去前段尿，收集中段尿10-20ml送检； ❖ 留置导尿管：建议更换导尿管后采集
10
无菌体液
脑脊液标本 ❖ 立即保温送检或床边接种（引起脑膜炎的病原体脑
膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌等抵抗力弱） ❖ 建议：同时送血培养
胸水、腹水和心包液 ❖ 含菌量少宜采集较大量标本或注入血培养瓶送检。 ❖ 注意：厌氧菌感染常见
崇德 精医 博爱 奉献
30
抗生素敏感试验--K-B法
31
抗生素敏感试验-MIC法
32
33
3
主要内容
1
标本采集、运送和保存
2 临床常用微生物学检查法
3 抗生素敏感试验和耐药性监测
崇德 精医 博爱 奉献
4
一般原则
❖ 在感染的早期或急性期、使用抗生素前或伤口局部 治疗前采集。
❖ 所有标本的采集、运送和保存应在无菌操作、防止 污染的原则下进行。
❖ 采用无菌容器，容器应密封、防止渗漏，不可混入 消毒液或添加防腐剂。
15
肺炎链球菌
16
念珠菌
❖七夕知何夕 ❖云是牛女期 ❖人间轻别离 ❖微界念真心（菌） ❖丝作鹊桥引 ❖子为河汉星 ❖相偎复相依 ❖无情胜有情
❖ 图片来自北京医院陈东科老师
17
新型隐球菌
18
二、分离培养与鉴定 ❖ 大多数细菌均可以通过人工方法培养，而衣原体
和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊 细胞株及动物接种。
24
1初筛 检测方法：酶联免疫试验（ELISA）
免疫胶体金快速试验 报告方式： 筛查试验（-）“HIV抗体阴性” 筛查试验（+）“HIV抗体待复查”
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免疫胶体金快速试验
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2复检
初筛（＋）→… 标本要求：原标本＋重新采集标本1份
（两份标本同时送检） 检测方法：另换筛查试剂盒
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3确认 ❖ 检测方法：免疫印迹实验（WB） ❖ 报告方式： HIV抗体确认实验（＋）：“HIV抗体阳性”
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肺炎链球菌
图片来自北京医院陈东科老师
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白假丝酵母菌
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新型隐球菌
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三、抗原检测 ❖ 沙眼衣原体抗原检测
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四、抗体检测
❖ 获得性免疫缺陷综合征 （Acquired immune deficiency syndrome，ＡＩＤＳ）
❖ 2015年世界艾滋病日主题： “行动起来，向‘零’艾滋迈进——合力抗艾，共担责任，共享 未来”。
❖ 及时送检：常规细菌学检验室温中不超过1h，如不 能及时送检，4℃保存不能超过8h；特殊细菌检验 如血培养、脑脊液、生殖道标本不可以冷藏。
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血培养
1.采血指征：发热(≥38℃)或低温(≤36℃)，寒战，
白细胞增多，c反应蛋白升高，严重的局部感染如脑膜 炎、心内膜炎、肺炎、肾盂肾炎、腹部术后感染等， 导管介入或血液透析患者； 2.采血时间：使用抗菌药之前，对间歇性寒战或发热应 在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h采集血液，或于 寒战或发烧后1h内进行； 3.采血部位：推荐肘静脉，疑似细菌性心内膜炎时以肘 动脉或股动脉为好，避免从导管采集；多次采血时， 应在不同部位进行。
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1 采集指征：
尿液标本
➢有典型的尿路感染症状； ➢肉眼脓尿或血尿； ➢尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性； ➢不明原因发热，无其他局部症状； ➢留置导尿管的患者出现发热； ➢膀胱排空功能受损； ➢泌尿系统疾病手术前。
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尿液标本 2 采集时机：用药前、输液或饮水前，并使尿液在膀
胱内停留一夜或至少4h以上； 3 采集方法： ❖ 清洁中段尿：用肥皂水清洗尿道口或外阴部，排尿
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血培养
4 采血量：成人需氧和厌氧各1瓶为1套，5～8ml/瓶 ，短时间内采集2～3套；儿童仅需氧瓶，采血量 1~5ml;
5 采血方法：皮肤消毒：75%酒精擦拭静脉穿刺部位 待30s以上；1%～2%碘酊作用30s或10%碘伏 60s，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达 3cm以上；75%酒精脱碘，待干。培养瓶消毒： 70%酒精擦拭血培养瓶橡皮塞，作用60s，待干。 用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头直接注入血培养 瓶，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。
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化脓及创伤感染标本
❖ 先用无菌生理盐水清洗伤口及病灶表面的杂菌； ❖ 采取伤口及病灶基底部或边缘部（接近肉芽组织）的
分泌物； ❖ 脓肿标本以无菌注射器抽取为好，注意排尽注射器内
空气。 ❖ 注意：请务必注明采集部位
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呼吸道标本
1 咳痰 ❖ 生理盐水漱口，咳出深部痰 ❖ 合格的痰标本:扁平上皮细胞≤10个/低倍视野且
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言
微生物的分类？
❖ 原核细胞型：细菌、放线菌、螺旋体、支原体、衣原 体、立克次氏体。
❖ 真核细胞型：真菌 、原虫。 ❖ 非细胞型：病毒和亚病毒。
“一虫二毒三菌四体”
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临床微生物学检查
❖ 利用微生物学相关检验技术，快速、准确检验 和鉴定临床标本中的病原微生物，并对引起感 染的微生物进行药物敏感性试验，指导临床合 理使用抗菌药物，为临床对感染性疾病诊断、 治疗、流行病学调查研究以及医院感染控制等 提供科学依据。
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五、核酸检测
❖ 1、乙型肝炎病毒核酸检测 ❖ 2、丙型肝炎病毒核酸检测 ❖ 3、人乳头瘤病毒核酸检测 ❖ 3、衣原体核酸检测 ❖ 4、淋球菌核酸检测 ❖ 5、单纯疱疹病毒核酸检测 ❖ 6、结核分枝杆菌核酸检测
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主要内容
1
标本采集、运送和保存
2 临床常用微生物学检查法
3 抗生素敏感试验和耐药性监测
WBC≥25个/低倍视野。 2 气管吸出物 ❖ 气管插管患者出现肺炎症状时 3 支气管肺泡盥洗液(BALF)
当下呼吸道感染患者伴有高热症状时 建议同时做血培养！
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主要内容
1
标本采集、运送和保存
2 临床常用微生物学检查法
3 抗生素敏感试验和耐药性监测
崇德 精医 博爱 奉献
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一、直接显微镜检查
❖ 形态学检查是微生物检验的重要方法之一， 根据其形态、结构和染色反应性等，做出快 速初步诊断，为临床治疗提供依据。
时弃去前段尿，收集中段尿10-20ml送检； ❖ 留置导尿管：建议更换导尿管后采集
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无菌体液
脑脊液标本 ❖ 立即保温送检或床边接种（引起脑膜炎的病原体脑
膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌等抵抗力弱） ❖ 建议：同时送血培养
胸水、腹水和心包液 ❖ 含菌量少宜采集较大量标本或注入血培养瓶送检。 ❖ 注意：厌氧菌感染常见
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抗生素敏感试验--K-B法
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抗生素敏感试验-MIC法
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3
主要内容
1
标本采集、运送和保存
2 临床常用微生物学检查法
3 抗生素敏感试验和耐药性监测
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一般原则
❖ 在感染的早期或急性期、使用抗生素前或伤口局部 治疗前采集。
❖ 所有标本的采集、运送和保存应在无菌操作、防止 污染的原则下进行。
❖ 采用无菌容器，容器应密封、防止渗漏，不可混入 消毒液或添加防腐剂。
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肺炎链球菌
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念珠菌
❖七夕知何夕 ❖云是牛女期 ❖人间轻别离 ❖微界念真心（菌） ❖丝作鹊桥引 ❖子为河汉星 ❖相偎复相依 ❖无情胜有情
❖ 图片来自北京医院陈东科老师
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新型隐球菌
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二、分离培养与鉴定 ❖ 大多数细菌均可以通过人工方法培养，而衣原体
和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊 细胞株及动物接种。
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1初筛 检测方法：酶联免疫试验（ELISA）
免疫胶体金快速试验 报告方式： 筛查试验（-）“HIV抗体阴性” 筛查试验（+）“HIV抗体待复查”
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免疫胶体金快速试验
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2复检
初筛（＋）→… 标本要求：原标本＋重新采集标本1份
（两份标本同时送检） 检测方法：另换筛查试剂盒
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3确认 ❖ 检测方法：免疫印迹实验（WB） ❖ 报告方式： HIV抗体确认实验（＋）：“HIV抗体阳性”
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肺炎链球菌
图片来自北京医院陈东科老师
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白假丝酵母菌
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新型隐球菌
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三、抗原检测 ❖ 沙眼衣原体抗原检测
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四、抗体检测
❖ 获得性免疫缺陷综合征 （Acquired immune deficiency syndrome，ＡＩＤＳ）
❖ 2015年世界艾滋病日主题： “行动起来，向‘零’艾滋迈进——合力抗艾，共担责任，共享 未来”。
❖ 及时送检：常规细菌学检验室温中不超过1h，如不 能及时送检，4℃保存不能超过8h；特殊细菌检验 如血培养、脑脊液、生殖道标本不可以冷藏。
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血培养
1.采血指征：发热(≥38℃)或低温(≤36℃)，寒战，
白细胞增多，c反应蛋白升高，严重的局部感染如脑膜 炎、心内膜炎、肺炎、肾盂肾炎、腹部术后感染等， 导管介入或血液透析患者； 2.采血时间：使用抗菌药之前，对间歇性寒战或发热应 在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h采集血液，或于 寒战或发烧后1h内进行； 3.采血部位：推荐肘静脉，疑似细菌性心内膜炎时以肘 动脉或股动脉为好，避免从导管采集；多次采血时， 应在不同部位进行。
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1 采集指征：
尿液标本
➢有典型的尿路感染症状； ➢肉眼脓尿或血尿； ➢尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性； ➢不明原因发热，无其他局部症状； ➢留置导尿管的患者出现发热； ➢膀胱排空功能受损； ➢泌尿系统疾病手术前。
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尿液标本 2 采集时机：用药前、输液或饮水前，并使尿液在膀
胱内停留一夜或至少4h以上； 3 采集方法： ❖ 清洁中段尿：用肥皂水清洗尿道口或外阴部，排尿
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血培养
4 采血量：成人需氧和厌氧各1瓶为1套，5～8ml/瓶 ，短时间内采集2～3套；儿童仅需氧瓶，采血量 1~5ml;
5 采血方法：皮肤消毒：75%酒精擦拭静脉穿刺部位 待30s以上；1%～2%碘酊作用30s或10%碘伏 60s，从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达 3cm以上；75%酒精脱碘，待干。培养瓶消毒： 70%酒精擦拭血培养瓶橡皮塞，作用60s，待干。 用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头直接注入血培养 瓶，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。
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化脓及创伤感染标本
❖ 先用无菌生理盐水清洗伤口及病灶表面的杂菌； ❖ 采取伤口及病灶基底部或边缘部（接近肉芽组织）的
分泌物； ❖ 脓肿标本以无菌注射器抽取为好，注意排尽注射器内
空气。 ❖ 注意：请务必注明采集部位
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呼吸道标本
1 咳痰 ❖ 生理盐水漱口，咳出深部痰 ❖ 合格的痰标本:扁平上皮细胞≤10个/低倍视野且