(动物病毒学)第章负链RNA病毒
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病毒学课件-单负股RNA病毒
結構模式圖
（二）甲型流感病毒亞型的劃分及命名
流感病毒的血凝素（H）及神經氨酸酶（N）是兩個最 為重要的分類指標 命名 型別/宿主/分離地點/毒株序號（指採樣時標本號）/ 分離年代（血凝素亞型神經氨酸亞型） 如：A/馬/黑龍江/1/89（H3N8）
宿主為人時不必寫出
(三）病毒的變異
甲型流感病毒變異的顯著特點是H和N發生 抗原性漂移（antigenic drift）
（一）主要特徵
病毒顆粒呈子彈狀，核衣殼螺旋對稱，單負股 RNA，有囊膜，囊膜上有纖突，有些具有血凝性， 細胞漿內增殖。
病毒結構
（二）代表病毒 狂犬病毒（Rabies virus)
致病性：引起人和動物狂犬病。
內基小體(Negri body) 狂犬病病毒在易感動物或
人的中樞神經細胞（主要是大腦海馬回的錐體細胞）中 增殖時，在胞質內形成嗜酸性包涵體，稱為內基小體。 在診斷上很有價值。
高致病力禽流感的判定標準
OIE規定的高致病力標準為：將含病毒的雞胚尿囊液原液用滅菌 生理鹽水作1∶10稀釋，靜脈內接種4~8周齡SPF雞8只，每只 0.2ml，隔離飼養觀察10d，死亡≥6只者，判定為HPAI
鑒於H5及H7亞型毒力易於變強的特點，國際禽病專家已於2003年 建議OIE修改上述HPAI病毒的判定標準，取而代之的是，將H5及 H7亞型的所有毒株一概劃歸為HPAI的範疇，不再作雞胚接種測定 毒力。這一新的規定尚待OIE批准頒佈。
街毒(street virus) 從自然發病的病例中分離的病毒。
固定毒(fixed virus) 經實驗室人工致弱的病毒株。
實驗室培養系統 病毒可感染多種溫血動物並增殖。雞胚、
鴨胚（不適合分離野毒），分離野毒可採用多種細胞，特別是 BHK-21、A72等，多不產生可見的病變。
兽医微生物学-分节段的负链RNA病毒
（1）分类地位：正粘病毒科/甲型流感病毒属。
1901年分离到禽流感病毒 1955年明确其与人及哺乳动物流感的关系 20世纪70年代水禽广泛存在的禽流感病毒是流感病 毒的基因库，对家禽业构成潜在的威胁。 禽流感的高致病力毒株对鸡有致病性，旧称“真性 鸡瘟”，现名高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza, HPAI），是OIE规定通报的疫病。
（1）H7N7、H3N8→马； （2）H1N1、H3N2→猪； （3）H10N4→貂；H4N5 →海豹； （4）H1N1 、H2N2 、H3N2 、H5N1 、H3N8 →人； （5）在禽类发现的组合很多，特别是H5N1 、H7N7是 高致病性的
✓抗原漂移与抗原转换
抗原漂移（Antigenic Drift）
④大量的病毒可通过粪排出，在环境中长 期存活，尤其在低温的水中。病毒通过野 禽传播，特别是野鸭。尚不清楚病毒如何 能在野禽群体中常年存在，有可能以低水 平维持，即使在迁徙越冬时也是如此。我 国的多种野鸭有较高的病毒检出率。
（5）诊断
① 病毒的分离与鉴定
鉴于高致病性毒株的潜在危险，一 般实验室只做血清学和RT-PCR检测。 高致病力毒株的分离及进一步鉴定 需送国家级的实验室完成。
第六章 分节段的负股RNA病毒 主要包括以下病毒：
正粘病毒科 布尼病毒科 沙粒病毒科
都是：
分节段的单股负股RNA病毒
正粘病毒科
布尼病毒科
沙粒病毒科
第一节 正粘病毒科 Orthomyxoviridae
一、正粘病毒科的分类
目前：本科分为5个属
✓ 甲型流感病毒属
Influenzavirus A 感染：人、禽、猪、马、貂、海豹、鲸等
2、基因组线状、负链、单股RNA，6~8节段 甲型、乙型、蛙传贫病毒8节段，丙型7节段，托 高土6节段，每个节段都具有末端重复序列，所有 节段的3‘端相同。
1901年分离到禽流感病毒 1955年明确其与人及哺乳动物流感的关系 20世纪70年代水禽广泛存在的禽流感病毒是流感病 毒的基因库，对家禽业构成潜在的威胁。 禽流感的高致病力毒株对鸡有致病性，旧称“真性 鸡瘟”，现名高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza, HPAI），是OIE规定通报的疫病。
（1）H7N7、H3N8→马； （2）H1N1、H3N2→猪； （3）H10N4→貂；H4N5 →海豹； （4）H1N1 、H2N2 、H3N2 、H5N1 、H3N8 →人； （5）在禽类发现的组合很多，特别是H5N1 、H7N7是 高致病性的
✓抗原漂移与抗原转换
抗原漂移（Antigenic Drift）
④大量的病毒可通过粪排出，在环境中长 期存活，尤其在低温的水中。病毒通过野 禽传播，特别是野鸭。尚不清楚病毒如何 能在野禽群体中常年存在，有可能以低水 平维持，即使在迁徙越冬时也是如此。我 国的多种野鸭有较高的病毒检出率。
（5）诊断
① 病毒的分离与鉴定
鉴于高致病性毒株的潜在危险，一 般实验室只做血清学和RT-PCR检测。 高致病力毒株的分离及进一步鉴定 需送国家级的实验室完成。
第六章 分节段的负股RNA病毒 主要包括以下病毒：
正粘病毒科 布尼病毒科 沙粒病毒科
都是：
分节段的单股负股RNA病毒
正粘病毒科
布尼病毒科
沙粒病毒科
第一节 正粘病毒科 Orthomyxoviridae
一、正粘病毒科的分类
目前：本科分为5个属
✓ 甲型流感病毒属
Influenzavirus A 感染：人、禽、猪、马、貂、海豹、鲸等
2、基因组线状、负链、单股RNA，6~8节段 甲型、乙型、蛙传贫病毒8节段，丙型7节段，托 高土6节段，每个节段都具有末端重复序列，所有 节段的3‘端相同。
(动物病毒学)第12章负链RNA病毒
抗原转换
(antigenic shift） ---Reassortment
+/genetic mutations
流感难以控制!!
抗原漂移（Genetic mutations）导致免疫失败
1.流感疫苗（2株A型流感病毒和 1株B型流感病毒）
2.免疫后，机体产生针对3种毒株 的抗体
3.在流感流行季节，若有流感病 毒感染机体，体内的抗体与HA 抗原结合，阻止病毒吸附到细 胞上
susceptible to both of these drugs (known as neuraminidase inhibitors), but resistant to a second class of antivirals (the
M2 inhibitors).
(三) 流感病毒的防治
(1) 疫苗(Vaccines) (2) 药物 (Drugs) (3) 干扰素（Interferon α/β）
virus: viral reassortment
N. American H1N1 (swine/avian/human)
PB2
Eurasian swine H1N1
PB2 PB1
PB1
PA
PA
HA
HA NP NA
NP NA MP
MP
NS
NS
Classical swine, N. American lineage Avian, N. American lineage Human seasonal H3N2 Eurasian swine lineage
染同一个细胞时，发 生基因重组产生新的 毒株 A-4:新的毒株可以通过 中间宿主感染人
5. 病毒的复制和抗病毒药物使用
(antigenic shift） ---Reassortment
+/genetic mutations
流感难以控制!!
抗原漂移（Genetic mutations）导致免疫失败
1.流感疫苗（2株A型流感病毒和 1株B型流感病毒）
2.免疫后，机体产生针对3种毒株 的抗体
3.在流感流行季节，若有流感病 毒感染机体，体内的抗体与HA 抗原结合，阻止病毒吸附到细 胞上
susceptible to both of these drugs (known as neuraminidase inhibitors), but resistant to a second class of antivirals (the
M2 inhibitors).
(三) 流感病毒的防治
(1) 疫苗(Vaccines) (2) 药物 (Drugs) (3) 干扰素（Interferon α/β）
virus: viral reassortment
N. American H1N1 (swine/avian/human)
PB2
Eurasian swine H1N1
PB2 PB1
PB1
PA
PA
HA
HA NP NA
NP NA MP
MP
NS
NS
Classical swine, N. American lineage Avian, N. American lineage Human seasonal H3N2 Eurasian swine lineage
染同一个细胞时，发 生基因重组产生新的 毒株 A-4:新的毒株可以通过 中间宿主感染人
5. 病毒的复制和抗病毒药物使用
rna病毒的名词解释
rna病毒的名词解释一、引言RNA病毒是一类非常重要的病毒，其基因组是由核糖核酸（RNA）构成的。
相对于DNA病毒，RNA病毒在病原性、复制方式等方面具有独特的特征。
本文将对RNA病毒进行较为详细的名词解释。
二、RNA病毒的分类RNA病毒按其基因组性质和复制策略的不同，可分为正链RNA病毒、负链RNA病毒和反转录病毒。
1. 正链RNA病毒正链RNA病毒的基因组是由正链RNA构成的。
正链RNA与细胞的核酸合成酶相容，因此能够直接作为模板合成蛋白质。
常见的正链RNA病毒有流感病毒、乙型肝炎病毒等。
2. 负链RNA病毒负链RNA病毒的基因组是由负链RNA构成的。
负链RNA无法直接作为模板，需要通过反转录复制机制合成正链RNA，然后再合成蛋白质。
常见的负链RNA病毒有埃博拉病毒、新冠病毒等。
3. 反转录病毒反转录病毒的基因组是由RNA和反转录酶构成的。
反转录酶能够将病毒RNA模板转录为病毒DNA，并与宿主细胞的DNA合成酶相容，使得病毒DNA能够转录和翻译为蛋白质。
常见的反转录病毒有艾滋病毒、乳头状瘤病毒等。
三、RNA病毒的复制RNA病毒的复制方式相对复杂，可以分为自我复制和依赖宿主细胞的复制两种方式。
1. 自我复制自我复制是RNA病毒独特的复制方式，其关键在于病毒复制酶的存在。
病毒复制酶能够通过将自身作为模板合成新的RNA，实现病毒基因组的复制。
自我复制机制使得RNA病毒复制速度较快，但也容易产生突变。
2. 依赖宿主细胞的复制除了自我复制，RNA病毒还依赖宿主细胞的复制机制。
病毒通过感染宿主细胞，利用其细胞器、酶和代谢途径等来完成病毒基因组的复制和蛋白质的合成。
此类复制方式比较常见于反转录病毒。
四、RNA病毒的病原性RNA病毒具有广泛的宿主范围和不同程度的病原性。
由于RNA病毒复制机制的特殊性，容易产生突变，并在相对短的时间内适应新的环境和宿主。
其中，负链RNA病毒具有高度的致病性，例如埃博拉病毒。
五、RNA病毒的应用除了致病性，RNA病毒还被广泛应用于基因工程、疫苗研究、基因表达调控等领域。
单股负链RNA病毒
第二十四章
1．包括
单股负链RNA病毒
副粘病毒科，弹状病毒科，丝状病毒科，波纳病毒科
2．特点：核衣壳螺旋对称，含RNA聚合酶，出芽方式成熟， 有囊膜及囊膜粒，单股负链RNA，不分节段， 胞浆内复制。
第一节
一、分类
副黏病毒科
呼吸道病毒属（以前叫副粘病毒属）
副黏病毒亚科
腮腺炎病毒属
麻诊病毒属
肺病毒亚科
肺病毒属 火鸡肺病毒属
多核合胞体形成。
5．抗原性（本科不讲） NDV只有1个血清型，但毒株的毒力有较大差异，主要取决于其 HN及F的裂解及活化。无毒株的HN和F为无活性的前体，有毒株的这 些前体可被裂解切割并活化。据毒力的差异可将NDV分成3个类型：
①强毒型；②中毒型；③弱毒型。 根据以下致病指数即： 病毒对一日龄雏鸡脑内接种的致病指数（ICPI）； 42日龄鸡静脉接种的致病指数（IVPI）；
→收获尿囊液或细胞培养液，进行下列试验。
① HA试验：检验是否含有病毒。 HI 试验（血凝抑制试验）：不能抑制则不是 NDV，若能抑制则为 NDV。 ②荧光抗体：检查病料中病毒；③ELISA；④中和试验 ⑤电镜；⑥HI抗体的水平是衡量免疫力的指标
7．免疫治疗 ①弱毒疫苗： 自然弱毒株 如： F株（Ⅲ系）； B1株（Ⅱ系苗）； Lasota株（Ⅳ系苗） Ⅴ4株。毒力弱适于1—2周龄雏鸡免疫。 ②中等毒力疫苗：I系苗 ， Roakin株， Komorov株 ，
（二）病毒特征：
病毒子呈子弹状，有囊膜，但底部缺少囊膜，核衣壳螺旋对称，
单股负链RNA。有5种主要病毒蛋白： ①G蛋白：为囊膜表面的突起的糖蛋白，能凝集鹅和雏鸡红C ②N蛋白：为核衣壳主要蛋白，诱导机体产生非中和抗体， 主要诱导机体产生细胞免疫
1．包括
单股负链RNA病毒
副粘病毒科，弹状病毒科，丝状病毒科，波纳病毒科
2．特点：核衣壳螺旋对称，含RNA聚合酶，出芽方式成熟， 有囊膜及囊膜粒，单股负链RNA，不分节段， 胞浆内复制。
第一节
一、分类
副黏病毒科
呼吸道病毒属（以前叫副粘病毒属）
副黏病毒亚科
腮腺炎病毒属
麻诊病毒属
肺病毒亚科
肺病毒属 火鸡肺病毒属
多核合胞体形成。
5．抗原性（本科不讲） NDV只有1个血清型，但毒株的毒力有较大差异，主要取决于其 HN及F的裂解及活化。无毒株的HN和F为无活性的前体，有毒株的这 些前体可被裂解切割并活化。据毒力的差异可将NDV分成3个类型：
①强毒型；②中毒型；③弱毒型。 根据以下致病指数即： 病毒对一日龄雏鸡脑内接种的致病指数（ICPI）； 42日龄鸡静脉接种的致病指数（IVPI）；
→收获尿囊液或细胞培养液，进行下列试验。
① HA试验：检验是否含有病毒。 HI 试验（血凝抑制试验）：不能抑制则不是 NDV，若能抑制则为 NDV。 ②荧光抗体：检查病料中病毒；③ELISA；④中和试验 ⑤电镜；⑥HI抗体的水平是衡量免疫力的指标
7．免疫治疗 ①弱毒疫苗： 自然弱毒株 如： F株（Ⅲ系）； B1株（Ⅱ系苗）； Lasota株（Ⅳ系苗） Ⅴ4株。毒力弱适于1—2周龄雏鸡免疫。 ②中等毒力疫苗：I系苗 ， Roakin株， Komorov株 ，
（二）病毒特征：
病毒子呈子弹状，有囊膜，但底部缺少囊膜，核衣壳螺旋对称，
单股负链RNA。有5种主要病毒蛋白： ①G蛋白：为囊膜表面的突起的糖蛋白，能凝集鹅和雏鸡红C ②N蛋白：为核衣壳主要蛋白，诱导机体产生非中和抗体， 主要诱导机体产生细胞免疫
单股负链RNA病毒
（二）病毒特征：
病毒子呈子弹状，有囊膜，但底部缺少囊膜，核衣壳螺旋对称，
单股负链RNA。有5种主要病毒蛋白： ①G蛋白：为囊膜表面的突起的糖蛋白，能凝集鹅和雏鸡红C ②N蛋白：为核衣壳主要蛋白，诱导机体产生非中和抗体， 主要诱导机体产生细胞免疫
③NS蛋白：（磷酸蛋白）与N蛋白和L蛋白一起负责病毒RNA转
囊膜上有血细胞凝集素H和神经氨酸酶N。
由于有血凝素，故病毒能凝集多种动物红C，叫HA（血凝试验）， 这种凝集性能为特异性血清所抑制叫HI（血凝抑制）试验。 3．抵抗力（略） 4．培养： ①9~11日龄鸡胚尿囊膜或尿囊腔中生长好，鸡胚24-72h死 亡胚体出血，脑炎。 ②细胞培养，鸡胚肾原代或传代C中增殖出现CPE，表现为
第一节
1．分类：
冠状病毒科
由于病毒外膜有突起似日冕状或王冠状，故名冠状病毒，
本科有2个属 冠状病毒属：代表种为传染性支气管炎病毒 凸隆病毒属
2．主要特征：
病毒子呈球状，有囊膜及棒状纤突，核衣壳螺旋对称，单分 子正股RNA，为已知RNA病毒中基因组最大的，纤突规则排列为冠
状，外膜由双层脂蛋白组成。有3或4种主要蛋白：核衣壳蛋白N及
脚垫和鼻过度角质化，肌肉痉挛或后肢瘫痪。
3．诊断：
①病毒分离鉴定：病料处理后接种犬肾或貂肾原代细胞培养，
经鸡胚绒毛尿囊膜适应的毒可在MDCK， Vero细胞上生长产生 CPE，特点为出现放射状细胞及形成合胞体。然后用荧光抗体或 琼脂扩散检测。 ②血清学试验：中和试验，补体结合试验，免疫荧光试验，
琼扩试验。
NP 、M1具有型特异性，相应抗体对病毒感染无保护力；
HA、 NA是种特异性抗原，HA使动物产生中和抗体，有保护作用， NA抗体不能中和病毒但可减少病毒增殖改变病理程度。 HA和NA变异频率很高，有H1~15 N1~9，各亚型之间无血清交叉反应 。
第33章 分节段的负链RNA病毒
H1、H2、H3
A型流感病毒出现的时间线
H1
1918
西班牙流感 H1N1
H9 H7
H5
俄国流感
H1
H3 H2
1966
禽流感
1994 1998
1957 1968 1977
亚洲流感 香港流感
H2N2
H3N2
1997 2003
不同血清型致病性的差异
• 高致病力禽流感（HPAV）为H3、H5、H7 组成的血清型。
•
六、诊断
1.病毒分离与鉴定
鸡胚接种
• 病料的采集和处理：采 集病死猪的肺和疑似流 感发病猪的鼻咽棉拭子
• 尿攮腔接种 9－11日龄 的SPF鸡胚
• 收毒：24－72 h 内收 集尿囊液
• 鉴定血凝性：血凝试验
血凝试验
•
鉴别诊断
1发病急，产蛋率急剧下降，眼 肿胀流泪，卵黄性腹膜炎，
• 2、与新城疫的鉴别诊断：
• 目前我国流行株为H5N1、H9N2
2.症状：
高致病力病毒：发病急、 死亡快、死亡率高，可 达100%；
低致病力病毒：发病急， 传播快；精神沉郁，叫 声小，眼呈半闭状，嗜 睡，采食量急剧下降， 饮水增多，嗉囊空虚， 排黄绿色稀便。
三、 症 状
1.喘 • 2、鸡群精神
沉郁，有神经 症状
3、鸡冠发紫、腿 部皮肤出血
• 2、低致病力病毒：
• ①发病急，传播快
• ②采食量急剧下降，呼吸困难，精神 沉郁，眼呈半闭状，嗜睡，产蛋鸡叫 声小(教堂效应)，嗉囊空虚，排黄绿
•③ 产 蛋 量 急 剧下降，从 80-90% ， 降 至 10-20% ， 软壳蛋畸型 蛋增多
鸭流感
四。病理变化
A型流感病毒出现的时间线
H1
1918
西班牙流感 H1N1
H9 H7
H5
俄国流感
H1
H3 H2
1966
禽流感
1994 1998
1957 1968 1977
亚洲流感 香港流感
H2N2
H3N2
1997 2003
不同血清型致病性的差异
• 高致病力禽流感（HPAV）为H3、H5、H7 组成的血清型。
•
六、诊断
1.病毒分离与鉴定
鸡胚接种
• 病料的采集和处理：采 集病死猪的肺和疑似流 感发病猪的鼻咽棉拭子
• 尿攮腔接种 9－11日龄 的SPF鸡胚
• 收毒：24－72 h 内收 集尿囊液
• 鉴定血凝性：血凝试验
血凝试验
•
鉴别诊断
1发病急，产蛋率急剧下降，眼 肿胀流泪，卵黄性腹膜炎，
• 2、与新城疫的鉴别诊断：
• 目前我国流行株为H5N1、H9N2
2.症状：
高致病力病毒：发病急、 死亡快、死亡率高，可 达100%；
低致病力病毒：发病急， 传播快；精神沉郁，叫 声小，眼呈半闭状，嗜 睡，采食量急剧下降， 饮水增多，嗉囊空虚， 排黄绿色稀便。
三、 症 状
1.喘 • 2、鸡群精神
沉郁，有神经 症状
3、鸡冠发紫、腿 部皮肤出血
• 2、低致病力病毒：
• ①发病急，传播快
• ②采食量急剧下降，呼吸困难，精神 沉郁，眼呈半闭状，嗜睡，产蛋鸡叫 声小(教堂效应)，嗉囊空虚，排黄绿
•③ 产 蛋 量 急 剧下降，从 80-90% ， 降 至 10-20% ， 软壳蛋畸型 蛋增多
鸭流感
四。病理变化
病毒学课件：单负股RNA病毒
细胞上洗脱下来。使F蛋白充分接近而发生病毒与细胞膜的融合。
细胞融合 F蛋白活化可导致病毒囊膜与细胞膜融合，也可导致两
个或多个细胞融合。
（2）病毒的培养 无母源抗体的鸡胚、鸡胚成纤维细胞等。 （3）致病机理 只有1个血清型，但毒力有较大差异，主要
取决于HN及F的裂解活化。
（4）诊断 采集病鸡呼吸道分泌物、脾脏、血液、脑组织等 分离培养 9～11日龄无母源抗体的鸡胚尿囊腔接种，也
正粘病毒科Orthomyxoviridae
甲型流感病毒属Influenzavirus A 乙型流感病毒属 Influenzavirus B 丙型流感病毒属Influenzavirus C 托高士病毒属 Thogotovirus
（一）主要特征
病毒颗粒多呈球形，初次分 离时可见长短不一的丝状， 有囊膜，表面有两种纤突： 血凝素(H)和神经氨酸酶(N)， 基因组为线状单负股RNA， 分节段。
可采用鸡胚成纤维细胞分离。
血清学试验 HI、ELISA等
（5）预防 活苗（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ系）与油佐剂灭活苗预防接种。
（2）犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV)
病毒特征 仅有1个血清型，但毒株间毒力差异大，囊膜上的纤
突只含血凝素而无神经氨酸酶。
致病性 犬最易感，出现双相热、支气管炎、卡他性肺炎、胃
肺病毒亚科 Pneumovirinae
肺病毒pneumovirus 火鸡肺病毒Metapneumovirus
（一）主要特征
病毒粒子球形或丝状，核衣壳螺旋对称，单负股RNA，不 分节段。有囊膜，表面有纤突，纤突有两种糖蛋白： 血凝素神经氨酸酶（HN） 及融合蛋白（F）。HN 介导病毒的细胞吸附；F 蛋白与病毒的感染性有 关，活化后可导致病毒 与细胞融合。
细胞融合 F蛋白活化可导致病毒囊膜与细胞膜融合，也可导致两
个或多个细胞融合。
（2）病毒的培养 无母源抗体的鸡胚、鸡胚成纤维细胞等。 （3）致病机理 只有1个血清型，但毒力有较大差异，主要
取决于HN及F的裂解活化。
（4）诊断 采集病鸡呼吸道分泌物、脾脏、血液、脑组织等 分离培养 9～11日龄无母源抗体的鸡胚尿囊腔接种，也
正粘病毒科Orthomyxoviridae
甲型流感病毒属Influenzavirus A 乙型流感病毒属 Influenzavirus B 丙型流感病毒属Influenzavirus C 托高士病毒属 Thogotovirus
（一）主要特征
病毒颗粒多呈球形，初次分 离时可见长短不一的丝状， 有囊膜，表面有两种纤突： 血凝素(H)和神经氨酸酶(N)， 基因组为线状单负股RNA， 分节段。
可采用鸡胚成纤维细胞分离。
血清学试验 HI、ELISA等
（5）预防 活苗（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ系）与油佐剂灭活苗预防接种。
（2）犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV)
病毒特征 仅有1个血清型，但毒株间毒力差异大，囊膜上的纤
突只含血凝素而无神经氨酸酶。
致病性 犬最易感，出现双相热、支气管炎、卡他性肺炎、胃
肺病毒亚科 Pneumovirinae
肺病毒pneumovirus 火鸡肺病毒Metapneumovirus
（一）主要特征
病毒粒子球形或丝状，核衣壳螺旋对称，单负股RNA，不 分节段。有囊膜，表面有纤突，纤突有两种糖蛋白： 血凝素神经氨酸酶（HN） 及融合蛋白（F）。HN 介导病毒的细胞吸附；F 蛋白与病毒的感染性有 关，活化后可导致病毒 与细胞融合。
动物负链RNA病毒反向遗传操作的构建策略及应用_朱春生
４３２
中国兽医科学
第 ４３ 卷
染禽痘病毒（ＦＰＶ）的 细 胞 系。 最 后 接 种 鸡 胚，经 鉴 定来自克隆 ｃＤＮＡ 的感染性病毒被成功拯救，并 且 与亲本病毒在病毒滴度和致病性上无明显差异。该 系 统 采 用 的 ＦＰＶ／Ｔ７ 拯 救 系 统 具 有 以 下 优 点： ＦＰＶ／Ｔ７不 容 易 产 生 ＣＰＥ；复 制 周 期 延 长；相 对 安 全，只在 禽 类 细 胞 中 复 制。 但 该 方 法 拯 救 的 ＮＤＶ 存在痘病毒 的 干 扰，易 诱 导 ＲＮＡ 重 组 并 且 在 应 用 时外源病毒不易去除。在 国 内，刘 玉 良 等 和 ［１０］ 葛 金 英等［１１］利用转染稳定表达 Ｔ７ＲＮＡ 聚合酶的 ＢＳＲ－ ７细胞系分别 拯 救 出 ＺＪＩ株 鹅 源 ＮＤＶ 和 表 达 绿 色 荧光蛋白（ＥＧＦＰ）的 重 组 ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ疫 苗 株。 他 们构建的系 统 中 筛 选 建 立 的 ＢＳＲ－７ 细 胞 系 不 需 要 共转染能够提供 Ｔ７ＲＮＡ 聚合酶的 ＶＶ（痘病毒）或 ＦＰＶ（禽痘病 毒），即 可 表 达 Ｔ７ ＲＮＡ 聚 合 酶，但 不 会产生 ＣＰＥ 干扰 病 毒 的 拯 救，方 法 更 加 方 便 可 靠。 Ｌｉ等［１２］ 采 用 真 核 ＲＮＡ 聚 合 酶 Ⅱ 成 功 拯 救 出 ＮＤＶ，该研究将全长基因组 ｃＤＮＡ 置于 ＣＭＶ 启动 子和剪切核酶之间，与 ３ 个 辅 助 质 粒 一 起 直 接 转 染 鸡胚细胞，并 同 时 与 依 靠 ＢＳＲ－Ｔ７ 细 胞 系 的 Ｔ７ 拯 救系统对比，证实 ＲＮＡ 聚合酶Ⅱ系统也比 Ｔ７ 拯救 系统更有效率。其中 ＲＮＡ 聚 合 酶 Ⅱ 拯 救 系 统 中 采 用的是来源一些具有较强的转录激活作用的病毒基 因组的启动子，可以被真核细胞中广泛存在的 ＲＮＡ 聚 合 酶 （Ⅰ ～ Ⅲ ）所 识 别 ，所 以 此 构 建 策 略 、操 作 步 骤 简单且 ＲＮＡ 聚合酶Ⅱ具有错 配 修 复 机 制 能 拯 救 出 更加亲 本 的 重 组 病 毒。 Ｍａｒｔｉｎ 等 也 ［１３］ 证 实，利 用 ＲＮＡ 聚合酶Ⅱ 系 统 比 Ｔ７ 系 统 在 波 纳 病 毒 和 麻 疹 病毒的拯救过程中更有效，ＲＮＡ 聚合酶Ⅱ系统由此 被更广泛地引入到副黏病毒科的拯救中。 １．２ 弹 状 病 毒 科 １９９４ 年 Ｃｏｎｚｅｌｍａｎｎ 等 将 ［１４］ 狂 犬 病 病 毒 Ｎ、Ｐ 和 Ｌ 基因分别构建 辅 助 质 粒，再 将 病 毒 全 长 ｃＤＮＡ 克隆到 Ｔ７启动子下游和具 有 自 剪 切 功 能 的 核 酶 序 列之间，与辅助质粒 一 起 共 转 染 到 预 先 感 染 重 组 痘 病毒 ｖＴＦ７－３ 的 细 胞 中，首 次 成 功 获 得 感 染 性 的 子 代 ＲＶ。由于 Ｔ７ＲＮＡ 聚 合 酶 的 特 异 性 和 高 效 性， 所以 ＶＶ／Ｔ７拯救 系 统 有 很 高 的 效 率，但 痘 病 毒 在 许多 细 胞 上 都 产 生 ＣＰＥ，甚 至 会 导 致 细 胞 死 亡，影 响拯救病毒。此外痘苗病毒只在细胞质中进行转录 复 制，对 拯 救 在 细 胞 核 内 复 制 的 病 毒 无 能 为 力。 ２０００年 Ｍｏｒｉｍｏｔｏ等 在 ［１５］ 共 转 染 拯 救 病 毒 时 发 现， 在 原 有 的 三 种 辅 助 质 粒 （Ｎ、Ｐ、Ｌ）基 础 上 再 增 加 一 种 表达 Ｇ 蛋 白 基 因 的 辅 助 质 粒 可 显 著 提 高 拯 救 ＲＶ 的产量，补充完善了 ＲＶ 感染性克隆的复活条件，说 明病毒的复活除必 要 的 条 件 之 外，额 外 一 些 病 毒 相
负链RNA反向遗传学
负链RNA病毒的反向遗传技术*曾江勇1，2，郭建宏1，刘在新1*(1.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃兰州730046；2.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，西藏拉萨850000)摘要：反向遗传技术是一种新的分子生物学技术，它在深入研究负链RNA病毒基因组结构和功能，探寻其基因组复制、转录和研发新型基因工程疫苗上发挥着重要的作用。
文章介绍了分节与不分节负链RNA病毒的复制机理和特征，论述了反向遗传学在研究这些病毒上的策略、最新研究进展及其主要影响拯救效率的因素，进一步涉及了负链RNA病毒载体及其重组病毒的研究动态。
因此，通过反向遗传学，人们将更加了解负链RNA病毒，为科学利用和有效控制该病毒奠定基础。
关键词：反向遗传学；负链RNA病毒；病毒载体反向遗传(Reverse genetic)技术作为一项新型技术，是从克隆的cDNA产生感染性RNA病毒的过程，实现了在cDNA水平上对RNA病毒的操作，从而为病毒的功能基因组研究提供了强有力的手段。
相对来说，这项技术更易用于正链(Positive-strand)RNA病毒，从cDNA水平对其基因组进行操作，拯救感染性病毒。
负链(Negative-strand，NS)RNA病毒，如埃博拉病毒、马尔堡病毒、汉坦病毒、拉沙病毒、克里木-刚果出血热病毒等，这些病原体由于存在独特的生物学特性，给病毒的拯救带来了一些困难，另外，它们引起的疫病具有发病率高和死亡率高的特点，因此，对负链RNA病毒的研究就显得尤为重要。
目前已将反向遗传技术应用到该类病毒研究中去，在这些病毒基因组的结构和功能，表达调控机制以及致病机理等方面，产生了深远影响。
1负链RNA病毒的复制机理负链RNA病毒有7个病毒科[1]，即弹状病毒科、副黏病毒科、丝状病毒科、博尔纳病毒科、正黏病毒科、布尼病毒科和沙粒病毒科。
其中，前4科病毒为不分节段的单股负链RNA病毒，后3科病毒为分节段的负链RNA病毒，分别含有6个～8个、3个、2个负链RNA片段。
第二十四章单股负链RNA病毒(精)
第二十四章
1．包括
单股负链RNA病毒
副粘病毒科，弹状病毒科，丝状病毒科，波纳病毒科
2．特点：核衣壳螺旋对称，含RNA聚合酶，出芽方式成熟， 有囊膜及囊膜粒，单股负链RN类 呼吸道病毒属（以前叫副粘病毒属）
副黏病毒亚科
腮腺炎病毒属
麻诊病毒属
肺病毒亚科
二、麻诊病毒属
属特征：核衣壳螺旋状对称，有囊膜，囊膜上纤突只含血凝素， 无神经氨酸酶，单股负链RNA，能凝哺乳动物红C， 该属病毒间抗原有效反应。 （一）麻诊病毒：引起人和猴的麻疹病。
（二）犬瘟热病毒：（CDV）
1．犬瘟热病毒与麻诊病毒、牛瘟病毒有相同抗原成份。 2．致病性：急性型出现双相发热（体温两次开高），眼鼻有卡 他性或脓性分泌物。在第二次发热时表现呕吐，腹泻，呼吸道卡 他炎症，有时发展为肺炎。有的神经抑郁，体重下降，脱水，
→收获尿囊液或细胞培养液，进行下列试验。
① HA试验：检验是否含有病毒。 HI 试验（血凝抑制试验）：不能抑制则不是 NDV，若能抑制则为 NDV。 ②荧光抗体：检查病料中病毒；③ELISA；④中和试验 ⑤电镜；⑥HI抗体的水平是衡量免疫力的指标
7．免疫治疗 ①弱毒疫苗： 自然弱毒株 如： F株（Ⅲ系）； B1株（Ⅱ系苗）； Lasota株（Ⅳ系苗） Ⅴ4株。毒力弱适于1—2周龄雏鸡免疫。 ②中等毒力疫苗：I系苗 ， Roakin株， Komorov株 ，
录和复制 ④M蛋白：基质蛋白，与维持病毒结构和形态有关 ⑤L蛋白：RNA聚合酶
（三）抗原性：
从自然病例分离的病毒叫“街毒”，对动物感染力
强，不同地域分离的病毒其抗原上十分接近。街毒
连续通过兔脑或脊髓内传代，对家兔潜伏期缩短， 固定化，神经组织亲和性增强，此时称“固定毒”。 固定毒对原宿主（狗）的毒力下降，用来制作狂犬 病疫苗。
1．包括
单股负链RNA病毒
副粘病毒科，弹状病毒科，丝状病毒科，波纳病毒科
2．特点：核衣壳螺旋对称，含RNA聚合酶，出芽方式成熟， 有囊膜及囊膜粒，单股负链RN类 呼吸道病毒属（以前叫副粘病毒属）
副黏病毒亚科
腮腺炎病毒属
麻诊病毒属
肺病毒亚科
二、麻诊病毒属
属特征：核衣壳螺旋状对称，有囊膜，囊膜上纤突只含血凝素， 无神经氨酸酶，单股负链RNA，能凝哺乳动物红C， 该属病毒间抗原有效反应。 （一）麻诊病毒：引起人和猴的麻疹病。
（二）犬瘟热病毒：（CDV）
1．犬瘟热病毒与麻诊病毒、牛瘟病毒有相同抗原成份。 2．致病性：急性型出现双相发热（体温两次开高），眼鼻有卡 他性或脓性分泌物。在第二次发热时表现呕吐，腹泻，呼吸道卡 他炎症，有时发展为肺炎。有的神经抑郁，体重下降，脱水，
→收获尿囊液或细胞培养液，进行下列试验。
① HA试验：检验是否含有病毒。 HI 试验（血凝抑制试验）：不能抑制则不是 NDV，若能抑制则为 NDV。 ②荧光抗体：检查病料中病毒；③ELISA；④中和试验 ⑤电镜；⑥HI抗体的水平是衡量免疫力的指标
7．免疫治疗 ①弱毒疫苗： 自然弱毒株 如： F株（Ⅲ系）； B1株（Ⅱ系苗）； Lasota株（Ⅳ系苗） Ⅴ4株。毒力弱适于1—2周龄雏鸡免疫。 ②中等毒力疫苗：I系苗 ， Roakin株， Komorov株 ，
录和复制 ④M蛋白：基质蛋白，与维持病毒结构和形态有关 ⑤L蛋白：RNA聚合酶
（三）抗原性：
从自然病例分离的病毒叫“街毒”，对动物感染力
强，不同地域分离的病毒其抗原上十分接近。街毒
连续通过兔脑或脊髓内传代，对家兔潜伏期缩短， 固定化，神经组织亲和性增强，此时称“固定毒”。 固定毒对原宿主（狗）的毒力下降，用来制作狂犬 病疫苗。
《兽医微生物学教学》16.单负链rna病毒(1)
2、神经氨酸酶活性是病毒复制中加强病毒颗粒的 移动和促进从感染的细胞中释放出来的重要因 素；
3、HN的另一个重要功能是促进F蛋白的细胞融合 作用。
整理课件
F蛋白的主要功能及作用：
①直接参与了NDV致病过程，在HN的协同作用下使 病毒囊膜与宿主细胞膜的融合，病毒穿过细胞膜 进入胞内，使红细胞溶解。
②F蛋白与病毒的毒力有关，在F0酶切位点，强毒 株为RRQRR↓ F，而弱毒株为GGRQGR↓ L；
整理课件
整理课件
纤突具两种糖蛋白：
❖ 血凝素神经氨酸酶（HN） ❖ 融合蛋白（F）
它们在感染过程中发挥重要作用，HN介导病毒对 细胞的吸附，F蛋白前体（F0）在细胞蛋白酶的作 用下裂解成F1和F2，暴露出末端疏水区导致病毒与 细胞融合。
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四、兽医临床常见的副粘病毒
❖ 1、新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV） （1）分类地位：单负链病毒目/副黏病毒科/副黏病 毒亚科/禽腮腺炎病毒属 （2）病毒的一般特征：
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（8）防制
防止病毒与易感禽接触，搞好预防接种
1.灭活苗：反应轻微，适用于雏鸡、初产母鸡和健康状态较差的鸡， 免疫期不超过6月。为增强免疫效果，常在灭活疫苗中加氢氧化 铝和油类佐剂，多用于第二次加强免疫用（产蛋鸡），两次免疫 间隔以9周最好。
2．弱毒苗：如B1株（Ⅱ系）、F株(Ⅲ系)、Lasota(IV系)这种毒株 一般没有致病力,仅偶尔引发轻微呼吸道症状和其它反应。其中 IV系毒力稍高,最好不用于10日龄以下雏鸡,II苗毒力太低，ND常 在区应用效果不理想，IV苗有取代之势，也有将IV系苗与灭活苗 同时应用于10龄雏鸡的免疫。
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（4）毒株分类 NDV只有一个血清型，但毒力差异大
3、HN的另一个重要功能是促进F蛋白的细胞融合 作用。
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F蛋白的主要功能及作用：
①直接参与了NDV致病过程，在HN的协同作用下使 病毒囊膜与宿主细胞膜的融合，病毒穿过细胞膜 进入胞内，使红细胞溶解。
②F蛋白与病毒的毒力有关，在F0酶切位点，强毒 株为RRQRR↓ F，而弱毒株为GGRQGR↓ L；
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纤突具两种糖蛋白：
❖ 血凝素神经氨酸酶（HN） ❖ 融合蛋白（F）
它们在感染过程中发挥重要作用，HN介导病毒对 细胞的吸附，F蛋白前体（F0）在细胞蛋白酶的作 用下裂解成F1和F2，暴露出末端疏水区导致病毒与 细胞融合。
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四、兽医临床常见的副粘病毒
❖ 1、新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV） （1）分类地位：单负链病毒目/副黏病毒科/副黏病 毒亚科/禽腮腺炎病毒属 （2）病毒的一般特征：
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（8）防制
防止病毒与易感禽接触，搞好预防接种
1.灭活苗：反应轻微，适用于雏鸡、初产母鸡和健康状态较差的鸡， 免疫期不超过6月。为增强免疫效果，常在灭活疫苗中加氢氧化 铝和油类佐剂，多用于第二次加强免疫用（产蛋鸡），两次免疫 间隔以9周最好。
2．弱毒苗：如B1株（Ⅱ系）、F株(Ⅲ系)、Lasota(IV系)这种毒株 一般没有致病力,仅偶尔引发轻微呼吸道症状和其它反应。其中 IV系毒力稍高,最好不用于10日龄以下雏鸡,II苗毒力太低，ND常 在区应用效果不理想，IV苗有取代之势，也有将IV系苗与灭活苗 同时应用于10龄雏鸡的免疫。
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（4）毒株分类 NDV只有一个血清型，但毒力差异大
《兽医微生物学教学课件》17.分节段的负股rna病毒
基因组释放
病毒基因组被释放到宿主细胞的细胞质中，开始进行复制和 转录。
基因组复制和转录
复制
病毒基因组在宿主细胞的细胞质中复制，产生新的病毒基因组。
转录
病毒基因组通过转录过程，产生病毒的RNA和蛋白质，为病毒的组装和释放做准 备。
病毒颗粒组装和释放
组装
新的病毒颗粒在宿主细胞的细胞质中 组装，由病毒的蛋白质外壳和复制的 基因组构成。
释放
组装完成的病毒颗粒通过不同的方式 从宿主细胞中释放出来，继续感染其 他细胞或宿主。
03
分节段的负股rna病毒的致病 性
致病机理
01
病毒入侵
基因表达
02
03
细胞破坏
分节段的负股RNA病毒通过与宿 主细胞表面的受体结合，进入细 胞内部。
病毒基因在宿主细胞内复制和表 达，合成病毒所需的蛋白质和 RNA。
与单股DNA病毒的比较
单股DNA病毒与分节段的负股RNA病毒在结构上存在显著差异。单股DNA病毒的基因组是单链DNA， 而分节段的负股RNA病毒则是双链RNA。此外，单股DNA病毒的基因组通常不发生节段重排，而分节段 的负股RNA病毒则会发生。
单股DNA病毒通常只有一个复制酶，而分节段的负股RNA病毒则有多个复制酶。此外，单股DNA病 毒的基因组不发生节段交换，而分节段的负股RNA病毒则会发生。
与正股rna病毒的比较
正股RNA病毒与分节段的负股RNA病毒在结构上存在显著差异。正股RNA病毒的基 因组是单链RNA，而分节段的负股RNA病毒则是双链RNA。此外，正股RNA病毒的 基因组通常不发生节段重排，而分节段的负股RNA病毒则会发生。
正股RNA病毒通常只有一个复制酶，而分节段的负股RNA病毒则有多个复制酶 。此外，正股RNA病毒的基因组不发生节段交换，而分节段的负股RNA病毒则 会发生。
病毒基因组被释放到宿主细胞的细胞质中，开始进行复制和 转录。
基因组复制和转录
复制
病毒基因组在宿主细胞的细胞质中复制，产生新的病毒基因组。
转录
病毒基因组通过转录过程，产生病毒的RNA和蛋白质，为病毒的组装和释放做准 备。
病毒颗粒组装和释放
组装
新的病毒颗粒在宿主细胞的细胞质中 组装，由病毒的蛋白质外壳和复制的 基因组构成。
释放
组装完成的病毒颗粒通过不同的方式 从宿主细胞中释放出来，继续感染其 他细胞或宿主。
03
分节段的负股rna病毒的致病 性
致病机理
01
病毒入侵
基因表达
02
03
细胞破坏
分节段的负股RNA病毒通过与宿 主细胞表面的受体结合，进入细 胞内部。
病毒基因在宿主细胞内复制和表 达，合成病毒所需的蛋白质和 RNA。
与单股DNA病毒的比较
单股DNA病毒与分节段的负股RNA病毒在结构上存在显著差异。单股DNA病毒的基因组是单链DNA， 而分节段的负股RNA病毒则是双链RNA。此外，单股DNA病毒的基因组通常不发生节段重排，而分节段 的负股RNA病毒则会发生。
单股DNA病毒通常只有一个复制酶，而分节段的负股RNA病毒则有多个复制酶。此外，单股DNA病 毒的基因组不发生节段交换，而分节段的负股RNA病毒则会发生。
与正股rna病毒的比较
正股RNA病毒与分节段的负股RNA病毒在结构上存在显著差异。正股RNA病毒的基 因组是单链RNA，而分节段的负股RNA病毒则是双链RNA。此外，正股RNA病毒的 基因组通常不发生节段重排，而分节段的负股RNA病毒则会发生。
正股RNA病毒通常只有一个复制酶，而分节段的负股RNA病毒则有多个复制酶 。此外，正股RNA病毒的基因组不发生节段交换，而分节段的负股RNA病毒则 会发生。
(动物病毒学)第12章负链RNA病毒
抗原转换
(antigenic shift） ---Reassortment
+/genetic mutations
流感难以控制!!
抗原漂移（Genetic mutations）导致免疫失败
1.流感疫苗（2株A型流感病毒和 1株B型流感病毒）
2.免疫后，机体产生针对3种毒株 的抗体
3.在流感流行季节，若有流感病 毒感染机体，体内的抗体与HA 抗原结合，阻止病毒吸附到细 胞上
n1n9血凝素hemagglutininhaproteolyticactivationcleavagehydrophobicmembranedomainhydrophobiccytoplasmicdomainha1ha2ss使其具有血细胞凝集活性是病毒的吸附蛋白病毒以膜融合方式迚入细胞需要ha的水解诱生中呾抗体呾细胞免疫反应决定病毒的亚型ha基因裂解位点与病毒组织嗜性horimotokawaoka2005ha基因中除裂解位点外97108126138217位的氨基酸与毒力的关系也非常密识别细胞受体水解其末端n乙酰基神经氨酸促迚病毒迚入靶细胞病毒在细胞表面成熟时na移去出芽点上的神经氨酸利于病毒粒子成熟呾释放
• 神经氨酸酶活性：
➢NDV的HN蛋白具有神经氨酸酶功能，能水解唾 液酸的糖苷键，使受体从红细胞表面脱离，从而 使已经被病毒凝集的红细胞发生解凝集。
• 细胞融合：
➢NDV复制时，病毒首先吸附于细胞受体，随后病 毒囊膜与细胞膜发生融合。NDV感染还可导致2 个或多个细胞之间的细胞膜融合，形成合胞体
5、NDV的血清分型
Animated slide: Press space bar
以前的几次大流感导致的死亡人数
➢ 1918-1919，H1N1: Spainish flu, 50 M Death ➢ 1957-1958，H2N2: Asian flu, 2 M Death ➢ 1968-1969，H3N2: Hong Kong flu,1 M death ➢ 1977-1978，H1N1: Russian flu，Not known ➢ 1997-Now，H5N1: AIV 493 infection，292 death
(antigenic shift） ---Reassortment
+/genetic mutations
流感难以控制!!
抗原漂移（Genetic mutations）导致免疫失败
1.流感疫苗（2株A型流感病毒和 1株B型流感病毒）
2.免疫后，机体产生针对3种毒株 的抗体
3.在流感流行季节，若有流感病 毒感染机体，体内的抗体与HA 抗原结合，阻止病毒吸附到细 胞上
n1n9血凝素hemagglutininhaproteolyticactivationcleavagehydrophobicmembranedomainhydrophobiccytoplasmicdomainha1ha2ss使其具有血细胞凝集活性是病毒的吸附蛋白病毒以膜融合方式迚入细胞需要ha的水解诱生中呾抗体呾细胞免疫反应决定病毒的亚型ha基因裂解位点与病毒组织嗜性horimotokawaoka2005ha基因中除裂解位点外97108126138217位的氨基酸与毒力的关系也非常密识别细胞受体水解其末端n乙酰基神经氨酸促迚病毒迚入靶细胞病毒在细胞表面成熟时na移去出芽点上的神经氨酸利于病毒粒子成熟呾释放
• 神经氨酸酶活性：
➢NDV的HN蛋白具有神经氨酸酶功能，能水解唾 液酸的糖苷键，使受体从红细胞表面脱离，从而 使已经被病毒凝集的红细胞发生解凝集。
• 细胞融合：
➢NDV复制时，病毒首先吸附于细胞受体，随后病 毒囊膜与细胞膜发生融合。NDV感染还可导致2 个或多个细胞之间的细胞膜融合，形成合胞体
5、NDV的血清分型
Animated slide: Press space bar
以前的几次大流感导致的死亡人数
➢ 1918-1919，H1N1: Spainish flu, 50 M Death ➢ 1957-1958，H2N2: Asian flu, 2 M Death ➢ 1968-1969，H3N2: Hong Kong flu,1 M death ➢ 1977-1978，H1N1: Russian flu，Not known ➢ 1997-Now，H5N1: AIV 493 infection，292 death
《兽医微生物学教学课件》17.分节段的负股rna病毒2014
抗原性漂移是由编码HA和/或NA蛋白的基因 发生点突变引起的，是引起HA和/或NA的次要 抗原变化 HA和NA的抗原漂移是互不联系独立进行的， 是基因突变和人群免疫力对病毒压迫和选择 的结果，它可引起致病性更强病毒的出现 其1~3年出现一次新变种，引起一次中小规 模的流行，新变种多在我国南方出现。
抗原漂移
RNA
H
流感病毒的抗原变异原理(2)
抗原转变(antigenic shift)：
当两种不同亚型流感病毒共同感染一宿主细胞时， （人IV－人IV、人IV－动物IV）两者的基因片段发 生遗传基因重组（gene recombination)，可引起 HA和/或NA的主要抗原发生变化 此时HA和/或NA完全发生了变异，形成新亚型， 是抗原的质变 往往引起世界性大流行，间隔时间一般没有规律。
感染禽群及病毒亚型
鸡：H5N1, H5N2, H7N3, H7N7, H7N4,H9N2
火鸡： H5N1，H5N8，H5N9，H7N1, H7N3, H7N7
鸭：H5N1 鹅：H5N1
禽流感易感人群及高危人群
易感染群：
一般认为，人类对禽流感病毒并不易感，但有感染者。 尽管任何年龄均可被感染，但在已发现的感染病例中， 13岁以下儿童所占比例较高，病情较重。 从事家禽养殖业者 在发病前1周内去过家禽饲养 销售及宰杀等场所者 接触禽流感病毒感染材料的实验室工作人员
AIV致病性的分子生物学基础（2）
流感病毒毒力取决于AIV囊膜上的HA是否容易被切割 成HA1和HA2两个部分。
如果HA容易切割，其致病性较强 如果HA不容易切割，其致病性较弱或没有
抗原漂移
RNA
H
流感病毒的抗原变异原理(2)
抗原转变(antigenic shift)：
当两种不同亚型流感病毒共同感染一宿主细胞时， （人IV－人IV、人IV－动物IV）两者的基因片段发 生遗传基因重组（gene recombination)，可引起 HA和/或NA的主要抗原发生变化 此时HA和/或NA完全发生了变异，形成新亚型， 是抗原的质变 往往引起世界性大流行，间隔时间一般没有规律。
感染禽群及病毒亚型
鸡：H5N1, H5N2, H7N3, H7N7, H7N4,H9N2
火鸡： H5N1，H5N8，H5N9，H7N1, H7N3, H7N7
鸭：H5N1 鹅：H5N1
禽流感易感人群及高危人群
易感染群：
一般认为，人类对禽流感病毒并不易感，但有感染者。 尽管任何年龄均可被感染，但在已发现的感染病例中， 13岁以下儿童所占比例较高，病情较重。 从事家禽养殖业者 在发病前1周内去过家禽饲养 销售及宰杀等场所者 接触禽流感病毒感染材料的实验室工作人员
AIV致病性的分子生物学基础（2）
流感病毒毒力取决于AIV囊膜上的HA是否容易被切割 成HA1和HA2两个部分。
如果HA容易切割，其致病性较强 如果HA不容易切割，其致病性较弱或没有
负股RNA病毒(郭)
Hodder 等利用强毒株Aust ralia - ricttorta (AV) 、弱毒株Queen2stand (V4) 、Eaves - Grimes ( EG) 和WaZU6 株F蛋白裂解位点区的氨基酸组成不同,设计并人工合成了2 个多肽;针对强弱毒株序列的不同,将2个多肽分别与载体蛋白连接制备出抗强毒株多肽和抗弱毒株多肽抗体,这两种抗体能有效地区别NDV 强弱毒株。 利用F和HN 糖蛋白能够诱导产生中和抗体,采用将F 、 HN基因插入表达载体的非必须区基因中的方式,构建重组病毒,并且可以通过ELISA、HI、Western blotting等方法检测重组表达产物F、HN 蛋白，据此可以对疫苗毒株和流行毒株进行有效的区分鉴别。
六、免疫预防 迄今为止，世界上还尚无治疗狂犬病的特效药，仍以预防为主。 目前世界上使用的疫苗有：（1）犬脑脊髓甘油石炭酸弱毒苗；（2）山羊脑脊髓甘油石炭酸弱毒苗；（3）山羊脑组织石炭酸无毒精制苗；（4）腮鼠肺组织培养无毒苗；（5）鸡胚培养无毒苗；（6）ERA系弱毒苗；（7）SAG系弱毒苗；（8）VRG系弱毒苗。上述前5种疫苗为肌肉注射苗，后3种为口服苗。 国外目前已研制出的疫苗主要有：纯化鸡胚成纤维细胞疫苗、原代牛肾细胞疫苗、基因工程疫苗和亚单位疫苗。关于多肽疫苗和抗独特型抗体苗，日前尚处于探索阶段。
鸡的神经症状
腺胃粘膜的腺体开口处充血和出血
鸡的神经症状
肠枣核形出血溃疡
肠枣核形出血溃疡
卵泡出血、形成疤痕，直肠、泄殖 腔粘膜出血、坏死
六、病毒的诊断： 1、病毒的分离： 2、病毒的鉴定： 3、强弱毒的鉴别： 传统的方法: 鸡胚平均致死时间试验(MDT) 、1日龄鸡脑内致病指数试验(ICPI)、6周龄鸡静脉致病指数试验(IVPI)等． 一般高致病力毒株的MDT小于60小时，ICPI值接近2（1.6～2），IVPI值接近3（2.5～3）。 缺点:必需使用SPF鸡和鸡胚,试验操作时间长,需要数天才能确诊．
六、免疫预防 迄今为止，世界上还尚无治疗狂犬病的特效药，仍以预防为主。 目前世界上使用的疫苗有：（1）犬脑脊髓甘油石炭酸弱毒苗；（2）山羊脑脊髓甘油石炭酸弱毒苗；（3）山羊脑组织石炭酸无毒精制苗；（4）腮鼠肺组织培养无毒苗；（5）鸡胚培养无毒苗；（6）ERA系弱毒苗；（7）SAG系弱毒苗；（8）VRG系弱毒苗。上述前5种疫苗为肌肉注射苗，后3种为口服苗。 国外目前已研制出的疫苗主要有：纯化鸡胚成纤维细胞疫苗、原代牛肾细胞疫苗、基因工程疫苗和亚单位疫苗。关于多肽疫苗和抗独特型抗体苗，日前尚处于探索阶段。
鸡的神经症状
腺胃粘膜的腺体开口处充血和出血
鸡的神经症状
肠枣核形出血溃疡
肠枣核形出血溃疡
卵泡出血、形成疤痕，直肠、泄殖 腔粘膜出血、坏死
六、病毒的诊断： 1、病毒的分离： 2、病毒的鉴定： 3、强弱毒的鉴别： 传统的方法: 鸡胚平均致死时间试验(MDT) 、1日龄鸡脑内致病指数试验(ICPI)、6周龄鸡静脉致病指数试验(IVPI)等． 一般高致病力毒株的MDT小于60小时，ICPI值接近2（1.6～2），IVPI值接近3（2.5～3）。 缺点:必需使用SPF鸡和鸡胚,试验操作时间长,需要数天才能确诊．
单股负链RNA病毒共28页
单股负链RNA病毒
1、纪律是管理关Байду номын сангаас的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
1、纪律是管理关Байду номын сангаас的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
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3. 人流感病毒(human influenza viruses)
2009 Novel H1N1
Pandemics of influenza Recorded human pandemic influenza(early sub-types inferred)
H2N2
H3N8
H1N1
H2N2 H3N2
二章负链RNA病毒
➢正粘病毒科（Orthomyxviridae） ➢ ➢副粘病毒科（Paramyxoviridae） ➢ ➢弹状病毒科（Rhabdoviridae） ➢ ➢丝状病毒科（Filoviridae） ➢ ➢布尼病毒科（Bunyaviridae）
12.1 正粘病毒科(Orthomyxoviridae)
4.相对DNA病毒而言，流感病毒 的基因更易于发生突变
5.HA基因发生突变，导致编码的 HA蛋白发生结构改变
6.体内抗体不能与HA蛋白结合， 无法达到预防病毒感染目的
抗原转换（Reassortment ）导致病毒跨种间传播
A-1:鸭/其它水禽流感病 毒感染鸡或猪
A-2:人A型流感病毒感
c水禽的AIV是其它物种流感病毒的来染源上,述是鸡A或IV猪的储存器 猪是人流感病毒与AIV发生重组的A“-3活:当试上管述两、种混病合毒器感”
➢ 能引起猪的高度传染性、急性呼吸道疾病
➢ 猪流感病毒大多是A／H1N1型，但其他亚型也会 在猪中传播，如H1N2、H3N1、H3N2。
➢ 禽流感病毒和人流感病毒也会感染猪
➢ 猪会同时感染不止一种类型的流感病毒，使得来自 不同类型病毒的基因融合，产生 “重组”流感病 毒
猪流感病毒又可以感染人 ―人感染猪流感病毒的可能途径和症状
➢囊膜：血凝素(Hemagglutinin, HA) 神经氨酸酶(Neuraminidase, NA)
Hemgglutinin -– 16 types: H1-H16 Neuraminidase – 9 types: N1-N9
血凝素(Hemagglutinin,HA)
➢使其具有血细胞凝集活性 ➢是病毒的吸附蛋白 ➢病毒以膜融合方式进入细胞需要HA的水解 ➢诱生中和抗体和细胞免疫反应，决定病毒的亚型
抗原转换
(antigenic shift） ---Reassortment
+/genetic mutations
流感难以控制!!
抗原漂移（Genetic mutations）导致免疫失败
1.流感疫苗（2株A型流感病毒和 1株B型流感病毒）
2.免疫后，机体产生针对3种毒株 的抗体
3.在流感流行季节，若有流感病 毒感染机体，体内的抗体与HA 抗原结合，阻止病毒吸附到细 胞上
染同一个细胞时，发 生基因重组产生新的 毒株 A-4:新的毒株可以通过 中间宿主感染人
Hale Waihona Puke 5. 病毒的复制和抗病毒药物使用
流感病毒无论感染猪、禽类或人后均存在相似复制模式
(扎那米韦和奥司他韦/达菲)
（二）主要流感病毒
1.禽流感病毒（Avian influenza viruses，AIV）
➢ 属于正黏病毒科、A型流感病毒属。 ➢ 是禽类流感的病原体。
1957 Asian influenza H2N2
1968 Hong Kong
influenza H3N2
2009 Pandemic influenza
H1N1
Reproduced and adapted (2009) with permission of Dr Masato Tashiro, Director, Center for Influenza Virus Research, National Institute of Infectious Diseases (NIID), Japan.
2003~2010.4.9，全球493人感染H5N1 禽流感病毒，292人死亡（Cumulative Number of Confirmed Human Cases of Avian Influenza A/(H5N1) Reported to WHO ）
2.猪流感病毒(Swine influenza viruses，SIV)
神经氨酸酶（Neuraminidase,NA ）
➢ 识别细胞受体，水解其末端N-乙酰基神经氨酸 ，促进病毒进入靶细胞
➢ 病毒在细胞表面成熟时，NA移去出芽点上的神 经氨酸，利于病毒粒子成熟和释放。
4. 病毒不断发生改变
抗原漂移
（antigenic drift） ---Genetic mutations
2. 核酸：
-ssRNA,单股,线状,6～8节段,全长13.6kb
―甲型、乙型流感病毒8节段
―丙型流感病毒7节段
―托高土病毒6节段 无
RNA多聚 酶
NA
3. 病毒的基本结构
― 编码8种结构蛋白和2种非结构蛋白
➢ 血凝素(HA） ➢ 神经氨酸(NA） ➢ 基质蛋白(M1,M2型特异性；
M2为离子通道蛋白) ➢ 核蛋白(NP，型特异性） ➢ RNA聚合酶 ( PB1、PB2、PA） ➢ 非结构蛋白(NS1、NS2 or NEP）
H1N1
Pandemic
H1N1
1895 1905 1915 1925
1955 1965 1975 1985 1995 2005 2010 2015
1889 Russian influenza H2N2
1900 Old Hong Kong influenza
H3N8
1918 Spanish influenza H1N1
Proteolytic activation cleavage
Hydrophobic membrane domain
HA1
S-S HA2
Hydrophobic cytoplasmic domain
HA基因裂解位点与病毒组织嗜性
Horimoto and Kawaoka 2005
HA基因中除裂解位点外，97，108，126， 138，217位的氨基酸与毒力的关系也非常密切
➢甲型流感病毒属(Influenzavirus A) ➢乙型流感病毒属(Influenzavirus B) ➢丙型流感病毒属(Influenzavirus C) ➢托高土病毒属（Thogotovirus）
（一）正粘病毒科的共同特性
1. 病毒形态：圆形或多形（丝状),有囊膜 ，病毒粒子80～120nm。