第4章-2细胞化学染色检验(血液检验)

NAP积分为： 30~130分
NAP染色结果既报阳性率又报积分值。
四、临床意义
2.病理性变化：
1.生理性变化：应激状态、妊娠、新生儿等。
(1)NAP：细菌性感染、慢粒(加、急)、急
淋、慢淋、恶性淋巴瘤、转移癌、 骨纤、真红、再障、原发性血小
板增多症、使用糖皮质激素等。
(2)NAP：慢粒(慢)、PNH、MDS、恶组等。
3. 疾病的鉴别：
(1) 类白与慢粒:
前者
前者
后者
后者
(2) 慢粒慢性期与慢性中性粒细胞白血病：
(3) 细菌性感染与病毒性感染/寄生虫感染：
前者 后两者正常或
(4) 慢粒病情观察：
(5) 再障与阵发性睡眠性血红蛋白尿： 前者 后者 (6) 恶组与反应性组织细胞增多症： 前者 (7) 急性白血病类型： 急性髓细胞 后者常 急淋
NAP染色反应强度标准：
（－）：胞质中无颗粒； （＋）：胞质含少量颗粒，约占1/4；
（＋＋）：胞质含中等量颗粒，约占1/2；
（＋＋＋）：胞质含较多颗粒，约占3/4； （＋＋＋＋）：胞质充满颗粒，无空隙。
钙 钴 法
++++
+++
++
++
+
+
－
EOS －
2. NAP染色结果报告：
NAP染色结果报告包括阳性率和积分值。
α-磷酸萘酚钠
α-萘酚+重氮盐
NAP PH9.6
α-萘酚+磷酸钠 不溶性沉淀定位 于胞质
二、正常血细胞染色反应

NAP主要存在于成熟的中性粒细胞胞 质中。严重的化脓性感染时，晚幼阶 段粒细胞也可见有阳性反应。

其他细胞基本呈阴性反应。
三、结果判断及参考范围
1. 结果判断：出现深褐色颗粒的量及密度
1. 特异性酯酶（specific esterase）
主要存在于粒细胞，又称“粒细胞酯酶”
－氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）。
2.非特异性酯酶(nonspecific esterase)
单核、组织细胞中含量较多，粒细
胞、淋巴细胞中含量少，且氟化钠抑 制单核细胞中的非特异性酯酶，而不 抑制粒细胞、淋巴细胞及其他细胞。
红色化合物，定位于含多糖类的细胞内。
二、正常血细胞的染色反应
1. 粒细胞系统：（阳性逐渐增强）
原始粒C（－）或（+）
早幼粒C~成熟中性粒C（+）：
细颗粒均匀红色
嗜酸粒C：颗粒不着色，胞质呈红色。
嗜碱粒C：颗粒阳性，胞质不着色。
2.单核细胞系统：分化差（－）其他（+），
细颗粒状。 3.淋巴细胞系统：多数（－）少数（+），
绿色箭头示：环形铁粒幼红细胞；蓝色箭头示：铁粒红细胞
三、参考范围
1. 细胞外铁： （ + ） ~（ ++ ） 2. 细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率大约 19~44%， I~II型（ I型为主），无Ⅲ 型、Ⅳ型、环形铁粒幼红细胞及铁粒
红细胞。
四、临床意义
1. 缺铁性贫血：
外铁（－），内铁<10%；
外铁增多。
五、应用评价
铁染色是临床常用的一种细胞化学 染色，虽不如血浆铁蛋白敏感，但是反
映机体储存铁的金标准。
外铁：反映骨髓中铁的储存量； 内铁：反映骨髓中可利用的铁量。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 neutrophilic alkaline phosphatase （NAP）
一、原
理
Kaplow偶氮偶联法：
CML
类白
五、应用评价
NAP染色有多种检测方法，国际标准化委员会推荐
Kaplow萘酚AS-BI磷酸钠法和Tomonaga萘酚AS-MX
磷酸钠法。钙-钴法试剂成本低廉，操作繁琐，反应
时间长，临床上逐步被偶氮偶联法取代，阳性产物色 泽鲜明、定位精确，尤其以萘酚AS-BI磷酸钠法最为 广泛使用，利于评定NAP活性强度的分级。常用重氮 盐有坚牢蓝RR、坚牢蓝BB、坚牢紫酱等，不同偶联 有不同的灵敏度。
治疗有效后，内外铁 。
2. 铁粒幼细胞性贫血： 外铁；内铁阳性率，环形铁粒幼 红细胞增多，可见粗颗粒的Ⅲ、Ⅳ型 铁粒幼红细胞。
3. MDS-RAS：内外铁增多，环形铁粒幼 红细胞>15%。 4. 非缺铁性贫血：溶贫、巨幼贫、再障、 白血病等，内外铁常增多。
5. 感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等：
细胞内铁(油镜观察幼红细胞)
Ⅰ型：1～2个小铁颗粒； Ⅱ型： 3～5个小铁颗粒；
Ⅲ型： 6～10个小铁颗粒或1～4个大颗粒；
Ⅳ型： 10个以上小铁颗粒或5个以上大颗粒。
铁粒幼红细胞(sideroblast)：
胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。
铁粒红细胞(siderocyte)：
胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。 环形铁粒幼红细胞(ringed sideroblast) 幼红细胞胞质内铁颗粒>6个，围绕 核周1/2以上者。
4. 疾病发病机制的探讨
白血病的诊断：MICM分型
M：morphology C：cytogenitics I：immunology M：molecular biology
形态学分型：进行初步的诊断
免疫学分型：明确细胞种类 细胞遗传学分型：与疾病预后有关 分子生物学分型：提高到分子水平
四、基本ห้องสมุดไป่ตู้骤
淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核
细胞系统、浆细胞、组织细胞（－）。
四、临床意义
主要用于鉴别急性白血病的类型 （1）急淋和急性髓细胞系的鉴别：
急淋：（－），阳性率<3%；
急单：弱阳性； 急粒：阳性（
+ ～ + + + ）。
ALL
ALL
原粒阴性
原粒弱阳性
原粒阳性
早幼粒 强阳性
（2）鉴别诊断： a. 小原粒（+）与原淋（－） b. 急性早幼粒白血病(+++)与急单（+） c. 急单（+）与组织细胞白血病、
粗颗粒或块状。
4.红细胞系统：（－），病理情况可（+）。 5.巨核细胞系统：（+），颗粒状或块状。 6.其它细胞：浆细胞（－），巨噬细胞（+）
a 粒细胞、b 巨核细胞、c 单核细胞、d 幼红细胞
三、结果判断
各种细胞阳性反应强弱不同 1. 粒细胞系统：
红色、弥散状。
2. 淋巴细胞系统：
粗颗粒状、小块状、大块状红色。
2. 帮助鉴别急性白血病的细胞类型：
急淋：（+）呈粗颗粒状或块状。 急粒：（+）细颗粒状或均匀红色。
急单：（+）细颗粒状，均匀分布，
有时胞质边缘颗粒较粗大。
3. 其他细胞： 急慢性淋巴细胞白血病和 淋巴瘤细胞多呈强阳性
戈谢细胞呈强阳性 尼曼-皮克细胞多呈阴性
CLL
ALL
酯 酶 染 色
一、分类
嗜酸性粒细胞（－）或弱（+） 嗜碱性粒细胞（+）
②单核细胞系统： （－） ③肥大细胞：（+） ④淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、
巨核细胞、血小板： （－）
3. 临床意义
主要用于辅助鉴别急性白血病细胞类型： ①急性粒细胞白血病： （+） ②急性早幼粒细胞白血病：强（+）
③急性单核细胞白血病：（－）
④急粒单：粒细胞（+）和单核细胞（－） ⑤急性巨核细胞性白血病：（－） ⑥急性淋巴细胞白血病：（－）
二氨基联苯胺法
二盐酸联苯胺法
复方联苯胺法
三、正常血细胞的染色反应
1. 粒细胞系统：
原始粒细胞（－）或（+） 早幼粒以下细胞均（+），阳性逐渐增强。
中性分叶核粒细胞：强阳性
嗜酸粒细胞：阳性最强 嗜碱粒细胞：（－）
2. 单核细胞系统：
（－）或弱（+），阳性颗粒少而细小。
3. 其它系统细胞：
低于SBB；
2. SBB步骤较繁琐。
过碘酸--雪夫反应(糖原染色)
periodic acid-Schiff reaction(PAS)
一、原理
过碘酸是氧化剂，使含有乙二醇基的
多糖类物质(糖原、糖蛋白、糖脂、粘多
糖等)氧化，形成双醛基。醛基与Schiff ’s
液中的无色品红结合，使无色品红变成紫
1、+
2、++
3、+++
4、++++
5、－
3. 红细胞系统：
均匀红色或块状
4. 单核细胞系统： 细颗粒状
5. 巨核细胞和血小板：
颗粒状、块状。
1.巨核细胞和血小板阳性
四、临床意义
1. 帮助鉴别巨幼细胞性贫血和骨
髓增生异常综合征、红白血病:
前者（－），后两者（+）。
A 红白血病(+)
B 巨幼细胞性贫血(—)
胞内的各种化学物质(酶类/脂类/糖类/铁
/蛋白质/核酸等)作定性、定位、半定量
分析的方法。
二、必要性

从形态学观察，存在较多的主观性； 有些原始细胞形态较相似，难以鉴别；

结合细胞化学染色，提高疾病的诊断率。
三、临床应用
1. 辅助判断急性白血病的细胞类型
2. 辅助血液系统疾病的诊断和鉴别 诊断 3. 观察疾病的疗效和预后
含铁物质 亚铁氰化钾
酸性 Fe [Fe(CN) ] + 12K+ 4 6 3
亚铁氰化铁
二、结果判断
1. 细胞外铁(骨髓小粒－含铁血黄素)