HPLC色谱柱使用记录
高效液相色谱仪使用说明书
高效液相色谱仪使用说明书序言高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography, HPLC）是一种常用的分离技术，广泛应用于药物分析、食品安全监测、环境检测等领域。
本说明书旨在提供关于高效液相色谱仪的基本操作原理、使用方法和注意事项等信息，以帮助用户正确、高效地使用该仪器。
一、仪器概述高效液相色谱仪主要包括进样系统、色谱柱、泵液系统、检测器和数据处理系统等基本组成部分。
1. 进样系统进样系统用于将待测样品引入色谱柱中进行分离。
常见的进样方式包括自动进样器、手动进样器和微量注射器等。
2. 色谱柱色谱柱是分离相和固定相组成的圆柱体，是进行样品分离的关键组件。
用户应根据待测样品的特性选择适当的色谱柱型号和填充物。
3. 泵液系统泵液系统通过输送流动相将样品送入色谱柱中，并提供足够的压力以保持流速和流动相性质的稳定。
泵液系统可根据实际需求配置恒压、梯度或等压梯度等控制方式。
4. 检测器检测器用于监测和记录样品的化学信号，并将其转化为可读的信号输出。
常见的检测器包括紫外可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
5. 数据处理系统数据处理系统用于采集、处理和分析检测到的信号，通常配备有专业的软件。
用户可根据需要选择合适的数据处理系统，并进行适当的参数设置。
二、操作方法1. 仪器准备（1）保证仪器通电正常并处于稳定工作状态。
（2）检查流动相储液瓶中是否有足够的流动相，并确保其配制符合要求。
（3）检查色谱柱的连接情况，确保柱座和柱连接部位严密无泄漏。
（4）开启数据处理系统，确保与色谱仪的连接正常。
2. 样品准备根据实验要求选择合适的样品，并进行必要的前处理工作，如过滤、稀释等。
3. 进样操作（1）将样品溶液通过合适的进样方式加入进样器中。
（2）设置进样体积和进样方式等参数，并进行进样操作。
4. 流动相系统设置（1）根据实验要求选择合适的流动相，注入流动相储液瓶中。
（2）设置流速、梯度等参数，并进行流动相系统的初始化。
液相色谱柱的使用及保养
C18, C18, C18, C18,
phenyl, CN, NH2, Silica C8, phenyl, CN, Silica C8, Silica C4 C18, C8
色谱柱的清洗
对所做的样品要有充分的了解
用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗
硅胶柱的一般方法
先用甲醇洗去极性杂质
回收率低，不出峰
“不可逆”吸附 固定相过强或流动相过弱 非特异性吸附
色谱柱以外的因素（一）
“柱效”问题，不一定是色谱柱问题！
仪器问题：连接不好造成死体积
进样器
检测器
管路，连接口 保护柱 在线过滤器堵塞
流动相问题：色谱柱未平衡好 进样量太大
色谱柱与仪器的联接
影响实验结果好坏的最重要因素
是决定性的步骤
样品预处理常用的方法
高速离心 过滤、超滤 选择性沉淀 衍生反应 液-固萃取 其他
/ 液-液萃取
Sep-Pak样品处理小柱
样品预处理的过程
去除微粒
过滤
过滤膜/过滤装置
有机(0.5m)/无机(0.45m)
膜片可更换
流速∶1.0 ml/min 纸速∶20 cm/min (用记录仪时，接检测器10mV档) 检测器灵敏度∶0.5-1.0AUFS (用记录仪时) 检测器时间常数∶小于0.2
谱带展宽（ml） =1000×W（cm）/20 （记录仪） =1000×W（min） （工作站）
液相色谱实用技术（二）
样品衍生∶氨基酸分析
PT法 IA CG O方 NS C
R
-
N C H O CO ຫໍສະໝຸດ 2氨 基 酸异酯 硫 氢 酸 苯
S R N H O H C C H NC O
高效液相色谱仪操作说明书
高效液相色谱仪操作说明书一、引言高效液相色谱仪（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物医药、环境监测等领域的分析仪器。
本操作说明书旨在帮助用户正确有效地操作HPLC仪器，以获得准确可靠的分析结果。
二、仪器概述1. 主要组成：HPLC仪器主要包括进样系统、色谱柱、流动相装置、检测器及数据分析系统等组成部分。
2. 基本原理：HPLC利用流动相在高压下通过色谱柱，样品分离后再由检测器进行检测和信号记录，通过数据分析系统生成分离效果图谱或定量结果。
三、操作步骤1. 准备工作a) 确保仪器电源已接通，并检查各部分连接是否牢固。
b) 打开相关软件并进行系统初始化。
c) 根据待分析样品的特性，选择适宜的色谱柱和流动相。
2. 进样系统操作a) 将待测样品通过合适的方法制备成溶液。
b) 打开进样系统的相关开关，将样品通过进样针注入进样口。
c) 调整进样量和进样速度，确保样品完全被进样器吸取。
3. 色谱柱操作a) 将色谱柱连接到系统中，并确保连接处密封良好。
b) 根据样品性质选择合适的流动相和梯度条件，设置柱温以提高分离效果。
c) 在柱前和柱后设置适当的减压阀，调节流量和压力，确保色谱柱正常运行。
4. 流动相装置操作a) 根据检测要求准备合适的流动相溶液。
b) 将流动相溶液通过流动相装置输送至色谱柱，确保流速和流量稳定。
5. 检测器操作a) 打开检测器并进行相关参数设置，如波长选择、灵敏度调节等。
b) 将流经色谱柱的样品原液通过检测器进行检测，并记录信号。
6. 数据分析与结果生成a) 使用相应的数据分析软件，导入检测到的信号数据。
b) 根据需求进行峰面积积分、峰高浓度定量等相关数据分析。
c) 生成分析图谱或报告，并保存结果。
四、故障排除在操作过程中，可能会遇到一些故障情况，以下列举一些常见故障及其排除方法：1. 柱堵塞：检查柱前和柱后的减压阀是否打开和调整流量。
2. 波峰异常：检查流动相和检测器参数设置是否正确。
3. 信号丢失：检查进样系统是否正常工作，检查柱连接是否存在泄漏。
HPLC仪色谱柱与使用注意事项
2020/10/19
10
分离不同分子量蛋白推荐的色谱柱
样品分子量
5×103 - 1×105 1×104 - 5×105
推荐柱
TSK-GEL G2000SWXL/SW/Super SW2000
TSK-GEL G3000SWXL/SW/Super SW3000
2×104 - 7×106
TSK-GEL G4000SWXL/SW
R1 Si O Si C18H37 + HCl
R2
1（2，3）：1
R2
R1，R2 =H，Cl，CH3
2020/10/19
3
根据R1、R2基团，含碳量可分为高碳、中碳、低碳 型键合相：
高碳 R1=R2 =CH3 载样量大，吸附性能大；
中碳 R1=H, R2=Cl
≡Si－O－
Si(H) ∣
－C18H37
HPLC仪色谱柱与使用注意事项
姚彤炜 主讲 浙江大学药学院
HPLC色谱柱有柱管和固定相组成，柱管用不锈 钢制成，常用色谱柱长10～30cm，内径2～6mm， 以4.6mm的内径最常用
孔径在15nm以下的填料适合于分析分子量小于 2000 的化合物，分子量大于2000 的化合物则 应选择孔径在30nm 以上的填料
2020/10/19
12
色谱柱的使用与维护
所有色谱柱使用缓冲液后必须用柱体积20～30 倍的含低有机溶剂（10%）的水冲洗色谱柱
色谱柱 150× 4.6mm 200× 4.6mm 250× 4.6mm
柱体积 2.5ml 3.3ml 4.2ml
冲洗体积 50ml 65ml 80ml
2020/10/19
2020/10/19
7
色谱柱 操作规程
色谱柱操作规程
《色谱柱操作规程》
一、使用前准备
1.1 检查色谱柱是否有损坏或污染
1.2 准备好色谱柱需要用到的溶剂和试剂
1.3 准备好色谱仪器和相关设备
二、装柱操作
2.1 检查柱子的填料是否均匀，如有不均匀情况需重新填料2.2 使用正确的柱子连接件连接色谱柱和色谱仪
2.3 用适当的方法装载样品进入色谱柱
2.4 在装载样品之前，进行柱子的平衡操作，以确保实验的准确性
三、流动相操作
3.1 准备好流动相，确保流动相的纯度和稳定性
3.2 用注射器将流动相缓慢地注入色谱柱中，直到柱子完全充满
3.3 确保流动相的压力和流速在正常范围内
四、运行及维护
4.1 启动色谱仪器，设置好运行参数
4.2 监控运行过程中的色谱柱压力和流速
4.3 如果发现异常情况，立即停止运行并检查色谱柱及相关设备
4.4 实验结束后，用适当的方法对色谱柱进行保养和清洗，以
确保下次使用时的准确性和稳定性
五、安全注意事项
5.1 操作过程中要严格遵守化学品的安全操作规程
5.2 避免色谱柱受到外部物质的污染和损坏
5.3 注意色谱柱及相关设备的维护和保养，确保使用安全和稳定性
六、记录和报告
6.1 在操作过程中要及时记录实验数据和观测结果
6.2 对实验结果进行分析和总结，撰写实验报告
6.3 如有必要，将实验结果提交并交流给相关部门或同行
以上即是《色谱柱操作规程》，希望能够对使用色谱柱的实验人员有所帮助。
HPLC 色谱柱安装与使用说明
液相色谱柱安装与使用说明液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。
一、液相色谱柱的安装：1、液相色谱柱的结构：a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。
柱接头采用低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3／16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。
7／16英寸外螺纹与1／4英寸柱管(Φ6.35mm)连接，中间放置压坏用于密封。
3／16英寸的内螺纹与1／16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接，中间也放置压环用于柱接头的密封。
为了尽量减少柱外死体积，在安装色谱柱时，用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底，然后再拧紧空心螺钉。
压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2．5mm长或其他固定尺寸)。
在两端柱接头内，柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网)，用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。
空柱各组件均为316#不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。
但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。
b、柱填料：液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱：多以硅胶为柱填料。
根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10 µm的范围内。
另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。
也有无定型和球型之分。
常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 µm之间。
2，色谱柱的安装：a、拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。
b、拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。
色谱柱使用管理规程
****有限公司1.目的：建立色谱柱使用管理规程。
2.范围：适用于仪器分析（HPLC GC前对检测条件适用性的确认和HPLC分析结束后对色谱柱的清洗。
3.责任：中心化验室负责人、检验员对本规程负责。
4.内容：4.1色谱柱使用注意事项新购进的色谱柱分类存放，硅胶柱、化学键合硅胶柱、氟基或氨基柱、离子交换树脂柱、凝胶柱各用一个色谱柱盒，盒上贴上标签，注明类别。
随柱说明书装入密实袋放入色谱柱盒中。
每启用一根色谱柱，在色谱柱上贴上标签，注明启用日期。
并做好色谱柱使用与维护记录，内容包括：色谱柱型号、编号、开始使用时间、最大流速、温度范围、最大压力、冲洗方法等。
见附件（1）,每根柱子每两个月保养一次，特别是对于一些使用频率少的柱子，因为放置时间长，容易干柱的要特别关注做好保养。
对于确已失效的柱子，做好停用记录，不能随意丢弃，专门存放。
对于使用时间较长柱效降低的柱子，可把它用于检测产品的中间体。
色谱柱使用一段时间后，常遇到柱子被污染，柱效会有一定程度的下降，采用适当的方法对色谱柱进行保护，可以延长色谱柱的使用寿命。
样品和流动相的处理：溶解的样品进样前用滤膜过滤，以除去不溶物。
如果必要, 需进行样品的预处理。
流动相中如有不纯物质将影响柱效，所以溶剂尽量使用色谱级别的，至少是分析纯级别，流动相使用前用微孔薄膜过滤。
在流动相的输液管前安装过滤器。
4.2测试完毕后处理测试完毕后，清洗约30分钟，一般流速为正常流速的1至1.5倍，然后冲洗保存约40分钟。
4.3色谱柱的贮存尽可能将色谱柱贮存于100%T机溶剂中（如：最好用乙月青，其次甲醇），避免在缓冲溶液液中保存。
使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15-20倍体积的纯化水-有机溶剂的流动相冲洗色谱柱（5%P醇和95%屯化水），后换成有机溶剂贮存（95%P醇和5%屯化水）。
清洗管路一个月一次，已避免色谱柱堵塞。
5.文件变更历史;6.附件：附件1:《色谱柱使用与维护记录》附件1: 色谱柱使用与维护记录ZL-JL-051-00开始使用时间： 尺 寸： 温度范围： 最大压力：柱子型号： ______________________ 柱子编号： ______________________ 最大流速： ml/min典型压力： ______________________ 冲洗方法：。
HPLC色谱柱的基础知识及使用技巧
HPLC色谱柱的基础知识及使用技巧一、引言高效液相色谱法（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术。
色谱柱是HPLC系统的核心组成部分，其性能直接影响分析结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍HPLC色谱柱的基本原理、分类、使用及维护等方面的专业知识。
二、色谱柱的基本原理色谱法是一种基于不同物质在固定相和移动相之间的分配平衡进行分离的物理化学方法。
HPLC色谱柱的核心是固定相，它是由硅胶、氧化铝、活性炭等颗粒状物质组成。
当样品溶液通过色谱柱时，不同物质根据其与固定相的相互作用力大小，依次从固定相中解吸下来，从而实现各成分的分离。
三、色谱柱的分类1.正相色谱柱：适合分离极性化合物，如糖类、醇类等。
2.反相色谱柱：适合分离非极性化合物，如脂肪酸、烃类等。
3.离子交换色谱柱：适合分离带电离子或极性化合物，如氨基酸、核酸等。
4.体积排阻色谱柱：适合分离大分子物质，如蛋白质、多糖等。
四、色谱柱的选择与使用1.根据分析物的性质选择合适的色谱柱。
2.确保色谱柱不受污染，使用前需进行清洗和活化。
3.避免过度使用压力，以延长色谱柱的使用寿命。
4.定期更换色谱柱，以保证分析结果的稳定性。
五、色谱柱的维护与保养1.使用后及时清洗色谱柱，防止残留物对柱子的污染。
2.色谱柱应储存于干燥、避光的环境中，避免受潮或暴晒。
3.对于长期不用的色谱柱，应定期检查其性能并进行活化处理。
4.避免将色谱柱置于高温或低温环境中，以防止硅胶固定相产生裂纹或变形。
5.定期更换流动相，以保证流动相的质量和稳定性。
同时，流动相的pH值应控制在固定相所能承受的范围内。
6.在使用过程中，应时刻关注色谱柱的压力变化。
若发现异常压力或突然变化，应及时检查柱子是否堵塞或受损。
若确有问题，应立即停止使用并进行修复或更换。
7.在使用过程中，还应注意观察色谱峰的形状和大小。
若发现异常峰或分离效果变差，应考虑更换流动相或清洗柱子。
若问题仍未解决，应考虑更换色谱柱。
HPLC操作规程
1目的：规定了高效液相色谱法的标准操作程序，便于规范操作。
2适用范围：适用于公司内用高效液相色谱法检测的产品。
3责任人：QC。
4程序内容4.1 简述4.1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理得到测定结果。
4.1.2常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱；离子交换填料，用于离子交换色谱；具一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。
4.1.3 高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理机组成。
检测器最常用的为可变波长紫外光检测器或紫外-可见光检测器，色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。
梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。
4.2 高效液相色谱仪的使用要求4.2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。
4.2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
4.2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
4.3 流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光度法进行溶剂检查应符合要求。
水应为新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。
对规定PH值的流动相应使用精密PH计进行调节。
配制好的流动相应通过0.45μm适宜的滤膜滤过，用前应脱气。
应配制足量的流动相及时待用。
4.3.1 供试溶液的配制：供试品用规定溶剂配成供试溶液。
定量测定时，对照品溶液配制1份，样品供试溶液配制2份。
UniSil-NH2系列HPLC氨基色谱柱使用说明书
UniSil®-NH2系列HPLC氨基色谱柱使用说明书尊敬的用户，非常感谢您购买和使用UniSil®系列HPLC氨基色谱柱。
UniSil®系列色谱柱由苏州纳微科技有限公司（Nano-Micro Tech）研发生产并采用全球领先的单分散超高纯硅胶微球填料。
UniSil®氨基柱可提供5μm（分析型）和10μm（制备型），并提供不同的孔径和尺寸选择。
UniSil®色谱柱制备工艺严格，从单分散微球填料、基团键合、装柱和填装性能测试等环节，均依照本公司严格质控标准，可靠性和重现性得到保障，您可安心使用。
为了更好地使用UniSil®系列NH2氨基柱，请您仔细阅读本产品说明书。
您选择纳微科技UniSil®-NH2氨基柱，可以获得：-全球唯一的单分散微球填料带来的品质保证，柱效更高，结果稳定性更好，柱寿命更长-多重保留机理，同时适用于正相、反相和离子交换分离-反相模式下分离亲水性和极性化合物，如碳水化合物和单糖、寡糖、糖醇等糖类化合物-正相模式下分离酸性物质、烃类化合物、维生素A和D1.使用前的检查和须知-打开包装检查色谱柱的填料名称、尺寸规格、连接形式及出厂检验报告(COA)- 出厂检验报告(COA)：填料批号、柱系列号、柱性能、测试流动相等内容，阅后请妥善保管。
- 新色谱柱内有流动相(正己烷/乙酸乙酯=9:1)，在存储或运输中可能有少量溶剂挥发，请您在使用前充分平衡色谱柱。
- 如需自行评价色谱柱的柱效或基本性能，可按检验报告中的操作条件来测试并保存。
- 在接入HPLC系统之前，确保系统洁净、无污染或无颗粒残留，建议用新配置的经过0.2μm过滤的流动相充分冲洗系统温馨提示：UniSil®系列氨基色谱柱产品提供柱效、对称因子及保留时间等数据作为色谱性能参考。
不同HPLC设备的柱效测试可能会有差异，柱效和柱压值如有较大异常，请联系苏州纳微科技有限公司售后服务部，以便按规范的流程处理或更换。
HPLC操作规程
HPLC高效液相色谱操作规程
1、仪器操作前应仔细阅读操作手册，并在专人指导下进行。
2、打开电源前，检测仪器与电脑的电源线，数据线以及输液管道
是否连接正常。
3、打开电源，在仪器通过自检后，打开操作软件，选择合适的检
测器，建立仪器方法，设定实验方法。
4、将处理好的样品注入样品瓶，封好杯口，将样品瓶按顺序放入
样品盘中。
5、实验结束后，根据色谱柱类型用相应的流动相清洗柱30分钟，
若使用过缓冲液，应该用不少于10%的甲醇或者乙腈水溶液冲洗系统，以防堵塞。
冲洗完成后要用规定的液体保存色谱柱，长期不用要将柱子取下，两端拧紧，密封保存。
6、退出色谱工作站，关闭各模块电源开关，清洁实验工作面。
7、关闭仪器总电源开关，结束实验, 填写仪器使用记录。
注意事项：
1、所使用的流动相、缓冲溶液在使用前需经膜过滤、超声脱气，
样品经针头过滤器（0.02um）过滤。
2、流动相过滤时应注意用相应的有机膜或无机膜，不能混用。
3、停泵时应将泵的流量设置为0，使泵缓慢停止工作。
4、拆装柱时应注意柱子的方向。
正相hplc色谱柱
正相HPLC色谱柱是一种常用的高效液相色谱柱，主要用于分离和纯化具有极性基团的化合物，如胺、醇、酚、酮等。
以下是正相HPLC色谱柱的一些特点和使用建议：
1. 硅胶基色谱柱
硅胶基色谱柱是最常用的正相HPLC色谱柱，其填充颗粒具有多孔性、高比表面积和低吸附性等优点，使得它具有较高的柱效和稳定的性能。
硅胶基色谱柱对极性化合物具有较好的分离效果，但不适用于分离脂溶性化合物。
2. 氨基键合硅胶色谱柱
氨基键合硅胶色谱柱是一种通过氨丙基键合硅胶颗粒制备的色谱柱，具有较高的耐酸碱性和耐氧化性。
该色谱柱适用于分离具有氨基或羧基极性基团的化合物，如氨基酸、胺类等。
3. 氰基键合硅胶色谱柱
氰基键合硅胶色谱柱是一种通过氰乙基键合硅胶颗粒制备的色谱柱，具有较高的耐酸碱性和耐氧化性。
该色谱柱适用于分离具有氰基极性基团的化合物，如腈类、异腈类等。
4. 正相HPLC流动相的选择
正相HPLC流动相一般采用低极性的有机溶剂，如正己烷、乙醚、氯仿等，也可以使用混合溶剂。
在选择流动相时，应根据样品的性质和分离要求进行选择。
一般来说，随着流动相极性的增加，样品的保留时间会延长。
5. 正相HPLC的使用注意事项
在使用正相HPLC色谱柱时，需要注意以下几点：
* 避免使用过于极性的流动相，以免损坏色谱柱；
* 在使用前应进行充分的平衡和清洗，以确保柱子的稳定性和寿命；
* 在使用过程中应控制流速和温度，以获得最佳的分离效果；
* 在使用后应进行适当的清洗和维护，以延长色谱柱的使用寿命。
hplc操作规程
hplc操作规程HPLC（高效液相色谱）是一种高效、准确、灵敏的分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等领域。
为了确保HPLC分析的准确性和可靠性，有必要制定一份详细的HPLC操作规程。
以下是一个HPLC操作规程的示例，共计1200字。
HPLC操作规程1. 实验前准备工作(1) 确保仪器处于正常工作状态。
检查HPLC系统的压力、流速、温度等参数，确保所有泵、检测器和采样器都能正常工作。
(2) 根据实验的需求，准备好HPLC色谱柱和色谱柱保护柱。
(3) 检查溶液的pH值、浓度等参数，确保样品溶液的配制准确无误。
2. 样品制备(1) 根据实验需求，准确称取适量的样品，并将其溶解于适量的溶剂中。
(2) 需要注意的是，溶解样品时要完全溶解，避免残留物对HPLC柱造成损害。
(3) 使用过滤器或离心机去除样品中的杂质和固体颗粒。
3. 系统平衡(1) 打开HPLC系统的所有阀门，确保流路畅通。
(2) 开始系统平衡前，关闭检测器和采样器，以避免样品流入检测器和采样器。
(3) 启动系统，调整流速至实验所需的流速。
通常流速为0.2-2 mL/min。
(4) 进行15-30分钟的系统平衡，确保系统稳定。
4. 校正和质量控制(1) 定期校正流速、温度和检测器灵敏度等参数，确保实验结果的准确性。
(2) 进行质量控制，包括运行标准曲线、检测器灵敏度和峰面积的稳定性等测试，以确保分析结果的可靠性。
5. 样品注射(1) 将样品以合适的方式注入采样环或自动采样器中。
(2) 确保注射量适当，一般不超过色谱柱的容量的10%。
(3) 使用空白样品作为对照，进行注射前和注射后的检测，以排除注射器、柱等可能引起的峰偏移或异常的情况。
6. 数据采集和分析(1) 设置合适的检测波长和积分时间，以获得准确的检测结果。
(2) 在实验过程中定期检查系统的稳定性和峰形。
(3) 根据实验要求，对分析结果进行计算和解释，包括峰高、峰面积、保留时间等指标。
(4) 记录得到的数据和结果，保存实验记录和报告。
HPLC使用方法
W1/2 = 2.354σ W = 4σ
从色谱流出曲线上，可以得到许多重要信息：
（l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所合组 份的最少个数．
（2）根据色谱峰的保留值(或位臵)，可以进行定性分析．
（3） 根据色谱峰下的面积或峰高，可以进行定量分析．
（4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据．
（5）色谱峰两峰间的距离，是评价固定相(和流动相)选择是否合适的依据．
色谱分析的目的是将样品中各组分彼此分离，组分要达到完全分离，两峰间的距离必须足够远，两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的，即与色谱过程的热力学性质有关。但是两峰间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此重叠，还是不能分开。这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过程的动力学性质有关。因此，要从热力学和动力学两方面来研究色谱行为。
［例18-1］有一根 lm长的柱子，分离组分1和2得到如图18d5的色谱图。图中横坐标l为记录笔走纸距离。若欲得到 R=1．2的分离度，有效塔板数应为多少？色谱往要加到多长？
(tM=5min,tR1=45min,tR2=49min,w1=w2=5mm)
解：先求出组分2对组分1的相对
保留值r2，1（即α值）
(w2)1/2＝2.0/1.7＝1.18 mm
R＝2(30-27)/(1.8+2)＝6/3.8＝1.6
[例18-3] 已知一色谱柱在某温度下的速率方程的A=0.08cm; B=0.65cm2/s; C=0.003s, 求最佳线速度u和最小塔板高H. 解: 欲求 u最佳和H最小,要对速率方程微分,即
高效液相色谱(HPLC)柱效测定
实验六高效液相色谱(HPLC)柱效测定093858 张亚辉一. 实验目的1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。
2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。
3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。
二. 实验原理高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。
在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。
反之，则称为正相色谱分离系统。
反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。
定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。
分离度（R）的计算公式为：R＝ 2[t(R2)-t(R1)] /1.7*(W1＋W2)式中 t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间； t(R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为此相邻两峰的半峰宽。
除另外有规定外，分离度应大于1.5。
本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE，常被用作塑料增塑剂。
它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。
但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。
待测物性质见表1。
表1色谱柱测试条件如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC分离检测。
三.仪器与试剂1、仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul微量注射器。
2、试剂甲醇（色谱专用），高纯水四. 实验步骤1、色谱条件色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶（C8）柱温：室温流动相：初始为高纯水：20％，甲醇：80％检测器：DAD检测器;检测波长：220nm；进样体积：20µl定量环，实际注射每次可控制在40µl。
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离
和定量分析化合物的混合物。
以下是HPLC的基本使用方法：
1. 样品准备：将待分析的混合物或溶液准备好，通常需要进行前处理，例如过滤、稀释或提取。
2. 系统准备：打开色谱仪的电源，启动仪器，确保所有组件处于正常工作状态。
检查液相、气相和其他溶剂的供应，并确保其质量良好。
3. 进样：将样品注射器连接到色谱柱，并根据实验要求设置注射器体积。
将样品注射器插入进样口，并将样品注入到色谱柱。
4. 创建梯度：根据分析要求，创建一个梯度程序。
这涉及到设置流动相的组成和梯度变化的速率。
5. 运行分析：点击开始按钮，启动分析过程。
色谱系统将自动进行溶剂梯度变化，使样品中的化合物逐步从色谱柱中分离出来。
6. 数据采集和分析：在分离过程中，色谱仪将采集到一系列数据点，包括峰高、峰面积、保留时间等。
使用相关的数据处理软件，可以对这些数据进行处理和分析。
7. 清洗和维护：在分析完成后，需要进行系统的清洗和维护。
这包括冲洗色谱柱、清理进样器和其他组件，并储存色谱仪在
正确的环境条件下。
以上是高效液相色谱仪的基本使用方法。
具体的使用流程和操作步骤可能会有细微的差异，取决于具体的仪器品牌和型号。
建议在使用前仔细阅读和理解相关的操作手册和使用说明。
HPLC色谱柱的使用
安捷伦agilent液相色谱柱zorbax eclipse xdb液相色谱柱（hplc柱）安捷伦agilentzorbax eclipse xdb液相色谱柱（hplc柱）zorbax eclipse xdbhplc色谱柱-c18,c8，苯基和cn-是为在宽的ph范围（p h2-9)获得碱性，酸性和中性化合物良好的峰形而设计的。
这一宽的ph范围实现了使用一个系列的色谱柱进行方法开发的卓越灵活性。
eclipexdb色谱柱可以用于低ph（2－3）的初始方法开发，且可提供所有类型化合物的高分离度和出色峰形。
同样的色谱柱还可用于中等ph（6-8）范围的方法开发。
在中等ph范围，残留硅羟基基活性更大，千万峰拖尾的相互作用更容易发生。
为了克服这些相互作用，eclipse xdb采用专利的工艺进行超密键合和双封端，以覆盖尽可能多的硅羟基。
结果得到了ph2-9范围内碱性化合物的出色峰形，eclipse xdb 色谱柱有c18,c8，苯基和cn键合相用于大多数分离的选择性优化，还有stabl ebond，bonus-rp和extend-c18可提供更多的选择性。
.方法开发的首选色谱柱.碱性、酸性、和中性化合物优异的峰形.在宽ph范围-ph2-9的高性能.在纯硅胶.超密键合和双封端保证了长寿命.三种键合相-c18，c8和苯基，用于选择性优化.提供从毛细管柱到制备柱的各种规格，适合于不同的样品量更多货号产品请浏览右上角详细资料：键合相孔径比表面积温度ph范围zorbax eclipse xdb-c18 80ao 180m2g 60℃2.0-9.0zorbax eclipse xdb-c8 80ao 180m2g 60℃2.0-9.0zorbax eclipse xdb-phenyl 80ao 180m2g 60℃2.0-9.0zorbax eclipse xdb-cn 80ao 180m2g 60℃2.0-9.0 zorbaxstablebond液相色谱柱(hplc柱) 安捷伦agilent zorbaxstablebond液相色谱柱(hplc柱)????zorbaxstablebond柱采用专利的，独特的单官能团硅烷，带有较大的二异丁基（sb-c18)或二异丙基（sb-cb,sb-c3,sb-phenyl,sb-cn和sb-aq)空间位阻侧链基团，保护关键的硅所键在低ph条件下免受消解的进攻。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告
实验目的：
通过高效液相色谱仪分离和测定混合物中的化合物。
实验原理：
高效液相色谱（HPLC）是一种利用高压将样品中的化合物推
动通过填充在柱中的固相材料的分离技术。
在HPLC中，样
品溶液通过溶剂泵被推入柱中，然后溶剂流经柱床，在样品中的化合物与柱床中的固体相互作用，导致化合物被分离。
随后，溶剂中的化合物传送到检测器中进行检测。
实验步骤：
1. 准备样品溶液：将待测混合物溶解在适当的溶剂中。
2. 准备色谱柱：安装和预平衡色谱柱，选择适当的柱材、填料和流动相。
3. 设置色谱仪参数：设置流动相的流速、温度和检测器等参数。
4. 注入样品：使用自动进样器或手动注射器，将样品溶液注入进样器中，并注入色谱柱。
5. 进行分离：根据样品的特性和需要，使用适当的温度和梯度程序，进行分离。
6. 检测：将溶剂与样品中的化合物一起传送到检测器中，并记录峰高、峰宽和保留时间等数据。
7. 数据分析：通过对峰的分析，确定混合物中各成分的相对含量。
8. 清洗和保养设备：完成实验后，清洗和保养色谱柱和色谱仪
设备。
实验结果：
根据分离得到的色谱图，通过分析峰的保留时间和峰面积，确定混合物中各成分的相对含量。
实验结论：
高效液相色谱是一种有效的分离方法，能够对混合物中的化合物进行准确的分离和测定。
根据实验结果，我们可以得到混合物中各组分的含量信息，并进一步进行结构解析和质量控制等工作。
赛默飞世尔 制备 HPLC 色谱柱使用说明书(节选) - NH2P 系列
色谱柱使用说明书色谱柱使用说明书((节选)NH2P系列系列：：NH2P-50 4E 1 色谱柱规格产品名称理论塔板数官能团基质分离模式粒径（μm）尺寸I.D.×L(mm)NH2P-50 4E 7500以上氨基聚乙烯醇正相分离 5 4.6×250产品名称最大耐压(MPa)最大使用流量（mL/min）使用温度范围(℃)使用PH范围出厂时溶剂NH2P-50 4E 15.0 1.5 4～50 2～13 CH3CN/H2O=75/25 通常使用流量：0.5～1.0 mL/min；使用频率高时，建议在通常流量下使用。
2 使用上的注意事项使用上的注意事项聚合物氨基柱与硅胶氨基柱相比，在同样的流动相条件下分离性能高，再现性好。
适用于宽的PH范围（PH2~13）及各种缓冲液。
Ⅰ 操作注意事项1）一定要在规定的压力、流量、温度范围内使用。
如果瞬间超过最高使用压力、或最大使用流量，都有可能会损坏色谱柱。
2）样品必须用流动相来配制。
对于流动相（如：乙腈/水=75/25）难溶解的样品，可将样品在纯水中溶解后，再加乙腈调成与流动相相同的组成。
3）连接色谱柱之前，对液相流路系统进行充分的清洗。
清洗方法如下。
A 流动相是极性溶剂/水的情况下清洗液：NH2P色谱柱测试用流动相清洗量：100mL注意点：拨动切换阀，对进样系统也要进行清洗。
B 流动相是缓冲液的情况下清洗液：①纯水 40mL②50mM 磷酸水溶液③纯水 40mL④50mM 氢氧化钠水溶液 100mL⑤纯水 100mL⑥NH2P色谱柱测定用流动相 100mL注意点：拨动切换阀，对进样系统也要进行清洗。
C 色谱柱流动相置换时，置换流量为0.5mL/min以下。
4）色谱柱的再生如果液相流路系统中含有污染填料的成分（金属离子等），会引起糖类的洗脱异常、分离性能降低。
因此3）流路清洗非常重要。
如果出现类似的分析异常，可以对色谱柱进行再生，有可能柱性能会回复。