几种常见饲料原料中抗性淀粉含量的测定
实验 粮食中淀粉含量的测定
实验粮食中淀粉含量的测定一、实验目的掌握粮食中淀粉含量测定的原理、试剂、仪器设备及操作要点。
二、实验原理试样经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成二糖，再用盐酸水解成具有还原性的单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉含量。
三、实验试剂1.淀粉酶溶液：称取α-淀粉酶0.5g，加100mL水溶解，加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉。
2.碘溶液：称取3.6g碘化钾溶于20mL水中，加入1.3g碘，溶解后加水稀释至100mL。
3.85%乙醇。
4.6mol/L盐酸：取盐酸50mL加水至100mL。
5.200g/L氢氧化钠溶液。
6.甲基红指示液：称取0.1g甲基红用95%乙醇溶液定容至100mL。
7.乙醚。
8.蒸馏水。
四、仪器设备1、粉碎磨：40目筛。
2、天平：分度值0.01g。
3、锥形瓶：250mL。
4、回流冷凝装置：与250mL锥形瓶匹配。
5、容量瓶：250mL。
6、抽滤装置。
7、恒温水浴锅。
五、操作步骤待测样品，用粉碎磨粉碎至全部通过40目筛，充分混合，保存备用。
试样水分含量的测定：105℃烘干至恒重，计算。
1、称取试样约2~5g（精确至0.01g），置于放有滤纸的漏斗内，先用50mL 乙醚分5次洗涤去除脂肪，再用约100mL乙醇洗涤除去可溶性糖类，将残留物移入250mL烧杯，并用50mL水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内。
2、将烧杯置于沸水浴加热15min，使淀粉糊化。
3、将糊化的试样，放置冷却至60℃以下，加20mL α-淀粉酶溶液，在恒温水浴锅中55~60℃保温水解1h，并经常搅拌。
4、取酶解液1滴加1滴碘溶液，应不显蓝色，否则再加热糊化并加适量酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止。
5、将酶解液加热至沸，冷却后移入250mL容量瓶加水定容至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液。
6、取50mL滤液，置于250mL锥形瓶中，加5mL盐酸，装上回流冷凝管，在沸水浴中回流1h。
冷却后加2滴甲基红指示液，用氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100mL容量瓶，洗涤锥形瓶，洗液并入100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用。
抗性淀粉含量的测定
饼干抗性淀粉含量的测定[21]采用3,5-二硝基水杨酸法制作葡萄糖标准曲线。
分别精密吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL 葡萄糖标准液(2.0 mg/mL)。
相对应的加入1、0.8、0.6、0.4、0.2、0mL 的蒸馏水，再分别在每支试管中加入2.0mL 的DNS 试剂，混和均匀后再放于沸水浴中加热2 min 进行显色反应，取出后立即冷却至室温，最后各加入蒸馏水9.0mL ，充分摇匀后，静止2min 在分光光度计下用540 nm 波长处测定光吸收值。
以葡萄糖含量(mg/mL)为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线如图1。
DNS 溶液配制DNS 试剂：称取 10g 3,5- 二硝基水杨酸溶于 600m L 水中，逐渐加入氢氧化钠10g ，50℃水浴溶解后，加入 200g 酒石酸钾钠、2g 苯酚和 5g 无水亚硫酸钠，待溶解并澄清后，取出冷却至室温。
水定容至 1000m L ，过滤。
贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置 7 天后使用。
将饼干碾成粉末，先在试管中加入PH=6.0的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，再加入过量α-淀粉酶（500 U/g ），放入水浴锅中在37℃的条件下下酶解16 h 。
用4 mol/L 的柠檬酸调节PH 至4.0-4.5 加入过量葡萄糖淀粉酶（5000 U/L ），在60℃的水浴锅中 酶解1 h 。
然后将样品放入离心管，4000 r/min ，离心10 min ，弃上清液，用蒸馏水洗涤沉淀，重复2次。
在沉淀中加入5 mL 的氢氧化钾溶液（2 mol/L ），剧烈振荡30 min ，使抗性淀粉充分溶解。
用1 mol/L 的醋酸溶液调节PH 至4.0-4.5，加入过量葡萄糖淀粉酶，60℃ 酶解1h 。
然后4000 r/min ，离心10 min ，收集上清液至100 mL 容量瓶中，经蒸馏水洗涤沉淀，离心，重复2次，合并上清液，最后定容。
用DNS 法[22]测定其还原糖含量。
淀粉的国标测定方法
淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后,其中淀粉用淀粉酶水解成双糖,再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定,并折算成淀粉。
2。
适用范围GB5009。
9-85，适用于所有含淀粉的食物。
3.仪器（1） 回流冷凝器(2） 水浴锅4。
试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1） 乙醚（2） 0.5 ％ 淀粉酶溶液：称取淀粉酶（Sigma 公司， E 。
C3.2。
1.1）0。
5 g ，加100ml 水溶解,加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中.（注：配成溶液的淀粉酶破坏很快，最好邻用现配。
）（3） 碘溶液：称取3.6 g 碘化钾溶于20 ml 水中，加入1。
3 g 碘，溶解后加水稀释至100 ml 。
（4） 85 ％乙醇.(5) 其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法5。
1 样品处理称取2~5 g 样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml 乙醚分5次洗除脂肪(注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml85 ％乙醇洗去可溶性糖类（注:此步骤目的是去除可溶性糖)，将残留物移入250 ml 烧杯内，并用50ml 水洗滤纸及漏斗,洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min,使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下,加20ml 淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1h,并时时搅拌(注：温度过高,淀粉酶的活性破坏）。
然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色,若显兰色，再加热糊化并加20ml 淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。
加热至沸，冷后移入250ml 容量瓶中,并加水至刻度，混匀，过滤.(注：此时淀粉已水解成双糖,过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml 滤液,置于250ml 锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L 盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h ，冷后加2滴甲基红指示剂,用5mol/L 氢氧化钠溶液中和至中性,溶液转入100 ml 容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100ml 容量瓶中，加水至刻度，混匀备用.（淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步反应，然后在淀粉酶的作用下，分解成短链淀粉、糊精、麦芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸进一步水解得到葡萄糖。
批量测定水稻抗性淀粉含量的方法[发明专利]
![批量测定水稻抗性淀粉含量的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d59e8beedb38376baf1ffc4ffe4733687f21fc70.png)
专利名称：批量测定水稻抗性淀粉含量的方法专利类型：发明专利
发明人：罗嘉锐,竺正航,郝晴文,杨维丰,姚惠珂申请号：CN202111450144.3
申请日：20211201
公开号：CN114136960A
公开日：
20220304
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种批量测定水稻抗性淀粉含量的方法，利用双酶水解法测定水稻中抗性淀粉含量，即先用胰α‑淀粉酶将非抗性淀粉水解成葡萄糖，再用钢珠和KOH溶解抗性淀粉，然后用淀粉葡糖苷酶(AMG)溶液使抗性淀粉水解成葡萄糖，并利用GOPOD法测定葡萄糖含量，从而根据标准曲线计算出抗性淀粉的含量。
相比于传统AOAC法耗时长、效率较低、费用高等缺点，本发明所提供一种批量测定水稻抗性淀粉含量的方法，具有成本低，重复性好，正确度较高，能实现批量操作等优势。
申请人：华南农业大学
地址：510640 广东省广州市天河区五山
国籍：CN
代理机构：杭州中成专利事务所有限公司
代理人：金祺
更多信息请下载全文后查看。
淀粉的国标测定方法
淀粉的国标测定方法The final revision was on November 23, 2020淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。
2.适用范围，适用于所有含淀粉的食物。
3.仪器（1）回流冷凝器（2）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）乙醚（3）碘溶液：称取 g碘化钾溶于20 ml水中，加入 g碘，溶解后加水稀释至100 ml。
（4） 85 %乙醇。
（5）其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法样品处理称取2～5 g样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪（注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖类（注：此步骤目的是去除可溶性糖），将残留物移入250 ml烧杯内，并用50ml水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min，使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下，加20ml淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1h，并时时搅拌（注：温度过高，淀粉酶的活性破坏）。
然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色，若显兰色，再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。
加热至沸，冷后移入250ml容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤。
（注：此时淀粉已水解成双糖，过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml 滤液，置于250ml锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h，冷后加2滴甲基红指示剂，用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100 ml容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。
（淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步反应，然后在淀粉酶的作用下，分解成短链淀粉、糊精、麦芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸进一步水解得到葡萄糖。
抗性淀粉的制取与检测
高温处理时间不变，温度在100～ 120℃之间变化与抗性淀粉产率的关 系研究 :
结果分析
马铃薯淀粉乳浓 由线性上度升趋35势%可见，高温使淀粉分子 更充分
结果分析
冷藏的时间越长，抗性淀粉的得率越多，但是 在冷藏48h之后，抗性淀粉得率增加并不明显。这主 要是回为糊化后的马铃薯淀粉结晶分为两个阶段， 晶核生成及晶体生长：首先是直链马铃薯淀粉分子 构象发生变化，晶核形成；然后当冷却到一定温度 支链马铃薯淀粉分子开始缓慢结晶。所以，无论是 直链马铃薯淀粉还是支链马铃薯淀粉，其老化都需 要经历分子自动取向，相互靠拢，才逐步形成晶体， 这需要一个过程。而过长的冷藏时间抗性淀粉并没 有更多增加。
RS(%)＝残留物的重量（干重）/初始重量（干重） × 100 以下实验中抗性淀粉检测都以此方法测定
结果分析
马铃薯淀粉乳浓度及高热高压处理时
间与抗性淀粉产率关系的研究
调整马铃薯淀粉乳浓度(25～45%)。固定 稀 盐 酸 用 量 为 马 铃 薯 淀 粉 重 量 的 3% ， 酸 解 30min，恒温水浴锅中沸水浴 1h。高压灭菌锅 进行高压高热处理，处理温度120℃, 调整高 热高压处理时间（10～60min）。之后取出放 在-18℃冷冻室贮藏30h。 最后60℃烘干。
(2)高热高压处理时间对抗性淀粉产率的影响
35%马铃薯淀粉乳浓度条件下，高热高压处理时间影响着马 铃薯淀粉链充分伸展的程度，随着高热高压处理时间的延长，抗 性马铃薯淀粉的得率上升，但是高热高压时间过长，同样会产生 降解马铃薯淀粉链的作用，马铃薯淀粉链过短不利于抗性马铃薯 淀粉的形成。
几种常见饲料原料中总淀粉含量的测定
目）后称取（１００ ±５）ｍｇ 样品于 １５ ｍＬ 离心试管 （带盖）中，并轻轻敲打试管，使样品掉入试管底
部。加入 ０．２ ｍＬ 乙醇（８０ ％，ｖ／ｖ），旋涡混匀。立即 加入 ３ ｍＬ 耐热 α－ 淀粉酶工作液（１００ Ｕ／ｍＬ），旋 涡混匀，放入沸水中 ６ ｍｉｎ（每隔 ２ ｍｉｎ 旋涡混匀 １ 次）。将试管从沸水中取出，加入 ４ ｍＬ 醋酸钠缓 冲液（２００ ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ ＝ ４．５），然后加入淀粉葡萄
华东师大生物系植物生理教研组1980由于植物组织中还原糖常不容易除尽以及酸水解时会有淀粉以外的高分子碳水化合物如半纤维素水解产生还原糖的干扰所得结果往往偏高对淀粉含量低的材料尤其如此徐昌杰等1998
２８ 检测分析
中国饲料
２００５ 年第 １５ 期
几种常见饲料原料中总淀粉含量的测定
中国科学院亚热带农业生态研究所
本文通过参考 Ｍｅｇａｚｙｍｅ 公司试剂盒提供的 方 法 （ＭｃＣｌｅａｒｙ 等 ，１９９７、１９９４；Ｅｎｇｌｙｓｔ 和 Ｃｕｍ－ ｍｉｎｇｓ，１９８８），结 合 国 内 实 际 情 况 ，探 讨 利 用 酶 水 解准确、方便、快捷的测定饲料中总淀粉含量，为 饲料行业测定总淀粉提供一种新方法。 １ 实验原理
［通 讯 地 址 ： 长 沙 市 芙 蓉 区 马 坡 岭 ， 邮 编 ： ４１０１２５］
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!"
抗性淀粉的制取与检测
25
结果分析
－18℃冷冻条件与4 ℃冷藏条件相比，抗性淀粉 的转化更快，在30h处抗性淀粉得率即达到较高值。 这可能是因为在零下－18℃低温环境，淀粉糊中的 水分子形成小冰晶从淀粉糊中析出,从而缩短了直链 分子之间的距离,使之容易形成氢键,增加了抗性淀粉 的含量。同时，可以看出,与冷藏相似,延长冷冻时间 对抗性淀粉的生成影响也较小。
粉 型）
粉等
老化淀粉（RS3 型） 煮熟后冷却的土豆、面包 抗消化 和玉米片等
化 学 改 性 淀 粉 （ RS4 商品淀粉（如用于婴儿食 抗消化
型）
品）
精选2021版课件
6
表2 抗性淀粉在食物中的含量
抗性淀粉含量
食物种类
≤1％
熟马铃薯、热米饭、高谷糠早餐麦片、小麦粉、空
心面条、热馒头
1～2.5％ 普通早餐麦片、饼干、面包、冷稀饭、熟马铃薯（冷）、
冷米饭
2.5～5.0％ 玉米片、大米碎片、油炸土豆片、爆豌豆
5.0～15％ 煮扁豆、煮蚕豆、煮大豆、豌豆、生大米、玉米粉、
高压蒸煮后冷却的小麦淀粉以及大豆淀粉和玉米
淀粉、烹调后冷冻的淀粉食品
≥15％
生马铃薯、生豆子、链淀粉玉米、未成熟的香蕉、 老化后的直链淀粉
精选2021版课件
7
食品中抗性淀粉的生理功能
精选2021版课件
19
(2)高热高压处理时间对抗性淀粉产率的影响
35%马铃薯淀粉乳浓度条件下，高热高压处理时间影响着马铃薯 淀粉链充分伸展的程度，随着高热高压处理时间的延长，抗性马铃薯 淀粉的得率上升，但是高热高压时间过长，同样会产生降解马铃薯淀 粉链的作用，马铃薯淀粉链过短不利于抗性马铃薯淀粉的形成。
这类抗性淀粉是由于淀粉分子在凝沉过程 中分子重新聚集成有序的结晶结构的缘故。 结晶区的出现阻止淀粉酶靠近结晶区域的 葡萄糖苷键，并阻止淀粉酶活性基团中的 结合部位与淀粉分子结合，因而就不能完 全被淀粉酶作用，从而产生抗酶解性。
实验粮食中淀粉含量的测定
实验粮食中淀粉含量的测定
实验粮食中淀粉含量的测定
一、实验目的
掌握粮食中淀粉含量测定的原理、试剂、仪器设备及操作要点。
二、实验原理
试样经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成二糖，再用盐酸水解成具有还原性的单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉含量。
三、实验试剂
1.淀粉酶溶液：称取α-淀粉酶0.5g，加100mL水溶解，加入数滴甲苯或
三氯甲烷，防止长霉。
2.碘溶液：称取
3.6g碘化钾溶于20mL水中，加入1.3g碘，溶解后加水
稀释至100mL。
3.85%乙醇。
4.6mol/L盐酸：取盐酸50mL加水至100mL。
5.200g/L氢氧化钠溶液。
6.甲基红指示液：称取0.1g甲基红用95%乙醇溶液定容至100mL。
7.乙醚。
8.蒸馏水。
四、仪器设备
1、粉碎磨：40目筛。
2、天平：分度值0.01g。
3、锥形瓶：250mL。
稻米及制品中抗性淀粉的测定
稻米及制品中抗性淀粉的测定
抗性淀粉是指由食物中摄入而对消化酶无效的完整淀粉结晶体，抗性淀粉主要来源于稻米，是作为一种天然存在的有机物质，有营养价值但不参与营养转化过程。
随着国内稻米和制品消费的不断增加，抗性淀粉的存在日益受到广大消费者的重视，因此如何准确地测定抗性淀粉是重要的事情。
首先，根据研究所需的实验材料，我们需要准备净稻米或其他制品样品，然后用实验室常规技术对样品进行脱水和研磨，将样品中的抗性淀粉提取出来。
然后将提取出来的抗性淀粉分别加入不同浓度的葡萄糖溶液中通过琼脂糖凝胶电泳法将抗性淀粉分离成不同粒径的抗性淀粉结晶体，以计算抗性淀粉含量。
之后，可以将抗性淀粉以元素计数的方式测定出抗性淀粉的原子质量，并对其计算抗性淀粉的含量，从而得出最终的抗性淀粉测定结果。
抗性淀粉的准确测定对于评估稻米及制品中营养素的品质有重要意义，只有正确测定其中抗性淀粉的含量，才能了解营养物质的水平，为稻米及制品的进一步发展奠定坚实的基础。
饲料中淀粉含量测定方法的对比研究
饲料中淀粉含量测定方法的对比研究饲料中淀粉含量测定方法的对比研究饲料中淀粉含量是饲料质量的重要指标之一，因此对其准确测定具有重要意义。
目前常用的饲料中淀粉含量测定方法有多种，本文将对这些方法进行对比研究。
1. 酚硫酸法酚硫酸法是一种常用的饲料中淀粉含量测定方法。
该方法的原理是将饲料样品与酚硫酸反应，生成蓝色复合物，再用紫外分光光度计测定吸光度，从而计算出淀粉含量。
该方法操作简单，准确度较高，但需要使用有毒的酚和硫酸，操作时需注意安全。
2. 酶解法酶解法是一种较为常用的饲料中淀粉含量测定方法。
该方法的原理是将饲料样品加入淀粉酶，使淀粉水解成葡萄糖，再用葡萄糖酸化酶将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，最后用比色法或滴定法测定葡萄糖酸的含量，从而计算出淀粉含量。
该方法操作简单，准确度较高，但需要使用酶，且酶的活性易受温度、pH等因素影响，操作时需注意控制条件。
3. 红外光谱法红外光谱法是一种新型的饲料中淀粉含量测定方法。
该方法的原理是将饲料样品放入红外光谱仪中，利用淀粉的特征吸收峰进行定量分析，从而计算出淀粉含量。
该方法操作简单，无需使用有毒物质和酶，且准确度较高，但需要使用昂贵的仪器，操作时需注意仪器的维护和保养。
4. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种较为精确的饲料中淀粉含量测定方法。
该方法的原理是将饲料样品加入高效液相色谱仪中，利用淀粉的特征色谱峰进行定量分析，从而计算出淀粉含量。
该方法准确度较高，但需要使用昂贵的仪器，操作时需注意仪器的维护和保养。
综上所述，不同的饲料中淀粉含量测定方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据实际情况进行综合考虑。
在操作时，应注意安全、控制条件、仪器维护和保养等方面，以保证测定结果的准确性和可靠性。
抗性淀粉和总淀粉测定方法
抗性淀粉及总淀粉测定方法采用Megazyme抗性淀粉试剂盒法，测定方法见试剂盒说明书（下附）原理（AOAC法 2002.02 ;AACC法32-40）抗性淀粉的测定方法：样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶（AMG）37℃振荡水浴孵育16小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成D-葡萄糖，孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精（IMS,变性乙醇）终止反应。
离心上述溶液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的RS，用含水的IMS或乙醇（50%v/v）洗涤絮状团，洗涤后离心，再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清混合。
小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入2M KOH溶解，溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。
用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。
D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂（GOPOD）测定，这也是对样品中RS含量的测定。
非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定可通过集中的上清液并定容至100mL，再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。
总淀粉测定方法：即抗性淀粉与非抗性淀粉总和。
抗性淀粉检测试剂盒K-RSTAR（100次分析）应用性和精确性这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。
如RS含量多于2% w/w，常规标准误差为±5%。
少于2% w/w RS的误差更高。
试剂盒瓶子1：淀粉葡糖苷酶AMG，12 mL，3300U/ mL，条件为pH4.5，40℃下，底物为可溶性淀粉，[单位或为200U/mL，条件为pH4.5，40℃下，底物为对硝基苯基β-麦芽糖苷]。
AMG 溶液应完全没有可检测到的游离D-葡萄糖。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子2：α-胰淀粉酶(胰酶，10g，3Ceralpha U/mg)。
4℃下稳定性> 3年。
瓶子3：GOPOD 试剂缓冲液。
磷酸钾缓冲液（1M，pH7.4），对羟基苯甲酸（0.22M）和叠氮化钠（0.4%W/V）。
三种降糖米中抗性淀粉含量的测定
三种降糖米中抗性淀粉含量的测定1982年Englyst等人在进行膳食纤维定量分析时，发现在不溶性膳食纤维中包埋有淀粉成分，称之为抗性淀粉(Resistant Starch，RS)，至此，抗性淀粉引起学者们研究其营养特性的兴趣。
1992年FAO(世界粮农组织)将其定义为“健康者小肠中不吸收的淀粉及其降解产物”。
近年的研究已经初步证明，抗性淀粉不能被小肠消化吸收和提供葡萄糖，但在大肠中能部分被肠道微生物菌群发酵，产生多种短链脂肪酸，改善肠道环境；抗性淀粉本身含热量极低，作为低热量添加剂添加到食物中，可起到与膳食纤维相似的生理功能。
更重要的是，抗性淀粉还具有调节血糖、防止心脑血管疾病、预防结肠直肠癌的作用，故抗性淀粉有着比膳食纤维更为广泛的保健意义。
本文通过参考Megazyme公司试剂盒提供的方法，结合国内实际情况，研究一套准确、方便、快捷测定原料中抗性淀粉含量的方法，为研究人员测定抗性淀粉提供一种新的方法。
1原理（AOAC法 2002.02 ;AACC法32-40）先用α-胰淀粉酶（Pancreaticα-amylase）将非抗性淀粉溶解成D-葡萄糖，再利用抗性淀粉能溶解于 KOH中的性质，用淀粉葡萄糖苷酶（Amyloglucosidase,AMG）使其水解成葡萄糖，然后测定糖的含量，从而推算出抗性淀粉的含量。
2 试验仪器与试剂2.1 仪器水浴恒温振荡器，移液枪、分析天平、涡旋混匀器、离心机、磁力搅拌器2.2 溶液的配制2.2.1顺丁烯二酸钠（马来酸钠）缓冲液(0.1M，pH6.0)用1600mL蒸馏水溶解23.2g顺丁烯二酸，用4M（160g/L）氢氧化钠调节pH 至6.0，加入0.74g二水氯化钙和0.4g叠氮化钠，溶解定容至2L。
2.2.2 醋酸钠缓冲液（1.2M，PH3.8）将69.6mL的冰醋酸（1.05g/mL）加至800 mL的蒸馏水中，用4M氢氧化钠调节pH至pH3.8。
用蒸馏水定容至1L，室温下可保存一年。
淀粉含量的测定
淀粉含量的测定一、引言淀粉是一种重要的碳水化合物，在食品工业和生物科学中有广泛应用。
测定淀粉含量可以帮助我们了解食物中的能量来源，也有助于食品加工和营养研究。
本文将介绍几种常用的淀粉含量测定方法，并探讨它们的优缺点和适用范围。
二、常用的淀粉含量测定方法2.1 琼脂糖滴定法1.准备样品：将待测样品制成均匀的悬浮液。
2.滴定：用琼脂糖溶液滴定样品悬浮液，直到溶液由浑浊变为透明为止。
3.计算淀粉含量：根据琼脂糖滴定的体积和浓度，计算出淀粉含量。
优点：简单易行，结果准确可靠。
缺点：需要专用试剂和设备。
2.2 碘滴定法1.制备样品：将样品加入适量的水中，加热溶解并冷却至室温。
2.滴定：滴加碘液至样品中，观察颜色变化。
3.计算淀粉含量：根据滴定所需的碘液体积和浓度，计算出淀粉含量。
优点：操作简单，结果可靠。
缺点：不适用于含有还原糖或异构糖的样品。
2.3 漂白粉浸提法1.制备样品：将样品加入适量的水中，与漂白粉充分混合，浸泡一定时间后过滤得到浸提液。
2.反应：加入酒精或乙醇，加热反应，使淀粉转化为糖。
3.滴定：滴加酸性氧化剂溶液滴定样品，直至颜色变化。
4.计算淀粉含量：根据滴定所需的酸性氧化剂溶液体积和浓度，计算出淀粉含量。
优点：适用范围广，不受样品中其他成分的干扰。
缺点：操作复杂，需较长时间。
三、各方法的优缺点比较方法优点缺点简单易行，结果准确可靠需要专用试剂和设备琼脂糖滴定法碘滴定法操作简单，结果可靠不适用于含有还原糖或异构糖的样品适用范围广，不受其他成分干扰操作复杂，需较长时间漂白粉浸提法四、结论根据不同的实际需求，可以选择适合的淀粉含量测定方法。
琼脂糖滴定法适用于快速检测淀粉含量，操作简单，结果准确可靠。
碘滴定法适用于大多数样品，操作简单，结果可靠。
漂白粉浸提法适用范围广，不受其他成分的干扰，但操作较复杂，时间较长。
因此，根据实际情况选择适合的方法进行淀粉含量测定。
综上所述，淀粉含量的测定涉及多个方法，各有优缺点。
几种常见饲料原料中抗性淀粉含量的测定
几种常见饲料原料中抗性淀粉含量的测定Resistant starch,简称RS，这一概念由Englyst提出，国内大多数文章译为抗性淀粉，也有的将其译为抗淀粉及抗消化淀粉，1993 年，欧洲抗性淀粉研究协会（EURESTA）将其定义为“健康者小肠中不被吸收的淀粉及其降解产物的总称”。
抗性淀粉一般分为4类：ＲS1型（生理不可消化性截留淀粉）；ＲS2型(抗性淀粉颗粒)；ＲS3型(老化淀粉)；ＲS4型(化学改性淀粉)，杨光和丁霄霖(2002)分别就抗性淀粉的测定方法进行了讨论，但测定结果却不尽一致，本文通过参考 Megazyme公司试剂盒提供的方法，结合国内实际情况，研究出一套准确，方便、快捷测定饲料中抗性淀粉含量的方法，为饲料行业测定抗性淀粉提供一种新的方法。
1 原理先用胰α-淀粉酶（Pancreatic α-amylase）将非抗性淀粉水解成葡萄糖，再利用抗性淀粉能溶于KOH中的性质，用淀粉葡萄糖苷酶（Amyloglucosidase,AMG）使其水解成葡萄糖，然后测定糖的含量，从而推算出非抗性和抗性淀粉的含量。
2 仪器与试剂2.1 仪器GILSON移液枪，DSHZ-300多用途水浴恒温振荡器（江苏太仓王秀实验设备厂），分析天平（0.000 1g），Beckman Synchron CX4/Pro全自动生化分析仪，WH-1微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂），离心机（Eppendorf Centrifuge 5810 R）。
2.2 溶液的配制2.2.1 马来酸缓冲液（0.1M，pH=6.0）将23.2g马来酸溶解于1 600ml蒸馏水中，用4M（160g/l）NaOH调pH至6.0，加入0.6g CaCl22H2O和0.4g叠氮钠，蒸馏水定容至2L，室温保存。
2.2.2 醋酸钠缓冲液（1.2M，pH=3.8）取69.6ml冰醋酸于800ml蒸馏水中，用4M NaOH调PH至3.8，蒸馏水定容至1L，室温保存。
测定淀粉含量的方法
测定淀粉含量的方法测定淀粉含量的方法导语：淀粉是一种重要的碳水化合物，存在于许多食物中，包括谷物、蔬菜和水果中。
测定淀粉含量可以帮助我们了解食物的营养价值以及其在人体中的作用。
在本文中，我将介绍几种常用的测定淀粉含量的方法。
一、碘液法碘液法是一种常用的测定淀粉含量的方法。
它基于碘与淀粉之间的反应产生蓝色或紫色复合物的原理。
以下是使用碘液法测定淀粉含量的步骤：1. 准备样品：将需要测定淀粉含量的食物样品研磨成细粉。
2. 提取淀粉：将细粉加入适量的水中，搅拌均匀后加热至沸腾，煮沸5分钟。
3. 过滤提取液：用纱布或滤纸过滤提取液，以去除非淀粉物质。
4. 添加碘液：将过滤后的提取液滴加入含有碘液（一般为碘化钾溶液）的烧杯中。
5. 观察颜色变化：如果淀粉含量较高，溶液会呈现出蓝色或紫色；如果淀粉含量较低，则溶液呈现黄色或无色。
通过比较样品的颜色变化与对照样品的颜色，我们可以推断淀粉在样品中的含量。
二、酶解法酶解法是另一种测定淀粉含量的常用方法。
它利用淀粉酶（如α-淀粉酶）催化淀粉分解为葡萄糖，然后通过检测葡萄糖浓度来间接测定淀粉含量。
以下是使用酶解法测定淀粉含量的步骤：1. 准备样品：将食物样品研磨成细粉。
2. 提取淀粉：将细粉加入适量的酶解缓冲液中，搅拌均匀后加热至一定温度，加入淀粉酶。
3. 反应一段时间：将混合物在适当的温度下反应一段时间，以确保淀粉完全被酶解成葡萄糖。
4. 检测葡萄糖浓度：使用葡萄糖测定仪器或试剂盒，测定反应液中葡萄糖的浓度。
5. 计算淀粉含量：根据葡萄糖浓度，计算出样品中的淀粉含量。
酶解法相较于碘液法更加准确和精确，可以考虑使用这种方法进行淀粉含量的测定。
三、pH滴定法pH滴定法是通过测定淀粉溶液的酸碱度来间接测定淀粉含量的方法。
淀粉溶液的pH值与其含量呈正相关关系。
以下是使用pH滴定法测定淀粉含量的步骤：1. 准备样品：将食物样品研磨成细粉。
2. 提取淀粉：将细粉加入适量的水中，搅拌均匀后加热至沸腾，煮沸5分钟。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
几种常见饲料原料中抗性淀粉含量的测定
Resistant starch,简称RS，这一概念由Englyst提出，国内大多数文章译为抗性淀粉，也有的将其译为抗淀粉及抗消化淀粉，1993 年，欧洲抗性淀粉研究协会（EURESTA）将其定义为“健康者小肠中不被吸收的淀粉及其降解产物的总称”。
抗性淀粉一般分为4类：ＲS1型（生理不可消化性截留淀粉）；ＲS2型(抗性淀粉颗粒)；ＲS3型(老化淀粉)；ＲS4型(化学改性淀粉)，杨光和丁霄霖(2002)分别就抗性淀粉的测定方法进行了讨论，但测定结果却不尽一致，本文通过参考 Megazyme公司试剂盒提供的方法，结合国内实际情况，研究出一套准确，方便、快捷测定饲料中抗性淀粉含量的方法，为饲料行业测定抗性淀粉提供一种新的方法。
1 原理
先用胰α-淀粉酶（Pancreatic α-amylase）将非抗性淀粉水解成葡萄糖，再利用抗性淀粉能溶于KOH中的性质，用淀粉葡萄糖苷酶（Amyloglucosidase,AMG）使其水解成葡萄糖，然后测定糖的含量，从而推算出非抗性和抗性淀粉的含量。
2 仪器与试剂
2.1 仪器
GILSON移液枪，DSHZ-300多用途水浴恒温振荡器（江苏太仓王秀实验设备厂），分析天平（0.000 1g），Beckman Synchron CX4/Pro全自动生化分析仪，WH-1微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂），离心机（Eppendorf Centrifuge 5810 R）。
2.2 溶液的配制
2.2.1 马来酸缓冲液（0.1M，pH=6.0）将2
3.2g马来酸溶解于1 600ml蒸馏水中，用4M（160g/l）NaOH调pH至6.0，加入0.6g CaCl22H2O和0.4g叠氮钠，蒸馏水定容至2L，室温保存。
2.2.2 醋酸钠缓冲液（1.2M，pH=
3.8）取69.6ml冰醋酸于800ml蒸馏水中，用4M NaOH调PH至3.8，蒸馏水定容至1L，室温保存。
2.2.3 氢氧化钾（2M）称取112.2g KOH溶于900ml去离子水中，用玻璃棒搅动，使之溶解，去离子水定容至1L。
2.2.4 乙醇（50%，V/V）取526ml 95%乙醇于1L容量瓶中，蒸馏水定容，混匀，室温保存。
2.2.5 淀粉葡萄糖苷酶（Amyloglucosidase,AMG）工作液（300U/ml）：取 1.0ml AMG母液（3300U/ml，Megazyme公司试剂盒提供），用马来酸缓冲液稀释到11ml. （注意：此试剂要求现配现用）
2.2.6胰α-淀粉酶（Pancreatic α-amylase）反应液：称取1.0g胰α-淀粉酶(Megazyme 公司试剂盒提供)用适量马来酸缓冲液溶解，转入于100ml容量瓶，加入 1.0mlAMG工作液，振摇5min，摇匀，用马来酸缓冲液定容。
溶液于12 000r/min离心10min，取出上清液，以备后用（注意：此试剂要求现配现用）
3 测定步骤
3.1 称取100mg（±5mg）样品于15ml离心试管（带盖）中，并轻轻敲打试管，使样品掉入试管底部。
3.2 每管内加胰α-淀粉酶（Pancreatic α-amylase）反应液
4.0ml（现配现用）。
3.3 盖紧盖子，旋涡混匀，然后用橡皮筋扎紧（一般为六个试管一扎）。
3.4 将扎好的试管放入37℃的水浴恒温振荡器中（200次/min）水解，16h后取出。
3.5 用纸巾将试管外的水擦干，加入
4.0ml乙醇（95%）旋涡混匀。
3.6 在离心机上于1 500g(大约3 000r/min)离心12min。
3.7 轻轻将试管移出（因为是低速离心，过重摇晃会使沉淀松散）将上清液倒入100ml容量瓶中，向剩下的沉淀中加入2ml乙醇（50%）旋涡混匀，再加入6ml乙醇（50%）旋涡混匀，仍然在1 500g离心12min
3.8 重复步骤3.7一次。
3.9 将上清液倒入原先的100ml容量瓶中，将试管倒置，用滤纸吸干试管内液体（防止非抗性淀粉水解成的糖转入下一步抗性淀粉的水解过程中）注意：只有在沉淀吸附得比较牢固时才能用，当沉淀比较松散时则尽量将上清液倒出后立即扶正试管。
3.10 将上述100ml容量瓶用蒸流水定容，摇匀。
吸取100μl溶液至Beckman Synchron CX4/Pro 全自动生化分析仪样品杯中，测定葡萄糖（GLU），计算出非抗性淀粉含量。
3.11 向试管中加入2.0ml KOH溶液（2M）冰浴振荡20min（注意不能旋涡混匀）
3.12 向每管中加8.0ml醋酸钠缓冲溶液(1.2M，pH3.8)摇匀。
3.13 加入100μl AMG酶液（3 300U/ml），盖紧盖子，反复摇匀，用橡皮筋扎紧，放入50℃水浴恒温振荡器中（200次/min），30min后取出。
3.14 1 500g离心12min，吸取100μl上清液至Beckman Synchron CX4/Pro全自动生化分析仪样品杯中，测定葡萄糖（GLU），计算出抗性淀粉含量。
4 计算公式
非抗性淀粉含量=G×（100/W）×0.9×100%
抗性淀粉含量=G×（10.3/W）×0.9×100%
总淀粉含量=非抗性淀粉含量+抗性淀粉含量
式中：G——水解样中葡萄糖含量(mg/ml)
W——样品干物质重量(mg)
0.9为淀粉与葡萄糖的转换系数
A式中100代表体积100ml；
B式中10.3为一经验值，表示步骤3.14中上清液的总体积为10.3ml。
5 应用实例
根据上述方法，对不同物质中抗性淀粉与非抗性淀粉的含量进行了测定。
由此不难看出：土豆粉和芋头中抗性淀粉的含量非常之高，其次为玉米等，而小米，燕麦等物质中抗性淀粉的含量则比较少。