大鼠海马神经元钠离子通道电流的记录与分析
离体大鼠海马神经元自发放电活动一般特征的研究
Ｔｈｅ Ｇｅ ｅ ａ ｅ ｔ ｉ ｔｖ ｔ ａ ａ ｔ ｒ ｆ ｎ ｒ ｌＥｌｃｒｃ Ａｃｉｉｙ Ｃｈ ｒ ｃｅ ｓ ｏ ｔ ｅ Ｒａ ｐ ｏ ａ ｐ ｓＥｘ — ｉ ｏ Ｐ ｒ ｍ ｉ ｌＣｅｌ ｈ ｔＨｉ ｐ ｃ ｍ ｕ —ｖｖ ｙ ａ ｄａ ｌ ｓ
ＹＡ ＮＧ ｎ ｈ ｎ Ａ Ｓ ｅ ｇ Ｒｕ ｓ ｅ ｇ ，Ｐ Ｎ ｈ ｎ ｗＵ， ＡＮＧ ｌ Ｙ Ｆ Ｙｉ ｇ ， Ａ Ｇ ｈ ｎ ｃ ａ ｇ ｌ Ｎ Ｓ ｅｇｈ ｎ ２
ｓ ｍｕ ａ ｔ ｉ ｔ ｌｎｓ．
Ｋｅ ｒ ｓ Ｒａ ｉｐ ｃ ｍｐ ｓ Ｍｉｒ ｅｅ ｔ ｅ Ｂ ｍｎ ｓ ｅ ； ｐ ｎａ ｅ ｕ ｉ ｈ ｒ ｅ ｙ ｗｏ ｄ ： ｔｈｐ ｏ ａ ｕ ； ｅｏ ｌｅ ｏ ； ｒ ｆ ｅ Ｓ ｔｎ ｏ ｓｄｓ ａｇ ｒ ｄ ｉ ｏ ｃ
１ 引 言
（ ． ｎ ａ Ｅｐｒ ｅｔ ａ ， ｕｎＰａｔ ｅ ｅ， ｏ １１Ｈ ｓｉｌｆＰ Ａ， ｕｉ ４０ ２ Ｃ／ １ Ａ ｉ ｌ ｘｅｍ ｎ Ｌ ｂ Ｂｒ ／ ／ Ｃｎ ｒ Ｎ ．８ ｏ ｔ Ｉ Ｇｉｎ５ １０ ， ｈｎ ｍ ｉ ｓｃ ｔ ｐａｏ ｌ ａ； ２ Ｓｉ ｃ ｆ ｏｅｅ Ｇａｇ ｉ ｒ ａ Ｕ ｉｒｔ ，Ｃｚｉ ５ １０ ） ．ｃｎｅｒｅＣｌｇ ， ｕｎｘ ｍ ｌ ｎ ｅ ｉ ａｌ ４０２ ｅ ｉ ｌ ｏ Ｎ ｖ ｓｙ ｉｎ
电针对术后认知功能障碍大鼠认知功能及海马α7nAChR受体表达的影响
现物医 Progress in Modern Biomedicine V〇L20 NO^O OCT^020•3815 •doi: 10.1324 l/ki.pmb.2020.20.003电针对术后认知功能障碍大鼠认知功能及海马a7iiAChR受体表达的影响*周玉弟张杰田伟千崔耀梅解珂△(南京中医药大学附属医院(江苏省中医院)麻醉科江苏南京210029)摘要目的：探讨电针对术后认知功能大鼠认知功能及海马〇[7型神经烟碱胆城能受体(nicotinic acetylcholine receptor,a7nAChR) 表达含量的影响。
方法：选择120只雄性S D大鼠，将其随机分为以下5组：对照组（C trl组)、手术组（O p组)、电针组(EA)、a7nAChR抑制剂（EA+oi-BGT)组、〇t7nAChR激动剂（PHA-543,613组),每组12只，每组又分为1d和3 d两个亚组。
采用Morris 水迷宫检测认知功能，ELISA检测血清种瘤坏死因子(Tumor necrosis factor，TNF)和白细胞介素- ip(interleukin-ip,IL-ip)、高迁移 率族蛋白丨(拓旦11111〇13丨丨办沒〇叩13(«^1^08-丨)含量，11丁-?01检测海马71^-£»和11^1择、11\«38-丨111-1^八表达，蛋白印迹法检测海马a7nA C hR表达，甲笨胺蓝法检测海马C A1区肥大细胞活化情况,T unel法检测海马C A1区细胞凋亡情况。
结果：与O p组相 比，E A组、PHA-543,613组术后第1d、第3d逃避潜伏期显著缩短，穿越平台次数增加（P<0.05);与E A组相比，EA+ot-BGT组术 后第l d、第3d逃避潜伏期显著延长，穿越平台次数明显减少(P<0.05)。
与O p组相比,E A组、PHA-543,613组鼠术后第1d、第3d 血清TNF-a和IL-l(3、H M G B-l含量显著降低，海马TNF-ot和IL-ip、HMGB-l m-RNA表达亦明显下调，海马oi7aAChR蛋白含 量表达上调、海马C A1区肥大细胞活化数目、T unel阳性细胞数目减少，两组比较差异有统计学意义（P<0.05)。
麻醉药对大鼠海马锥体神经元钠通道电流的影响和其机制
麻醉药对大鼠海马锥体神经元钠通道电流的影响及其机制孛文摘要弼蟊全麻原理楚麻醉学最重癸的基本理论之一，德全麻药俸蕉的确切棱Ｉ镅楚今不明。
一般认为吸入全麻药的作用机制较为复杂，其中可能包涵静脉全麻药的作最视翱。
不管吸入全麻药宏鬣秘徽蕊承平的作震部位如衙，现在可以肯定分子水平的作用部位是在神经细胞膜。
越来越多的证据表明吸入麻醉药发挥效应的部位是缫臆膜上的离子逶道。
在诸多的离子通道中，麻醉药对１３．一乙酰胆碱受体（ｎＡＣｈＲ）和ｒ一氨基丁酸度受体（ＧＡＢＡ。
歉）通遘影嚷的研究最多，因实验条件翻药物裁量簿嚣索不同，研究结果不一。
一般认为ｎＡＣｈＲ通道不是全麻药作用的主要靶位。
尽管ＧＡＢＡ。
受体透道燕丈家公认豹全麻药主要靶位之一，在其蕊臻麻醉浓度主要增强ＧＡＢＡ对该受体通道的效应，但融发现许多用对该通道作鲻不能解释的现象，敬全麻药对其它兴奋性离子遥道的作蔫邑受蓟鬟视。
在中枢神经系统（ＣＮＳ）主要的兴奋性离子通道中，钠通道为主要的兴奋性电压｝－】控登离子通道，是可兴奋缨魏产生动作电彼及传释神经摔凌的关键部位和决定因索，虽以前的实验发现枪乌贼巨轴突模型的钠通道对全麻药不敏感，僵磊聚的研究证臻ｌ瓶床浓度的全麻药对鬣脑钠遵遂、肺泡ｌｌ登缅胞钠通道及心肌细胞钠通道都有显著的抑制作用，且遵循Ｍｅｙｅｒ—Ｏｖｅｒｔｏｎ规则。
因茈，全麻药对脑钠通道的影响以及此影响在全麻串的地位值得研究。
本课题分三部分研究异丙酚（静脉麻酩药）、异氟醚（吸人麻醉药）和利多卡因（局部麻醉药）对急健分离的ＣＮＳ铺通道的影响。
第一部分异丙酚对大鼠海马锥体神经元钠通道电流的影响材料和方法选用１０～１４ｄＳＤ大鼠，雌雄不拘，体重２０—３０９，由徐州医学院实验动物中心提供。
将实验大鼠快速断头，置于０～４℃氧饱和的人工脑脊液（ＡＣＳＦ）中分离出海马，手工切成约５００１山ｍ厚的脑片。
将脑片放人孵育槽中用ＡＣＳＦ漂浮孵育６０ｒａｉｎ，连续通以９５％Ｏ：＋５％ＣＯ：维持ｐＨ在７．３５～７．４０。
发育早期大鼠海马脑片CA1区锥体神经元离子通道特征研究的开题报告
发育早期大鼠海马脑片CA1区锥体神经元离子通道特征研
究的开题报告
研究背景：
大脑海马是哺乳动物的重要记忆和学习中心。
在海马CA1区，锥体神经元是主要的兴奋性细胞，它们的活动与学习和记忆形成密切相关。
离子通道是神经元膜电位的关键调节者，它们的特性和表达模式能够影响神经元的兴奋性和抑制性，影响神经元的信息处理和传递。
然而，在大鼠海马CA1区锥体神经元发育早期离子通道的表达和功能特征尚不清楚，这是进一步了解海马神经元发育过程中离子通道的变化和神经元活动调节机制的重要问题。
研究目的：
本研究旨在探究发育早期大鼠海马CA1区锥体神经元的离子通道特征，研究离子通道的表达和功能特点，以深入了解海马神经元发育过程中离子通道对神经元活动的调节作用。
研究内容和方法：
1.实验动物：选取3天、7天、14天和21天龄的大鼠作为实验对象。
2.海马脑片的制备：将大鼠取出，迅速将其头部分离，取出海马组织，制备成400 um的脑片。
3.脑片的细胞外记录：利用多通道挠性阵列技术记录大鼠海马CA1区锥体神经元的电位变化，探究神经元的兴奋性和抑制性变化。
4.全细胞膜片钳技术：应用全细胞膜片钳技术记录大鼠海马CA1区锥体神经元的膜电位和离子通道电流，在不同发育时期分析离子通道的表达和功能特点。
5.基于荧光定量PCR和免疫印迹技术，分析大鼠海马CA1区锥体神经元的离子通道基因表达和蛋白表达水平的变化。
研究预期：
通过实验数据的分析，本研究预计可以揭示大鼠海马CA1区锥体神经元离子通道表达和功能特征在发育早期的变化规律。
揭示离子通道对神经元兴奋性和抑制性的调节作用，为深入了解海马神经元发育过程中离子通道的可塑性提供科学基础。
离体大鼠海马神经元自发放电活动一般特征的研究
离体大鼠海马神经元自发放电活动一般特征的研究离体大鼠海马神经元自发放电活动一般特征的研究作者：杨润生，潘盛武，方颖，杨盛昌【摘要】观察离体大鼠海马锥体细胞的生理电发放模式。
在脑脊液孵育下，将玻璃微电极插入到离体大鼠海马脑片锥体细胞附近，进行胞外电脉冲记录，微机记录并保存电信号。
共观察到海马部神经元自发放电主要呈5种特征，分别为不规则发放、单波规则发放、紧张发放、阵发排放及周期排放型等形式。
说明神经元的生理电发放模式可能与细胞的排列次序、生理应答呈一定的相关性。
【关键词】大鼠海马；微电极；脑片；自发放电Abstract：T o study the general characters of the rat hippocampus of the spontaneous electric activity of the ex-vivo pyramidal cells. We recorded the electrophysiology near the hippocampal pyramidal cells of the rat limbic system by capillary glass microelectrode with continous perfusion of the artificial cerebrospinal fluid(ACSF).Results showed that five characters of spontaneous were recorded by the rat hippocampal cells,they were un-regulation release,single wave regular release,intension release,paroxysm release and period release.It proves that the characters of the rat hippocampus of the spontaneous electric activity may connect with the arrangement of the cells,and the respondence of the stimulants.Key words：Rat hippocampus；Microelectrode；Brain slice；Spontaneous discharge1 引言边缘系统是大脑皮层内侧皮质包裹的部分脑区之一，其主要组成包括了海马结构 (hippocampal)［1］。
降钙素基因相关肽对大鼠海马神经细胞钠离子通道的作用
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降钙 素 基 因相 关 肽 对 大 鼠 海 马 神 经细 胞 钠 离 子通 道 的 作 用
房春燕 。 宁 ， ． 李 韩慧蓉。 琳 ， 启 ， ， 王 孙文 史立宏‘康 白 ，
①Ｃ Ｒ Ｇ Ｐ可 以使大鼠海 马神 经细胞钠
通道 电流的峰值增加 ４ ％； ｃ ｉ 使其钠 离子通道 电流的激活 曲线和稳 态失活曲线产 生显著 的向超极化 （ １ ② Ｇ 寅 值） 方向移动 １ｍ ０ Ｖ左右： Ｇ Ｐ ．７ ⑧Ｃ Ｒ ８ 可以阻断 Ｃ Ｒ ３ Ｇ Ｐ的上述 作用 结 论 ①Ｃ Ｒ Ｇ Ｐ能够增加 海马神 经元钠 离子
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选用 】 ｔＳ ～７ Ｄ大 鼠， ｌ 以酶 消化加吸 管吹打法急性 分 离其海马神 经元细胞 ， 用全细胞膜 片钳
大鼠Meynert核神经元钠钾钙电流观察
Ｃ Ｃ 明该 电流为 ｃ ：离子所介导的高 电位激活性钙电流 。结论 ： ｎ Ｍ神经元上能够诱导 出钠 、 、 ｄ１ 证 ａ ＋ 在 ｂ 钾 钙电压门控通道电流，
为进一步相关研究提供 了实验依据。
【 关键词 】 膜片钳 ； ｅｎｒ核 ； 、 、 Ｍ ｙｅ ｔ 钠 钾 钙电流 【 中国图书分类法分类号 】 ３２８ Ｒ ２ ．１
ｉ ａ ｔ ａｅ ． ｈ ｏａ ｓｕ ｐ ａ ｕ ｅ ｔ ａ ｂ ｕ －８ｎ Ｔ ｅｉ ｗ ｒ ａｃｕ ｃ ｒｅ ｔ ｓｉａ ｔ ａｅ ｌｗｌ． ｈ ａｃ ｕ ｐ ａ ｕ ｒ ｎ ｎ ｃｉ ｔｄ Ｔ ｅＰ ｔｓ ｉ ｍ ｅ ｋ ｃ ｒ ｎ ｓａ ｏ ｔ ｖ ｗ ７ Ａ． ｈ ｎ ａ ｄ ｃ ｌｉ ｍ ｕ ｒ ｎ ｎ ｃｉ ｔｄ ｓ ｗａ ｖ ｏ ｙ Ｔ ｅｃ ｌｉ ｍ ｅ ｋ ｃ ｒｅ ｔ
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海马干细胞分化的神经元电生理特征的初步探讨
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作 者 单 位 ： !"###!$ 哈尔滨医科大学第一临床医学院立体定向 功能神经外科 （ 沈红、林志国、马晓燕、杨富明） ；哈尔 滨 医 科 大 学药理教研室 （ 单宏丽、王鹤） ；黑龙江省第五医院 （ 冯建斌）
膜片钳常见问题解答
膜片钳常见问题解答膜片钳常见问题解答（一）1.什么是电压钳和膜片钳，有什么区别？答：电压钳技术是通过向细胞内注射一定的电流，抵消离子通道开放时所产生的离子流，从而将细胞膜电位固定在某一数值。
由于注射电流的大小和离子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映离子流的大小和方向。
膜片钳技术钳制的是“膜片”，是指采用尖端经过处理的微电极和细胞膜发生紧密接触，使尖端下的这片细胞膜在电学上和其它细胞膜分离，这大大降低了背景噪声，使单通道微弱的电流得以分辨出来。
采用电压钳技术将这片膜的电位钳制在某一数值，可记录到单通道电流。
从这点上看，膜片钳技术是特殊的电压钳技术。
随着膜片钳技术的发展，它已经不仅仅局限于“膜片”的概念，也不仅仅采用电压钳技术，还常采用电流钳技术。
2. 离子通道电导的单位是什么？如何换算？答：离子通道电导的单位是西门子（Siemens, S），旧称姆欧，即安培/伏特。
常用皮西门子（pS），1pS＝10E-12 S，1,000 pS＝1 pA/mV。
3. MultiClamp 700A中，在放大器和信号器的连接中，放大器的raw output是否需要连接信号器的 ANALOG IN 接口? scaled output，raw output有什么区别?答：Raw output为原始信号输出，放大器输出的信号没有经过处理（如滤波、放大等），scaled output为定标输出，输出的信号经过了处理。
后者的灵活度大，因此多采用。
目前膜片钳放大器多设有scaled output，你可将其和数模转换器（你所说的信号器）的ANALOG IN连接，这样放大器的输出信号就能传送给计算机了，此时已经没有必要再使用Raw output了。
若你想记录两个输出，则需要将Raw output和数模转换器的另一个ANALOG IN连接。
4. 在Clampex的Edit protocol/Wave中，Step和ramp各有什么适用范围？答：Ramp多用于电流衰减缓慢的离子通道以及失敏不明显的受体通道的I-V曲线制作，如多用于钾、钙离子通道。
海马微量注射L-NA对大鼠学习记忆的影响和NO、SS相关性研究
海马微量注射Ｌ－ＮＡ对大鼠学习记忆的影响及Ｎ０、ＳＳ相关性研究研究生麻琳导师郭洪志教授前言学习和记忆是大脑高级功能之一，学习记忆过程受神经递质和神经肽的调节已引起人们的广泛重视。
正常情况下，神经递质和神经肽在学习记忆过程中可能是相互作用的，因此研究它们之间的相关性非常重要。
近年来的研究发现生长抑素（Ｓｏｍｏｔｏｓｔａｔｉｎ，ｓｓ）是一种与学习记忆等智能活动相关的神经活性多肽，在Ａ１ｚｈｅｉｍｅｒ’Ｓ病和血管性痴呆病人各重要脑区的含量均显著下降，较其它神经肽类递质损害严重面广泛。
一氧化氮（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅ，ＮＯ）是中枢神经系统（ＣＮＳ）中一种扩散性细胞问信使分子，研究证明ＮＯ与神经元的突触可塑性有关，参与海马的长时程增强效应，可能在学习记忆过程中起逆行信使的作用。
国内外虽有采用一氧化氮合酶（ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａＳｅ，ＮＯＳ）抑制剂抑制大鼠脑内Ｎ０的合成，造成大鼠学习功能障碍的动物模型，然而关于ＮＯ影响学习功能的机制目前还不十分清楚，有的学者分析可能与调节某些神经递质和神经肽的释放有关，也有报道在ＣＮＳ内ＮＯ可促进乙酰胆碱、多巴胺和ｙ一氨基丁酸等神经递质的释放，这些递质对学习记忆功能均有重要影响ｎ１。
然而目前国内外尚无对ＮＯ与Ｓｓ在学习记忆过程中的相关性研究。
本课题采用大鼠海马微量注射ＮＯＳ抑制剂Ｎ”一硝基一Ｌ一精氨酸（Ｎ—ｃ１）一Ｎｉｔｒｏ—Ｌ－Ａｒｇｉｎｉｎｅ，Ｌ－ＮＡ）的方法，研究了ＮＯ、ｓｓ对学习记忆功能的影响，通过海马内ＮＯ与ＳＳ含量改变的相关性分析，探讨Ｎ０、ｓｓ在学习记忆过程中的相互作用，从而进一步揭示Ｎ０在学习记忆过程中的作用机制。
材料和方法材料：１、动物：ＷｉＳｔａｒ大鼠，雄性，１８０－２００９，由山医大实验动物部提供。
２、试剂：Ｌ－ｂｌＡ系ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ产品ＮＯ试剂盒购自南京聚力生物医学研究所ｓｓ放免药盒购自海军放免技术中心３、仪器：脑立体定向仪（ＳｕｍｍｉｔｍｅｄｉｃａｌＣｏ、Ｊａｐａｎ）Ｙ型电迷宫（ＭＧ一２型，江苏省沙洲县三兴声电公司）半自动生化分析仪（美国原子能研究所研制）放免ｒ一计数器（ＦＭＧ一１８２型；上海日环仪器厂）方法：１、动物模型的制作：Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠３６只，随机等分为海马微量注射Ｎ—ＬＡ组、海马微量注射生理盐水组和正常对照组。
大鼠海马神经元钠离子通道电流的记录与分析
大鼠海马神经元钠离子通道电流的记录与分析摘要：离子通道是生物电活动的基础。
自1976年德国的E.Neher和B.Sakmannw创立了膜片钳技术以来使得研究细胞膜上单个离子通道的特性成为可能。
膜片钳技术是一种以记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜上单一的或者多个离子通道分子活动的技术。
l980年以来，由于吉欧姆阻抗的封接方法的确立，此技术被越来越多地应用于细胞研究，点燃了细胞和分子水平的生理学研究的革命之火。
在国内也掀起了一股离子通道的研究热潮。
本文主要介绍了运用膜片钳技术测量大鼠海马神经元钠离子通道电流的方法，同时对测量的数据进行了分析处理，实验结果表明：钠离子通道具有电压依赖性，钠通道的激活曲线反映了通道开启的速度非常迅速(几个毫秒)，钠通道的I-V曲线反映了通道的激活过程、阈电位大约-50mV左右、反转电位60mV、内向整流特性等。
此实验结果可以做为辐射组细胞的对照组。
关键词：海马神经元、钠离子通道、膜片钳技术、全细胞记录模式、I-V曲线引言过去的二十世纪是一个伟大的时代，人类在科学技术方面得到了巨大的发展。
人类不再仅仅局限在单一的学科内进行研究，而是将各种学科相互结合，产生了诸如生物物理学、生物化学等交叉学科，取得了巨大的成就。
生物电的研究便是其中最重要的成就之一。
科学家在很早便注意到了生物组织中存在生物电流的现象，并进行了初步研究与探索。
18世纪，电学研究逐渐兴起，Galvani首次在生物体(蛙)上发现了生物电现象。
1902年J.伯恩斯坦在他的膜学说中提出神经细胞膜对钾离子有选择通透性。
1939年A.L.霍奇金与A.F.赫胥黎用微电极插入枪乌贼巨神经纤维中，直接测量到膜内外电位差。
1949年A.L.霍奇金和B.卡茨在一系列工作基础上提出膜电位离子假说，认为细胞膜动作电位的发生是膜对纳离子通透性快速而特异性地增加,称为“钠学说”。
尤其重要的是,1952年A.L.霍奇金和A.F.赫胥黎用电压钳技术在枪乌贼巨神经轴突上对细胞膜的离子电流和电导进行了细致地定量研究，结果表明Na+和K+的电流和电导是膜电位和时间的函数,并首次提出了离子通道的概念【1】。
膜片钳常见问题解答讲解
膜片钳常见问题解答（一）1.什么是电压钳与膜片钳，有什么区别？答：电压钳技术是通过向细胞内注射一定的电流，抵消离子通道开放时所产生的离子流，从而将细胞膜电位固定在某一数值。
由于注射电流的大小与离子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映离子流的大小和方向。
膜片钳技术钳制的是“膜片”，是指采用尖端经过处理的微电极与细胞膜发生紧密接触，使尖端下的这片细胞膜在电学上与其它细胞膜分离，这大大降低了背景噪声，使单通道微弱的电流得以分辨出来。
采用电压钳技术将这片膜的电位钳制在某一数值，可记录到单通道电流。
从这点上看，膜片钳技术是特殊的电压钳技术。
随着膜片钳技术的发展，它已经不仅仅局限于“膜片”的概念，也不仅仅采用电压钳技术，还常采用电流钳技术。
2. 离子通道电导的单位是什么？如何换算？答：离子通道电导的单位是西门子（Siemens, S），旧称姆欧，即安培/伏特。
常用皮西门子（pS），1pS＝10E-12 S，1,000 pS＝1 pA/mV。
3. MultiClamp 700A中，在放大器和信号器的连接中，放大器的raw output是否需要连接信号器的 ANALOG IN 接口? scaled output，raw output有什么区别?答：Raw output为原始信号输出，放大器输出的信号没有经过处理（如滤波、放大等），scaled output为定标输出，输出的信号经过了处理。
后者的灵活度大，因此多采用。
目前膜片钳放大器多设有scaled output，你可将其与数模转换器（你所说的信号器）的ANALOG IN连接，这样放大器的输出信号就能传送给计算机了，此时已经没有必要再使用Raw output了。
若你想记录两个输出，则需要将Raw output与数模转换器的另一个ANALOG IN连接。
4. 在Clampex的Edit protocol/Wave中，Step和ramp各有什么适用范围？答：Ramp多用于电流衰减缓慢的离子通道以及失敏不明显的受体通道的I-V曲线制作，如多用于钾、钙离子通道。
马桑内酯对大鼠海马神经元钠电流的影响
马桑内酯对大鼠海马神经元钠电流的影响张勤;赖晓晖;廖大清;刘洁;周东【期刊名称】《四川大学学报：医学版》【年(卷),期】2007(38)1【摘要】目的研究马桑内酯(coriaria lactone,CL)对大鼠海马神经元钠离子通道电流的影响,探讨该影响在CL致痫中的意义。
方法利用全细胞膜片钳技术,在急性分离的大鼠海马神经元上记录钠电流,观察CL对电流幅度的影响。
结果经0.1 mg/mL、0.2 m g/mL的CL作用后,海马神经元钠电流有不同程度的增加〔CL 0.1 m g/mL组的最大峰值电流密度为(-90.11±14.02)pA/pF,增幅为17.32%±8.52%;CL 0.2 m g/mL组的最大峰值电流密度为(-111.52±6.65)pA/pF,增幅为37.98%±4.91%〕;经与对照组相比,CL 0.2 m g/mL组(P<0.05)的变化较CL 0.1 m g/mL组(P>0.05)明显。
结论CL使海马神经元电压依赖性钠电流的幅度增大,从而改变细胞的兴奋性,引发异常放电。
【总页数】4页(P119-122)【关键词】马桑内酯;海马神经元;钠电流;膜片钳技术;癫痫【作者】张勤;赖晓晖;廖大清;刘洁;周东【作者单位】四川大学华西医院神经内科;四川大学麻醉与危重急救研究室;四川省人民医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R741【相关文献】1.海马电刺激对耐药性颞叶癫痫大鼠CA1区神经元钠通道电流的影响 [J], 伍国锋;洪震;高宾丽;周凤2.拉莫三嗪对大鼠急性分离海马神经元钠电流的影响 [J], 笱玉兰;朱遂强;唐明;罗利俊;陈国华3.人参皂苷Rb1对缺血大鼠海马神经元持续性钠电流的影响 [J], 江炜炜;姜正林;柯开富4.人参皂苷Rb_1对缺血大鼠海马神经元持续性钠电流的影响 [J], 江炜炜;姜正林;柯开富5.大鼠海马神经元钙电流特性及马桑内酯对其影响的研究 [J], 赖晓晖;张勤;周东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
CoCl2预处理对大鼠海马神经元急性低氧后Na+、K+电流的影响
CoCl2预处理对大鼠海马神经元急性低氧后Na+、K+电流的影响赵彤;刘卫;吴丽颖;丁爱石;王福庄;范明【期刊名称】《中国应用生理学杂志》【年(卷),期】2003(019)003【摘要】目的:观察氯化钴(CoCl2)预处理对急性低氧后海马神经元电压门控性Na+、K+电流的影响.方法:原代培养大鼠海马神经元,分为CoCl2预处理和非处理组,采用膜片钳全细胞记录技术,检测急性低氧后海马神经元钠电流(INa)、钾电流(Ik)的变化.结果:急性低氧后,海马神经元INa、IK电流幅度明显降低,INa阈值右移,而经CoCl2预处理的海马神经元INa、IK电流的降低幅度明显减轻.结论:CoCl2预处理减轻急性低氧所致的INa、IK电流变化,对神经元有明显的保护作用.【总页数】3页(P250-252)【作者】赵彤;刘卫;吴丽颖;丁爱石;王福庄;范明【作者单位】军事医学科学院基础医学研究所神经生物研究室,北京,100850;解放军第88医院,山东,泰安,271000;军事医学科学院基础医学研究所神经生物研究室,北京,100850;军事医学科学院基础医学研究所神经生物研究室,北京,100850;军事医学科学院基础医学研究所神经生物研究室,北京,100850;军事医学科学院基础医学研究所神经生物研究室,北京,100850【正文语种】中文【中图分类】Q421【相关文献】1.电磁脉冲辐照对培养大鼠海马神经元细胞内培养上清LDH及培养上清液中CHE、K+、Na+浓度的影响 [J], 赵梅兰;曾晓哲;王德文2.低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和Jun基因表达的影响 [J], 丁爱石;王福庄;于顺;吴丽颖;赵彤;范明3.低氧预处理提高下丘脑细胞缺氧耐受性与Na+、K+电流的关系 [J], 吴丽颖;刘卫;丁爱石;王福庄;范明4.针刺预处理促进急性低氧大鼠海马腺苷A1受体表达及神经元的保护作用 [J],李生花;马祁生;洒玉萍;马兰;杨应忠;靳国恩;文绍敦5.低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和热休克蛋白表达的影响 [J], 丁爱石;王福庄;于顺;吴丽颖;赵彤;范明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
电针对MCAO大鼠海马微循环血流量的影响
电针对MCAO大鼠海马微循环血流量的影响作者：韩冰冰，王世军蒋继强【摘要】目的研究电针对局灶性脑缺血(MCAO)大鼠海马CA1区微循环血流量的影响。
方法应用激光多普勒微循环血流分析仪，实时监测栓线法栓塞大脑中动脉所致局灶性脑缺血大鼠电针人中、内关、曲池、足三里前后大鼠脑海马CA1区微循环血流量的变化。
结果电针人中、内关对MCAO大鼠右侧海马CA1区微循环血流量无明显影响;电针曲池、足三里可使MCAO大鼠右侧海马CA1区微循环血流量降低，与电针前相比具有显著性差异(P【关键词】电针; 局灶性脑缺血; 海马; 微循环Abstract：ObjectiveTo investigate theeffects of electroacupuncture on the microcirculation in the hippocampal CA1 region of focal cerebral ischemia rats. MethodsFocal cerebral ischemia in rats were produced with middle cerebral artery occlusion (MCAO). The real time microcirculatory blood flow was observed with a laser doppler blood flow monitor in the hippocampal CA1 region of MCAO rats after electroacupuncture on Renzhong(DU26), Neiguan (PC6) and Quchi (LI11), Zusanli(ST36). ResultsThe microcirculatory blood flow of the right lateral hippocampus showed no remarkable change in Renzhong, Neiguan group after electroacupuncture. The microcirculatory blood flow of the right lateral hippocampus was decreased greatly in Quchi, Zusanli group after electroacupuncture (P1 材料与仪器动物雄性Wistar大鼠，12周龄，32只，体质量(250±20)g，山东大学医学部实验动物中心提供，普通级，动物生产许可证号：SCXK(鲁)20030004。
妥泰对急性分离的大鼠海马神经元钠电流的影响
妥泰对急性分离的大鼠海马神经元钠电流的影响朱遂强;苟玉兰;李卫华;唐明;杨美兰;阮旭中【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2004(033)002【摘要】目的在离子通道水平探讨妥泰(Topiramax,TPM)对大鼠海马神经元细胞的钠通道的作用.方法采用7～10 d的大鼠,以链霉素蛋白酶E加吸管吹打法制备海马神经元;利用全细胞膜片钳技术,观察TPM对急性分离大鼠海马神经元电压依赖性钠通道的作用.结果 TPM使这种河豚毒素(Tetrodotoxin, TTX)敏感的内向电流幅值减小(n=27),这种作用具有浓度依赖性,它还可以使钠电流的稳态失活曲线负向漂移(n=5).结论 TPM具有传统抗痫药物对钠电流的类似作用.【总页数】4页(P146-149)【作者】朱遂强;苟玉兰;李卫华;唐明;杨美兰;阮旭中【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院基础医学院生理学教研室,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R322.81;R96【相关文献】1.焦亚硫酸钠对大鼠海马CA1区神经元钠电流的影响 [J], 孟紫强;聂爱芳2.拉莫三嗪对大鼠急性分离海马神经元钠电流的影响 [J], 笱玉兰;朱遂强;唐明;罗利俊;陈国华3.急性分离的大鼠海马及皮层神经元快速失活钾电流特性的比较 [J], 高秀萍;祁金顺4.马桑内酯对大鼠海马神经元钠电流的影响 [J], 张勤;赖晓晖;廖大清;刘洁;周东5.人参皂苷Rb_1对缺血大鼠海马神经元持续性钠电流的影响 [J], 江炜炜;姜正林;柯开富因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
咪唑安定临床治疗浓度对海马神经元钠离子通道的作用
咪唑安定临床治疗浓度对海马神经元钠离子通道的作用唐俊;庄心良;李士通;焦志华;颜涛【期刊名称】《中国临床药理学与治疗学》【年(卷),期】2003(8)5【摘要】目的 :采用大鼠海马神经元作为研究对象 ,研究咪唑安定对神经元钠离子通道的影响 ,以探讨其临床遗忘作用的可能机制。
方法 :在急性分离的大鼠海马锥体神经元上 ,利用全细胞膜片钳技术 ,记录钠离子通道的电流 ,研究咪唑安定对钠离子通道电流幅度和激活特性的影响。
结果 :咪唑安定对海马钠离子通道电流具有可逆性抑制作用 ,0 .1和1 0 μmol·L- 1 的咪唑安定对钠离子通道分别抑制了(7.95± 7.46) %和(2 5 .3 7± 8.3 1 ) % (P <0 .0 1 )。
1 0 μmol·L- 1 的咪唑安定还可使钠离子通道的激活曲线右移。
结论 :咪唑安定对海马神经元上的钠离子电流有较弱程度的抑制作用。
【总页数】3页(P515-517)【关键词】药效学;咪唑安定;海马;锥体神经元;钠离子通道;膜片钳【作者】唐俊;庄心良;李士通;焦志华;颜涛【作者单位】上海华东医院麻醉科;上海第一人民医院麻醉科【正文语种】中文【中图分类】R965.2;R971.2【相关文献】1.咪唑安定对大鼠海马CA1区锥体神经元GABAA受体的作用 [J], 马加海;王殿仕;徐礼鲜2.糖尿病大鼠海马神经元电压门控钠离子通道的研究 [J], 陈伟燕;郑小伟3.不同浓度七氟醚预处理对大鼠海马神经元缺氧复氧时细胞凋亡的影响及线粒体ATP敏感型钾通道在其中的作用 [J], 吴晓丹;陈彦青;李德龙;戴双波;李捷萌;崔翔4.咪唑安定对大鼠海马锥体细胞延迟整流K+通道的作用 [J], 唐俊;庄心良;李士通;徐国辉;陈猛5.咪唑安定对交感神经元全细胞钠通道电流的抑制作用 [J], 郑吉健;庄心良;刘宝刚;杜冬萍;徐国辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
双分离法记录Wistar大鼠神经元的全细胞电流
双分离法记录Wistar大鼠神经元的全细胞电流沈佩同;毕平;李刚【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2010(014)002【摘要】背景:细胞培养与通道电流记录是全细胞膜片钳实验的主要难点.目的:介绍一种简单可行的降低全细胞膜片钳实验方法,将细胞急性分离与电流的分离技术结合起来,以提高工作效率,缩短实验的时间,从根本上降低膜片钳实验的难度.方法:SPF级出生4～7 d的wistar大鼠40只,雌雄不限.采用改良的急性分离的方法制备Wistar大鼠脑皮质细胞,将大鼠脑皮质切成400～600μm厚度的薄片,在人工脑脊液中通混合气静止1 h,并通以氧气.将脑组织块放入含有16 u/mL(typeX)和2 u/mL(type XIV)蛋白水解酶的人工脑脊液中,孵育60 min,清除消化酶.在全细胞电压钳制模式下,保持电位～80 mV,给予-60 mV到60 mV的去极化脉冲刺激,步阶为+10 mV,刺激波宽160 ms.记录到跨膜总电流,在全细胞电极液里面加入70 mmol/LCsCl,70 mmol/L CsF;在外液中先后加入11 μmol/L阻断剂河豚毒素、30 mmol/L的氯化四乙胺、1 mmol/L的4-AP.分别记录内向钠电流,瞬时外向钾电流和延迟整流钾电流,结果用clampfit分析处理.主要观察:①细胞的形态学观察.②全细胞电流的记录.③内向钠电流的记录.④外向钾电流的记录.结果与结论:细胞空间立体结构强,表面光滑,有完整的树突或者轴突,且细胞的活性可以在25℃室温下维持8-10 h.在外液中加入1 μmol/L的河豚毒素基本上可以阻断钠电流;30 mmol/L的氯化四乙胺和1 mmol/L的4-AP可以阻断外向钾电流.结果表明,改良的细胞急性分离方法细胞功能完好.通过电流分离技术,不改变细胞外液和电极液,仅需添加特异阻断剂,可记录到内向钠电流,瞬时外向钾电流以及延迟整流钾电流,较之传统方法可显著提高工作效率.【总页数】4页(P285-288)【作者】沈佩同;毕平;李刚【作者单位】天津医科大学生物医学工程系,天津市,300070;天津医科大学生物医学工程系,天津市,300070;天津大学精密仪器与光电子学院,天津市,300072【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.松果体素抑制大鼠海马神经元甘氨酸激活的全细胞电流 [J], 程新萍;开远忠;吴旭;刘雅静;周江宁2.淫羊藿总黄酮抑制大鼠脊髓背角神经元甘氨酸激活的全细胞电流 [J], 程新萍;朱峰;周可青3.大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的全细胞电流记录 [J], 张宇;高秀萍;李建国;郑肇青;张策4.全细胞记录急性分离海马锥体神经元电压门控通道电流 [J], 蔡青;朱忠良;樊小力;白转丽;贾宁;李霞5.培养大鼠颈上神经节神经元γ—氨基丁酸电流的全细胞记录 [J], 刘青松;何湘元因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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外膜向外记录模式
• 形成细胞贴附记录模式后，采用继续施 加负压或者电击的方法打破细胞膜，就形 成了全细胞记录模式。在形成全细胞记录 模式后，将电极缓缓提起，逐渐脱离细胞， 同样由于细胞具有流动性，粘在电极尖端 的细胞膜会自动融合，这样细胞膜外面就 朝向电极极端外，形成外膜向外记录模式。
全细胞膜片钳技术
细胞膜离子通道
• 细胞膜上存在多种类型的离子通道，主要 有电压门控离子通道、配体门控离子通道 以及机械门控离子通道等。 • 本实验主要讨论使用膜片钳放大器测量门 控离子通道的方法。在大鼠海马组织细胞 膜上存在多种门控离子通道。电压门控钠 离子通道，电压门控钾离子通道以及电压 门控钙离子通道等
电压门控钠离子通道
膜片钳技术
• 膜片钳技术是一种通过微电极与细胞膜之 间形成紧密接触的方法，采用电压钳或者 电流钳技术对生物膜上离子通道的电活动 （尤其是可对单通道电流）进行记录的微 电极技术。
膜片钳技术的基本操作过程：
• 首先在细胞膜表面，给电极间断施加负压， 这样在玻璃微电极壁与膜之间就形成了紧 密接触，术语叫做高阻封接（Gigaohm Seal），其电阻达109（1G）以上，以使 离子不能从玻璃电极尖端与膜之间通过， 只能从膜上的离子通道进出。如果轻轻的 回撤电极，细胞膜可被撕下一片，能记录 着小片膜的跨膜离子电流。如果运气好的 话，这片膜上也许只有一个离子通道，可 以记录单通道电流。
• 持电位于-80mV，给予从-70mV至+60mV 的阶梯去极化脉冲电压刺激，步幅+10mV， 刺激波宽160ms，刺激频率0.5Hz，可记录 得到CA3区锥体神经元全细胞跨膜总电流.
•
从图中可知，全细胞跨膜总电流既有内向电流 成分，又有外向电流成分。内向电流主要发生在 刺激初期几毫秒，表现为快速激活和快速失活的 特性，之后外向电流成分被激活。
大鼠海马神经元钠离子通道电 流的记录与分析
大鼠海马结构
• 海马结构位于侧脑室下角底内，是种系发 生上比较古老而简单的皮质部分，具有一 致的组织结构，细胞分层排列，是研究中 枢神经系统解剖和生理的可塑性模型。 • 海马与许多高级神经活动、行为反应以及 植物性神经功能有重要关系，一直被视为 神经科学研究的模型。海马与学习、记忆 关系密切，且对缺血和缺氧、癫痫、衰老、 化学损害剂和有害物理辐射等许多致病因 素较为敏感。
• 全细胞膜片钳技术可分为电流固定模式 和电压固定模式，前者是在固定电流的条 件下检测与其相应的膜电位。例如将电流 固定在零时，可检测细胞的自然应答（静 息膜电位、自发性膜电位振动或自发性动 作电位等）。后者是在电位固定的基础上 检测钳制电压时的膜电流。
• 全细胞膜片钳技术示意图及其等效电路图
全细胞跨膜总电流
• 电压门控钠离子通道广泛存在于神经、 肌肉等可兴奋性细胞膜上，其激活可导致 钠离子快速内流，使细胞去极化，产生动 作电位的上升相，主要生理功能是产生可 传播动作电位。 • 钠通道在维持细胞兴奋性及正常生理功能 上非常重要，而且还是一些药物的作用靶 点，如局部麻醉药和I类抗心律失常药，就 是分别选择性地阻断神经细胞和心肌细胞 的钠通道，达到阻断兴奋性传播和减少细 胞兴奋性的作用。
内向钠电流的I-V曲线分析
分别在1、3、5、7、9min记录不同 时间的钠电流
钠电流随时间变化过程
• 如图可知，钠电流的峰值在3min以后达到 较大的较稳定的值。对I-V曲线进行分析可 知，海马神经元钠电流的激活电位阈值为60mV，在-30 mV时达到电流峰值，在60mV到-10mV之间电流随电压变化比较明 显，在其后电流随电压的变化较小。峰电 流大小为-2339.85±1307 nA,翻转电位为 54.8±6.1mV
实验总结与展望
• 本实验介绍了运用PC2C膜片钳放大测量器 大鼠海马神经元钠离子通道的方法。然后 就测量所得的数据做了分析和处理。对大 鼠海马神经元钠离子通道的电学特性有一 定的了解。 • 以此为基础，在后续的实验研究中，我们 可以研究各种物理刺激，如电磁辐射、激 光刺激、温度刺激等对大鼠海马神经元离 子通道的影响，进而对物理刺激的作用机 理进行理论研究。
电压ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ控钾离子通道
• 钾离子通道是人体内分布最广、种类最多 的一种离子通道。电压门控钾离子通道对 所有可兴奋细胞的功能是必需的，主要控 制动作电位的形状，形成动作电位，调节 动作电位的频率，调整静息膜电位，在调 节神经递质释放、心率、胰岛素分泌、神 经元兴奋性、上皮电解质传导、平滑肌收 缩、细胞体积调节等细胞信号转导过程中 起着重要作用。
膜片钳技术的基本记录模式
• 膜片钳技术共有四种基本记录模式，其 他的记录模式都是在此基础上组建发展衍 变而来的。这四种记录模式为：细胞贴附 记录模式、内面向外记录模式、外面向外 记录模式、全细胞记录模式。 • 前面三种是单通道记录模式。
内面向外记录模式
• 将电极接触细胞膜，轻轻的给予负压吸 引，就形成了细胞贴附记录模式。将电极 迅速提起，脱离细胞，因为细胞具有流动 性，粘着在电极尖端的细胞膜会自动融合， 从而形成一个囊泡。当将电极提出浴液液 面而短暂（2S）暴露在空气中，囊泡的外 表面会破碎，再次将电极放入浴液，就形 成了内面向外记录模式。另外，如果将电 极放入低钙溶液中，囊泡的外表面也会破 裂，形成内面向外记录模式。