ELISA检测乙肝抗体HBsAb概论
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两对半： HBsAg HBsAb HBcAb HBeAg HBeAb
HBV-Ag、Ab检测结果临床分析
HBsAg HBeAg
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HBsAb HBcAb HBeAb
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HBV感染/无症状携带者
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急性/慢性乙肝/无症状携带者
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急性/慢性乙肝
（传染性强，大三阳）
-
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双抗体夹心法
酶标抗体
血清样品 或参比品
底物
特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体； 标本中的抗原与固相载体上的抗体结合成固相抗原复合物； 加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合， 酶量与标本中受检物质的量成正相关；
酶标仪测定OD值
加底物：夹心式复合物中的酶催化 底物成为有色产物
终止液
根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量
这种方法所测定的抗原只要有一个结合部位就可， 因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此 法。该法的优点是快，因为只有一个保温洗涤过程， 但需用较多量的酶标记抗原。
➢ 操作步骤 1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。 2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。
待1 待2 待3 阳性 阴性 空白
3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀， 空白孔不加，置37度温箱30分钟。 4.取出反应板，弃液，拍干。 5.每孔注满洗涤液，（不要溢出）静置5秒后弃液，拍干， 重复洗涤5次，拍干。 6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。 7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。
酶免疫技术
酶联免疫吸附试验
用于检测可溶性抗 原或抗体
酶免疫组化法
用于检测组织中或 细胞表面的抗原
酶联免疫吸附试验-ELISA
ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记； 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物； 产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定 性或定量分析。
ELISA检测乙肝抗体
第三小组
肝表面抗体ELISA检测
➢ 实验目的
1.掌握ELISA的原理和操作方法。 2.熟悉酶标仪的使用方法。
免疫标记技术 免疫标记技术是用荧光素、酶、或者放射性核素等标记抗体或 抗原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。
标记物
Y
细胞1
细胞2
分类
荧光素
放色性核素
酶
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定 方法中有三个必要的试剂：
（1）固相的抗原或抗体，即"免疫吸附剂" （immunosorbent）； （2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物" （conjugate）； （3）酶反应的底物。
ELISA的类型
间接法（测抗体） 双抗体夹心法（测大分子抗原） 竞争法（测小分子抗原）
➢ 结果观察
➢ 结果观察
乙型肝炎病毒采用ELISA检测法具有操作简便、灵敏度高、试 剂成本低、环保和适用于大批量人群抗原、抗体筛查等优点, 目前在国内实验室被广泛使用。 缺点易产生假阳性结果。
酶标仪洗板机
排枪加样 酶标仪
乙肝病毒（hepatitis B virus, HBV）
抗原,抗体: 1、表面Ag（HBsAg） HBsAb 2、核心抗原（HBcAg） HBcAb 3、e抗原（HBeAg） HBeAb
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、 HBeAg、AFP等。只要获得针对受检抗原的特异性抗体， 就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。
竞争法
用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。 以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面， 经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混 合液，而另一组只加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底 物显色，这两组底物降解量之差，即为所要测定的未知 抗原的量。
放射免疫技术
免疫荧光技术
Fra Baidu bibliotek
酶免疫技术
酶免疫技术
用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。 可用酶标测定
仪测定光密度（OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到
ng-pg/ml水平。
Y
酶
酶
DH2 + H2O2
D + 2H2O
无色
有色
酶具有高效催化性：可以加快化学反应的速度 ；在反应前后， 没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用。
酶联免疫吸附试验-ELISA
➢ 实验原理
抗原或抗体吸附到固相载体表面后，以及抗原抗体与 酶连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应底物 时，在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标本中 受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定 性或定量分析。
此法的特异性及灵敏度与荧光及同位素标记相似，但 其方法较以上两者简便，且不需特殊贵重仪器。因此，这 项技术目前正越来越广泛地被应用到医学的各个领域中。
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急性感染趋向恢复（小三阳）
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既往感染恢复期
+
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既往感染恢复期
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既往感染或“窗口期”
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既往感染或接种过疫苗
间接法
将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原；
加酶标抗体：与固相抗原抗体复合物中的 抗体结合，使该抗体问接地标记上酶；
加受检血清：其特异抗体与抗原结合， 形成固相抗原抗体复合物。
固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。
传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原 就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法 。
HBV-Ag、Ab检测结果临床分析
HBsAg HBeAg
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HBV感染/无症状携带者
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急性/慢性乙肝
（传染性强，大三阳）
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双抗体夹心法
酶标抗体
血清样品 或参比品
底物
特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体； 标本中的抗原与固相载体上的抗体结合成固相抗原复合物； 加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合， 酶量与标本中受检物质的量成正相关；
酶标仪测定OD值
加底物：夹心式复合物中的酶催化 底物成为有色产物
终止液
根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量
这种方法所测定的抗原只要有一个结合部位就可， 因此，对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此 法。该法的优点是快，因为只有一个保温洗涤过程， 但需用较多量的酶标记抗原。
➢ 操作步骤 1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。 2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。
待1 待2 待3 阳性 阴性 空白
3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀， 空白孔不加，置37度温箱30分钟。 4.取出反应板，弃液，拍干。 5.每孔注满洗涤液，（不要溢出）静置5秒后弃液，拍干， 重复洗涤5次，拍干。 6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。 7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。
酶免疫技术
酶联免疫吸附试验
用于检测可溶性抗 原或抗体
酶免疫组化法
用于检测组织中或 细胞表面的抗原
酶联免疫吸附试验-ELISA
ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记； 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物； 产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定 性或定量分析。
ELISA检测乙肝抗体
第三小组
肝表面抗体ELISA检测
➢ 实验目的
1.掌握ELISA的原理和操作方法。 2.熟悉酶标仪的使用方法。
免疫标记技术 免疫标记技术是用荧光素、酶、或者放射性核素等标记抗体或 抗原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。
标记物
Y
细胞1
细胞2
分类
荧光素
放色性核素
酶
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定 方法中有三个必要的试剂：
（1）固相的抗原或抗体，即"免疫吸附剂" （immunosorbent）； （2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物" （conjugate）； （3）酶反应的底物。
ELISA的类型
间接法（测抗体） 双抗体夹心法（测大分子抗原） 竞争法（测小分子抗原）
➢ 结果观察
➢ 结果观察
乙型肝炎病毒采用ELISA检测法具有操作简便、灵敏度高、试 剂成本低、环保和适用于大批量人群抗原、抗体筛查等优点, 目前在国内实验室被广泛使用。 缺点易产生假阳性结果。
酶标仪洗板机
排枪加样 酶标仪
乙肝病毒（hepatitis B virus, HBV）
抗原,抗体: 1、表面Ag（HBsAg） HBsAb 2、核心抗原（HBcAg） HBcAb 3、e抗原（HBeAg） HBeAb
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、 HBeAg、AFP等。只要获得针对受检抗原的特异性抗体， 就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。
竞争法
用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。 以测定抗原为例，将特异性抗体吸附于固相载体表面， 经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和待测抗原的混 合液，而另一组只加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底 物显色，这两组底物降解量之差，即为所要测定的未知 抗原的量。
放射免疫技术
免疫荧光技术
Fra Baidu bibliotek
酶免疫技术
酶免疫技术
用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。 可用酶标测定
仪测定光密度（OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到
ng-pg/ml水平。
Y
酶
酶
DH2 + H2O2
D + 2H2O
无色
有色
酶具有高效催化性：可以加快化学反应的速度 ；在反应前后， 没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用。
酶联免疫吸附试验-ELISA
➢ 实验原理
抗原或抗体吸附到固相载体表面后，以及抗原抗体与 酶连接后，仍保持免疫活性和酶活性，当酶遇到相应底物 时，在酶的催化下引起底物水解显色。产物的量与标本中 受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定 性或定量分析。
此法的特异性及灵敏度与荧光及同位素标记相似，但 其方法较以上两者简便，且不需特殊贵重仪器。因此，这 项技术目前正越来越广泛地被应用到医学的各个领域中。
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急性感染趋向恢复（小三阳）
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既往感染恢复期
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既往感染或接种过疫苗
间接法
将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原；
加酶标抗体：与固相抗原抗体复合物中的 抗体结合，使该抗体问接地标记上酶；
加受检血清：其特异抗体与抗原结合， 形成固相抗原抗体复合物。
固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。
传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原 就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法 。