RNA酶抑制剂
rna聚合酶抑制剂
RNA聚合酶抑制剂RNA聚合酶抑制剂是一类能够干扰RNA合成的药物或化合物，通过阻止RNA聚合酶的活性来抑制基因的转录过程。
这类药物在医学和生物学领域扮演着重要的角色，被广泛用于研究和治疗多种疾病。
RNA聚合酶是一个关键的酶，负责在细胞内媒介转录过程，将DNA转录成RNA，进而合成蛋白质。
因此，抑制RNA聚合酶的活性可以有效地控制基因的表达。
这对于治疗一些基因相关的疾病非常有潜力，比如癌症和病毒感染。
一些常见的RNA聚合酶抑制剂包括抗生素类药物和化学合成的化合物。
抗生素如利福平和链霉素等被发现可以抑制细菌RNA聚合酶，起到抗菌作用。
而在抗癌治疗中，一些化学合成的RNA聚合酶抑制剂被设计出来，用于干扰肿瘤细胞的RNA合成，从而抑制肿瘤的生长和扩散。
除了治疗作用，RNA聚合酶抑制剂在科研领域也有着重要的应用价值。
科学家们利用这些药物来研究基因的功能和调控机制，探索疾病发生的机理以及新药的研发方向。
通过研究RNA聚合酶抑制剂的作用机制，人们能够更深入地了解基因表达调控的复杂性，为治疗手段的创新提供理论基础。
然而，虽然RNA聚合酶抑制剂具有许多潜在的应用前景，但在临床和科研中仍然存在一些挑战和限制。
首先，不同类型的RNA聚合酶抑制剂对不同的基因和细胞类型具有特异性，因此需要精准选择药物来实现预期的治疗效果。
此外，一些RNA聚合酶抑制剂可能会对正常细胞产生不良影响，导致副作用的出现，因此在应用时需要谨慎权衡利弊。
总的来说，RNA聚合酶抑制剂作为一类重要的药物和研究工具，为我们深入理解基因表达调控机制和探索疾病治疗方式提供了有力支持。
随着科学技术的不断进步和人们对基因疾病的认识不断深化，相信RNA聚合酶抑制剂将在未来发挥更加重要的作用，为人类健康和生命科学研究做出更大的贡献。
1。
如何防止RNA酶污染
如何防止RNA酶污染在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。
而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。
由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。
因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。
在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA 酶。
RNA酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。
外源性的RNA酶存在于操作人员的手汗、唾液等，也可存在于灰尘中。
在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。
这些外源性的RNA酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。
而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。
一、防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。
2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。
3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。
4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。
然后用高压灭菌除去残留的DEPC。
不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。
5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。
6. 设置RNA操作专用实验室，所有器械等应为专用。
二、常用的RNA酶抑制剂1. 焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。
它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
2. 异硫氰酸胍：目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。
反转录试剂盒中各种试剂作用
反转录试剂盒中各种试剂作用引言反转录（Reverse Transcription）是一种将RNA转录成DNA的反应过程。
反转录试剂盒是用于反转录反应的实验室工具，其中包含了不同的试剂。
每种试剂都具有特定的作用，以实现高效的反转录反应。
本文将介绍反转录试剂盒中各种试剂的作用及其在反转录反应中的重要性。
反转录试剂盒中的试剂1. 反转录酶（Reverse Transcriptase）反转录酶是反转录反应的核心酶，它能够将RNA模板转录成相应的DNA。
在反转录试剂盒中，通常含有高活性的反转录酶，用于保证反应的高效率。
反转录酶具有以下主要功能：•识别RNA模板：反转录酶能够特异性地识别并结合RNA模板。
它通过与RNA模板的互补序列相结合，在DNA链合成过程中提供模板。
•DNA链合成：反转录酶通过使用RNA模板来合成DNA链。
它能够确保DNA链的正确合成，并具有较高的反应速率和精确性。
2. 核酸酶（Nuclease）核酸酶在反转录试剂盒中的作用是防止外源RNA的污染。
在反转录反应前，加入核酸酶可以降解外源RNA，从而避免对反应的干扰。
核酸酶具有以下职能：•高效降解RNA：核酸酶能够迅速降解外源RNA，以保证反转录反应的特异性。
•不影响反转录酶活性：核酸酶对反转录酶活性没有不良影响，不会干扰反转录反应的进行。
3. 引物（Primer）引物在反转录反应中起到初始化DNA合成的作用。
引物是一种短链的DNA序列，它与RNA模板特异结合，为反转录酶提供起始点。
引物的功能主要有：•特异性结合：引物能够与RNA模板的互补序列特异性结合，为反转录酶提供起始点。
这有助于确保DNA链的正确合成。
•有效启动反应：引物能够引导反转录酶开始DNA合成，促进反转录反应的进行。
4. 辅助酶（Co-factors）反转录试剂盒中通常含有一些辅助酶，它们可以提高反转录反应的效率和特异性。
常见的辅助酶包括：•RNA酶抑制剂（RNase Inhibitor）：用于抑制外源及内源RNA酶的活性，保护RNA模板免于降解。
[基础]rna提取注意事项
![[基础]rna提取注意事项](https://img.taocdn.com/s3/m/3fdb7b35492fb4daa58da0116c175f0e7cd119c9.png)
RNA提取注意事项一些RNA提取方法，在进行具体实验时，应根据研究对象的性质，提取核酸的用途而对上述方法在操作步骤和试剂使用量上作一定的修改。
1、在核酸提取时，为了增加细胞的裂解度，增加核蛋白复合体破碎度，以释放更多的游离核酸，在操作中常要用到溶菌酶和蛋白酶K，在确保没有核酸水解酶存在的前提下，酶反应时间越长越好。
2、有时在使用蛋白酶时，为了抑制核酸水解酶的降解作用，可在蛋白酶缓冲液中用终浓度5mM的EDTA代替NaCL，并且可将反应温度提高到50－60℃，并将反应时间缩短到15－25min，但酶用量必须提高10－20倍。
溶菌酶使用时缓冲液中需加EDTA，因游离金属离子对酶有抑制。
3、许多植物材料中富含酚，在细胞破碎时，在多酚氧化酶作用下，被氧化成有色的锟类物资，影响核酸的提取及降低提取质量，在提取液中加入PVP和巯基乙醇对降低酚类的干挠可能有所帮助。
PVP将与酚形成复杂的聚合体，在提取时将酚从核酸成分中游离。
且PVP与巯基乙醇作为强还原剂可防止多酚的褐变。
另外作为还原剂的这些成分在一定程度上可抑制核酸水解酶的作用。
4、许多生物材料在提取核酸时，都会遇到多糖的污染问题，具体表现为有机溶剂沉淀时，沉淀很多，但复溶时，大量沉淀不溶，电泳观察时核酸含量很低。
克服多糖污染可采用以下一些办法1) CTAB多次抽提。
2) 在有机溶剂沉淀时先稀释样品浓度（可到10倍左右），对低浓度样品再进行沉淀。
3)在有机溶剂沉淀时选用异丙醇和5MNaCL作为沉淀溶剂，此时氯化钠的用量可用到1/5-1/2的体积，异丙醇可用到0.6-1的体积。
异丙醇沉淀核酸时，高浓度盐存在将使大量多糖存在在溶液中，从而可达到去多糖的作用。
但高浓度的盐存在会影响核酸的进一步操作，因此必须用乙醇多次洗涤脱盐。
5、在核酸提取时，酚与氯仿均起到变性的作用。
酚的变性能力强于氯仿，但酚与水有一定的互溶，因此酚抽后，除可能损失部分核酸外，水相中还会残留酚，而酚的存在将对核酸的酶反应产生强的抑制，因此在操作中可单用氯仿作变性剂、也可用酚/氯仿混合变性，也可用单一酚作变性己，但用单一酚后在有机溶剂沉淀时一定要用氯仿从抽提。
RNA提取相关试剂——DEPC和TRIS
DEPC焦碳酸二乙酯（DEPC）：DEPC即diethypyrocarbonate，DEPC结构式中文名为。
分子式为C6H10O5，分子量为162.14。
是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。
它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
DEPC 可以抑制植物细胞上的NSCC，即nonselective cation channel （非选择性阳离子通道）。
是常用的NSCC抑制剂.DEPC毒性1．DEPC(diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯) 是一种高效烷化剂。
配置：加0.1% DEPC 到去离子水中，混匀过夜，然后高温高压121℃，20min，DEPC即降解成二氧化碳和水无毒。
2．DEPC有刺激性，对眼睛气道粘膜有强刺激，在操作中应尽量在通风的条件下进行，DEPC毒性并不是很强，但吸入的毒性是最强的，使用时戴口罩，不小心占到手上注意立即冲洗。
3．DEPC是一种潜在的致癌物质，主要是能生成乙酯基衍生物和乙酯类衍生物，其中尿烷是一种已知的致癌物质。
DEPC水泡过一次枪头后还能再用吗?是否每次都要重配？答：不能再用。
每次处理耗材时都要用新配的。
DEPC水用于配制电泳缓冲液和溶解RNA.DEPC在水中的半衰期25℃、磷酸缓冲液中其半衰期为4 min（pH 6）、9 min（pH 7）。
Tris缓冲液中DEPC的降解会加快，25℃时，半衰期为1.25 min（pH 7.5）、0.37 min（pH 8.2）。
DEPC加入到水中之后并不会立即溶解，而是形成小的球状液滴（类似于油滴），需要彻底搅拌直至液滴消失才算混合均匀。
此时的溶液才可以拿去高温除菌除DEPC。
一般灭菌15min即可将DEPC彻底除去。
（试验所用试剂也可用DEPC处理，加入DEPC至0.1%浓度，然后剧烈振荡10分钟，再煮沸15分钟或高压灭菌以消除残存的DEPC，否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性）配制泡实验器具的DEPC水的配制：1000ml双蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml容量瓶中静置4小时后备用。
RNA提取相关试剂——DEPC和TRIS
DEPC焦碳酸二乙酯（DEPC）：DEPC即diethypyrocarbonate，DEPC结构式中文名为。
分子式为C6H10O5，分子量为。
是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。
它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
DEPC可以抑制植物细胞上的NSCC，即nonselective cation channel （非选择性阳离子通道）。
是常用的NSCC抑制剂.DEPC毒性1．DEPC(diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯) 是一种高效烷化剂。
配置：加% DEPC到去离子水中，混匀过夜，然后高温高压121℃，20min，DEPC即降解成二氧化碳和水无毒。
2．DEPC有刺激性，对眼睛气道粘膜有强刺激，在操作中应尽量在通风的条件下进行，DEPC 毒性并不是很强，但吸入的毒性是最强的，使用时戴口罩，不小心占到手上注意立即冲洗。
3．DEPC是一种潜在的致癌物质，主要是能生成乙酯基衍生物和乙酯类衍生物，其中尿烷是一种已知的致癌物质。
DEPC水泡过一次枪头后还能再用吗?是否每次都要重配？答：不能再用。
每次处理耗材时都要用新配的。
DEPC水用于配制电泳缓冲液和溶解RNA.DEPC在水中的半衰期25℃、磷酸缓冲液中其半衰期为4 min（pH 6）、9 min（pH 7）。
Tris缓冲液中DEPC的降解会加快，25℃时，半衰期为min（pH ）、min（pH ）。
DEPC加入到水中之后并不会立即溶解，而是形成小的球状液滴（类似于油滴），需要彻底搅拌直至液滴消失才算混合均匀。
此时的溶液才可以拿去高温除菌除DEPC。
一般灭菌15min即可将DEPC彻底除去。
（试验所用试剂也可用DEPC处理，加入DEPC至%浓度，然后剧烈振荡10分钟，再煮沸15分钟或高压灭菌以消除残存的DEPC，否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性）配制泡实验器具的DEPC水的配制：1000ml双蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml容量瓶中静置4小时后备用。
RNA抑制剂对细胞分裂的影响研究
RNA抑制剂对细胞分裂的影响研究RNA抑制剂是一种可以调节基因表达的工具，它通过干扰RNA的翻译或降解过程来影响靶标基因的表达。
近年来，人们开始关注RNA抑制剂在细胞分裂中的作用，研究表明，RNA抑制剂对细胞分裂有着重要的影响。
一、RNA抑制剂的作用机制RNA抑制剂主要通过两种机制来调节基因表达：1. siRNA（小干扰RNA）介导的降解siRNA是双链RNA分子，其一端与靶标mRNA互补配对，另一端则与RNA 酶复合物（RISC）结合，将靶标mRNA切割成小的短片段。
这个过程称为RNA 干扰（RNAi），是一种常见的基因表达调节机制。
2. miRNA（微RNA）介导的翻译抑制miRNA是21-25核苷酸长度的非编码RNA序列，它与靶标mRNA互补配对，导致靶标mRNA不能被翻译成蛋白质。
与siRNA不同，miRNA介导的调节机制更加复杂，其中涉及多个蛋白质的参与。
二、RNA抑制剂对细胞周期的影响细胞周期是细胞自身复制和增殖过程中的重要阶段，由G1、S、G2和M四个时期组成。
在细胞分裂的过程中，RNA抑制剂的作用主要包括以下几个方面：1. RNA抑制剂可以阻滞细胞周期RNA抑制剂可以靶向影响多个周期相关蛋白的表达，从而阻碍细胞周期的正常进行。
研究表明，RNA抑制剂对一些G1和G2期的修饰酶、转录因子和生长因子的表达产生了明显的影响。
2. RNA抑制剂可以诱导细胞凋亡RNA抑制剂对凋亡相关的基因表达也有重要的影响。
研究表明，RNA干扰靶向抑制特定的凋亡相关蛋白，可以导致细胞凋亡。
3. RNA抑制剂可以影响有丝分裂RNA抑制剂对有丝分裂也有影响，特别是在某些非常规条件下。
研究表明，siRNA介导的DNA甲基转移酶靶向抑制可以导致细胞减数分裂和有丝分裂异常。
三、RNA抑制剂在肿瘤治疗中的应用由于RNA抑制剂对细胞分裂的影响，在肿瘤治疗中也得到了广泛的应用。
珍珠链霉素是一种RNA抑制剂，可以靶向抑制细胞周期的蛋白质，从而诱导凋亡。
rna酶失活条件
rna酶失活条件
RNA酶是一种能够催化RNA合成或者RNA降解的酶类。
当需要对RNA进行全面或者局部地失活时，就需要使用RNA酶失活条件。
RNA酶失活条件指的是能够抑制RNA酶活性的化学物质或环境条件。
一、生理条件
1、低温环境：低温能够减缓RNA酶的催化速率，从而减缓RNA 的合成或者降解速度。
2、高温环境：高温能够破坏RNA酶的结构，使其失去活性。
3、低pH环境：低pH能够使RNA酶失去活性并降解RNA。
4、高盐环境：高盐环境能够影响RNA酶的催化作用，降低其活性。
二、化学条件
1、酸性物质：例如醋酸、HCl等酸性物质可以使RNA失活，从而保护RNA。
2、有机物：例如醇类、甲醇、甲醛等有机物能够破坏RNA的结构，使其失活。
3、具有脱水作用的物质：例如乙醇、二甲基亚砜能够使RNA变性和失活。
4、金属离子：例如Hg2+、Cu2+等金属离子能够影响RNA酶的催化作用，从而失活RNA。
三、添加物
1、抗生素：例如氯霉素、甲基磺菌素等抗生素能够破坏RNA合成或者降解的细菌酶，从而失活RNA。
2、抑制剂：例如铂类、硫脲类等抑制剂可以阻止RNA合成或者降解，从而保护RNA。
3、酵母RNA：酵母RNA是一种能够与RNA竞争性结合的小分子RNA，能够通过竞争性抑制RNA的降解和合成。
综上所述，RNA酶失活是一种常用的实验手段，能够有效保护
RNA并阻止其降解和合成。
根据实验需求，科研者可选择不同的RNA酶失活条件，从而实现对RNA的精确控制。
细菌RNA聚合酶抑制剂的分子生物学机制研究进展
细菌RNA聚合酶抑制剂的分子生物学机制研究进展Go to:Abstract细菌RNA聚合酶抑制剂利福霉素类药物是治疗结核病的一线药物，随着利福霉素类药物耐药菌的出现，开发能杀灭利福霉素类药物耐药菌且生物利用度高的新型RNA聚合酶抑制剂已迫在眉睫。
细菌RNA 聚合酶与不同抑制剂复合物的晶体结构和冷冻电镜结构研究揭示了RNA聚合酶抑制剂主要具有以下分子生物学作用机制：①阻止短RNA 延伸；②与底物竞争；③阻止“桥螺旋”变构；④阻止蟹钳打开；⑤阻止蟹钳关闭。
本文综述了这五类重要RNA聚合酶抑制剂的研究进展，以期为已有RNA聚合酶抑制剂的修饰改造和新型RNA聚合酶抑制剂的开发提供参考。
AbstractRifamycins, a group of bacterial RNA polymerase inhibitors, are the first-line antimicrobial drugs to treat tuberculosis. In light of the emergence of rifamycin-resistant bacteria, development of new RNA polymerase inhibitors that kill rifamycin-resistant bacteria with high bioavailability is urgent. Structural analysis of bacterial RNA polymerase in complex with inhibitors by crystallography and cryo-EM indicates that RNA polymerase inhibitors function through five distinct molecular mechanisms: inhibition of the extension of short RNA; competition with substrates; inhibition of the conformational change of the 'bridge helix’; inhibition of clamp opening； inhibition of clamp closure. This article reviews the research progress of these five groups of RNA polymerase inhibitors to provide references for the modification of existing RNA polymerase inhibitors and the discovery of new RNA polymerase inhibitors.Keywords: Rifamycins/pharmacokinetics, Anti-bacterialagents, DNA-directed RNA polymerases/antagonists & inhibitors, Microscopy, electron, Freezing, Review细菌RNA聚合酶是催化细菌基因转录的蛋白质机器，对细菌的存活至关重要，所以RNA聚合酶抑制剂对细菌具有很强的杀伤作用。
RNase Inhibitor （RNA酶抑制剂） 说明书
RNase Inhibitor （RNA 酶抑制剂）储存条件：-20℃保存产品内容RNase Inhibitor 产品编号C10201A 包装规格 50 µl (40 U/µl)■ 产品概述：本产品是通过基因重组技术克隆表达的猪源 RNase Inhibitor 。
其能有效地抑制真核生物中RNaseA 、RNaseB 和RNaseC 的活性，但不会抑制RNase H 、S1核酸酶、T7、SP6及T3 RNA 聚合酶、M-MLV 及AMV 反转录酶和DNA 聚合酶等的活性。
因此广泛地应用于cDNA 的合成、体外转录及翻译等需要预防潜在RNase 污染的实验中。
■ 来源：大肠杆菌重组表达纯化。
■ 活性单位：抑制5 ng RNase A 活性的50%所需的酶量定义为1个活性单位（U ）。
■ 纯度（品质检测）：以考马斯染色SDS －PAGE 胶检测纯度大于95%，经鉴定无核酸酶污染。
■ 产品特点：1. 有效抑制真核生物中RNase A 、RNase B 和RNase C 的活性。
2. 能在高至50℃的条件下抑制RNase 的活性。
3. 缓冲体系要有DTT 的存在，活性pH 范围广。
4. 能快速、有效地保护RNA ，不影响RNA 转录、反转录及其蛋白翻译过程。
5. 40 U 的RNase Inhibitor 能有效抑制高达80 ng 的RNase A 的活性。
■ 产品应用：主要应用于cDNA 合成、体外转录、体外表达、mRNA 的分离纯化等有潜在RNase 污染的实验中。
■ 储存缓冲液：20mM HEPES-KOH （pH7.6 @ 25℃）、50mM KCl 、8mM DTT 、50% Glycerol 。
GeneCopoeia Inc. 19520 Amaranth Drive Germantown, Maryland 20874USA Tel: 301-515-6982; 1-866-360-9531Fax: 301-515-6983Web: GeneCopoeia TMExpressway to Discovery图例：40U RNase Inhibitor 能有效地抑制RNase A 多至80ng 。
DEPC水
1、DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。
DEPC是一种潜在的致癌物质，在操作中应尽量在通风的条件下进行，并避免接触皮肤。
DEPC毒性并不是很强，但吸入的毒性是最强的，使用时戴口罩。
不小心占到手上注意立即冲洗，RNase AwayTM试剂可以替代DEPC，操作简单，价格低，且无毒性。
只需将RNase AwayTM 直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面，浸泡后用水冲洗去除，即可以快速去除器皿表面的RNase，并且不会残留而干扰后继实验。
2、DEPC处理水：超纯水，灭菌，加入0.1%的DEPC，处理过夜，第二天灭菌去除DEPC。
如：(1) 配制DEPC水溶液(用来浸泡枪头、离心管等)：1000mL灭菌去离子水中加入1mL DEPC，盖紧塞子振摇5min，静置4小时，倒入盛有枪头和离心管的容器内，用保鲜膜封住容器口以防止DEPC挥发，室温静置过夜，倒掉溶液，处理物品灭菌30min以除去残留的DEPC。
倒出的DEPC水溶液高压灭菌30min再丢弃。
(2) 配制 DEPC处理水（用来配RNA电泳用缓冲液）：1000mL去离子水中加入1mL DEPC，盖紧塞子振摇，静置过夜，再加上塑料袋封紧瓶口，高压灭菌30min以除去残留的DEPC。
(3)配1000ml的DEPC处理水，加1mlDEPC。
磁力搅拌器搅拌过夜。
第二天高压蒸汽灭菌 121c，25min DEPC分解成二氧化碳和酒精，封闭冷藏备用。
最好分装小瓶来用，尽量避免污染。
配1000ml的DEPC处理水，加1mlDEPC。
磁力搅拌器搅拌过夜。
第二天高压蒸汽灭菌 121c，25min DEPC分解成二氧化碳和酒精，封闭冷藏备用。
DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。
DEPC是一种潜在的致癌物质，在操作中应尽量在通风的条件下进行，并避免接触皮肤。
防止RNA酶污染的措施
一、防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。
2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。
3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。
4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。
然后用高压灭菌除去残留的DEPC。
不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。
5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。
6. 设置RNA操作专用实验室，所有器械等应为专用。
二、常用的RNA酶抑制剂1. 焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。
它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
2. 异硫氰酸胍：目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。
它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。
3. 氧钒核糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物，它和RNA酶结合形成过渡态类物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性。
4. RNA酶的蛋白抑制剂（RNasin）：从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。
RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂，可以和多种RNA酶结合，使其失活。
5. 其它：SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定抑制作用。
mRNA的分离与纯化真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5’端帽子结构（m7G）和3’端的Poly(A)尾巴。
绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3’端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。
这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）琼脂糖亲合层析分离纯化mRNA的理论基础就在于此。
RNA酶抑制剂使用说明书
威格拉斯生物技术（北京）有限公司
RNA酶抑制剂
(VigoraseIn)
产品说明：
VigoraseIn是本公司研发的一种非人源性RNase结合蛋白基因，经原核表达和纯化的
蛋白性RNA酶抑制剂。
与人胎盘来源的RNA酶抑制剂相比，具有更广谱的RNase抑
制活性；同时其活性对DTT的依赖明显降低。
与其它蛋白性RNA酶抑制剂一样，
VigoraseIn对RNA相关操作的酶促反应均无明显抑制作用，因此可广泛使用于RNA
实验中需抑制RNase活性的各种反应中，如反转录cDNA第一链合成和后续的PCR、
体外转录翻译系统等。
产品内容与储存方法：
名称数量保存条件
VigoraseIn 20 μl -20℃
RNA酶抑制活性为40 u/μl。
低温运输，-20℃保存。
有效期12个月。
使用方法：
反转录或体外转录翻译体系中，加入适量VigoraseIn，如终浓度至0.5~5 u/μl。
加热可
使本酶失活。
电话：（010）58941231, （010）58941232 传真：（010）58941232
网址： 电子邮件：runon@。
RNA酶活性的控制(实验室常识)
为了获得高质量的真核细胞mRNA，必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。
同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。
下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。
大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注意事项，只是在遇到问题时可能采用其中的一种或几种方法加以解决。
实验程序RNA酶的抑制剂破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法（一）实验程序如不谨慎操作，外源性RNA酶可以通过下述途径污染RNA制品：（１）玻璃制品、塑料制品和电泳槽灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA 酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。
实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染，使用前必须于180 ℃干烤８小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品）。
另一种方法是用0.1 ％焦碳酸二乙酯（DEPC）的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯，试管和其他用品。
DEPC是RNA酶的强烈抑制剂，但其作用并不是绝对的（Fedorcsak和Ehrenberg,1966）。
灌满DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置２小时，然后用灭菌水淋洗数次，并于100℃干烤15分钟（Kumar和Lindberg,1972)。
在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高压蒸氯灭菌15分钟。
上述处理可以除去器甲上痕量的DEPC，以防DEPC通过羧甲基化作用对RNA的嘌呤碱基进行修饰。
羧甲基化的RNA在无细胞体系中翻译效率很低，然而，除非其中大部分嘌呤碱基均被修饰，否则其形成DNA：RNA或RNA：RNA杂交休的能力并不明显降低。
用于RNA电泳的电泳槽应用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙醇干燥，然后灌满3％的H2O2溶液，于室温放置10分钟，然后用0.1 ％DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。
最好能留出一些玻璃器皿、塑料制品和电泳槽作上特殊标记，存放在指定地点，为RNA实验专用。
关于Rnasin的常见问题
1) RNasin 核酸酶抑制剂是什么？有什么用？RNasin 核酸酶抑制剂是由Promega 研究和开发的，具有广谱的RNA 酶抑制活力，用于清除RNA 酶污染。
2) RNasin 核酸酶抑制剂和重组的RNasin 核酸酶抑制剂之间有什么差异？两种酶抑制剂的用途相似。
但酶抑制剂的来源不同。
RNasin 核酸酶抑制剂最初是从人的胎盘中分离的，目前还在用。
重组的RNasin 核酸酶抑制剂是由Promega 研究的，用它为研究人员提供高质量和稳定的试剂。
因为来源于大肠杆菌, 无人DNA 的污染，故用途更广。
3) RNasin 核酸酶抑制剂如何起作用？RNasin 核酸酶抑制剂是1 个50kD 大小的蛋白，它和RNA 酶以非共价键按1 ：1 结合，而抑制RNA 酶活力，结合常数为10-14。
4) RNasin 核酸酶抑制剂抑制哪些核酸酶和聚合酶？不抑制哪些酶？RNasin 核酸酶抑制剂抑制活力如表所示------------------------------------------------------抑制不抑制RNaseA RNaseT1RNaseB 核酸酶S1RNaseC RNase( 曲霉素)RNase( 胎盘) RNase ONET™M核酸酶血管生成素Taq DNA 聚合酶AMV 或M-MLV 反转录酶SP6, T7, T3 RNA 聚合酶------------------------------------------------------5) RNasin 核酸酶抑制剂反应的条件如何？RNasin 核酸酶抑制剂的反应条件为pH5-8( 最适pH7-8) 。
6) 使用RNasin 核酸酶抑制剂应避免哪些条件？简单而言，应避免使RNasin 核酸酶抑制剂和RNA 酶复合物解聚。
应避免使RNasin 核酸酶抑制剂失活。
具体的因素是温度>50o C, 尿素，SDS ，或其他变性剂。
7) RNasin 核酸酶抑制剂的活力单位如何？定义为抑制5ngRNase A 水解2` ，3`- 单磷酸环化胞苷的50% 的活力所用的抑制剂的量。
RNasin RNA酶抑制剂操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:// RNAsin
RNA酶抑制使用说明书
产品储存：－20 ℃保存，避免起泡，避免剧烈振荡或搅拌。
产品介绍：
本制品是经过大肠杆菌表达的重组蛋白，与RNase A形成1：1复合体，对RNase 表现高度的非竞争性抑制（Ki=3×10-10 M）。
该反应是可逆的，通过尿素及疏基类试剂能够解离复合体，使RNase 复活而抑制剂不可逆失活。
本品属蛋白质性质，与其它竞争性抑制剂（核酸类、无机磷酸类）不同，可以很容易地通过苯酚处理将其从反应体系中除去。
活性定义：抑制5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
第一链cDNA合成(以20 μl反应体系为例)
1.加入
2. 轻轻混匀
如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP)，42℃孵育50min。
如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育50 min。
3.70℃加热5 min失活TUREscript Hˉ RTase。
RT-PCR
反转录所得的cDNA可直接用于PCR反应或储存于-20°C。
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1.产品描述
RNA酶抑制剂具有广谱的RNA酶抑制作用，包括中性的真核生物的RNA的抑制作用。
分子量是50kDa的蛋白质通过非共价键与RNA酶以1：1的比例结合发挥它的抑制作用。
RNA酶抑制剂与RNA酶结合的有效浓度时10-14M。
相比之下，抗体的结合浓度是10-6-10-8M。
而且，RNA酶抑制剂的动力学结合是非常迅速的，确保与RNA酶的迅速络合，并对其产生迅速的抑制作用。
Promega提供两种不同的实验方案：天然的RNA酶抑制剂和重组的RNA 酶抑制剂。
这些产品都是应用离子交换和亲和色谱法结合得到，所以都是纯净的。
她们都不含有DNA外切酶、核酸外切酶活性和RNA酶活性。
RNA酶抑制剂除了具有对RNA酶活性抑制作用的能力外，已经被证实，在血管生成素的诱导下可以抑制血管的生成。
重组RNA酶抑制剂：为实验人员提供一个额外的水平，保证试剂的纯度和连续性。
从重组大肠杆菌中提取，氨基端是一个已经解锁的丝氨酸残基。
一般考虑：分子和核糖核酸酶结合，因为核酸酶在变性的情况下保持活性，所以必须注意避免RNA酶抑制剂变性。
如果被稀释或储存一段时间，为了防止活跃核酸酶的释放，应该避免温度高于50℃，以及尿素或者其他变性剂的浓度过高。
RNA酶抑制剂在一定pH变化范围内是非常活跃的。
2.标准使用程序
重组和天然RNA酶抑制剂在体外转录和翻译时可以互换，具体介绍如下。
想要得到更多关于体外转录系统的信息，请咨询核糖核酸探针体外转录系统手册。
A.体外转录（未标记RNA）
下面的体外转录系统分析使用最终浓度在1u/ul的RNA酶抑制剂。
经过合适的修改，这个反应可以用于各种实验的体外转录分析。
B.体外转录（32P标记RNA探针）
C.体外翻译
包括RNA抑制酶和体外翻译，确保RNA酶作用物的完整性。
（1）兔网织红细胞溶解产物参与的简单体外翻译反应：
（2）三硝基甲苯网织红细胞溶解产物或者小麦胚芽提取物系统参与的简单体外翻译
3．缓冲液和溶液的成分
4.参考文献。