经口急性毒性试验.
001_经口急性毒性试验方法_改良寇氏法
急 性 毒 性 试 验 方 法――改良寇氏法Kärber 法由Kärber 于1931提出，后经Finney 改进，顾汉颐作过改进，1963年孙瑞元教授对该法进一步改进，改进后的计算方法称为点斜法或孙氏法，增加了不含0%和100%死亡率的校正式，所得LD 50及全部有关参数与正规概率单位法相近。
改良寇氏法（Käber）试验设计的原则是：各组剂量按等比级数；各组动物数相等：大致有一半组数的动物死亡率在10%～50%之间，另一半在50%～100%之间，最好出现0 %和100 %的剂量组。
一、剂量选择及分组1、剂量选择剂量设计是否合理是急性毒性试验能否成功的关键。
探求外源化学物的急性毒性，测定其LD 50或LC 50时，应首先广泛查阅文献资料，了解该化学物的化学结构和理化性质，如结构式、分子量、溶解度、挥发度、纯度及杂质含量等，其次确定测定LD 50的计算方法，然后设计剂量。
2、预试验：总的原则是先用少量动物，以较大的剂量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围，即确定受试动物全部致死的最小剂量（b ）和全部不致死的最大剂量（a ），即求出待测化学物0 %~100 %的大致致死剂量范围，然后在这个剂量范围内按几何级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂量呈等比级数（r ），其比值为1.2~1.5。
进行正式实验。
用于急性毒性试验时，动物的体重为：大鼠180~200g ，小鼠18~22g ，豚鼠200~250ｇ，家兔2~2.5kg ，犬10~12 kg 。
用于实验的同一批动物体重变异范围不得超过所用动物平均体重的20%。
仍然遵守雌雄各半或雌雄兼取的原则。
当预试中发现化学物的毒性有明显的性别差异时，则需要选用雌、雄两种性别的动物分别进行试验，求出各自的LD 50。
通过预试，找出受试化学物引起动物死亡的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和分组。
按下式设计剂量组：1n abr -= 式中：r —相邻两组剂量的比值，一般为1.2～1.5，b —最低全致死剂量量， a —最高不致死剂量， n —设计的组数。
《动物毒理实验》课件：实验一 小鼠经口急性毒性试验
四、实验步骤
1. 剂量选择： 查阅文献，估计预期毒性中值；
预试验，求出受试化学物的0～100%或 10～90%大致致死范围，设计正式试验的剂 量和分组。
体重增加：低水平的化学毒物促进动物 生长，动物体重增长率大于对照组。
观察指标（3）
死亡数和死亡时间 十分重要的中毒机理研究信息；重
点观察和记录各个剂量组动物的死亡数； 每只动物死亡的时间（尤其是最早出现 死亡的时间）。
观察指标（4）
病理学检查及其他指标
及时剖检：对死亡动物的主要脏器进行肉眼观察， 重点检查主要脏器的大小、外观、色泽、有无充血、 出血、水肿等；
（2） 配制方法的选择：等浓度稀释法和等 容量稀释法。
等浓度稀释法：将受试化学物配制成一 种浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给 受试化学物的体积不同，剂量越高，所用的 体积越大；剂量越低，所用的体积越小。
等容量稀释法
将受试化学物配制成不同浓度，不同剂量 组实验动物单位体重所给受试化学物的体 积相同，剂量越大，受试化学物配制的浓 度越高。
为避免操作误差，等容量稀释的传统方法 常用1︰K系列稀释法（K=各组剂量比值）。
根据实验设计要求确定最高剂量组所需受 试化学物的浓度和总体积，配制母液。
（3）等容量稀释法配制6个剂量组的染毒溶液
➢ 求母液浓度C1 绝对致死剂量为2500mg/kg，最低中毒剂
量为800mg/kg，每10g体重小鼠灌胃0.2mL C1=2500mg/kg×10g/0.2mL＝125mg/mL ➢ 求公比r
《食品毒理学》经口急性毒性试验
《食品毒理学》经口急性毒性试验一、实验目的和要求掌握给药方法；了解一次或24小时内多次给予受试化学物后，动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试动物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死量。
二、主要仪器设备实验动物：成年昆明系实验小鼠（SPF级别）。
器材：注射器（0.25，1，2，5ml）、吸管（0.1，0.2，0.5，1，2，10ml）、容量瓶（10，25，50ml）、烧杯（10，25，50ml）、滴管、灌胃针12号、动物体重秤、解剖剪刀、镊子、手术手套，口罩。
试剂：受试化合物（氯化钡溶液，20mg/mL）。
三、实验原理氯化钡是强电解质，可完全电离出钡离子，导致钡离子在小鼠血液内部引发急性低钾血症，故小鼠会出现肌无力和发作性软瘫，心肌应激性减低，各种心律失常和传导阻滞，由于肌无力，严重中毒的小鼠还会出现呼吸困难乃至死亡等症状。
四、实验内容1．健康动物的选择和性别鉴定。
2．实验动物称重、编号和随机分组。
3．受试化学物溶液的配制。
4．小鼠灌胃操作技术。
（1）预实验，取小白鼠、称重、随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液，摸索小鼠接近100%和0%死亡的剂量范围。
（2）小鼠随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液。
小鼠灌胃法：将钝头的12号注射针（适用于小鼠），安装在适当容积的注射器上，吸取所需的受试物溶液，左手抓住动物双耳后至背部的皮肤（小鼠仅抓住耳后、颈部的皮肤，用无名指、小手指和大鱼际肌将其尾根部压紧），将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者。
注意使动物的上消化道固定成一直线。
右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避开牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。
若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即可深入至胃部。
如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免操作穿破食管，甚至误人气管，导致动物立即死亡。
急性经口毒性试验 上下增减剂量法
附件12急性经口毒性试验上下增减剂量法Acute Oral Toxicity Test Up-and Down Procedure1 范围本方法规定了急性经口毒性试验上下增减剂量法（上下法）的基本原则、要求和方法。
本方法适用于化妆品原料安全性毒理学检测。
2 试验目的急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。
试验结果可作为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其他毒理学试验剂量的依据。
3 定义3.1 急性经口毒性acute oral toxicity一次或在24 h内多次经口给予实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。
3.2 经口半数致死量（LD50）oral medium lethal dose经口一次给予受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重接受受试物的重量(mg/kg或g/kg)来表示。
3.3 延迟死亡delayed death设定的给药间隔（通常为48 h）内不引起受试动物死亡或出现濒死状态，但在14 d的观察期间内出现死亡。
3.4 剂量级数因子dose progression factor也称为剂量步进因子。
是指主试验中，当前剂量的一只动物存活或死亡时，下一只动物染毒剂量增加或降低倍数。
剂量级数因子建议为1/（估计的剂量-反应曲线斜率）的反对数。
默认的剂量级数因子为3.2，即0.5（1/2）的反对数。
3.5 限值剂量limit dose受试动物进行急性经口毒性试验的上限剂量（2000 mg/kg或5000 mg/kg）。
3.6 逆转reversal是指在某个染毒剂量下观察动物无反应，在下一个染毒剂量下观察动物有反应的现象，反之亦然（也就是前一个动物发生反应，后一个动物无反应）。
因此，一对不同的动物染毒反应情况产生一个逆转。
3.7 名义受试动物量nominal sample size是指受试动物的总数量按下列规则减去一定量动物数：（1）减去染毒序列开始时出现相同反应的最后1只动物之前的受试动物数量，（2）或减去第一次发生逆转的一对动物之前受试动物的数量。
实验二 经口急性毒性LD50测定
实验二经口急性毒性LD50测定实验二经口急性毒性LD50测定一、试验目的1. 熟悉急性毒性LD50测定的剂量设计2. 掌握小鼠灌胃技术3. 掌握改进寇氏法计算LD50的方法二、试验原理选择健康的实验动物，依据LD50计算的设计原则，将实验动物随机分成数个染毒组和一个阴性对照组。
一次或24小时内多次给予实验组受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因。
根据受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。
三、材料和试剂1. 实验动物:健康成年小鼠60只，雌雄各半2. 器材:灌胃针(小鼠适用)、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、分析天平、台秤、外科手术剪、镊子3. 受试物:(敌百虫或克佰威)4. 染色剂:苦味酸酒精饱和溶液、0.5%品红溶液四、实验内容1. 实验动物称重、编号和随机分组2. 染毒剂量设计及试剂配制3. 小鼠灌胃染毒技术4. 毒性反应的观察及LD50计算五、试验方法(一)预实验1. 探索剂量范围先找出100%与0%的致死量(或阳性反应的剂量)为实验的上、下限剂量(Dmax和Dmin)。
据经验或文献定出一个估计量，取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax;如降低一档剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax。
以次类推，找出Dmin。
2. 剂量分组一般染毒组数(G)以5-8组为宜，组间剂量比值为r。
在确定组数后，按下列公式计算r。
1/(G-1)r = (Dmax/Dmin) 3. 受试物溶液的配制配制等比浓度的敌百虫溶液，并使每只动物在给药容量上相等(如0.5ml/20g)。
剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6,0.9，设5个剂量组。
经口急性毒性试验
经口急性毒性试验经口急性毒性试验是一种广泛使用的实验室动物毒性试验，它通常用于评价新化合物、生物制品等物质的毒性，以及评估安全使用剂量的潜在结果。
这篇文章将介绍经口急性毒性试验的背景、方法、注意事项和限制。
背景方法经口急性毒性试验通常使用小鼠、大鼠、兔子或其他哺乳动物，动物必须年龄相似、体重相当且健康状态良好。
实验中使用不同剂量的测试物质来确定它们在动物体内的毒性。
通常，实验中使用的剂量量较低，但有时也会使用较高的剂量以便观察更加严重的毒性反应。
其实验流程如下：1.选取合适且健康的实验动物，检查其体内和体外健康状况；2.确定实验剂量，并将物质以食物、水、灌胃管等方式交予动物口服；3.观察动物的外观、行为和症状，记录观察结果；4.在一定时间后继续观察动物，在必要时应用适当的护理；5.按照实验协议的规则处理动物，以确保其安全。
注意事项在进行经口急性毒性试验时，需要注意以下几点：1.确定剂量：需要选择适当的实验剂量，以确保所测试的物质不会对动物造成过度毒性反应，且可以解释毒性的分级。
2.采取恰当的动物保护措施：对于实验过程可能造成疼痛或不适的情况，应采取适当的保护措施，例如提供充足的饮水、合适的饲料和温度环境。
3.保证实验数据质量：为了确保实验数据质量，需要在实验过程中跟踪记录、分析数据，并确定实验的有效性以及物质毒性分级的准确性。
限制虽然经口急性毒性试验是一种有效的毒性评估方法，但它有一定的局限性。
经口急性毒性试验只能评估物质对动物的急性毒性反应，而对于慢性毒性、免疫毒性或生殖毒性等长期影响，它并不能提供完整的信息。
此外，每种动物特征不同，对物质的敏感程度也会不同，因此难以将实验结果适用于不同品种的动物和不同的物质评估。
因此，除经口急性毒性试验外，还需要完善其他的毒性评估方法以更准确地评估药物、化学物质和其他物质的毒性。
(整理)经口毒性实验
急性经口毒性试验Acute Oral Toxicity Test1 范围本方法规定了动物急性经口毒性试验的基本原则、技术和要求。
本方法适用于评价化学品的急性毒性作用。
2 规范性引用文件OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 401. Feb. 1987 ) OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 425. Feb. 2001 ) USEPA OPPTIS Health Effects Guideline (Series 870.1100 June 1996)3 试验目的3.1 检测化学品对实验动物的急性毒性作用和强度。
3.2 为亚急(慢)性等毒性试验提供剂量选择的依据。
3.3 试验结果可作为化学品急性毒性分级和标签标识。
４定义4.1 急性经口毒性(Acute Oral Toxicity): 一次或在24h内多次经口给予实验动物受试样品后，动物在短期内出现的健康损害效应。
4.2 经口半数致死剂量（Oral Median Lethal Dose）: 经口一次或24h内多次经口给予受试样品后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重接受受试样品的质量(mg/kg bw或g/kg bw)来表示。
4.3 剂量-反应关系(Dose-response Relationship)：表示化学毒物的剂量与某一群体中质效应的发生率之间的关系。
5 试验基本原则以经口灌胃法给予各试验组动物不同剂量的受试样品，每组用一个剂量，染毒剂量的选择可通过预试验确定。
染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。
试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行大体解剖。
本方法主要适用于啮齿类动物的研究，但也可用于非啮齿类动物的研究。
6 试验方法6.1 受试样品的处理受试样品应溶解或悬浮于适宜的赋形剂中，（不溶性固体或颗粒状物质研磨、过100目筛）建议首选水或食用植物油（如玉米油）作溶剂，也可考虑使用其它赋形剂（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）等配成混悬液；不能配制成混悬液时，可配制成其它形式(如糊状物等)，但不能采用具有明显毒性的有机化学溶剂。
急性经口毒性实验课件
实验环境： 无菌、无 尘、恒温 恒湿
实验人员： 具备相关 资质和技 能
实验方案： 制定详细 的实验计 划和操作 流程
01
02
03
04
实验操作
准备实验材料：实验动物、试剂、仪器等 实验分组：将实验动物分为对照组和实验组 给药方式：采用灌胃、注射等方式给药 观察指标：记录实验动物的体重、行为、生理指标等 数据分析：对实验数据进行统计分析，得出结论 实验报告：撰写实验报告，总结实验结果和结论
识
02
实验过程中必须佩 戴防护设备，如手 套、口罩、护目镜
等
03
实验过程中必须遵 守操作规程，避免 操作失误导致的危
险
04
实验结束后，必须 对实验场所进行彻 底清洁和消毒，避
免污染环境
实验误差控制
01 实验设计：合理设计实验方案， 减少误差来源
02 实验操作：严格按照操作规程 进行，避免操作失误
0
01. 急性经口毒性实验概述 02. 急性经口毒性实验操作步骤 03. 急性经口毒性实验注意事项 04. 急性经口毒性实验应用
实验目的
01 评估化学物质对生物体的急性毒性作用 02 确定化学物质的毒性剂量和毒性作用机制 03 为化学物质的安全使用提供科学依据 04 保护生物和环境免受有毒化学物质的危害
2
实验方法：采用动物模型进行实验， 如小鼠、大鼠等
3
实验结果：观察动物的行为、生理 指标、病理变化等
4
评价标准：根据实验结果，评估药 物的安全性，为药物研发提供依据
食品添加剂安全性评价
01
急性经口毒性实验是评价食品添加剂安全性的重要方法之一
02
实验方法：通过给实验动物喂食不同剂量的食品添加剂，观察其毒性反应
急性经口毒性试验
急性经口毒性试验2.3.1.1 目的（1)检测消毒剂对实验动物的急性毒性作用和强度。
（2)为亚急（慢）性毒性等试验提供剂量选择的依据。
2.3.1.2 实验动物小鼠或大鼠任选一种，雌雄各半。
小鼠体重18g～22g，大鼠体重180g～220g，根据不同的计算LD50方法，选用适当的动物数量。
2.3.1.3 试验分组如应用概率单位-对数图解法计算LD50，随机分为5个～6个剂量组。
通常最高剂量组的动物死亡率应≥90%，最低剂量组动物死亡率应≤10%。
可先以较大的组距较少量动物进行预试，找出其粗略致死剂量范围，然后再设计正式试验的剂量分组。
2.3.1.4 操作程序（1）动物的准备：试验前，一般禁食过夜，不限制饮水。
（2）受试物的配制：常以水或食用植物油为溶剂配制成溶液，或采用0.5%羧甲基纤维素配制成混悬液。
灌胃给予受试物的最大容量，小鼠不超过0.2ml/10g体重，大鼠不超过1.0ml/100g体重。
（3）染毒方法：用灌胃方式将受试物一次给予动物。
若受试物毒性很低，一次灌胃容量太大，可在24h内分成2次～3次给予，其总剂量作为一日剂量计算。
（4）染毒后观察动物的中毒表现和死亡数及死亡时间，并对死亡动物和观察期满处死动物进行尸体解剖，肉眼观察，发现有异常的组织或脏器，尚需进一步作组织病理学检查。
观察时间14d。
2.3.1.5 LD50的计算方法根据给受试物后14d内的各剂量组动物死亡率计算LD50(半数致死剂量)。
2.3.1.5.1概率单位-对数图解法：（1）根据各剂量组动物死亡率，从表2-9 中查各组的概率单位。
因死亡率为 0% 和 100%的概率单位，与所试动物数有关，故需另在表2-10中查找。
例如：对死亡率为45%的概率单位，可查表2-9。
先在表的左侧纵标目上找到 40，而后在表的上行横标目处找到5，两者交叉点处的4.87，即为45% 的概率单位。
又如:某组用 10 只实验动物，如果全部存活(死亡率为0%)，查表2-10，其概率单位为 3.04。
化学品 丽斑麻蜥急性经口毒性试验-最新国标
化学品丽斑麻蜥急性经口毒性试验1范围本文件规定了化学品对丽斑麻蜥急性经口毒性试验的测定方法，包括试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等的基本要求。
2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
2.1半数致死剂量median lethal dose在急性经口毒性试验中，引起50%的供试生物死亡时的供试物剂量，用LD50（mg/kg 体重）表示。
2.2急性毒性acute toxicity是指生物体短时间（天）暴露于某种化学物质中产生的明显不良反应。
在本试验中，丽斑麻蜥急性经口毒性用半数致死剂量(LD)来表示，即在特定时间内（7d）导致50%数量的50供试蜥蜴死亡的供试物浓度。
2.3供试物test substances试验中需要测试的物质。
2.4化学品chemicals化学品是指各种元素组成的纯净物和混合物，无论是天然的还是人造的。
3方法原理将不同浓度的供试物以一次经口灌注的方法暴露给丽斑麻蜥，以7d为一试验周期，记（mg/kg体重）录丽斑麻蜥的死亡情况，确定50%试验丽斑麻蜥死亡时的供试物剂量，用LD50表示。
4试剂和材料4.1供试生物试验应选择同一种群、体长、体重和年龄相似的丽斑麻蜥（Eremias argus）成年蜥蜴。
试验用丽斑麻蜥体重变异系数不超过平均体重的20%。
试验前至少需要驯养7d，驯养条件和照明条件与试验时的条件一致。
驯养期间死亡率小于5%，且生长状态符合物种生长规律视为健康良好，可用于后续试验。
雌性丽斑麻蜥用于试验不能在其繁殖期。
丽斑麻蜥驯养环境参数见附录A。
4.2试剂丽斑麻蜥的饮水可使用自来水。
配置不同浓度供试物溶液过程中的溶剂一般选择水（GB/T6682-2008规定的实验室一级用水）或者食用油（例如玉米油）。
试验用水的pH值应为6.5-8.5。
试验期间水质保持恒定。
对于难溶于水或者油的供试物，可使用少量对丽斑麻蜥毒性小的有机溶剂助溶,例如乙醇，二甲基亚砜等，其中有机溶剂用量一般不得超过0.1mL/L(0.1%)，用前应了解溶剂的毒理学特性。
急性经口毒性实验
死亡率及LD50计算
死亡率
根据实验动物接触毒物后的死亡数量，计算死亡率。死亡率=死亡动物数/总动物 数×100%。
LD50计算
采用概率单位法或图解法计算LD50（半数致死量），即引起50%实验动物死亡 的毒物剂量。通过比较不同毒物的LD50值，可评价其急性毒性大小。
数据统计与分析
数据整理
将实验数据进行整理，包括动物 种类、性别、体重、接触毒物剂 量、中毒症状、死亡时间等。
药物剂量范围确定
通过分析实验动物在急性经口毒性实验中的反应，可以确定药物的安全剂量范 围，为临床试验和药物治疗提供参考。
在环境科学中的应用
环境污染物风险评估
急性经口毒性实验可用于评估环境污染物对生物体的毒性作 用，为环境风险评估和污染物治理提供依据。
生态毒理学研究
通过分析实验动物在急性经口毒性实验中的反应，可以了解 环境污染物对生态系统的潜在影响，为生态毒理学研究提供 基础数据。
统计分析
采用适当的统计方法对数据进行 分析，如描述性统计、方差分析 、回归分析等，以揭示毒物剂量 与中毒症状及死亡率之间的关系 。
结果解释
根据统计分析结果，对实验数据 进行解释和讨论。比较不同毒物 或不同剂量下的中毒表现和死亡 率，分析可能的影响因素和机制 。
05
实验注意事项与讨论
实验操作规范
动物选择
急性经口毒性实验通过给予实验动物不同剂量的化学物质，观察其产生的毒性效应，从而 建立剂量-反应关系，确定化学物质的毒性阈值和致死剂量。
生物体对化学物质的吸收、分布和代谢
化学物质进入生物体后，会经过吸收、分布和代谢等过程，这些过程会影响化学物质在生 物体内的浓度和停留时间，从而影响其毒性效应。
实验动物的选择
毒理学 实验二、急性经口毒性试验
LD50测定方法 霍恩（Horn)法（剂量递增法） ——查表 改进寇氏法(karber’s method) 几率单位法
13
改进寇氏法(karber’s method) 基本要求：
每个染毒剂量组的实验动物数量相同； 各剂量组组距呈等比级数； 死亡率呈正态分布； 最低剂量组死亡率<20%，最高剂量组死亡率>80%。
实验二、经口急性毒性试验
1
急性毒性的概念
急性毒性（acute toxicity）是指实验动物一次或 24h内多次接触一定剂量外源化学物后在短期内所产生的健 康损害作用及致死效应。
观察指标包括一般行为和外观改变、大体形态变化 以及死亡效应。
2
（二）急性毒性试验的目的
1.求出致死剂量及其他急性毒性参数，并根据 LD50对急性毒性进行分级。 2.观察中毒表现、毒作用强度和死亡情况，初步 评价毒物的毒效应特征。 3.为后续的毒性试验提供接触剂量和观察指标选 择的依据。 4.为毒理学机制研究提供线索。
i——相邻两剂量组之对数剂量差值； Xk——最大剂量的对数值； p——死亡率； q——存活率（q = 1－p）； ∑p——各剂量组死亡率总和； m —— lgLD50； n——每组动物数。
最后求反对 数得LD50及 可信区间
22
表6-3 我国农药的急性毒性分级
级别
经口LD50
经皮LD50
吸入LC50
18
19
表1. 急性毒性实验原始记录
受试物名称： 动物物种品系： 染毒途径：
受试物性状： 动物来源： 室温：
受试物来源：
组别 剂量 动物 性 体重 染毒量 染毒 体征及 死亡 体重 (mg/kg) 编号 别 (g) (ml) 时间 出现时间 时间 记录(g)
经口毒性急性试验实验报告
经口毒性急性试验实验报告一、实验目的本次经口毒性急性试验的主要目的是评估测试物质通过口腔摄入后在短时间内对实验动物可能产生的毒性反应，包括但不限于观察中毒症状、确定致死剂量范围以及了解毒性作用的特点和机制，为后续的毒性评估和安全性研究提供基础数据。
二、实验材料1、测试物质本次实验所选用的测试物质为_____，其纯度为_____，物理状态为_____。
2、实验动物选用健康的_____种属动物，体重范围在_____至_____克，雌雄各半，共_____只。
实验动物均来自具有资质的供应商，并在实验前经过适应性饲养，确认健康状况良好。
3、饲料和饮水实验动物在实验期间给予标准的饲料和清洁的饮用水，自由摄取。
4、实验器材包括灌胃针、电子天平、计时器、观察笼等。
三、实验方法1、剂量设计根据预实验结果和相关文献资料，设置了_____个剂量组，分别为_____、＿____、＿____等，同时设立了阴性对照组（给予等量的生理盐水）。
2、动物分组将实验动物随机分为不同的剂量组和对照组，每组动物数量为_____只，确保分组的随机性和均衡性。
3、染毒途径采用一次性经口灌胃的方式进行染毒，灌胃体积根据动物体重进行计算，控制在_____毫升/千克体重。
4、观察指标及时间在染毒后的_____小时内，对实验动物进行密切观察，观察指标包括一般行为表现（如活动、进食、饮水、毛发状态等）、神经系统症状（如抽搐、震颤、昏迷等）、呼吸系统症状（如呼吸急促、呼吸困难等）、消化系统症状（如呕吐、腹泻等）以及死亡情况。
观察时间点分别为染毒后_____分钟、＿____小时、＿____小时等。
四、实验结果1、中毒症状在不同剂量组中，实验动物表现出了不同程度的中毒症状。
低剂量组动物可能仅出现轻微的活动减少、食欲不振等症状；中剂量组动物可能出现呕吐、腹泻、呼吸急促等症状；高剂量组动物则可能出现抽搐、昏迷甚至死亡。
2、死亡情况随着剂量的增加，实验动物的死亡率逐渐升高。
经口急性毒性试验
2
试剂和ห้องสมุดไป่ตู้料
1.受试动物 健康小鼠50只 2.器材 玻璃匀浆器、注射器、容量瓶、烧杯、灌胃器、电子天平（感量 0.1g） 3.试剂 氯硝柳胺悬浮液
华南农业大学兽医学院 公司名称/LOGO
公司名称/LOGO 华南农业大学兽医学院
4
方法
（一）健康动物的选择和性别鉴定（见实验一） 急性毒性试验选择动物的体重要求：小鼠18-22g，大鼠180-200g。 （二）动物称重、编号与随机分组（见实验一） （三）剂量分组 经预试求出受试化学物的大致致死范围（0-100%），按等比级数设计5-7个 剂量组。
华南农业大学兽医学院 公司名称/LOGO
8
公司名称/LOGO 华南农业大学兽医学院
9
六．LD50计算方法 １、平均致死量法（又名寇氏法） 此法计算LD50较为简便，但实验要符合下列要求： （１）每个实验组动物数要相同； （２）各组剂量要按等比级数分组； （３）最大剂量的死亡率最好为100%或与之接近，最小剂量的死亡率最好为0%或与 之接近，计算公式如下： LD50=Log-1[Xm-i(Σp-0.5)]式中: xm——最大剂量的对数值 i——组距，即相邻两组剂量对数剂量之差 p——各剂量组死亡率（死亡率均用小数表示）
2 0 1 5
动物毒理学实验
实验二 经口急性毒性试验
华南农业大学兽医学院 公司名称/LOGO
1
目的和原理
急性毒性试验的目的是推测新药对人的急性毒性的强弱。同时，它可以为长期 毒性试验、生殖毒性试验、致突变试验等试验设计提供剂量选择依据和有关毒 性信息，还可以推测受试药物毒性发生的速度和持续时间，与半数有效量(ED50) 比较判断新药的安全系数。因此，急性毒性试验对了解新药的毒性是非常必要 的。 急性毒性试验的原理是动物一次或24h内多次接触外源化学物后，观察急性毒性 反应及其程度，中毒死亡的原因及特征，了解受试动物毒性反应的剂量-反应关 系，求出LD50。
实验三 经口急性毒性实验
上一张
下一张
开 始
结 束
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
3. 实验步骤
4.中毒症状：染毒后认真观察中毒发生、 4.中毒症状：染毒后认真观察中毒发生、发展 中毒症状 过程，中毒特点和毒作用靶器官。 过程，中毒特点和毒作用靶器官。观察期间每 3d，称重一次， 3d，称重一次，对死亡动物和实验结束时的存 活动物全部称重，作大体病理学检查， 活动物全部称重，作大体病理学检查，取病变 组织做病理组织学检查，为亚慢性、 组织做病理组织学检查，为亚慢性、慢性和其 他毒性试验剂量和观察指标选择提供参考依据， 他毒性试验剂量和观察指标选择提供参考依据， 并按表3 做好记录。 并按表3-1做好记录。
上一张
下一张
开 始
结 束
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
5. 注意事项
正确捉拿动物，防止咬伤。 正确捉拿动物，防止咬伤。 防止操作者中毒。 防止操作者中毒。 剩余受试化学物应在教 师指导下销毁。 师指导下销毁。
上一张
下一张
开 始
结 束
南京晓庄学院
将外源化合物经口染毒求出LD 将外源化合物经口染毒求出LD50是毒理学研 究中重要的基本技术和基础工作之一。通过试验， 究中重要的基本技术和基础工作之一。通过试验， 学习外源化合物急性毒性试验设计原则，掌握大、 学习外源化合物急性毒性试验设计原则，掌握大、 小鼠经口灌胃技术 求算LD 的方法。 经口灌胃技术和 小鼠经口灌胃技术和求算LD50的方法。 急性毒性试验的原理是动物一次或24h内多 急性毒性试验的原理是动物一次或24h内多 24h 次接触外源化合物后，观察急性毒性反应 急性毒性反应及其程 次接触外源化合物后，观察急性毒性反应及其程 中毒死亡的原因及特征， 度，中毒死亡的原因及特征，了解受试动物毒性 反应的剂量-反应关系，求出LD50。 反应的剂量-反应关系，求出LD50。 剂量 LD50
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
大小鼠标记方法（单色法n>10）
双 色 法
大小鼠标记方法（双色法n<10）
红色表示十位数： 头部染红色为10
左前肢为20
左腰部为30 黄色表示个位数。 大小鼠标记方法（双色法n>10）
其它标记方法
烙印编号法：
体内埋号编号法：
耳孔编号法：
挂牌编号法：
实验动物的随机分组
表1 动物随机分组表 动物号 随机数字 除6余数 分组 动物号 随机数字 除6余数 分组 1 97 1 A 16 27 3 C 2 74 2 B 17 7 1 A 3 24 0 F 18 36 0 F 4 67 1 A 19 7 1 A 5 62 2 B 20 51 3 C 6 42 0 F 21 24 0 F 7 81 3 C 22 51 3 C 8 14 2 B 23 79 1 A 9 57 3 C 24 89 5 E 10 26 2 B 25 73 1 A 11 42 0 F 26 16 4 D 12 53 5 E 27 76 4 D 13 32 2 B 28 62 2 B 14 37 1 A 29 27 3 C 15 32 2 B 30 66 0 F
组 别 A B C D 1 2 7 26 4 5 9 27 14 8 16 鼠 号 17 10 20 19 13 22 23 15 29 25 28
E
F
12
3
24
6 11 18 21 30
具体方法如下：继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F组的现有动物数，即： 56/7(7为A组现动物数)整除，余数为0，将A组第7只动物(25号)调配给D组；下一 个：50/6(6为A组现有动物数)余2，将A组第2只动物(4号)调配给D组；接下来 26/6(6为C组现有动物数)余2，将C组第2只动物(9号)给D组。余类推，最后调整
分组成表3所示。雌性动物也按上法分组，然后将雌、雄动物合组进行试验。
表3 调配后30只动物随机分组
组别 A 1 14 鼠号 17 19 23 组别 D 4 9 鼠号 25 26 27
B
C
5
7
8
16
10
20
13
22
15
29
E
F
2
3
6
11
12
18
24
21
28
30
实验动物染毒途径和方法（示教）
常用的染毒途径： 经口染毒 经呼吸道染毒
面向自己,沿着门牙左 边滑入
气管
By LASCO
食道
经皮染毒
注射途径染毒
吸收速率：
静脉注射>吸入染毒>肌肉注射>腹腔注射>皮下注射> 经口染毒>皮内注射>其他染毒途径如经皮等
受试物的配制
1、受试化学物的量取
(1)、称量法--固体化学物
(2)、吸量法--液体化学物
2、受试化学物的稀释
(1)、等浓度Rat）
实验动物的称重
大、小鼠秤的感应量需在0.1g以下。 同一组内、同性别动物体重差异应
小于平均体重的10%。
不同组间同性别动物体重均值差异
应小于5%。
急性毒性实验一般使用体重为18-
22g的小鼠或/和180-220g大鼠。
实验动物编号的标记方法
颜料涂擦被毛编号法（常用于大小鼠）： 红色：0.5%中性红或品红溶液 黄色：3-5%苦味酸溶液（水） 80-90%苦味酸酒精饱和溶液 咖啡色：2%硝酸银
10m1)、容量瓶(10，25，50ml、烧杯(10，25，50ml)、滴管、
灌胃针(大鼠、小鼠适用)、电子天平(感应量1/10000g)、动物 体重秤、外科剪刀、镊子。
(三) 试剂
受试化学物为氟化钠(NaF，分析纯)，苦味酸酒精饱和液 或其它染色剂。
实验动物的选择(提问)
实验动物的性别鉴定
♀
♂
规定：
余数：1、2、3、4、5、6分别对应A、B、C、D、E、F 组
实验动物调配
按上法分组后，A组有动物7只，B组7只，C组6只，D组与E组各2只，F 组6只。为了使每组动物数均为5只，需要根据随机分配的原则再选出2
只A组和1只C组动物给D组。B组选出2只，F组选出1只给E组。
表2 初步分组结果
n—为设计的剂量组数；
求得值后以最低剂量组的剂量值加上一个即是第二个剂 量组的对数剂量，依次推至最高剂量组，查各自反对数 及得出各组剂量的真实值。
小鼠氟化钠经口急性毒性测量
啮齿类动物急性毒性中毒主要观察内容 （1）
系统器官 中枢神经系统及神经肌肉系统 观察及检查项目 行为 动作 对各种刺激的反应 大脑及脊髓反射 肌肉紧张力 瞳孔大小 分泌 呼吸系统 鼻孔 呼吸性质和速率 流鼻涕 弛缓、困难、潮式呼吸 中毒后一般表现 改变姿态、叫声异常、不安、安静 震颤、运动失调、麻痹、惊撅、强制性动作 易兴奋、被动、缺乏知觉、知觉过敏 减弱、缺乏 强直、弛缓 扩大或缩小 流泪、出汗
黑色：煤焦油的酒精溶液
单 色 法
大小鼠标记方法（单色法n<10）
单色法标记原则：单色 法编大于10的号码时，
我们规定顺时针旋转，
后一位必需大于前一位 数，例如：可以编，12，
13，14……19，但不能
编10，11，20，21，22， 30，31，32，33，等， 以此类推。100以内最 大能编89号。
实习内容
试验动物的选择和性别鉴定。
试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 急性毒性试验常用染毒途径和方法。
急性毒性反应的观察和LD50计算。
实验材料
(一) 实验动物：健康成年小鼠或大鼠若干只。
(二) 器材 注射器(O.25，1，2，5ml)、吸管(0.1，0.2，0.5，1，2，
一般是采用少量动物(2~3只为一组)，拉大组距，逐渐
缩小，找出受试物0%和100%死亡剂量。
正式试验
经预试验求出受试化学物的致死剂量范围(即死亡率10%90%的剂量范围)，再以下式求出正式试验的剂量组距(i) 值。
logLD90 - logLD10 i n -1
i—表示相邻的两个剂量组，剂量对数之差或相邻两组剂 量比值的对数值；
实验二 经口急性毒性试验 Acute Oral Toxicity Test
Dept. of Toxicology School of Public Health Xinjiang Medical University
目的要求
掌握实验动物的常用染毒途径和方法。 掌握半数致死浓度的测定方法和结果评定。
(2)、等容量稀释法
寇氏法
Karber法或平均致死量法，是依据剂量对数与死亡率呈S型
曲线所包括的面积推导出死亡率为50%的剂量；
此法简单，准确率高，但实验设计要求每个染毒组实验动
物数相同，各计量组距呈等比级数，死亡率呈常态分布，最 低剂量组死亡率<20%，最高剂量组>80%。
预实验
目的是为了确定正式实验的剂量范围。