双波长薄层色谱扫描法测定甲基红含量(精)
薄层扫描法(TLCS)
1.1 Kubelka—Munk理论
Kubelka—Munk理论说明了固定相的散射参数对斑点中物质的 浓度与吸光度间关系的影响。该理论的基本方程式如下。 （1）薄层色谱斑点的透射率：
上式是Kubelka—Munk理论描述薄层色谱斑点透光率的最基本公 式。式中Sx是薄层板的散射参数，它与固定相的种类、粒度、薄 层厚度及涂布均匀程度有关。其数值大小直接影响薄层色谱斑点 的吸光度—浓度曲线偏离Beer定律的情况。只有已知薄层板准确 的SX值，才能正确地运用曲线校直法进行薄层扫描定量分析。薄 层色谱斑点中物质的含量包含于a及b两个参数中。
不规则斑点，用直线式扫描定量，即使光带长度适宜，定量误差仍然 较大，因为所得峰面积还与扫描方向有关。
综上所述，直线式扫描较适用于规则圆形薄层色谱斑点及条状薄层 色谱斑点的定量分析。所能测定斑点的大小，以仪器的光带长度为上限。 例CS—930薄层扫描仪，出射狭缝最大长度(高度)为6mm，只能测定小 于6mm的斑点。 在作直线式扫描叫，光带的步进距离ΔY也影响蜂面 积。斑点小应选小步进距离，选择适宜，能降低定量误差。有关TLC及 HPTLC板的光带长度及步进距离的具体选择见表。
反射式
2.1 扫描方式选择
(1) 直线扫描 直线式扫描是用一光带先照射在薄层板的一端，而后作直线 运动至另—端。在作直线式扫描时，实际上是光带固定，薄层板相 对于光带作直线运动。
在作直线扫描时，光带的长度对扫描后所得的色诺峰峰面积 影响很大，下图说明了光带越长，所得的色谱蜂面积越小，反之 则峰面积越大。光带太长，检测灵敏度低，光带太短，光带只通 过斑点的一部分，所得的蜂面积，不能真实反砍斑点的吸收情况。 因此，正常扫描时，应使光带长度略大于斑点直径。在多斑点扫 描的，光带长度略大于最大斑点直径。为了降低定量误差，应使 标准品斑点的直径与检品斑点的直径尽量接近。样品斑点为带状 时，光带长度应约为样带的2/3。
薄层色谱法详解
薄层板的活化：硅胶板于105-110℃烘30分钟，氧化铝板于150-160℃烘4小时，可得活性的薄层板。
点样
点样
点样方式：分为手动点样和自动点样。手动点样主要器具为微量毛细管、微量注射器等。自动点样采用半自动点样仪或全自动点样仪，按预设程序自动点样。手动点样灵活方便，常用于各种TCL鉴别中，器具以微量毛细管最常用。仪器的自动点样准确性好，常用于薄层扫描法的含量测定。
影响展开的因素
制备离心色谱仪
A相对湿度的影响
B溶剂蒸汽的影响(a展开室的饱和b预吸附)
C温度的影响
D展距的影响与分离度仅正比与展距的平方根
显色
A光学检出法
a自然光(400~800nm)
b紫外光(254nm或365nm)
c荧光一些化合物吸收了较短波长的光，在瞬间发射出比照射光波长更长的光，而在纸或薄层上显出不同颜色的荧光斑点(灵敏度高、专属性高)
B蒸汽显色法
显色
多数有机化合物吸附碘蒸气后显示不同程度的黄褐色斑点，这种反应有可逆及不可逆两种情况，前者在离开碘蒸气后，黄褐色斑点逐渐消退，并且不会改变化合物的性质，且灵敏度也很高，故是定位时常用的方法；后者是由于化合物被碘蒸气氧化、脱氢增强了共轭体系，因此在紫外光下可以发出强烈而稳定的荧光，对定性及定量都非常有利，但是制备薄层时要注意被分离的化合物是否改变了原来的性质。
显色方法a喷雾显色：显色剂溶液以气溶胶的形式均匀的喷洒在纸和薄层。b浸渍显色：挥去展开剂的薄层板，垂直的插入盛有展开剂的浸渍槽中，设定浸板及抽出速度和规定在显色剂中浸渍的时间。
薄层色谱法测定标准操作规程
薄层色谱法测定标准操作规程目的：建立薄层色谱法测定标准操作规程。
（《中华人民共和国药典》2010版附录）范围：适用于薄层色谱法的测定。
职责：检验员，QC主管。
内容：1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。
等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
2 仪器与材料：2.1 薄层板：2.1.1市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，按固定相种类又可分为硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、微晶纤维素、硅藻土、氧化铝、聚酰胺薄膜等薄层板。
2.1.2 自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板，自制薄层板系指手工（或借助涂布器）将固定相涂布于玻璃板或其他适宜载板上使成为有一定厚度的均匀薄层。
常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、微晶纤维素等，其粒径一般为10~40um。
2.2 点样器：采用手动、半自动或全自动点样器材，手动点样时一般采用微量毛细管。
2.3 展开容器：应使用适合薄层板大小的平底或双槽薄层色谱专用展开缸，并配有严密的盖子。
水平展时使用专用水平展开缸。
2.4 显色与显色装置按各品种项下规定。
可采用喷雾显色、浸渍显色或蒸气熏蒸显色，喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用玻璃容器或适宜的展开缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。
2.5 检视装置为装有可见光或紫外光（254nm及365nm）光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。
3 操作方法：3.1 薄层板制备：3.1.1 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30min，聚酰胺薄膜不需活化。
铝基片薄层板或聚酰胺薄膜均可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的涂层不得有破损，如在储放期间被空气中杂质污染，使用前可用甲醇、二氯甲烷与甲醇的混合溶剂在展开容器中上行展开预洗，取出，晾干，活化后使用。
双波长薄层色谱扫描法测定蒲公英总黄酮含量(精)
【摘要】目的：建立蒲公英中总黄酮的含量测定方法。
方法：应用双波长薄层色谱扫描法，以芦丁为对照品，测定波长λs=278nm，参比波长λR=356nm，测定蒲公英中总黄酮的含量。
结果：回归方程为Y=873851X+80.593，r=0.999，RSD=2.6％，蒲公英总黄酮含量为4.236%。
结论：用该方法测定蒲公英中总黄酮的含量，操作简便，结果可靠，重复性好。
【关键词】双波长薄层色谱扫描法总黄酮芦丁蒲公英属菊科类为植物蒲公英，是常用的中药类抗菌、抗真菌的药物，具有清热解毒、利胆保肝、医治乳痈疔疮等药理作用。
主要成分含有蒲公英甾醇、绿原酸、总黄酮等成份，现已制成注射剂、片剂、糖浆等不同剂型，广泛应用于人与畜各科多种感染性炎症，均有良好疗效。
这种中草药价廉物美，药源丰富，应当进一步开发，做到物尽其用。
针对其总黄酮的含量，我们采用双波长薄层色谱扫描法对其进行测定，现报道如下。
1 仪器与试剂1.1 仪器CS930型双波长飞点式薄层扫描仪（日本岛津）；高硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂生产）；旋转蒸发仪RE52A型（上海亚荣生化仪器厂）；5ul微量进样器（上海医用激光仪器厂）。
1.2 试剂芦丁对照品（中国药品生物制品检定所）；蒲公英（产地为内蒙，由内蒙古成大方圆有限公司饮片分装）；其它试剂均为分析纯。
2 薄层分析与鉴定2.1 对照品溶液的配置［1］精密称取芦丁对照品25mg，置50ml容量瓶中，以85%乙醇溶解并加至刻度，精密吸取10ml置20ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，备用。
2.2 供试品溶液的制备精密称取内蒙蒲公英（提前粉碎研磨成细粉）10g，用13倍量药材的85%乙醇加热回流2次，每次1小时［2］，回收蒸发乙醇至干（旋转蒸发仪），残渣加入50ml热水溶解，先用石油醚（50，50，30ml）萃取3次，要下层液（除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素），再用正丁醇（50，50，30ml）萃取3次，要上层液（除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质），合并正丁醇提取液用85%乙醇30ml溶解，过滤至50ml容量瓶中，再用85%乙醇洗涤滤纸至刻度，摇匀。
双波长测定实验报告
一、实验目的1. 掌握双波长分光光度法的原理和应用；2. 学习使用紫外-可见分光光度计进行定量分析；3. 通过实验测定待测物质的含量。
二、实验原理双波长分光光度法是一种基于物质在特定波长处吸光度与浓度成正比关系的定量分析方法。
该方法通过选择两个特定波长，分别测定待测物质在这两个波长下的吸光度，从而消除共存物质对测定结果的干扰。
实验原理如下：A1 = ε1c1λ1A2 = ε2c2λ2式中，A1、A2分别为待测物质在波长λ1、λ2处的吸光度；ε1、ε2分别为待测物质在波长λ1、λ2处的摩尔吸光系数；c1、c2分别为待测物质在波长λ1、λ2处的浓度。
通过联立上述两个方程，可以消去ε1、ε2，得到待测物质的浓度：c = (A1λ2 - A2λ1) / (λ1λ2)三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外-可见分光光度计、移液管、容量瓶、锥形瓶、比色皿、洗耳球等；2. 试剂：待测物质标准溶液、参比溶液、溶剂等。
四、实验步骤1. 准备标准溶液：准确移取一定体积的待测物质标准溶液，加入适量的溶剂，定容至一定体积，配制成一系列浓度梯度的标准溶液；2. 配制参比溶液：准确移取一定体积的参比溶液，加入适量的溶剂，定容至一定体积；3. 测定吸光度：在紫外-可见分光光度计上，选择两个特定波长，分别测定标准溶液和参比溶液的吸光度；4. 数据处理：根据实验数据，绘制吸光度-浓度曲线，通过线性回归得到线性方程，代入待测样品的吸光度，计算待测样品的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度-浓度曲线；2. 线性回归：对吸光度-浓度曲线进行线性回归，得到线性方程；3. 待测样品浓度计算：代入待测样品的吸光度，根据线性方程计算待测样品的浓度。
六、实验讨论1. 实验误差分析：实验误差主要来源于仪器误差、操作误差和试剂误差。
在实验过程中，应尽量减小误差，提高实验结果的准确性；2. 双波长选择：在双波长分光光度法中，选择合适的波长对消除共存物质干扰至关重要。
药品薄层色谱扫描法
药品薄层色谱扫描法一目的：制定薄层扫描检查法，规范薄层扫描测定的操作。
二适用范围：适用于薄层扫描法的测定。
三责任者：品控部。
四正文：1.简述薄层扫描法指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点或对经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定。
2.仪器2.1 仪器构成薄层扫描法所用的仪器薄层扫描仪。
该仪器主要同光源、单色器、样品室、薄层板台架、检测器、记录仪及数据处理系统等部分组成。
光源：色括氘灯（200～370nm）、钨灯（370～700nm）或氙灯，有的还加有汞灯，光源的转换通过转动反射镜而完成。
单色器：包括光栅与夹缝。
入口夹缝固定，出口夹缝可根据需要调整其高度与宽度。
由光源发出的复合光，经光源反射镜反射后进入入口夹缝，经光栅色散后由准直镜反射到出口夹缝得到单色光，再经平面镜向下反射到薄层板上。
薄层板台架及驱动装置：仪器中的薄层板台架可完成薄层板的X轴和Y轴方向的移动。
检测器：包括监测用光电倍增管及反射测定用与透射测定用的光电倍增管。
反射测定时，光束照射到薄层板上斑点以前的光，一部分被石英窗板反射由监测光电倍增管接受，另一部分照射到斑点，除部分光被样品吸收后作为吸收度信号。
透射测定时，由透射光电倍增管代替反射光电倍增管，它的输出信号与监测光电倍增管的输出信号之比，经对数转换后得到透射测定的吸收度信号。
数据处理：设定适当参数，采集检测器的吸收度信号进行积分计算，通常仪器上还具有对信号作不同处理的功能。
如背景校正、提高信噪比、工作曲线直线化、平滑基线等，按要求进行数据的再处理，然后送至打印机，打印谱图及报告。
2.2 仪器性能检定2.2.1 仪器波长准确度的检查用低压汞灯在200～700nm波长范围内以荧光方式对空白的硅胶薄层板扫描零吸收图谱，图谱中峰位波长与相应已知波长的差值即为波长准确度，汞灯谱线的已知波长为253.6、313.0、334.2、365.0、404.7、435.8、546.1、578.0nm，有的仪器规定波长准确度应不大于±8nm。
薄层扫描法(TLCS)
理想的空白薄层板(简称空白板)的单位薄层厚度的吸光系数K＝0。 事实上，一般空白板K≠0。为了消除此影响，通常在薄层扫描中都是 以空白板为基准，测定相对透光率及相对反射率来计算薄层色谱斑点的 吸光度。 (a)在透射法中薄层色谱斑点的吸光度：
上式中i及i0分别为透过斑点及空白板的透射光光强，I0为照射光光强。 T与T0分别为斑点及空白板的透射率。
薄层扫描法
一、.双波长薄层色谱扫描仪 1 光学系统
主要包括光源(氘灯与钨订)、单色器(入口狭缝．出口狭缝、光栅等)．以 及检测器(监测光电倍增管、反射和透射测定光电倍增管)组成。
2 主要功能
(1)可进行物质的紫外-可见原位吸收光谱测绘 紫外-可见吸收光谱既可作为物质定但的参考，又可提供待测物质的最 大吸收波长，以便进行色谱测定。 仪器在记录吸收光谱时，可提供两种方式。一种为标准方式(NORMAL)， 这种方式记录光谱进行波长扫描时，所测得光谱数据，一方面存入文件中， 同时也输出到记录器上。另一种方式为差示方式(DIFFERENCE)．它可将 测得光谱数据减去文件中存贮的光谱数据，并将其差值只输入到记录器中， 而不存贮在文件里。 要想得到校正过基线的正确光谱，应这样进行：先以标准方式，在巳展 开过的荡层板上无斑点的空白位置上，进行一次波长扫描，将基线光谱(它 反映空白板对各种技长光的吸收情况)存入文件中(亦可输出到记录器去)。 然后再用差示方式对待测斑点进扣波长扫描，就能得到扣除薄层空白板吸 收的待测物质的正确光谱图。 (2) 多通道自动扫描 仪器提供的程序方式(PROGRAM)，可完成冬通道 的自动扫描。程序方式中有七种参数供使用。它们包括波长1和波长2，用 来分别设定测量波长和参比波长，可以进行双波长扫描。
(2)锯齿式扫描 用截面积为正方形的光束照射薄层板，光束的运动轨迹为矩齿形。
薄层色谱扫描法
7、系统适用性试验
（1）检测灵敏度：指用于限量检查时，被测成分能 被检出的最低量。 （2）分离度：用于限量检查或含量测定时，要求定 量峰与相邻峰之间有较好的分离度,应大于1.0。 （3）重复性：指同一薄层板上同一供试品溶液相同 浓度的数个斑点，扫描结果的偏差。不显色直接扫 描，相对标准偏差应不大于3.0%，显色后扫描，相 对标准偏差应不大于5.0%。
3、测量方式
(1)透射法：测定照射光穿透样品斑点后 光的吸收情况。
(2)反射法：样品斑点对照射光的反射情 况进行测定的方法。
4、测光形式
(1)单波长扫描：使用一种波长的光束对薄层进行扫 描。适用于分离度好，背景干扰小的薄层色谱。 (2)双波长扫描：用测定波长和参比波长分别扫描薄 层后，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差，可 减少分离度欠佳的组分间的相互干扰，并减少薄层 板的背景干扰，能显著改善基线的平稳性。操作时 应选择待测斑点无吸收或最小吸收的波长作为参比 波长。
6、展距:一般为8-15cm 在这种展距内得不到分离的组分,增加展距并非 解决问题的办法,不仅延长了分离的时间,而且会引 起斑点扩散反而降低分离度,因此,展距内分离不理 想时,不能一味的增加展距,而是可以优化展开剂,以 得到理想的结果。
由此可见,展开时必须控制条件一致，得到重现的 分辨率最佳的色谱，才能得到可靠的定性定量结果。
(三)展开
1、预饱和 薄层各个部分对展开剂蒸气的预吸附程度不同,会影响色 谱分离，因此当用展开剂时，先将薄层及展开缸进行预饱和, 以便得到重现的色谱图。 2、相对湿度：50%-60%较适宜 相对湿度过大影响薄层活度,吸附剂吸附能力下降,分离 效果不理想。 3、温度:一般18-25℃较适宜 温度变化会影响组分在两相间的分配,被分离物质的Rf值 应在0.2-0.8较适合,Rf值太大,斑点易扩散,扫描重现差,Rf 值太小,斑点没有完全展开,扫描结果不能代表真实浓度。
薄层扫描法测定药物的含量
薄层扫描法测定药物的含量一、实验目的1.掌握处理样品的方法和思路。
2.掌握薄层扫描法测定药物含量的原理和实验操作。
二、仪器与试剂1.仪器Mettler AL204电子天平双波长扫描仪HHS型电热恒温水浴锅分液漏斗规格：125mL、250mL容量瓶规格：10mL、25mL、50mL 、100mL刻度移液管规格：1mL、2mL、5mL、10mL圆底烧瓶规格：50mL、100mL、250mL硅胶G（薄层层析用）玻璃板铺板器锥形瓶规格：250mL 滤纸研钵球形冷凝管2.试剂甲醇乙醇二氯甲烷醋酸等均为分析纯三、实验原理薄层扫描法是以一定波长的光照射展开后的薄层色谱板，测定其对光的吸收或所发出的荧光，进行定量分析的方法。
其原理与双波长分光光度计相似，从光源发出的光，通过两个单色器分光后，成为不同波长的λ1和λ2，斩光器使它们交替地照射到薄层上，经透射或反射后分别由光电倍增管接收，再输出电讯号，由对数放大器变换成吸光度，记录下的讯号是λ1和λ2两波长吸光度之差。
选择斑点中化合物的吸收峰波长作为测定波长、选择化合物吸收光谱的基线部分，即化合物无吸收的波长作为参比波长。
用一定波长的光束对薄层板进行扫描，记录其吸光值随展开距离的变化，得到薄层色谱扫描曲线，曲线上的每一个色谱峰相当于薄层上的一个斑点，色谱峰高或峰面积与组分的量之间有一定的关系，比较对照品与样品的峰高或峰面积，可得出样品中待测组分的含量。
四、实验内容实验题目：益新颗粒（人参皂苷Rg1）保肝灵颗粒（黄芪甲苷）脑复清胶囊（阿魏酸）胃舒胶囊（盐酸小檗碱）扑感片（马来酸氯苯那敏）颈复康冲剂（芍药苷）1.处理样品方法的设计要求：选择任意一项实验题目，查阅文献资料，设计合理的提取分离纯化样品的实验方法（至少两种方法）。
2.薄层扫描法测定主成分含量要求：从设计的多种处理样品方法中选择最优方案，此方案所处理的样品，选择适宜展开系统展开后，采用薄层扫描法测定时，杂质对主成分无干扰，得到满意的含量测定结果。
薄层色谱法测定操作规程
标准操作规程目的：为规范薄层色谱法测定检查操作，确保实验的准确性，依据《中国药典》2020版四部和《药品生产质量管理规范》（2010年修订），特制定本规程。
适用范围：适用于用薄层色谱法进行鉴别、检查或含量测定。
依据：《中国药典》2020版第四部57页0502“薄层色谱法”《药品生产质量管理规范》2010年修订责任：检验员负责本规程的实施。
内容：1.简述：薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。
2.TLC的原理：通常所说的薄层色谱一般是指吸附薄层色谱，可根据TLC所采用的涂层材料性质的不同，其物理化学原理也有所不同，可分为：2.1 吸附薄层色谱：采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层，利用吸附剂表面对不同组分吸附能力的差别达到分离的方法。
最为广泛的方法由于混合物中的各个组分对吸附剂（固定相）的吸附能力不同，当展开剂（流动相）流经吸附剂时，发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有不同的移动速度，最终得以在固定相薄层上分离。
2.2 分配薄层色谱：由硅胶、纤维素铺成薄层，不同组分在指定的两相中有不同的分配系数。
2.3 离子交换薄层色谱：由含有交换活性基团的纤维素辅成薄层。
2.4 排阻薄层色谱：利用样品中分子大小不同，受阻情况不同加以分离，也称凝胶薄层。
3.仪器与材料：3.1 薄层板：按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。
固定相中可加入黏合剂、荧光剂。
硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、G、H表示含或不含石膏黏合剂。
F254为在紫外光254nm波长下显绿色背景的荧光剂。
按固定相粒径大小分为普通薄层板(10～40μm)和高效薄层板(5～10μm)。
TLC法测定甲基红的含量
实验五双波长薄层扫描法测定甲基红的含量一. 实验目的1.1掌握薄层色谱扫描法的基本原理。
1.2熟悉薄层色谱扫描仪的基本操作。
二. 实验原理用于定量的薄层色谱仪称为薄层色谱扫描仪或薄层色谱光密度计，用此种仪器对薄层上被分离的物质进行直接定量分析的方法称为薄层色谱扫描法。
分析的基本原理是用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射到薄层斑点上，对整个斑点进行扫描，用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的变化达到定量分析的目的。
本实验根据甲基红的极性，在硅胶板上用混合展开剂展开，然后采用岛津CS-9301型双波长薄层色谱扫描仪，可直接在薄层板上对甲基红斑点进行定量分析。
三、实验内容1试剂及仪器：试剂：甲基红、无水乙醇、环己烷、醋酸乙酯、冰醋酸（均为分析纯）；硅胶G（60型）（青岛海洋化工集团公司出品国家药典会监制）仪器：CS 9301PC薄层扫描仪（岛津）2对照品溶液制备：取甲基红，加无水乙醇制成每l ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
3 未知试样溶液：内含甲基红。
4点样：吸取供试品溶液5μl或10μl、对照品溶液5μl与10μl，分别交叉点于同一硅胶G 薄层板上（10×10cm）。
5展开：以无水环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸=6:6:0.5为展开剂，展开，取出，晾干。
6 测定与计算：光源：钨灯扫描方式：反射法吸收扫描，波长：(s=525nm，λR=700nm。
扫描速度：20mm/秒计算：测量未知浓度样品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，直线回归，外标法两点校正。
三思考题1本操作中哪些地方易产生误差？如何减少实验误差？2点样时应注意什么？样品和对照品为什么要交叉点样？附薄层色谱法要求薄层色谱法，系将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。
待点样、展开后，与适宜的对照物按同法在同板上所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。
薄层色谱扫描仪检定规程
薄层色谱扫描仪检定规程1 说明1.1 薄层色谱扫描仪是在经过薄层色谱分离后，对薄层板上分离出来的在紫外和可见光区有光吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行光扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。
根据仪器的不同可以进行反射吸收测定、透射吸收测定或荧光测定；可采用单波长测定或双波长测定；扫描方式有线性扫描或锯齿扫描。
Kubelka-Munk方程是薄层色谱扫描法的依据。
1.2 常见的薄层扫描仪大都附有线性化器、背景补偿、背景抑制和自动背景抑制等附件，用以消除背景的影响。
并附有荧光附件，可以扫描荧光斑点的强度，与对照品斑点比较，测定荧光物质的含量。
1.3 本规程主要参照山东省地方检定规程薄层色谱扫描仪（初稿）、上海市药品检验所CS-910薄层扫描仪检定法和湖北省药品检验所CS-930型双波长薄层扫描仪检验方法（暂行）制定。
2 检定项目和技术要求2.1 波长准确度≤±5nm2.2 背景漂移≤±0.5Abs2.3 基线噪声反射和透射方式误差均≤0.02Abs2.4 重复性误差RSD≤2.0%3 检定条件3.1 环境条件3.1.1 室温10~30℃，相对湿度小于65%。
3.1.2 室内不应有影响检定的强电场、强磁场和强烈气流。
3.2 检定设备与试剂3.2.1 笔式低压汞灯3.2.2 空白标准薄层板3.2.3 甲基红指示液（中国药典1995年版附录）4 检定方法4.1 波长准确度的测定4.1.1 测定条件光谱测定方式：光源选用低压汞灯，光源选择置汞灯位置，采用小狭缝，负高压用手动控制，荧光测定方式。
4.1.2 测定方法将空白薄层板置样品台上，对准光束，用波长设定键调波长至436nm处，调整低压汞灯位置，使读数出现最大值，用手动负高压调小读数，使记录笔在适当位置，然后扫描200~700nm的汞灯谱线，并打印出峰位置，与汞灯规定的谱线253.6、313.0、334.0、334.2、365.0、404.7、435.7、546.1和579.0nm的波长比较。
双波长薄层色谱扫描法测定甲基红含量(精)
五、思考题
• 1. 解释甲基红、甲基橙及甲基黄剂时，各组份
的位置，并说明各Rf 值不同的原因。 • 2. 本实验的误差来源主要在哪里？实验过程应注意 哪些？
（3）测量：
A. 将薄层板固定于平台，接通电源开启主机，主机系
统自检后进入 CS-930 型薄层色谱扫描仪分析系统。
B. 对欲测斑点进行原位光谱扫描，根据斑点的吸收光谱选择 最大吸收峰波长作为λ1；选择斑点吸收光谱的基线部分，
既该化合物无吸收处的波长为样品的参考波长λ2。
C. 选择测试分析参数。 D. 确定光斑起始位置，进行色谱扫描。 E. 对色谱峰进行查找编辑。 F. 做工作曲线。 G. 执行定量，测得试样中甲基红的含量。 H. 确定要输出的内容与格式，打印分析实验报告。
三、仪器与试剂
• 仪器：
• 岛津 CS-930 型薄层色谱扫描仪具有多功能、自动化程度较 高的特点，它包括主机及 DR-2 数据处理机两部分。CS-930 型薄层色谱扫描仪与常见光密度法仪器不同之处在于它具有 双波长、锯齿扫描、校正曲线线性化器和背景校正的功能。 • （1）双波长法：试样斑点最大吸收波长定为样品波长λ1 ， 试样斑点不吸收的波长定为参考波长λ2 。选用双波长法可以 提高灵敏度、平滑基线和增强校正曲线的线性。 • （2）锯齿扫描法：用以消除因斑点形状不规则、大小不等 以及浓度分布不均匀带来的测量误差。 • （3）校正曲线线性化：校正曲线线性化器校正光束被薄层 板上的吸附剂所分散，致使测定的吸光度不与物质含量成正 比偏离线性的影响。 • （4）背景补偿：补偿背景吸收光的影响。
• 试剂：
• 甲基红 分析纯 0.1%（60% 乙醇溶液）
• 甲基橙 • 甲基黄 • 试 样 指示剂规格 0.06%（水溶液） 指示剂规格 0.06%（95% 乙醇溶液） 内含甲基红0.1%，甲基橙 0.06% 和甲基黄0.06%
【免费下载】实验九 双波长分光光度法测定复方制剂含量
实验器材：
试药：磺胺嘧啶对照品，甲氧苄啶对照品，复方磺胺嘧啶片，安替比林对照品，安痛 定注射液。
仪器：紫外分光光度仪，石英比色皿，100mL 容量瓶，移液管。
实验内容与方法：
（一）复方磺胺嘧啶片（Compound Sulfadiazine Tablets） 本品每片中含磺胺嘧啶（C10H10N4O2S）应为 0.360~0.440g；含甲氧苄啶（C14H18N4O3） 应为 45.0~55.0mg。 [处方]
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根保通据护过生高管产中线工资敷艺料设高试技中卷术资配，料置不试技仅卷术可要是以求指解，机决对组吊电在顶气进层设行配备继置进电不行保规空护范载高与中带资负料荷试下卷高总问中体题资配，料置而试时且卷，可调需保控要障试在各验最类；大管对限路设度习备内题进来到行确位调保。整机在使组管其高路在中敷正资设常料过工试程况卷中下安，与全要过，加度并强工且看作尽护下可关都能于可地管以缩路正小高常故中工障资作高料；中试对资卷于料连继试接电卷管保破口护坏处进范理行围高整，中核或资对者料定对试值某卷，些弯审异扁核常度与高固校中定对资盒图料位纸试置，.卷编保工写护况复层进杂防行设腐自备跨动与接处装地理置线，高弯尤中曲其资半要料径避试标免卷高错调等误试，高方要中案求资，技料编术试5写交卷、重底保电要。护气设管装设备线置备4高敷动调、中设作试电资技，高气料术并中课3试中且资件、卷包拒料中管试含绝试调路验线动卷试敷方槽作技设案、，术技以管来术及架避系等免统多不启项必动方要方式高案，中；为资对解料整决试套高卷启中突动语然过文停程电机中气。高课因中件此资中，料管电试壁力卷薄高电、中气接资设口料备不试进严卷行等保调问护试题装工，置作合调并理试且利技进用术行管，过线要关敷求运设电行技力高术保中。护资线装料缆置试敷做卷设到技原准术则确指：灵导在活。分。对线对于盒于调处差试，动过当保程不护中同装高电置中压高资回中料路资试交料卷叉试技时卷术，调问应试题采技，用术作金是为属指调隔发试板电人进机员行一，隔变需开压要处器在理组事；在前同发掌一生握线内图槽部纸内故资，障料强时、电，设回需备路要制须进造同行厂时外家切部出断电具习源高题高中电中资源资料，料试线试卷缆卷试敷切验设除报完从告毕而与，采相要用关进高技行中术检资资查料料和试，检卷并测主且处要了理保解。护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
薄层色谱检查法标准操作规程
目的：规范薄层色谱法检验操作规程，保证检验的质量。
范围：适用于本厂用薄层色谱法检查的物料及产品。
责任：质量控制室人员。
内容：1薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。
2仪器与材料2.1薄层板：按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。
固定相中可加入黏合剂、荧光剂。
硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、G、H表示含或不含石膏黏合剂。
F254为在紫外光254nm波长下显绿色背景的荧光剂。
按固定相粒径大小分为普通薄层板10～40μm和髙效薄层板 5-10μm保证色谱质量的前提下，可对薄层板进行特别处理和化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板。
固定相颗粒大小一般要求粒径为10〜 40pm。
玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。
2.2点样器：一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。
2.3展开容器：上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。
水平展开用专用的水平展开缸。
2.4显色装置：喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸溃显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。
2.5检视装置：为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。
2.6薄层色谱扫描仪：系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。
3操作方法3.1薄层板制备3.1.1市售薄层板：临用前一般应在110℃活化30分钟。
双波长薄层色谱扫描法测定复方黄芪胶囊中黄芪甲苷的含量
双波长薄层色谱扫描法测定复方黄芪胶囊中黄芪甲苷的含量张丽;佟巍;龚海英;李灵芝
【期刊名称】《武警医学院学报》
【年(卷),期】2008(17)6
【摘要】【目的】建立双波长薄层色谱扫描法测定复方黄芪胶囊中黄芪甲苷含量的方法。
【方法】采用薄层扫描法测定黄芪甲苷含量，展开剂为氯仿-甲醇-水（14：7：2），扫描波长：λS：530nm，λR：700nm。
【结果】薄层色谱斑点清晰，黄芪甲苷在1．000～7．000μg／ml范围内线性关系良好，加样回收率97．31％，RSD=1．85％（n=6）。
【结论】以双波长薄层色谱扫描法测定复方黄芪胶囊中黄芪甲苷的含量，方法灵敏，准确。
【总页数】3页(P492-494)
【关键词】复方黄芪胶囊;黄芪甲苷;薄层扫描色谱
【作者】张丽;佟巍;龚海英;李灵芝
【作者单位】武警医学院药化教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R914.4
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薄层色谱扫描法
薄层色谱扫描法标准操作规程1 简述薄层色谱扫描法是指用一束一定波长、一定强度的紫外或可见光对薄层板进行扫描，测定薄层板上的样品斑点对光的吸收强度或斑点经激发后所产生的荧光强度。
所得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、检查和含量测定的方法。
薄层色谱扫描法可分为吸收法和荧光法。
扫描时测定薄层板上的方法称为荧光法。
吸收法测定可采用反射法或透射法两种方式进行扫描。
反射法是指测定样品斑点对照射光的反射情况进行测定的方法；透射法则是测定照射光穿透样品斑点后光的吸收情况。
荧光法测定均采用反射法。
透射法大多用于凝胶色谱的扫描，非透明介质薄层板的扫描主要为反射式吸收法或荧光扫描法。
薄层色谱扫描可使用单波长和双波长进行测定。
单波长薄层扫描适合于分离度好，背景干扰小的薄层色谱。
双波长薄层扫描时用测定波长和参比波长分别扫描层板，测定样品斑点在两波长下的吸收度之差，可减少分离度欠佳的组分间的相互干扰，并减少薄层板的背景干扰，操作时应选择待测斑点无吸收或最小吸收的波长作为参比波长。
根据扫描时光束的轨迹不同，波长色谱扫描又可分为线性扫描和锯齿扫描。
线性扫描时一般采用一束比待测斑点略宽的狭窄光带沿展开方向作单向等速扫描，它适合于形状较规则斑点的扫描。
锯齿扫描是用使用微小正方形光束沿展开方向扫描的同时，在垂直于展开方向进行反复式扫描，扫描过程中光束的运动轨迹呈锯齿形或矩形，它对于形状不规则或分布不均匀的斑点扫描重复性较好，但扫描速度较慢。
在采用反射式吸收法测定时，入射光照射到薄层板上，一部分照射过薄层板，一部分光发生反射，此外还产生大量的散射光。
因此，波长扫描定量一般不符合Lambert-Beer 定律，其样品量与反射光强度符合Kubelka-Munk 方程：(1-R) 2/R=2.303 £C/S其中R为反射光强，&为样品吸收系数，C为样品浓度，S为薄层板散射系数。
由此方程可知，样品吸收系数和薄层板散射系数均可影响波长扫描反射法定量的工作曲线方程。
双波长薄层扫描法测定西灵生白口服液中黄芪甲甙的含量
双波长薄层扫描法测定西灵生白口服液中黄芪甲甙的含量
曹红;刘云
【期刊名称】《现代仪器使用与维修》
【年(卷),期】1998(000)006
【摘要】采用双波长薄层扫描法测定西灵生白口服液中黄芪甲甙的含量，样品直
接采用水饱和的正丁醇萃取，进行薄层层析。
展开剂：氯仿－甲醇－水（１３：６：２）；波长：λｓ＝５３０ｎｍ，λＲ＝７００ｎｍ。
黄芪甲甙的平均回收率为９５．５２％（ＲＳＤ＝２．２９％，ｎ＝６），并对方法的稳定性进行了考察，方法灵敏度高，重现性好，结果满意。
【总页数】4页(P41-43,53)
【作者】曹红;刘云
【作者单位】总后卫生部药品仪器检验所;总后卫生部药品仪器检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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四、实验步骤
（1）点样：取一块硅胶板（10 × 20 cm），用定量毛细管
吸取甲基红、甲基橙、甲基黄及试样各 1 µ L，分别点在
硅胶板上，点样间距为 1 ~ 1.5 cm。 （2）展开：将点好的薄层板放置在密闭的展开槽中，用展 开剂进行展开（一般需 30 min左右），斑点间隔 2 cm左 右即可。然后取出薄层板将展开剂挥发至干。
三、仪器与试剂
• 仪器：
• 岛津 CS-930 型薄层色谱扫描仪具有多功能、自动化程度较 高的特点，它包括主机及 DR-2 数据处理机两部分。CS-930 型薄层色谱扫描仪与常见光密度法仪器不同之处在于它具有 双波长、锯齿扫描、校正曲线线性化器和背景校正的功能。 • （1）双波长法：试样斑点最大吸收波长定为样品波长λ1 ， 试样斑点不吸收的波长定为参考波长λ2 。选用双波长法可以 提高灵敏度、平滑基线和增强校正曲线的线性。 • （2）锯齿扫描法：用以消除因斑点形状不规则、大小不等 以及浓度分布不均匀带来的测量误差。 • （3）校正曲线线性化：校正曲线线性化器校正光束被薄层 板上的吸附剂所分散，致使测定的吸光度不与物质含量成正 比偏离线性的影响。 • （4）背景补偿：补偿背景吸收光的影响。
到薄层斑点上，对整个斑点进行扫描，用仪器测量通过斑
点或被斑点反射的光束强度的变化达到定量分析的目的。 • 本实验根据试样中甲基红、甲基橙、甲基黄有不同的 极性，在硅胶板上用混合展开剂展开，可将它们分开。然 后采用岛津 CS-930 型双波长薄层色谱扫描仪，可直接在 薄层板上对甲基红斑点进行定量分析。
（3）测量：
A. 将薄层板固定于平台，接通电源开启主机，主机系
统自检后进入 CSLeabharlann 930 型薄层色谱扫描仪分析系统。
B. 对欲测斑点进行原位光谱扫描，根据斑点的吸收光谱选择 最大吸收峰波长作为λ1；选择斑点吸收光谱的基线部分，
既该化合物无吸收处的波长为样品的参考波长λ2。
C. 选择测试分析参数。 D. 确定光斑起始位置，进行色谱扫描。 E. 对色谱峰进行查找编辑。 F. 做工作曲线。 G. 执行定量，测得试样中甲基红的含量。 H. 确定要输出的内容与格式，打印分析实验报告。
五、思考题
• 1. 解释甲基红、甲基橙及甲基黄在硅胶板上以正丁
醇、无水乙醇和环己烷混合物为展开剂时，各组份
的位置，并说明各Rf 值不同的原因。 • 2. 本实验的误差来源主要在哪里？实验过程应注意 哪些？
双波长薄层色谱扫描法测 定甲基红含量
一、实验目的
学习利用岛津 CS-930 型薄层色谱扫描仪测定 甲基红含量的原理与方法，初步了解 CS-930 型 薄层色谱扫描仪的结构与使用。
二、实验原理
• 用于定量的薄层色谱仪称为薄层色谱扫描仪或薄层
色谱光密度计，用此种仪器对薄层上被分离的物质进行直
接定量分析的方法称为薄层色谱扫描法。其分析的基本原 理是用一束长宽可以调节的一定波长、一定强度的光照射
• 试剂：
• 甲基红 分析纯 0.1%（60% 乙醇溶液）
• 甲基橙 • 甲基黄 • 试 样 指示剂规格 0.06%（水溶液） 指示剂规格 0.06%（95% 乙醇溶液） 内含甲基红0.1%，甲基橙 0.06% 和甲基黄0.06%
• 无水乙醇 分析纯 • 展开剂 无水正丁醇﹕无水乙醇﹕无水环己烷 = 3﹕1﹕4