葡萄籽原花青素液相检测方法
四种原花青素含量测定方法比较
四种原花青素含量测定方法比较一、本文概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，因其强大的抗氧化和生物活性，近年来在营养学、食品科学、医药学等领域受到了广泛关注。
其中，四种主要的原花青素——儿茶素（Catechin）、表儿茶素（Epicatechin）、没食子儿茶素（Gallocatechin）和表没食子儿茶素（Epigallocatechin）的含量测定对于评估食品营养价值、研究药物作用机制以及监控产品质量具有重要意义。
本文旨在比较和分析目前常用的四种原花青素含量测定方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法（UV-Vis）、荧光光谱法（Fluorometry）和质谱法（MS），以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
通过比较这些方法的准确性、灵敏度、操作简便性以及成本效益等方面的优劣，我们期望能为科研人员和企业选择最适合的原花青素含量测定方法提供指导。
二、方法概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，具有强效的抗氧化性能，对多种疾病具有预防和治疗作用。
由于其生物活性的重要性，对原花青素含量的准确测定显得尤为重要。
目前，常用的原花青素含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法、薄层色谱法（TLC）和毛细管电泳法（CE）。
这些方法各有优缺点，适用于不同的样品类型和实验条件。
高效液相色谱法（HPLC）具有高分辨率、高灵敏度、高重现性等优点，可以同时分离和测定多种原花青素。
但是，该方法需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员，且样品处理过程繁琐，分析时间较长。
紫外可见分光光度法是一种简便、快速的测定方法，适用于大量样品的初步筛选。
然而，该方法只能测定总原花青素的含量，无法区分不同种类的原花青素，且易受样品中其他色素的干扰。
薄层色谱法（TLC）是一种基于原花青素在薄层板上的分离和显色进行测定的方法。
液相色谱-质谱分析葡萄籽提取物中原花青素
液相色谱-质谱分析葡萄籽提取物中原花青素
苏叶萍;杜平;金建秀;许巧霞;刘洪海
【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2010(29)11
【摘要】目的采用快速高分离度液相色谱-串联质谱(RRLC-MSMS)法分析葡萄籽提取物中原花青素的化学成分.方法葡萄籽提取液经HPD400A大孔吸附树脂纯化后,采用RRLC-MSMS法分离,并根据质谱信息分析其化学成分.结果分离检测出葡萄籽提取物中原花青素的3种单体,初步分离鉴定出9种二聚体、5种三聚体和1种四聚体.结论采用RRLC-MSMS法可以较好地分离、分析葡萄籽提取物中原花青素的主要成分.
【总页数】3页(P1479-1481)
【作者】苏叶萍;杜平;金建秀;许巧霞;刘洪海
【作者单位】石河子大学药学院,832002;新疆中基天然植物纯化高新技术研究院,乌鲁木齐,830088;新疆中基天然植物纯化高新技术研究院,乌鲁木齐,830088;石河子大学药学院,832002;新疆中基天然植物纯化高新技术研究院,乌鲁木齐,830088【正文语种】中文
【中图分类】R286%R927.1
【相关文献】
1.木瓜多聚原花青素降解产物的液相色谱-电喷雾质谱分析 [J], 姜力;朱宏涛;王军民;张颖君;华燕;赵平
2.岩茶水库岭肉桂中原花青素的高效液相色谱-串联质谱法分析 [J], 侯冬岩;刁全平;吴寒;李铁纯;回瑞华;王顺明
3.葡萄籽中原花青素的液相色谱质谱分析 [J], 杨成对;宋莉晖;汪聪慧
4.葡萄籽提取物原花青素的高效液相色谱分离分析 [J], 黄宏南;黄健文
5.基于液相色谱-质谱联用技术定性定量分析黑豆种皮中可溶型和结合型花青素 [J], 顿倩;彭瀚;麦琦莹;邓泽元;张兵
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
葡萄籽原花青素液相检测方法
原花青素原花青素原花青素原花青素HPLC初步方案初步方案初步方案初步方案一．实验目的：分析样品原花青素纯度，了解其中杂质成分。
二．实验方案：1. 方案一：Waters 公司高效液相色谱，C18柱(4.6 ×250 mm) , 检测波长为280 nm，进样量10μL ,柱温为室温。
待测液均经0.45μm 孔径的滤膜过滤。
流动相及流速见下表(A —10 %乙酸,B —重蒸水)：2. 方案二：（间接法定量）（原理类似铁盐催化比色法）(1) 标准曲线：称取前花青素标准品10mg 溶于10ml甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5ml 置于10ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。
各取1ml 测定。
(2) 试样测定: 将正丁醇与盐酸按95 ：5的体积比混合后,取出6.0ml 置于具塞锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵[NH4Fe(SO4) 2·12H2O]溶液（用浓度为2mol/L 盐酸配成2%(w/v)的溶液）和1.0ml 经0.45μm滤膜过滤的试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,待进行高效液相色谱分析。
(3)液相色谱参考分析条件: 色谱柱Shimadzu Shim –pak CLC –ODS 4.6 ×150mm;柱温35 ℃;检测器:紫外检测器,检测波长525nm流动相: 水:甲醇:异丙醇:10 %甲酸= 73 :13 :6 :8 流速0.9ml/min。
注：该方法使用的水解方法与我们当前使用的铁盐催化水解原花青素方法稍有差异，哪种效果更好，可进行预实验加以比较。
3．方案三：（反相高效液相色谱）标样：原花青素标准品色谱柱：Hypersi ODS-2 ，150 × 4.6mm 5μm；流动相：A：0 . 2%(V/V) 乙酸；B：乙腈；流量：1ml /min；进样量：5μl;柱温：30℃；检测波长：280nm.洗脱梯度：以乙腈的百分比浓度表示(B液溶于A液)0 ～5 % ，10min；5%～20%，10～20min；20%～40%，20～40min；40%～50%，40～50min；50%～5%，45～50min；5%～0，50～60min。
葡萄籽提取物原花青素的高效液相色谱分离分析
葡萄籽提取物原花青素的高效液相色谱分离分析
黄宏南;黄健文
【期刊名称】《中华医学写作杂志》
【年(卷),期】2001(008)024
【摘要】葡萄籽提取物原花青素(Grape Seed Extract Proanthocyanidin，GSEP)是广泛存在于植物界的属于双黄酮衍生物的天然多酚化合物，实验证明，它是一种比VC、VE更强的自由基消除剂，具有极强的抗氧化特性，同时还具备保护心血管和预防高血压、抗肿瘤、抗辐射、抗突变、皮肤保健及美容、抗过敏及抗炎、改善视觉功能等作用。
目前在国外应用非常广泛。
是一种颇具开发前景的保健品。
【总页数】2页(P2794-2795)
【作者】黄宏南;黄健文
【作者单位】福建省卫生防疫站，350001;福建医科大学，350004
【正文语种】中文
【中图分类】R-331
【相关文献】
1.以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量 [J], 吴巍;程秀凤;王春辉;崔文熹;傅荧荧
2.高效液相色谱法同时测定葡萄籽提取物中儿茶素、原花青素B1和原花青素B2的含量﹡ [J], 倪慧敏;汤洋;张言;杜倩;刘雨;孙鑫波
3.葡萄籽提取物原花青素对UVA照射HaCaT细胞表达VEGF及PEDF mRNA影响的研究 [J], 史云容;张峻岭;康元
4.葡萄籽提取物原花青素在蛋糕及面包中的应用研究 [J], 王丽莎;唐雪燕;焦婷婷
5.葡萄籽提取物原花青素在蛋糕及面包中的应用研究 [J], 王丽莎;唐雪燕;焦婷婷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法
葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法葡萄籽提取物-原花青素被誉为“最强效的自由基清除剂”，其抗氧化能力是VC的20倍，VE的50倍。
也是唯一能透过血脑屏障的抗氧化剂，因此在促进皮肤新陈代谢，分解黑色素，以及提高机体免疫力，延缓衰老方面的应用极为广泛。
葡萄籽提取物由原花青素、儿茶素、表儿茶素、没食子酸等多酚类物质组成的，由于原花青素的成分极其复杂，目前的研究实验中还无法提供原花青素的标准品，因此Bate-Smith 和Porter法只能测定葡萄籽提取物中原花青素的相对含量。
一、Bate-Smith法、Porter法测定葡萄籽原花青素含量西安源森生物实验室对Bate-Smith法和Porter法测定原花青素相对含量实验进行了研究：（一）Bate-Smith法测定葡萄籽原花青素含量【实验目的】由于目前没有原花青素的标准品，因此此方法测定的只是葡萄籽提取物中原花青素的相对值，其含量用原花青素指数(procyanidolic index)来表示。
【Bate-Smith法原理】原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素(图1)。
【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约15～40mg)用甲醇溶解，最后定溶于100ml。
从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中，然后再加入6ml盐酸-正丁醇溶液(5/95,V/V)，在97℃±1下反应40min后，取出迅速冷却，在550nm处测定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。
原花青素指数=A×7.0/WW:样品质量(g)；A:吸光度【实验结果】由于用Bate-Smith法测得的葡萄籽提取物中原花青素指数一般在80～100之间，有时也可能大于100。
因此，目前很多植物提取物生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量，是不正确的。
（二）Porter法测定葡萄籽原花青素含量【实验概述】由于Bate-Smith法测定的结果重现性很差,并且原花青素在此条件下反应不是很彻底。
前花青素含量测定方法(UV)
编号:TCD0150 原花青素（Proanthocyanidin）含量测定方法
一、仪器与试剂
1．仪器：UV-2101 PC紫外-可见光分光光度计
2．试剂：2%NH4Fe(SO4)2·12H2O的2N盐酸水溶液：量取浓盐酸17mL，加水至100mL，加入2gNH4Fe(SO4)2·12H2O，振摇溶解，即得。
(两周内有效) 酸性正丁醇溶液：95mL正丁醇中加入5mL浓盐酸，混匀。
(当日使用)
二、溶液制备
1．样品溶液制备精密称取葡萄籽提取物样品约100mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解定容。
精密吸取2mL于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即为供试液。
精密吸取该供试液1mL于10mL具塞试管中，加入2% NH4Fe(SO4)2·12H2O 的2N盐酸水溶液0.2mL，酸性正丁醇溶液6mL，拧紧密封盖，摇匀，拧松密封盖。
置95℃水浴中加热反应60min，取出，在冰水浴中快速冷却，即得待测样品溶液。
2．标准品溶液制备以标准样品代替样品，按样品溶液制备方法，处理即得标准品溶液。
3．样品空白溶液制备以甲醇代替样品供试液，按样品溶液处理，即得空白溶液。
三、样品测定
打开仪器电源，预热20min，待仪器自检通过后，在546nm处以样品空白溶液作为空白，测定标准品溶液和样品溶液吸收度。
四、结果计算
A×Ws
C%= ×S
As×W
As、A：标准样品、样品吸收值
Ws、W：标准样品、样品称样量（mg）
S：标准样品含量（%）
注：所用器皿均需干燥处理。
除甲醇外，其余均需平行显色三份。
葡萄籽中分离提取原花青素的研究
葡萄籽中分离提取原花青素的研究花青素是一类多酚类化合物，其具有高效的清除自由基的功能，是一种新型、高效、低毒的天然抗氧化剂。
本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
研究结果表明：本项目产品投资费用少，操作费用低，产品附加值高；原料为废物利用，变废为宝符合国家相关产业政策；几乎没有“三废”排放，使用的溶剂全部回收利用，废渣可以作为造纸或者饲料综合利用。
标签：花青素；葡萄籽；提取；正交实验1 概述原花青素是广泛存在于植物中的一类天然多酚类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。
属于缩合鞣质或黄烷醇类。
最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红。
它于1879年在意大利上市。
由于原花青素的多种功效，由葡萄籽提取的原花青素已被我国卫生部批准为保健原料。
目前对原花青素的提取研究及保健作用研究已非常成熟。
已经将其应用到工业化产业，开发出多种原花青素的保健产品和化妆产品。
原花青素的产品已被广大消费者普遍接受。
2 葡萄籽中花青素的提取本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
并通过设计正交实验，得出原花青素提取最佳工艺条件。
2.1 实验方法2.1.1 葡萄籽中原花青素的提取本实验采用甘肃紫轩酒业葡萄酒厂生产葡萄酒产生的葡萄籽下脚料作为本实验的原材料。
在生产葡萄酒压榨葡萄汁的糟粕和葡萄酒生产前和发酵后压榨的榨粕，所得的这些榨渣中，以换成干品计，约有50%的葡萄皮，45%的葡萄籽和少量的梗等，将该榨渣经粗选分离出葡萄籽，作为提取的原料。
所得的葡萄籽用粉碎机粉碎后，过20目筛，于磨口三角瓶中，经石油醚脱脂脱水份，得脱脂葡萄籽粉，用一浸提液在50℃的恒温水浴中回流浸提，离心后取上清液，反复提取若干次，最后洗涤残渣，将上清液和洗涤液合并，加入固体无水硫酸钠脱水，倾出上层溶液，在真空度为0.095MPa，温度为40℃的条件下真空浓缩，浓缩液冷却至室温，得到原花青素粗提液，干燥，制得粗提物。
葡萄籽原花青素含量检测方法
杭州尼诺生物科技有限公司葡萄籽原花青素一目的：建立葡萄籽原花青素含量测定法。
二仪器：紫外可见分光光度UV—UNIC7200。
三责任者：QC检验员。
四原理：原花青素在酸性条件下加热水解产生色素，产生色素的过程是定量反应。
通过检测水解产物的最大吸收波长下的吸光度对原花青素进行定量。
在吸光度0.2-0.7纳米范围内浓度和吸光度呈线性关系。
五试剂和对照品：甲醇（分析纯）正丁醇（分析纯）盐酸（分析纯）硫酸铁铵（分析纯）葡萄籽对照品（公司自制）六试剂配制及溶液配制：1 试剂配制：50%甲醇溶液：量取50毫升甲醇溶于50毫升纯化水中。
盐酸正丁醇溶液：量取5毫升盐酸溶于95毫升正丁醇，置阴凉处避光保存。
硫酸铁铵盐酸溶液：称取2克，NH4F e (SO4)212H2O溶于100毫升2摩尔/升的盐酸水溶液中。
2 溶液配制：对照品溶液：称取10毫克葡萄籽对照品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。
供试品溶液：称取10毫克葡萄籽供试品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。
七测定步骤：在一系列10毫升具塞硼硅酸玻璃刻度试管中，各加0.2毫升硫酸铁铵盐酸溶液，6毫升正丁醇盐酸溶液，再逐个加1毫升待测样品溶液，1毫升对照品溶液，1毫升甲醇（空白），记录试管体积V A。
加塞，振荡混匀。
于98。
C沸水浴中反应45分钟，取出试管于冰水中迅速冷却，记录试管的体积V B。
在546纳米处用紫外分光光度计检测相对于空白的吸光度。
八计算：此方法受环境因素影响，操作中用对照品来定量待测样，其计算公式如下：原花青素%=K×A1×M2×V1/（A2×M1×V2）式中：A1 为供试品吸收度A2 为对照液吸收度M1 为供试品称样量M2 为对照品称样量V1 为供试品最终体积V A-V BV2 为对照品液最终体积K 为对照品的含量。
葡萄籽中原花青素(OPC)的提取与纯化
生研1002班姚远学号：2010001225葡萄籽中原花青素(OPC)的提取与纯化一、原花青素简介原花青素是一种水溶性色素，可以随着细胞液的酸碱改变颜色。
细胞液呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。
花青素(Anthocyanins)是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一。
花青素为植物二级代谢产物，在生理上扮演重要的角色。
花瓣和果实的颜色可吸引动物进行授粉和种子传播。
常见于花、果实的组织中及茎叶的表皮细胞与下表皮层。
花青素属于酚类化合物中的类黄酮类(Flavonoids)。
基本结构包含二个苯环，并由3碳的单位连结(C6-C3-C6)。
花青素经由苯基丙酸路径和类黄酮生合成途径生成，由许多酵素调控催化。
以天竺葵色素(Pelargonidin)、矢车菊素(Cyanidin)、花翠素(Delphinidin)、芍药花苷配基(Peonidin)、矮牵牛苷配基(Petunidin)及锦葵色素(Malvidin)六种非配醣体(Aglycone)为主。
花青素因所带羟基数(-OH)、甲基化(Methylation)、醣基化(Glycosylation)数目、醣种类和连接位置等因素而呈现不同颜色。
[9]颜色的表现因生化环境条件的改变，如受花青素浓度、共色作用、液胞中pH値的影响(Clifford)。
橙色和黄色是胡萝卜素的作用。
1910年在胡萝卜中发现了β-胡萝卜素，以后共发现另外2种胡萝卜素异构体，分别是：α、β、γ三种异构体。
1958年β-胡萝卜素获得专利，目前主要从海洋中提取，也可人工合成。
[1]食品中几种重要花青素的结构自然界有超过300种不同的花青素。
他们来源于不同种水果和蔬菜如紫甘薯、越橘、酸果蔓、蓝莓、葡萄、接骨木红、黑加仑、紫胡罗卜和红甘蓝、颜色从红到蓝。
这些花青素主要包含飞燕草素（Delchindin）、矢车菊素（Cyanidin）、牵牛花色素（Petunidin）、芍药花色素（Peonidin）。
花青素颜色随PH值发生变化，从当PH值为3时的覆盆子红到当PH值为5时的深蓝莓红。
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法摘要:对原花青素的概念、测定方法及其存在的问题进行了分析，综述了原花青素的性质，安全性和提取、检测方法，并对统一的原花青素检测方法进行了展望。
关键词:葡萄籽原花青素提取检测EXTRACTION AND DETERMINA TION METHODS OF PROANTHOCYANIDIN FROM GRAPE SEEDAbstract:The definition, determination methods of proanthocyanidin from grape seed and their problems were analyzed. The character, safety, extraction methods of proanthocyanidin were also introduced in this paper. Besides, the development foreground of uniform determination method of proanthocyanidin was illustrated.Key words:grape seed ; proanthocyanidins ; extraction; determination20世纪70年代，法国科学家J．Masqulier发现了比松树皮更好的原花青素资源——葡萄籽。
“地中海地区膳食”健康效果揭示了酚类化合物和不饱和脂肪酸的神奇功效Ⅲ；“法国悖论”现象更是揭示了葡萄籽的多酚神奇功能。
葡萄籽中含有丰富的亚油酸、蛋白质、原花青素等成分，但研究最多的还是原花青素成分，现已被证明具有显著的抗氧化和清除自由基的活性，具有极大的开发前景。
同时由于葡萄籽原花青素成分的复杂性，原花青素概念认识的不一致，还没有统一的检测方法。
因此，迫切需要建立葡萄籽原花青素含量的统一分析方法，以便对葡萄籽原料及其产品中的原花青素准确定量。
葡萄籽中原花青素提取和测量方法研究
１ ２ ５ 料液 比对 原花青 素提取 的影响 选 择 ５个梯 度进 ．． 行 实验 ， 取全部 上清液 ， 定容 到 ２０ ｌ ０ ｍ 测定 。
液 中低 密度脂蛋 白的氧化而 引起 的动 脉硬化 ， 且对 常 见 并
的子宫 癌有一定 的疗效 ’ － 。本文将对 赤霞珠 葡萄籽 中原 花青素 提取和测 量方 法进行研究 和讨 论 ， 而找 出适 合实 从 验室 的最佳提取 方法 和测量方法 。
素有强 抗氧化 能力 ， 以清 除 体 内 的 自由基 和 活性 氧 ， 可 其 清除 自由基能力 是 Ｖ 的 ５ ０倍 。它 还能 预 防 由于 人 体血
１２４ ｐ ．． Ｈ对 原花青 素提取 的影响
７ ０ ８ ０ ９ ０进 行分别提 取 。 ． ，． ，．
调ｐ Ｈ值为 ５０６０ ．， ， ．
２ 结果 与分析
２ １ 不 同溶 剂对原 花青素 提取效果 的影 响。 ． 由图 １ 出 ， 得 甲醇提取 效果最佳 ， 乙醇次 之 ， 石油 醚几
乎无提 取效果 ， 以 ， 以选择 甲醇作 为提取 液 ， 所 可 石油 醚则
用来脱 脂 。
艺场 。将 筛选 好 的葡萄 籽放 于干 燥箱 中 ，０ 中干 燥 ６ ， ６％ ｈ 用粉碎机粉 碎 （ ≤１ ｍ） ｍ 备用 。主要 试 剂 ： 花青 素标 准 原
维普资讯
３ ８
安徽农学通报 ， ｎ ｕ Ａ ＳｉＢ ｌ ２０ １ （３ Ａ ｈｉ ． ｅ ｕ１ ０７，３ ２ ） ． ．
葡萄 籽 中原 花 青 素提 取 和 测 量 方 法研 究
马红江 王 莹 葛 彬 唐 慧芬 李予霞
（ 石河子大学生命科学学院 ， 新疆石河子 ８２ ０ ） ３ ０ ３
中图分类号 ￥６ ６ 文献标识码 Ｂ 文章编号 １０ ７ ３ （０ ７ ２ ３ ０ ０ ７— ７ １ ２０ ）３— ８— ２
以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量
以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量吴巍，程秀凤，王春辉，崔文熹，傅荧荧（天津市尖峰天然产物研究开发有限公司，天津300457）摘要：目的：建立以原花青素B2为标准品测定葡萄籽提取物中原花青素含量的方法。
方法：以含量≥99%的原花青素B2（HPLC标定）做标准品，参照Bate-Smith法，在546 nm处测定吸光度，来标定葡萄籽提取物中原花青素含量。
结果：原花青素B2通过Bate-Smith法反应后的吸收度与浓度成良好线性关系，其线性范围为22.89μg.mL-1～ 114.5μg.mL-1，r=0.99902（n=5）。
回收率：97.99%，RSD：1.02%(n=6)。
结论：该法以通过HPLC标定的原花青素单一成分B2做为标准品，解决了过去以原花青素混合物做标准品其原花青素含量标准不统一，无法让人信服的问题，其测定结果能准确反映葡萄籽提取物中的原花青素的真实含量，可用作质控方法。
关键词：原花青素B2; 原花青素;葡萄籽提取物Determine proanthocyanidins in grape seed extract with proanthocyanidin B2 standardWU Wei ，CHENG Xiu-feng，W ANG Chun-hui，CUI Wen-xi，FU Ying-ying（Tianjin Jianfeng Natural product R&D Co.，Ltd.，Tianjin 300457，China）Abstract: Objective: To establish a method for detecting proanthocyanidins in grape seed extract with proanthocyanidin B2 standard. Methods: Refer to the Bate-Smith method, using proanthocyanidin B2（≥99%;HPLC）to calibrate proanthocyanidins in grape seed extract at 546nm. Results: Linear range of proanthocyanidins is 22.89μg.mL-1～114.5μg.mL-1 (r=0.99902, n=5) ,Recovery: 97.99%, RSD: 1.02%( n=6 ). Conclusion: Using single ingredient proanthocyanidin B2 standard calibrated by HPLC to calibrate proanthocyanidins, resolving the problem that the standard content is not identical and can not convince when using proanthocyanidin compound standard. The method have better linearity and repeatability , can detect grape seed extract’s proanthocyanidins exactly.Key Words: proanthocyanidin B2; proanthocyanidin; grape seed extract原花青素是一类物质，它们是由儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯通过C4-C6或C4-C8键共价相连组成的多聚体，葡萄籽提取物中的最主要成分就是原花青素，各种1聚合程度的原花青素在其中混合存在着，测定其中总原花青素的含量是衡量其质量好坏的主要指标之一。
硫酸_香草醛法测定葡萄籽原花青素含量
硫酸-香草醛法测定葡萄籽原花青素含量孙 芸 谷文英(江南大学食品学院,无锡,214036)摘 要 以硫酸作为香草醛法的酸性介质,测定葡萄籽提取物水溶液中原花青素含量,对硫酸浓度、香草醛浓度、反应温度及时间等影响比色反应的因素进行了研究,选择出较适宜的反应条件。
关键词 葡萄籽,原花青素,硫酸-香草醛法第一作者:博士研究生(谷文英为通讯作者)。
收稿时间:2003-04-17,改回时间:2003-09-03原花青素是一类由黄烷-3-醇缩合而成的聚多酚类物质,具有很强的生物活性,作为防癌、抗突变、防治心血管疾病药物的有效成分和用作安全无毒的新型天然抗氧化剂,在医药、保健食品等领域具有广泛的用途。
原花青素的定量测定方法,除比较经典的H PLC 法外,更多的是比色测定方法,包括Folin -Ciocateau (FC )法[1]、酸化香草醛(Vanillin)法[2,3]、盐酸-正丁醇(BuOH -H Cl)法[4]及紫外吸收法[5],其中FC 法测定的是总酚含量,对原花青素缺乏专一性,Vanillin 法可同时测定原花青素单体及聚合体的总含量,BuOH -H Cl 法只测定聚合原花青素含量,儿茶素单体不反应,但与香草醛法相比,反应中易形成副产物,且受结构影响较大,同时比色测定法反应的条件要求较高,重复性较差,原花青素的紫外吸收法一般用于经HPLC 纯化分离后组分的定性及定量检测(270~280nm)。
从测定方法的灵敏度、专一性及简便性来讲,目前应用比较多的是酸化香草醛法。
盐酸及硫酸均可作为其酸性介质,但在不同含量的葡萄籽原花青素含量测定过程中发现,传统的以盐酸为酸性介质的香草醛法在测定原花青素含量较低的葡萄籽提取物水溶液时,体系透明度较低,干扰较大。
而据报道[6],在测定甲醇溶液中原花青素含量的香草醛反应体系中,以硫酸催化的反应灵敏度高于盐酸。
据此,本实验以硫酸作为香草醛法的酸性介质,探索出了测定葡萄籽提取物水溶液中原花青素含量的硫酸-香草醛比色法。
硫酸香草醛法测定葡萄籽原花青素含量
硫酸香草醛法测定葡萄籽原花青素含量一、本文概述本文旨在探讨硫酸香草醛法在测定葡萄籽原花青素含量中的应用。
原花青素作为一种重要的天然抗氧化剂，在葡萄籽等植物中含量丰富，具有显著的生物活性，对人体健康具有积极作用。
因此，准确测定葡萄籽中原花青素的含量对于评估其营养价值和开发相关健康产品具有重要意义。
硫酸香草醛法作为一种常用的原花青素测定方法，具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，在食品、药品等领域得到了广泛应用。
本文将详细介绍硫酸香草醛法的原理、操作步骤、影响因素及注意事项，并通过实验验证该方法的准确性和可靠性，为葡萄籽原花青素含量的测定提供科学依据。
二、材料与方法硫酸香草醛、葡萄籽提取物、原花青素标准品（纯度≥98%）、甲醇、乙醇、丙酮、盐酸等均为分析纯，购自国内外知名试剂公司。
紫外可见分光光度计、电子天平、恒温水浴锅、离心机、超声波清洗器等。
准确称取葡萄籽粉末适量，加入一定比例的甲醇-水-盐酸混合溶液，置于恒温水浴锅中进行回流提取。
提取液经过离心、过滤后，得到原花青素提取液。
精确称取原花青素标准品，用甲醇溶解并定容，得到不同浓度的标准溶液。
分别取各浓度标准溶液，加入硫酸香草醛试剂，摇匀后在一定温度下反应一定时间，测定其吸光度。
以吸光度为纵坐标，原花青素浓度为横坐标，绘制标准曲线。
取适量葡萄籽原花青素提取液，加入硫酸香草醛试剂，摇匀后在相同条件下进行反应，测定其吸光度。
根据标准曲线计算样品中原花青素的含量。
所有数据均以平均值±标准差表示，采用SPSS等统计软件进行数据分析，采用单因素方差分析（ANOVA）比较不同处理组之间的差异，显著性水平设为P<05。
通过以上方法和步骤，可以准确测定葡萄籽中原花青素的含量，为进一步研究葡萄籽的营养价值和开发利用提供依据。
三、实验结果与分析在本次研究中，我们采用硫酸香草醛法测定了葡萄籽原花青素含量。
此方法基于原花青素在特定条件下与硫酸香草醛发生显色反应，通过测定反应后溶液的光密度值，可推算出原花青素含量。
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法有多种，其中一种常用的方法是索氏提取法和固相萃取法相结合，具体步骤如下：
1. 将葡萄籽进行干燥、粉碎、过筛、脱脂，得到葡萄籽粉末。
2. 将葡萄籽粉末进行提取、过滤、浓缩，再溶解，最后进行固相萃取，得到精制原花青素。
3. 精制原花青素过微孔滤膜后进入高效液相色谱进行检测。
另外，也可以使用Bate-Smith法和Porter法来检测葡萄籽中原花青素的
含量。
Bate-Smith法是先称取适量的葡萄籽提取物用甲醇溶解，然后加入
盐酸-正丁醇溶液在特定温度下反应一定时间后迅速冷却，在特定波长下测
定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。
而Porter法是对Bate-Smith法进行了改进，主要是在试剂中添加了Fe3+以提高反应的程度和颜
色的稳定性。
请注意，不同方法提取和检测葡萄籽原花青素的步骤和条件可能会有所不同，具体的操作方法和参数需要根据实际情况和实验条件进行调整。
同时，由于提取和检测过程中可能会涉及到化学试剂的使用，因此也需要注意安全问题。
原花青素检测方法注意细则
原花青素（20150518）1、原理原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。
原花青素本身无色，但经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。
本方法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。
计算试样中原花青素含量。
2、试剂2.1 甲醇分析纯2.2 正丁醇分析纯2.3 盐酸分析纯2.4 硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2•12H2O溶液：用浓度2mmol/l盐酸配成2%（w/v）的溶液。
（1.67ml盐酸，加水至10ml）2.5 原花青素标准品葡萄籽提取物，纯度95%2.6 正丁醇盐酸混合液：正丁醇：盐酸=95：5（v：v）3、仪器3.1 分光光度计4、分析步骤4.1试样的制备4.1.1 片剂取20片试样，研磨成粉状。
4.1.2 胶囊挤出20粒胶囊内容物，研磨或搅拌均匀，如内容物含油，应将内容物尽可能挤出。
4.1.3 口服液摇匀后取样。
4.2 提取4.2.1 粉状试样称取70mg试样置于50ml容量瓶中，加入30ml甲醇，超声处理30min，放冷至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，静置30min，取上清液过滤备用。
4.2.2 含油试样称取50mg试样置于小烧杯中，用20ml甲醇分数次搅拌，将原花青素洗入50ml容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。
5.2.3 口服液吸取适量试样（取样量不超过1ml）置于50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。
4.3 测定4.3.1 标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10ml甲醇中，吸取该溶液0、0.1、0.3、0.5、1.0、1.5ml（用2ml刻度吸管量取）置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。
各取1ml 测定。
与试样测定方法相同。
4.3.2 试样测定取1ml试样溶液于10mL比色管中，加入6ml正丁醇盐酸混合液，再加入0.2ml 硫酸铁铵溶液，混匀，用封口膜封紧比色管口，置沸水浴精确加热40min后（氺浴锅调至100度，将装有比色管的烧杯放入氺浴锅中），立即置冰水中冷却3—5min后，取出放置约15min使供试液至室温，于546nm波长处测吸光度，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。
葡萄籽中原花色素的含量测定方法简述
葡萄籽中原花色素的含量测定方法简述摘要：葡萄籽中的原花色素具有很多的生物活性，其含量的测定对于研究葡萄籽的生物活性以及开发葡萄籽的药用价值具有很大的意义。
本文介绍了葡萄籽中原花色素的含量测定方法，包括提取、纯化、检测等步骤，为研究葡萄籽的生物活性以及开发葡萄籽的药用价值提供了一定的参考。
关键词：葡萄籽；原花色素；含量测定；生物活性；药用价值一、引言葡萄籽是葡萄的种子，富含原花色素、多酚类物质、黄酮类物质等多种生物活性成分。
其中，原花色素是一种天然的生物活性成分，具有很多的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
因此，研究葡萄籽中原花色素的含量及其生物活性具有很大的意义。
二、葡萄籽中原花色素的提取葡萄籽中原花色素的提取可采用乙醇提取法、水提取法、超声波提取法、微波辅助提取法等多种方法。
其中，乙醇提取法是一种常用的提取方法，其步骤如下：1、取适量的葡萄籽，粉碎成细粉。
2、将葡萄籽粉末加入适量的乙醇中，并加入一定量的氢氧化钠。
3、在室温下振荡提取2-3小时。
4、离心沉淀，取上清液。
5、重复以上步骤，直至提取液无色。
6、将提取液浓缩至一定体积，得到葡萄籽中原花色素的提取物。
三、葡萄籽中原花色素的纯化葡萄籽中原花色素的提取物中含有其他的杂质，需要进行纯化。
纯化方法可以采用硅胶柱层析法、逆流色谱法、高效液相色谱法等多种方法。
其中，高效液相色谱法是一种常用的纯化方法，其步骤如下：1、将葡萄籽中原花色素的提取物溶解在适量的溶剂中。
2、用C18柱进行分离，选择合适的流动相，进行梯度洗脱。
3、将纯化后的葡萄籽中原花色素的溶液收集起来，用氮气吹干。
4、将干燥后的纯化产物溶解在适量的溶剂中，得到纯化后的葡萄籽中原花色素。
四、葡萄籽中原花色素的检测葡萄籽中原花色素的检测可以采用紫外分光光度法、高效液相色谱法、质谱法等多种方法。
其中，高效液相色谱法是一种常用的检测方法，其步骤如下：1、将纯化后的葡萄籽中原花色素溶解在适量的溶剂中。
葡萄籽中原花青素提取方法优化处理
2 材料与方法
2 1 试剂与材料 贵人香葡萄籽, 甲醇、无水乙醇、丙酮、石油醚、
浓盐酸、硫酸高铁盐为分析纯。 2 2 主要仪器
紫外分光光度计( 722S 上海精密科学仪器有限 公司) 、旋转蒸发仪( RE- 85Z 上海青浦泸西仪器厂) 、 恒温水浴锅( DZKW- D 河北省黄骅航天仪器厂) 、真 空干燥器( 668 大连第四仪表厂) 。 2 3 方法 2 3 1 含量测定 采用铁盐催化比色法测定葡萄 籽提取物中原花青素的含量[ 5] 。将 10 mg 葡萄籽提 取物溶于 10 ml 甲醇中, 得样品溶液。取样品溶液 1 ml, 用甲醇稀释至 10 ml 为待检测液。将正丁醇与 38% 的盐酸按照 95 5 的体积比混合后, 取出 6 ml;
21 05b 1 60
乙醇
8 30 a 0 53
24 78c 1 05
丙酮
7 90 a 0 97
16 24a 1 52
注: 数值为同一处理 3 次重复平均 值, 括号中 的数值为 标准方差, 同 一列中紧跟字母不同表示新复极差法差异显著( P < 0 05) .
不同浓度的丙酮水溶液提取葡萄籽中的原花青
以一般不应用于工业生产上。因此, 从提取率及提
取纯度角度看, 100 目是最适宜的处理方式。
表 1 葡萄籽粉碎度对提取原花青素的影响 Tab. 1 Influence of the degree of crushed grape seeds on extracting PC
处理方法
处理程度 提取率( % ) 提取纯度( % )
葡萄籽中原花青素提取方法优化处理*
吕国红1, 2 傅 星1* *
( 1 中国科学院沈阳应用生态研究所, 沈 阳 110016; 2 中国科学 院研究生院, 北京 100039)
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
原花青素原花青素原花青素原花青素HPLC初步方案初步方案初步方案初步方案
一．实验目的：分析样品原花青素纯度，了解其中杂质成分。
二．实验方案：
1. 方案一：Waters 公司高效液相色谱，C18柱(4.6 ×250 mm) , 检测波长为280 nm，进样量10μL ,柱温为室温。
待测液均经0.45μm 孔径的滤膜过滤。
流动相及流速见下表(A —10 %乙酸,B —重蒸水)：
2. 方案二：（间接法定量）（原理类似铁盐催化比色法）
(1) 标准曲线：称取前花青素标准品10mg 溶于10ml甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、
1.0、1.5ml 置于10ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。
各取1ml 测定。
(2) 试样测定: 将正丁醇与盐酸按95 ：5的体积比混合后,取出6.0ml 置于具塞锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵[NH4Fe(SO4) 2·12H2O]溶液（用浓度为2mol/L 盐酸配成2%(w/v)的溶液）和1.0ml 经0.45μm滤膜过滤的试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,待进行高效液相色谱分析。
(3)液相色谱参考分析条件: 色谱柱Shimadzu Shim –pak CLC –ODS 4.6 ×150mm;柱温35 ℃;
检测器:紫外检测器,检测波长525nm
流动相: 水:甲醇:异丙醇:10 %甲酸= 73 :13 :6 :8 流速0.9ml/min。
注：该方法使用的水解方法与我们当前使用的铁盐催化水解原花青素方法稍有差异，哪种效果更好，可进行预实验加以比较。
3．方案三：（反相高效液相色谱）标样：原花青素标准品
色谱柱：Hypersi ODS-2 ，150 × 4.6mm 5μm；
流动相：A：0 . 2%(V/V) 乙酸；B：乙腈；
流量：1ml /min；
进样量：5μl;
柱温：30℃；
检测波长：280nm.
洗脱梯度：以乙腈的百分比浓度表示(B液溶于A液)
0 ～5 % ，10min；
5%～20%，10～20min；
20%～40%，20～40min；
40%～50%，40～50min；
50%～5%，45～50min；
5%～0，50～60min。
稳定液配制：取0.5g 抗坏血酸置于1L 容量瓶中，加约500mL 双蒸水，混合，溶解
抗坏血酸。
加入100mL 乙腈，用双蒸水稀释至刻度。
标准品溶液液的配制与稀释均使
用稳定液做溶剂。
通过对HPLC 流动相条件的改进，确定了适合检测葡萄籽超微粉提取液中的没食子
酸、儿茶素、表儿茶素单体的HPLC 流动相条件。
色谱条件:UV 检测器，波长280nm，流速1mL/min，上样量10µl，柱温30℃。
流动相：A，2%乙酸、9%乙腈水溶液；B，
乙腈。
梯度模式：0min →23min →45min →50min →70min，流动相 A 相应浓度梯度为
100% →100% →75% →75% →100%。
稳定液配制：取0.5g 抗坏血酸置于1L 容量瓶中，加约500mL 双蒸水，混合，溶解
抗坏血酸。
加入100mL 乙腈，用双蒸水稀释至刻度。
标准品溶液液的配制与稀释均使
用稳定液做溶剂。
葡萄籽原花青素液相色谱图1-抗坏血酸，2－儿茶素，3－表儿茶素
通过稳定液（主要成分为抗坏血酸）、没食子酸、儿茶素、表儿茶素单独进样确定它们的出峰顺序。
依次的保留时间为 3.29min，4.53min，12.27min，23.42min，
称取0.5g原花青素样品，到100ml容量瓶中！超声溶解，定容至刻度，用毛细管吸取一滴到薄层板上。