准噶尔山楂叶总黄酮的超声波提取及抗氧化研究_任艳利

黄酮类化合物是一类广泛存在于自然界的具有 C － C 基 本母核的一大类化合物［1 －2］，总黄酮作为一种天然的植物提 取物，不仅有广泛的药理作用，还具有低毒安全的特性。现 代研究表明，黄酮类化合物有明显的抗氧化、抗炎、抑菌、抗 癌及降 血 脂 等 生 物 活 性，已 广 泛 应 用 于 食 品 和 医 药 行 业［3 －4］。准噶尔山楂（ Crataegus songorica K． Koch． ） 是蔷薇科 蔷薇属的 植 物，在 新 疆 伊 犁 州 霍 城 县 大、小 西 沟 有 大 量 分 布［5 －6］。笔者采用超声波法提取准噶尔山楂叶中的总黄酮， 探讨了准噶尔山楂叶中总黄酮提取工艺的影响因素，通过单 因素和正交试验法得出超声波提取的优化条件，并对总黄酮 的抗氧化性进行了探讨，为准噶尔山楂叶的综合利用和深度 开发提供一定的参考［7 －9］。 1 材料与方法 1． 1 材料 以采自霍城县大、小西沟的准噶尔山楂叶为材 料，自然避光干燥，用粉碎机粉碎为粉末后备用。722 型紫外 可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司； HHS 型电热恒温 水浴 锅，上 海 博 远 实 业 有 限 公 司 医 疗 设 备 厂； FA1004． MAX100g 电子天平，上海天平仪器厂； TGL-18M，台式高速冷 冻离心机，上海安亭科学仪器公司； DILON99-IID 型超声波细 胞粉碎机，西安比朗仪器公司； RE-52AA 旋转蒸发器，上海亚 荣生化仪器厂； DZF-6020 真空干燥箱，上海和呈仪器制造有 限公司。 1． 2 方法 1． 2． 1 准噶尔山楂叶总黄酮的提取。称取一定质量的准噶 尔山楂叶粉，用不同体积分数的乙醇作溶剂，在超声波细胞 粉碎机中提取，抽滤。将抽滤液用旋转蒸发仪浓缩，浓缩液
用力摇匀，将 Ai 所表示的样品在室温下静置 30 min 后， 加入比色皿中进行吸光度的测定，测出 A0 、Ai 、Aj 所表示样品 的吸光度值，清除率按下式计算：
SA（ % ） = 1 － （ Ai － Aj ） / A0 × 100 式中，A0 ，未加提取液的 DPPH 溶液的吸光度； Ai ，加入提取液 后的 DPPH 溶液的吸光度； Aj，DPPH 溶液与提取液混合后的 吸光度。 2 结果与分析 2． 1 单因素试验结果分析 2． 1． 1 乙醇浓度对总黄酮提取率的影响。称取 5 g 准噶尔 山楂叶粉末于 100 ml 烧杯中，在料液比 1∶ 16 g / ml、温度 50 ℃ 、功率 90 W 时，考察不同乙醇浓度对总黄酮提取率的影 响。从图 2 看出，总黄酮提取率在乙醇浓度 40% ～ 70% 时随 乙醇浓度的增大而增加，70% 乙醇超声波提取总黄酮提取率 最高； 当乙醇浓度大于 70% 随着乙醇浓度的增大总黄酮提取 率降低。因此，从提取率来看，乙醇浓度最好选取 70% 。
图 2 乙醇浓度对总黄酮提取率的影响
2． 1． 2 提取时间对总黄酮提取率的影响。称取 5 g 准噶尔 山楂叶粉末，以 70% 乙醇为溶剂，超声温度 50 ℃ 、料液比 1∶ 16 g / ml、功率 90 W，考察不同时间对总黄酮提取率的影 响。从图 3 看出，在提取时间 20 ～ 40 min，随着超声波提取 时间的增加总黄酮提取率增加明显； 提取时间 50 min 时总黄 酮提取率最高，在 60 min 时有下降趋势。由此可见，并不是 提取时间越长越好。因此，提取时间可选在 50 min。 2． 1． 3 料液比对总黄酮提取率的影响。称取 2 g 准噶尔山 楂叶粉末，以 70% 乙醇为溶剂，在超声温度 50 ℃ 、时间 50 min、功率 90 W，考察料液比对提取率的影响。从图 4 看出， 总黄酮提取率随提取溶剂的比例增大而增加，而在 1∶ 16 ～ 1∶ 20 g / ml 时增加较快； 料液比 1∶ 24 g / ml 时开始下降。由此可见， 并不是提取溶剂越多越好。因此，料液比可选在 1∶ 20 g / ml。
40 卷 15 期
任艳利等 准噶尔山楂叶总黄酮的超声波提取及抗氧化研究
8711
醇溶解定容至 50 ml 容量瓶中，摇匀，作为储备液保存于冰箱 中，用时逐级稀释。
吸取 2 ml DPPH·储备液，用无水乙醇定容于 100 ml 容 量瓶中摇匀待测。利用 DPPH·溶液的特征紫红色团的吸 收，用紫外 － 可见分光光度法测定加不同浓度提取液后在波 长 517 nm 处吸光度的下降来表示其对有机自由基的消除能 力。其中，样品 A0 ： 2 ml DPPH·溶液 + 2 ml 无水乙醇； 样品 Ai ： 2 ml DPPH·溶液 2 ml 样品溶液； 样品 Aj ： 2 ml 样品溶 液 + 2 ml 无水乙醇。
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40（ 15） ： 8710 － 8712
责任编辑 李菲菲 责任校对 李岩
准噶尔山楂叶总黄酮的超声波提取及抗氧化研究
任艳利，张 维，刘 影 （ 伊犁师范学院化学与生物科学学院，新疆伊宁 835000）
摘要 ［目的］为准噶尔山楂叶的综合利用和深度开发提供一定的参考。［方法］ 利用超声波法提取准噶尔山楂叶中的总黄酮，用总黄 酮提取率作为衡量提取工艺的指标，对影响超声波提取的多个因子进行单因素、正交试验分析。［结果］ 准噶尔山楂叶中的总黄酮的超 声波提取最佳条件为： 乙醇浓度 80% ，提取温度 50 ℃ ，提取时间 50 min，提取功率 75 W，总黄酮的得率高达 84． 50% ； 影响总黄酮得率的 主次因素依次为： 乙醇浓度 ＞ 提取时间 ＞ 提取功率 ＞ 提取温度。［结论］准噶尔山楂叶总黄酮有较强的清除自由基能力，表现出明显的 抗氧化性。 关键词 超声波； 准噶尔山楂叶； 总黄酮； 提取； 抗氧化性 中图分类号 S 122 文献标识码 A 文章编号 0517 － 6611（ 2012） 15 － 08710 － 03
作者简介 任艳利（ 1978 － ） ，女，河南偃师人，讲师，硕士，从事生物化 学与分子生物学研究，E-mail： ryl2003@ 126． com。
收稿日期 2012-02-22
再经氯仿萃取、醇沉、过滤后，将滤液浓缩成膏状，置于真空 干燥箱中干燥，得到准噶尔山楂叶总黄酮测试样品。 1． 2． 2 标准曲线的绘制。先用甲醇将烘干的标准品芦丁配 制成浓度 1． 128、0． 940、0． 752、0． 564、0． 376、0． 188 mg / ml 的 标准溶液［10］，依次移取不同浓度的标准液 1 ml 分别置于带 刻度的 10 ml 试管中，各加甲醇至 5 ml，分别加入 5% NaNO2 溶液 0． 5 ml，摇匀，室温放置 6 min，再加 10% Al（ NO3 ） 3 溶液 0． 5 ml，摇匀，室温放置 6 min，加 4% NaOH 溶液 4． 0 ml，摇匀， 室温放置 15 min，在波长 500 nm 测定吸光度，绘标准曲线（ 图 1） 。其回归方程为： A = 1． 022 8X + 0． 045 7（ R2 = 0． 998 6） 。
图 5 提取温度对总黄酮提取率的影响
2． 1． 5 提取功率对总黄酮提取率的影响。称取 5 g 准噶尔 山楂叶粉末，以 70% 乙醇为溶剂，在超声时间 50 min、温度 60 ℃ 、料液比 1∶ 20 g / ml 条件下，考察提取功率对总黄酮提取率 的影响。由图 6 可知，功率在 60 ～ 90 W，随功率增大，总黄酮 提取率增大； 90 ～ 120 W 时，随功率增大，总黄酮提取得率呈 下降趋势。分析原因，是因为在功率不断增大的过程中，温 度也会不断地升高，影响了提取率，故选择 90 W 为最佳提取 功率。 2． 2 正交试验结果及分析 称取 5 g 准噶尔山楂叶粉，以料 液比为 1∶ 20 g / ml，置于超声波提取器中提取，在单因素试验
图 3 提取时间对总黄酮提取率的影响
图 4 料液比对总黄酮提取率的影响
2． 1． 4 提取温度对总黄酮提取率的影响。称取 2 g 准噶尔 山楂叶粉末，以 70% 乙醇为溶剂，料液比 1∶ 20 g / ml、功率 90 W、时间 50 min，考察不同温度对总黄酮得率的影响。由图 5 可见，当提取温度在 40 ～ 60 ℃ ，随着温度的升高总黄酮提取 率随之增大； 50 ～ 60 ℃ 时总黄酮提取率增幅较大； 但温度超 过 60 ℃ 时，随着温度的升高总黄酮提取率反而下降。因此， 提取温度选在 60 ℃ 为宜。
图 1 总黄酮标准曲线
1． 2． 3 单因素试验。以准噶尔山楂叶总黄酮提取率为指 标，分别研究乙醇浓度、提取时间、料液比、提取温度、提取功 率对准噶尔山楂叶总黄酮提取率的影响。 1． 2． 4 正交试验。在单因素试验的基础上，对提取时间、料 液比、提取温度、提取功率进行 4 因素 3 水平正交试验设计 分析各因素影响主次，确定其最优提取工艺。 1． 2． 5 DPPH 法测 定 总 黄 酮 对 总 自 由 基 的 清 除 作 用［11］。 DPPH·溶液的配制： 准确称取 0． 198 4 g DPPH·，用无水乙
Study on the Ultrasonic Extraction and Antioxidative Activity of Total Flavonoids from Crataegus songorica K． Koch． Leaves REN Yan-li et al （ College of Chemistry and Biological Science，Yili Normal University，Yining，Xinjiang 835000） Abstract ［Objective］ To provide references for the comprehensive utilization and deep processing of Crataegus songorica K． Koch leaves． ［Method］ The total flavonoids were extracted from Crataegus songorica K． Koch leaves by ultrasonic wave，and the impact factors were analyzed by single factor and orthogonal experiments． ［Result］ The best ultrasonic extraction conditions were 80% ethanol concentration，50 ℃ extraction temperature，50 min extraction time and 75 W extraction power，under the conditions，the yield of total flavonoids could reach up to 84． 50% ，and the influential degree of each impact factor decreased in the order of ethanol concentration ＞ ultrasonic time ＞ ultrasound power ＞ ultrasonic temperature． ［Conclusion］The total flavonoids from Crataegus songorica K． Koch leaves had strong radical scavenging ability and significant antioxidative activity． Key words Ultrasonic extraction； Crataegus songorica K． Koch leaves； Total flavonoids； Extraction； Antioxidative activity