常用细菌生化反应试验 ppt课件
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细菌的生化反应实验ppt课件
菌名imvic试验伏吲哚试验甲基红试验伏普试验柠檬酸试验大肠杆菌未知菌对照大肠杆菌未知菌对照三金黄色葡萄球菌的生化鉴定?以以16种生化鉴定管检测金黄色葡萄球菌对各种物质的利用情况每组一套种生化鉴定管检测金黄色葡萄球菌对各种物质的利用情况每组一套尿素蔗糖精氨酸水溶液木糖乳糖甘露糖木糖醇麦芽糖蕈糖甘露醇乙酰葡胺硝酸盐蜜二糖果糖葡磷胨水山梨醇尿素蔗糖精氨酸水溶液木糖乳糖甘露糖木糖醇麦芽糖蕈糖甘露醇乙酰葡胺硝酸盐蜜二糖果糖葡磷胨水山梨醇将实验结果记入表格中
反应结束加试剂0.5ml 两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性
.
4
甲基红实验（M.R实验）
微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸—— pH下降——加入指示剂甲基红——红色
.5V.P实验原理 Nhomakorabea.
6
三、实验材料
菌 种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、未知菌斜面 培养基：葡萄糖发酵培养基试管、乳糖发酵培养基试管、
实4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 1
验尿蔗精木乳甘木麦蕈甘乙硝蜜果V 山
项 目
素
糖
水
糖
糖
糖
醇
芽 糖
糖
醇
酰 葡
还
二 糖
糖
P
醇
胺
结 果
总 值
.
17
.
13
.
14
（4）柠檬酸盐试验：培养48h后观察柠檬酸盐 斜面培养基上有无细菌生长和是否变色，蓝色 为阳性，绿色为阴性。
菌名
大肠杆菌 未知菌 对照
吲哚试验
IMViC试验
甲基红试验 伏-普试验
柠檬酸试验
.
15
（三）金黄色葡萄球菌的生化鉴定
反应结束加试剂0.5ml 两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性
.
4
甲基红实验（M.R实验）
微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸—— pH下降——加入指示剂甲基红——红色
.5V.P实验原理 Nhomakorabea.
6
三、实验材料
菌 种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、未知菌斜面 培养基：葡萄糖发酵培养基试管、乳糖发酵培养基试管、
实4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 1
验尿蔗精木乳甘木麦蕈甘乙硝蜜果V 山
项 目
素
糖
水
糖
糖
糖
醇
芽 糖
糖
醇
酰 葡
还
二 糖
糖
P
醇
胺
结 果
总 值
.
17
.
13
.
14
（4）柠檬酸盐试验：培养48h后观察柠檬酸盐 斜面培养基上有无细菌生长和是否变色，蓝色 为阳性，绿色为阴性。
菌名
大肠杆菌 未知菌 对照
吲哚试验
IMViC试验
甲基红试验 伏-普试验
柠檬酸试验
.
15
（三）金黄色葡萄球菌的生化鉴定
细菌鉴定之生化反应 ppt课件
醇，后者含酒精，都含浓盐酸，前者主要成分为后者10倍，后者灵 敏度更高
2020/11/29
11
3 硫化氢试验
原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫化氢，后者 遇亚铁离子或铅则形成黑褐色的沉淀。
培养基：醋酸铅培养基 方法：待测菌接种于醋酸铅培养基，35 ℃培养24-48小时观察结果 结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性 意义：沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变
形杆菌属、腐败假单胞菌为阳性
2020/11/29
12
4 尿素分解试验
原理：某些细菌具有尿素分解酶，能分解尿素产生大量的氨，使培 养基呈碱性
培养基：尿素培养基 方法：待测菌接种于培养基，35 ℃培养18-24小时观察结果 结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性 意义：变形杆菌、摩根氏、雷氏普罗维登氏、克雷伯氏为阳性
培养基：葡萄糖蛋白胨水 方法：待测菌接种于培养基，35 ℃48h，加入甲液（6%α奈酚酒
精溶液）和乙液（40 %KOH溶液） 结果：20min内出现红色为阳性，如无红色，且于35 ℃4h 后仍如
故即为阴性 意义：本试验常与甲基红一起试验，前者阳性则后者多阴性
2020/11/29
7
6 甲基红试验
： 原理 细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者进一步生成甲酸、乙酸、
乳酸等，使培养基的PH降至4.5以下，加入甲基红试剂后显红色即 阳性。若产酸量少，或进一步转化为其他物质，则培养基的PH仍在 6.2以上，加入甲基红试剂后显黄色，为阴性 培养基：葡萄糖蛋白胨水 方法：待测菌接种于培养基，2-4天后，加入甲基红试剂，观察结果 结果：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳性，黄色为阴性 意义：大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸杆菌、等为阳性；肠杆菌 属、哈夫尼亚菌属为阴性
2020/11/29
11
3 硫化氢试验
原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫化氢，后者 遇亚铁离子或铅则形成黑褐色的沉淀。
培养基：醋酸铅培养基 方法：待测菌接种于醋酸铅培养基，35 ℃培养24-48小时观察结果 结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性 意义：沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变
形杆菌属、腐败假单胞菌为阳性
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4 尿素分解试验
原理：某些细菌具有尿素分解酶，能分解尿素产生大量的氨，使培 养基呈碱性
培养基：尿素培养基 方法：待测菌接种于培养基，35 ℃培养18-24小时观察结果 结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性 意义：变形杆菌、摩根氏、雷氏普罗维登氏、克雷伯氏为阳性
培养基：葡萄糖蛋白胨水 方法：待测菌接种于培养基，35 ℃48h，加入甲液（6%α奈酚酒
精溶液）和乙液（40 %KOH溶液） 结果：20min内出现红色为阳性，如无红色，且于35 ℃4h 后仍如
故即为阴性 意义：本试验常与甲基红一起试验，前者阳性则后者多阴性
2020/11/29
7
6 甲基红试验
： 原理 细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者进一步生成甲酸、乙酸、
乳酸等，使培养基的PH降至4.5以下，加入甲基红试剂后显红色即 阳性。若产酸量少，或进一步转化为其他物质，则培养基的PH仍在 6.2以上，加入甲基红试剂后显黄色，为阴性 培养基：葡萄糖蛋白胨水 方法：待测菌接种于培养基，2-4天后，加入甲基红试剂，观察结果 结果：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳性，黄色为阴性 意义：大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸杆菌、等为阳性；肠杆菌 属、哈夫尼亚菌属为阴性
《细菌的生化反应》PPT课件
❖ 皮肌炎是一种引起皮肤、肌肉 、心、肺、肾等多脏器严重损害 的，全身性疾病，而且不少患者 同时伴有恶性肿瘤。它的1症状表 现如下：
❖ 1、早期皮肌炎患者，还往往伴 有全身不适症状，如-全身肌肉酸 痛，软弱无力，上楼梯时感觉两 腿费力；举手梳理头发时，举高 手臂很吃力；抬头转头缓慢而费 力。
V－P试验
反应生成红色化合物
培养基变红
9
[方法]
取出试管培养物，加入等量的李氏试剂，摇匀后 不加塞，静置30分钟观察结果。
阴性
阳性
[结果]
VP 试肠杆菌：— 产气杆菌：+
无红色为阴性，-
10
枸橼酸盐利用试验
[原理]
某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源， 也能利用其中的铵盐作为唯一氮源，细菌生长过程中分解枸 橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱性， 使指示剂呈碱性反应，指示剂由绿色变为深蓝色是枸橼酸盐 利用试验阳性（产气杆菌），反之培养基不变色是为阴性（ 大肠杆菌）。
细 菌 生 化 反 应
1
细菌的生化反应
❖ 概念：用生化的方法来检测细菌对各种基质的 代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌种类，这 种生化试验称为细菌的生化反应试验。
❖ 意义：是鉴别细菌的重要依据。
2
糖发酵试验
碳水化合物 代谢试验
甲基红试验 V-P试验
生 化
碳源和氮源 利用试验
反
IMViC试验
枸橼酸盐利用试验
[原理]
❖ 产气杆菌利用葡萄糖时产生中性物质之一就是乙酰甲基甲醇， 它在碱性溶液中被空气中的分子氧氧化生成二乙酰，二乙酰 与培养基中的含胍基的化合物反应，生成红色化合物，是VP 试验阳性；而大肠杆菌不能产生乙酰甲基甲醇，为阴性。
❖ 1、早期皮肌炎患者，还往往伴 有全身不适症状，如-全身肌肉酸 痛，软弱无力，上楼梯时感觉两 腿费力；举手梳理头发时，举高 手臂很吃力；抬头转头缓慢而费 力。
V－P试验
反应生成红色化合物
培养基变红
9
[方法]
取出试管培养物，加入等量的李氏试剂，摇匀后 不加塞，静置30分钟观察结果。
阴性
阳性
[结果]
VP 试肠杆菌：— 产气杆菌：+
无红色为阴性，-
10
枸橼酸盐利用试验
[原理]
某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源， 也能利用其中的铵盐作为唯一氮源，细菌生长过程中分解枸 橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱性， 使指示剂呈碱性反应，指示剂由绿色变为深蓝色是枸橼酸盐 利用试验阳性（产气杆菌），反之培养基不变色是为阴性（ 大肠杆菌）。
细 菌 生 化 反 应
1
细菌的生化反应
❖ 概念：用生化的方法来检测细菌对各种基质的 代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌种类，这 种生化试验称为细菌的生化反应试验。
❖ 意义：是鉴别细菌的重要依据。
2
糖发酵试验
碳水化合物 代谢试验
甲基红试验 V-P试验
生 化
碳源和氮源 利用试验
反
IMViC试验
枸橼酸盐利用试验
[原理]
❖ 产气杆菌利用葡萄糖时产生中性物质之一就是乙酰甲基甲醇， 它在碱性溶液中被空气中的分子氧氧化生成二乙酰，二乙酰 与培养基中的含胍基的化合物反应，生成红色化合物，是VP 试验阳性；而大肠杆菌不能产生乙酰甲基甲醇，为阴性。
细菌常见的生化反应试验
细菌常见的生化反应试验（一）什么是生化试验?指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。
生化试验或称生化反应：细菌的酶不完全相同，对营养物质的分解能力不一致，因此其代谢产物各异。
在培养基中加入可与被测终产物反应的指示剂，产生肉眼可见的变化，如颜色的改变等，利用生化方法来鉴定细菌的试验，统称为细菌的生化试验或称生化反应（二）生化试验的方法：1在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。
2在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。
3根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。
4根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。
（三）生化试验的注意事项1.待检菌应是新鲜培养物，培养18~24h。
2.待检菌应是纯种培养物。
3.遵守观察反应的时间。
观察结果的时间，多为24或48小时。
4.应做必要的对照试验。
5.提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。
（四）检验细菌的生化试验范围:1、糖（醇）类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验二、糖醇类代谢试验（一）糖醇类发酵试验（二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验（三）V-P试验（四）甲基红（Methyl Red）试验MR（五）七叶苷水解试验（六）甘油品红试验（一）糖醇类发酵试验1、原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖(醇)，有的只能分解1~2种糖(醇) ，有的分解糖(醇)能产酸产气，有的分解糖(醇)只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。
常用的糖醇单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇2试验方法：用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。
《细菌生理生化反应》课件
细菌的应激反应
适应机制
细菌在面对环境压力时，会通过 改变基因表达、改变细胞膜组成
或产生抗性酶来适应。
抵抗力增强
某些细菌在长期暴露于抗生素后， 会发展出抗药性，使抗生素失效。
群体感应
某些细菌通过释放化学信号来感知 周围细菌的数量，以调节群体行为 。
03
细菌的生化反应
糖代谢
糖酵解
糖异生
糖酵解是细菌获取能量的主要方式， 通过糖的氧化磷酸化作用将糖分解为 丙酮酸，并释放能量。
抗菌药物的种类与作用机制
青霉素类
通过抑制细菌细胞壁合成起作 用，对大多数革兰氏阳性菌有
强大的抗菌活性。
头孢菌素类
通过抑制细菌细胞壁合成起作 用，对革兰氏阳性菌和革兰氏 阴性菌均有抗菌活性。
大环内酯类
通过抑制细菌蛋白质合成起作 用，对革兰氏阳性菌和部分革 兰氏阴性菌有抗菌活性。
氨基糖苷类
通过抑制细菌蛋白质合成起作 用，对革兰氏阴性菌有强大的
毒素的作用机制
毒素可干扰细胞代谢、破坏细胞结构，导致疾病的发生。
细菌感染的症状与治疗
症状
01
细菌感染可引起不同的症状，如发热、咳嗽、呕吐、腹泻、皮
疹等。
诊断方法
02
通过临床表现、实验室检查和病原学诊断等方法确诊。
治疗
03
针对不同细菌感染，选择合适的抗生素进行治疗，同时注意提
高免疫力。
05
抗菌药物与耐药性
生长条件
温度、pH值、氧气和营养物质的 浓度等环境因素影响细菌的生长 。
细菌的代谢与能量转换
分解代谢
细菌通过分解大分子物质 ，如糖类、蛋白质和脂肪 ，来获取能量。
合成代谢
细菌合成细胞成分，如氨 基酸、核苷酸和脂肪酸， 以维持细胞功能。
细菌的生化试验PPT课件
5．在滤纸片上滴加试剂时不要过多，以刚润湿纸片 为宜，如滤纸片过湿，可能妨碍空气与细菌接触，延 长反应时间，造成假阴性。
过氧化氢酶试验
【原理】 过氧化氢酶试验又称触酶试 验。部分细菌含有黄素蛋白，在代谢过 程中与空气中的氧发生反应，形成过氧 化氢，过氧化氢对细菌有毒害作用，会 破坏细胞组分，因此，细菌为保护自己 ，通常具有过氧化氢酶，可以催化裂解 过氧化氢，形成水和氧气。
2．结果：发酵 特征试管颜色不变而 氧化特征试管颜色变 黄，表明试验细菌的 葡萄糖分解代谢为氧 化型；两管颜色均变 黄色为发酵型；两支 培养管颜色均不变为 产碱型或不活动型。 O管 F管
O管 F管
糖发酵试验
三．甲基红试验：
原理：细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖 产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸 、乳酸和琥珀酸等，使培养pH下降至4.5以下 时，加入甲基红指示剂呈现红色。如细菌分解 葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其 它物质(如醇、酮、醛、气体和水)，培养基pH 在5.4以上，甲基红(MR)试验呈橘黄色。
VP阴性
VP阳性
五．β—半乳糖苷酶试验(ONPG试验) ：
细 菌需 分二 解种 乳酶
糖
半乳糖苷渗透酶 β—半乳糖苷
迟缓分解乳糖的细菌可产生β—半乳糖苷酶， 能分解邻硝基酚-β-半乳糖苷(ONPG)而释放出黄 色的邻硝基酚。故此试验又称为ONPG试验。
六．七叶苷水解试验：
1．原理：七叶苷可被细菌水解，生成葡 萄糖和七叶素。七叶素与培养基中的枸橼酸铁 的二价铁离子反应生成黑色的化合物，使培养 基变黑。
硝酸盐还原试验是测定还原过程 中生成的亚硝酸。
硝 酸 盐 还 原 试 验
阴性
阳性
氧化酶试验
【原理】 氧化酶又称细胞色素氧化酶 ，能将还原型细胞色素C氧化形成水和 氧化型细胞色素C，氧化型细胞色素C再 使四甲基对苯二胺氧化，形成显色反应 。
过氧化氢酶试验
【原理】 过氧化氢酶试验又称触酶试 验。部分细菌含有黄素蛋白，在代谢过 程中与空气中的氧发生反应，形成过氧 化氢，过氧化氢对细菌有毒害作用，会 破坏细胞组分，因此，细菌为保护自己 ，通常具有过氧化氢酶，可以催化裂解 过氧化氢，形成水和氧气。
2．结果：发酵 特征试管颜色不变而 氧化特征试管颜色变 黄，表明试验细菌的 葡萄糖分解代谢为氧 化型；两管颜色均变 黄色为发酵型；两支 培养管颜色均不变为 产碱型或不活动型。 O管 F管
O管 F管
糖发酵试验
三．甲基红试验：
原理：细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖 产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸 、乳酸和琥珀酸等，使培养pH下降至4.5以下 时，加入甲基红指示剂呈现红色。如细菌分解 葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其 它物质(如醇、酮、醛、气体和水)，培养基pH 在5.4以上，甲基红(MR)试验呈橘黄色。
VP阴性
VP阳性
五．β—半乳糖苷酶试验(ONPG试验) ：
细 菌需 分二 解种 乳酶
糖
半乳糖苷渗透酶 β—半乳糖苷
迟缓分解乳糖的细菌可产生β—半乳糖苷酶， 能分解邻硝基酚-β-半乳糖苷(ONPG)而释放出黄 色的邻硝基酚。故此试验又称为ONPG试验。
六．七叶苷水解试验：
1．原理：七叶苷可被细菌水解，生成葡 萄糖和七叶素。七叶素与培养基中的枸橼酸铁 的二价铁离子反应生成黑色的化合物，使培养 基变黑。
硝酸盐还原试验是测定还原过程 中生成的亚硝酸。
硝 酸 盐 还 原 试 验
阴性
阳性
氧化酶试验
【原理】 氧化酶又称细胞色素氧化酶 ，能将还原型细胞色素C氧化形成水和 氧化型细胞色素C，氧化型细胞色素C再 使四甲基对苯二胺氧化，形成显色反应 。
常用细菌生化反应试验
不发酵的V-P试验
总结词
详细描述
不发酵的V-P试验表示细菌不能发酵葡萄糖， 不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
有些细菌不能发酵葡萄糖，因此不产生乙酰 甲基甲醇属、不动杆菌 属等。不发酵的V-P试验有助于鉴别非发酵 菌与肠杆菌科细菌。
临床意义
非发酵菌为医院感染的重要病原菌，可引起 呼吸道、泌尿道、伤口等感染。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
检测细菌对酸性环境的 适应能力，用于鉴别肠
道菌属。
试验原理
糖发酵试验
氧化酶试验
不同细菌含有不同的酶系，能够分解糖类 产生酸性或碱性产物，通过指示剂变色反 应判断细菌对糖类的代谢能力。
氧化酶催化过氧化氢分解为水和氧气，过 氧化氢在铁离子存在下形成棕色沉淀，通 过观察沉淀判断氧化酶活性。
触酶试验
甲基红试验
V-P试验阴性
总结词
V-P试验阴性表示细菌不能利用葡萄糖，不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
详细描述
当细菌不能利用葡萄糖或不产生乙酰甲基甲醇时，V-P试验呈阴性。这通常表明该细菌 不属于肠杆菌科，因为肠杆菌科细菌通常能够发酵葡萄糖并产生乙酰甲基甲醇。V-P试
验阴性有助于排除某些肠道细菌感染的可能性。
过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和氧 气，氧气在硫酸中形成白色沉淀，通过观 察沉淀判断过氧化氢酶活性。
肠道菌属能够代谢糖类产生酸性产物，使 培养基pH降低，加入甲基红指示剂后呈红 色，通过观察颜色变化判断肠道菌属。
02 糖发酵试验
葡萄糖发酵试验
总结词
葡萄糖发酵试验是细菌生化反应试验中的一种，用于鉴别细菌对葡萄糖的代谢 能力。
04 Voges-Proskauer试验
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二乙酰
培养基变红
葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径
常用细菌生化反应试验
9
蛋白质类代谢试验
靛基质试验 硫化氢试验 苯丙氨酸脱氨试验 尿素酶试验
常用细菌生化反应试验
10
靛基质试验
原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的 色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂 对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。
伏－普试验（V-P试验）
原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮 酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙 酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化 合物。
培养基：葡萄糖蛋白胨水
结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+
培养基不变色： －
应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
常用细菌生化反应试验
常用细菌生化反应试验
1
糖醇类代谢试验
糖发酵试验 甲基红试验 V-P试验 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） 七叶苷水解试验 Β－半乳糖苷渗透酶试验
常用细菌生化反应试验2来自糖发酵试验原理
多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物
(或产酸产气)－→pH↓ －→指示剂呈酸性 变色(若产气者有气泡出现)
结果：加入试剂后培养基呈现绿色为阳
性
应用：多用于肠常用道细菌杆生化反菌应试的验 鉴定
14
苯丙氨酸脱氨试验原理
苯丙氨酸 苯丙氨酸脱氨酶
苯丙酮酸 10％三氯化铁
绿色化合物
常用细菌生化反应试验
15
尿素酶试验
原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生 成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基 试剂：酚红指示剂 结果：培养基变红：+
培养基：蛋白胨水
试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）
结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+ 培养基液面为黄色： －
应用：用于肠道杆菌的鉴定
常用细菌生化反应试验
11
靛基质试验原理
色氨酸
色氨酸酶
靛基质 （吲哚）
对二甲基氨基苯甲 醛 玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚）
常用细菌生化反应试验
12
硫化氢试验
原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸， 生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐 或铅盐结合生成黑色络合物。
常用细菌生化反应试验
6
葡萄糖
甲基红试验
丙酮酸 大量混合酸
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红
常用细菌生化反应试验
7
葡萄糖
V－P试验
丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰
培养基变红
常用细菌生化反应试验
8
大量混合酸
pH降至4.4以下 甲基红试剂
培养基变红
葡萄糖 丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇 V-P试剂
培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基
结果：培养基 变黑 为阳性，不变黑为阴 性
应用：常用于肠道杆菌的鉴定
常用细菌生化反应试验
13
苯丙氨酸脱氨实验
原理：细菌的具有的苯丙氨酸脱氨酶， 可使培养基中的苯丙氨酸脱氨，形成苯 丙酮酸，后者与三氯化铁作用，形成绿 色化合物。
培养基：苯丙氨酸琼脂
试剂：10％三氯化铁
20
甲基红试验
常用细菌生化反应试验
21
常用靛细菌基生化质反应试试验验
22
血清学试验
血清学鉴定： 用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的 抗原 血清学诊断： 用已知抗原检测血清中的特异性抗体
常用细菌生化反应试验
23
血清学鉴定
试剂（诊断血清） ：含抗体
检测对象：特异性抗原
方法：直接凝集试验（玻片法）、荚膜肿
胀伤寒试杆验菌诊断血清 + 待检测细菌
（含抗伤寒杆菌抗体）
细菌凝集
玻片凝集试验：阳性
报告：检出伤寒杆菌
常用细菌生化反应试验
24
培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微 量发酵管
试剂：酚红、溴甲酚紫等
结果:培养基呈酸性变色
应用：观察细菌对糖度的 分解情况，常 用于肠道杆菌的鉴定
常用细菌生化反应试验
3
糖发酵试验结果判断
反应现象
结果描述
酸性变色、有气泡 分解××糖产酸、产气
酸性变色、无气泡
分解××糖产酸、不产 气
培养基不变色
不分解××糖
常用细菌生化反应试验
4
甲基红试验
原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一 步生成大量混合酸，使培养基pH维持在 4.4以下，加入甲基红后，使甲基红呈现 红色反应。此为甲基红试验阳性。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 试剂：甲基红试剂 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+
培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验， 主要用于区别大常用肠细菌肝生化反菌应试和验 产气肠杆菌 5
培养基不变色－ 应用：肠杆菌科属间鉴定
常用细菌生化反应试验
16
尿素酶试验原理
尿素 尿素酶
氨+CO2
培养基pH升高
酚红呈碱性变色
常用细菌生化反应试验
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枸橼酸盐利用试验
原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐 作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯
一碳源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳 酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是 指示剂呈碱性反应。
培养基：枸盐酸盐培养基
试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色， pH7.6以上呈蓝色）
结果：培养基变蓝：+
培养基不变常用色细菌：生化－反应试验
18
枸橼酸盐利用试验原理
培养基
枸橼酸盐
铵盐
碳酸盐
氨
培养基pH下降
溴麝香草酚蓝 呈碱性变色
培养基变蓝
常用细菌生化反应试验
19
糖发酵试验
常用细菌生化反应试验
培养基变红
葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径
常用细菌生化反应试验
9
蛋白质类代谢试验
靛基质试验 硫化氢试验 苯丙氨酸脱氨试验 尿素酶试验
常用细菌生化反应试验
10
靛基质试验
原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的 色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂 对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。
伏－普试验（V-P试验）
原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮 酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙 酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化 合物。
培养基：葡萄糖蛋白胨水
结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+
培养基不变色： －
应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
常用细菌生化反应试验
常用细菌生化反应试验
1
糖醇类代谢试验
糖发酵试验 甲基红试验 V-P试验 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） 七叶苷水解试验 Β－半乳糖苷渗透酶试验
常用细菌生化反应试验2来自糖发酵试验原理
多糖－→单糖－→丙酮酸－→酸性产物
(或产酸产气)－→pH↓ －→指示剂呈酸性 变色(若产气者有气泡出现)
结果：加入试剂后培养基呈现绿色为阳
性
应用：多用于肠常用道细菌杆生化反菌应试的验 鉴定
14
苯丙氨酸脱氨试验原理
苯丙氨酸 苯丙氨酸脱氨酶
苯丙酮酸 10％三氯化铁
绿色化合物
常用细菌生化反应试验
15
尿素酶试验
原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生 成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基 试剂：酚红指示剂 结果：培养基变红：+
培养基：蛋白胨水
试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）
结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+ 培养基液面为黄色： －
应用：用于肠道杆菌的鉴定
常用细菌生化反应试验
11
靛基质试验原理
色氨酸
色氨酸酶
靛基质 （吲哚）
对二甲基氨基苯甲 醛 玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚）
常用细菌生化反应试验
12
硫化氢试验
原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸， 生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐 或铅盐结合生成黑色络合物。
常用细菌生化反应试验
6
葡萄糖
甲基红试验
丙酮酸 大量混合酸
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红
常用细菌生化反应试验
7
葡萄糖
V－P试验
丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰
培养基变红
常用细菌生化反应试验
8
大量混合酸
pH降至4.4以下 甲基红试剂
培养基变红
葡萄糖 丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇 V-P试剂
培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基
结果：培养基 变黑 为阳性，不变黑为阴 性
应用：常用于肠道杆菌的鉴定
常用细菌生化反应试验
13
苯丙氨酸脱氨实验
原理：细菌的具有的苯丙氨酸脱氨酶， 可使培养基中的苯丙氨酸脱氨，形成苯 丙酮酸，后者与三氯化铁作用，形成绿 色化合物。
培养基：苯丙氨酸琼脂
试剂：10％三氯化铁
20
甲基红试验
常用细菌生化反应试验
21
常用靛细菌基生化质反应试试验验
22
血清学试验
血清学鉴定： 用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的 抗原 血清学诊断： 用已知抗原检测血清中的特异性抗体
常用细菌生化反应试验
23
血清学鉴定
试剂（诊断血清） ：含抗体
检测对象：特异性抗原
方法：直接凝集试验（玻片法）、荚膜肿
胀伤寒试杆验菌诊断血清 + 待检测细菌
（含抗伤寒杆菌抗体）
细菌凝集
玻片凝集试验：阳性
报告：检出伤寒杆菌
常用细菌生化反应试验
24
培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微 量发酵管
试剂：酚红、溴甲酚紫等
结果:培养基呈酸性变色
应用：观察细菌对糖度的 分解情况，常 用于肠道杆菌的鉴定
常用细菌生化反应试验
3
糖发酵试验结果判断
反应现象
结果描述
酸性变色、有气泡 分解××糖产酸、产气
酸性变色、无气泡
分解××糖产酸、不产 气
培养基不变色
不分解××糖
常用细菌生化反应试验
4
甲基红试验
原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一 步生成大量混合酸，使培养基pH维持在 4.4以下，加入甲基红后，使甲基红呈现 红色反应。此为甲基红试验阳性。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 试剂：甲基红试剂 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+
培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验， 主要用于区别大常用肠细菌肝生化反菌应试和验 产气肠杆菌 5
培养基不变色－ 应用：肠杆菌科属间鉴定
常用细菌生化反应试验
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尿素酶试验原理
尿素 尿素酶
氨+CO2
培养基pH升高
酚红呈碱性变色
常用细菌生化反应试验
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枸橼酸盐利用试验
原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐 作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯
一碳源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳 酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是 指示剂呈碱性反应。
培养基：枸盐酸盐培养基
试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色， pH7.6以上呈蓝色）
结果：培养基变蓝：+
培养基不变常用色细菌：生化－反应试验
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枸橼酸盐利用试验原理
培养基
枸橼酸盐
铵盐
碳酸盐
氨
培养基pH下降
溴麝香草酚蓝 呈碱性变色
培养基变蓝
常用细菌生化反应试验
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糖发酵试验
常用细菌生化反应试验