植物组织MDA含量测定
植物组织中丙二醇含量的测定
需要注意的是，植物组织中糖类物质对 MDA-TBA反应有干扰作用。可用公式消 除误差
C（μmol/L）=6.45（A532－A600）－0.56A450 公式（2） 式中： A532 、A600、A450分别表示450nm、532nm和 600nm波长下的吸光度。
三、材料、仪器设备及试剂
材料 植物叶片 仪器设备
分别测定上清液在450nm、532nm和600nm处的吸光值。并按公式（2）算出MDA浓度
五、思考题
第二次离心起什么作用？ 哪些因素会影响MDA含量测定结果？
研钵、试管、可调加样器、恒温水浴锅、冷 冻离心机、分光光度计
试剂
5%三氯乙酸（TCA）、0.67%（W/V）硫代 巴比妥酸（TBA） 用10%的TCA配制
四、实验步骤
新鲜叶片，去污，剪碎，混匀
称三份，0.5g左右
分别置于三只研钵中，加5%TCA研磨
所得匀浆在3000r/min下离心10min 取上层清液2ml，加0.67%TBA 2ml，混匀后在100℃水浴上煮沸30min，冷却后再离心一次
MDA在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸（TBA）反 应，形成在532nm波长处有最大吸收的有色三甲基复 合物，该复合物的吸光系数为155mm/(L▪cm)，并在 600nm波长处有最小吸光度。
可按公式 A532－A600=155000×C×L 公式（1） 算出MDA浓度(μ,mol/L),进一步算出单位质量组织中 MDA含量(μ,mol/L)。式中A532和A600分别表示532nm和 600nm波长处的吸光度。L为比色杯的厚度（cm）。
植物组织中丙二醇含量的测定
一、实验目的
熟练掌握丙二醇含量测定的原理和方法 掌握冷冻离心机的使用方法
【精品】植物组织中丙二醛含量的测定
【精品】植物组织中丙二醛含量的测定植物组织中的丙二醛（malondialdehyde, MDA）是一种重要的生物指示物，它是脂质过氧化反应生成的副产物，被广泛用于评估植物在环境胁迫下的氧化损伤程度。
本文旨在介绍植物组织中丙二醛含量的测定方法。
一、实验原理脂质过氧化反应是指脂质分子在产生自由基的作用下和氧分子反应产生的一系列复杂化学反应，其中丙二醛是其主要生成产物之一。
丙二醛含量可用氨基苯酚反应法进行测定，方法如下：二、实验步骤1.制备样品：将植物组织样品取出后，立即放入液氮中快速冷冻，然后在-80℃条件下保存。
制备样品时最好避免使用任何金属仪器或操作工具。
2.提取组织丙二醛：取出冰冻样品，加入10%四氢吡啶，用离心机离心5分钟，将上清液移至新离心管中，加入等体积的三氯醋酸/磷酸氢二钾缓冲液（pH=7.4），混合均匀后加入1%氨基苯酚溶液，摇晃混匀后，在沸水中加热15分钟，之后冷却至室温。
3.检测丙二醛含量：加入冷却到室温的硫酸，甲醛，氨基苯酚混合液中，混合均匀后，在室温下放置30分钟，之后用丙酮-石油醚混合液提取反应液中的丙二醛。
4.测定丙二醛含量：用紫外分光光度计检测丙二醛含量，吸收波长为532nm，以硫酸/磷酸氢二钾缓冲液作为空白对照。
三、实验注意事项1.制备样品时，应采取快速操作，避免组织样品在高温、干燥等条件下发生氧化损伤。
2.反应液中的溶液准确测量。
3.注意保护自己的安全，如佩戴防护手套和眼镜，避免反应液溅出。
4.在测定过程中，确保光谱仪的本底值已经清除，否则会影响测试结果。
总之，通过此篇文章的描述，我们可以了解到测定植物组织中丙二醛含量的方法。
这种方法简单、快速、精确，可以广泛应用于植物生理生化领域中的实验研究。
植物体内丙二醛含量的测定
植物体内丙二醛含量的测定一、目的通过实验，掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。
二、原理丙二醛（MDA）是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。
它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。
测定植物体内丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应，生成红棕色的三甲川（3、5、5－三甲基恶唑2、4－二酮），三甲川最大的吸收波长在532nm。
但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450nm处，在532nm处也有吸收。
植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
此外在532nm波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除。
低浓度的铁离子能显著增加硫代巴比妥酸与蔗糖或丙二醛显色反应物在532、450nm处的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛与硫代巴比妥酸显色反应中需要有一定的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100－300μg·g－1Dw，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3＋的终浓度为0.5nmol· L－1。
在532nm、600nm和450nm波长处测定吸光度值，即可计算出丙二醛含量。
三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：植物叶片。
2. 仪器设备：离心机，分光光度计；电子分析天平；恒温水浴；研钵；试管；移液管（1ml、5ml）、试管架；移液管架；洗耳球；剪刀。
3. 试剂：10％三氯乙酸；0.6％硫代巴比妥酸（TBA）溶液：石英砂。
四、实验步骤1. 丙二醛的提取称取受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2ml，研磨至匀浆，再加8ml10％三氯乙酸进一步研磨，匀浆以4000r/min离心10min，其上清液为丙二醛提取液。
【精品】植物组织或器官中丙二醛含量的测定
【精品】植物组织或器官中丙二醛含量的测定一、实验目的1. 了解研究植物中丙二醛的重要性以及丙二醛浓度与氧化应激的相关性。
2. 掌握植物中丙二醛的测定方法。
二、实验原理丙二醛（MDA）是脂质过氧化物分解的产物，是氧化应激的指标之一。
在植物中，氧化应激是由各种内外因素引起的，例如病毒感染、冷热伤害、营养缺乏、病理性衰老等。
氧化应激可导致膜脂质过氧化反应，氧化膜脂产生丙二醛。
因此，测量植物中丙二醛的浓度可以作为研究植物抗氧化性的指标之一。
本实验采用硫代巴比妥酸（TBA）法测定植物中丙二醛含量，原理是TBA可以与丙二醛反应生成红色的丙二醛- TBA复合物，其吸收峰位在532 nm处，可以用分光光度计测定光密度确定丙二醛的含量。
三、实验步骤1. 植物材料的获取和制备（1）选择植物组织或器官（如叶片、根、果实等）。
（2）将所选植物材料切碎，称取10g左右的样品，加入10 mL 10%三氯乙酸（TCA）的全氟烷提取液中（三氯乙酸毒性较大，操作时要带口罩）。
（3）用搅拌器将植物样品匀浆，放在冰箱中冷藏30分钟，使样品中的丙二醛充分释放。
（4）离心样品15分钟，取出上清液，加入等体积的2.5% TBA溶液，混合均匀。
（5）将混合液热浴在90°C温水中加热15分钟。
加热后，将混合液立即置于冰水中降温至室温。
2. 分光光度计测定丙二醛含量（1）将混合液用橡胶头香瓶移至1cm宽光程量筒中，用2.5% TBA溶液作对照。
（2）用分光光度计在532 nm处读取混合液和对照的吸收值。
计算混合液中丙二醛的含量，单位为nmol/g FW（新鲜重）。
四、实验注意事项1. 操作时要戴手套和口罩，避免皮肤直接接触样品和有毒化学品。
2. 混合液必须热浴到90℃，加热时间必须精确，否则可能会影响实验结果。
3. 混合液的pH值一定要保持在酸性范围内。
4. 取样时尽量避免样品接触金属器皿，以免产生误差。
5. 实验前要彻底清洗实验仪器和玻璃器皿，避免污染样品。
实验7-2 丙二醛含量测定
实验7-2 丙二醛（MDA）含量测定【实验目的】1、掌握植物组织中丙二醛含量测定的原理和方法。
2、了解丙二醛含量测定的意义。
【实验原理】植物器官在衰老或逆境胁迫时，会发生脂质过氧化作用，丙二醛（MDA）是其终产物之一，其含量可以反映脂类过氧化程度和植物遭受逆境伤害的程度。
在高温和酸性条件下，丙二醛与硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红棕色的3，5，5-三甲基恶唑-2，4-二酮（三甲川），在532nm处有最大吸收波长。
植物在胁迫条件下可溶性糖增加，而糖与硫代巴比妥酸的反应产物在532nm也有吸收（最大吸收波长为450nm），因此测定植物组织中丙二醛含量时需排除可溶性糖的干扰。
采用双组分分光光度法可分别求出丙二醛和可溶性糖的含量。
蔗糖与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为85.40和7.40；丙二醛与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为0和155000，根据Lambert-Beer定律，列出二元一次方程：A450=C1×85.4A532- A600=C1×7.4+ C2×155000解此方程得：C1（mmol/L）=11.71 A450C2（μmol/L）=6.45（A532- A600）-0.56 A450 （1）其中：C1——可溶性糖的浓度C2——丙二醛的浓度A450、 A532、A600分别表示450、532和600nm波长下的吸光值。
【实验器材与试剂】1、实验材料受逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官、正常植物叶片或器官2、实验试剂 10%的三氯乙酸（TCA）（称取10克TCA蒸馏水稀释定容至100mL）、石英砂、0.6%的硫代巴比妥酸（称取0.6克硫代巴比妥酸先用少量1mol/L氢氧化钠溶解，再用10%三氯乙酸定容至100mL）3、实验仪器分光光度计、离心机、研钵、电炉、试管、量筒、天平、移液管等【实验步骤】1、MDA的提取称取材料1g，剪碎，先加入2mL10%的三氯乙酸和少量石英砂研磨，再加入8mL10%的三氯乙酸充分研磨后，4000r/min离心10min，上清液即为样品提取液。
丙二醛含量测定
植物组织中丙二醛含量测定方法一：一、目的通过实验，掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。
二、原理丙二醛（MDA）是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。
它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。
测定植物体内丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应，生成红棕色的三甲川（3、5、5－三甲基恶唑2、4－二酮），三甲川最大的吸收波长在532nm。
但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450nm处，在532nm处也有吸收。
植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
此外在532nm波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除。
低浓度的铁离子能显著增加硫代巴比妥酸与蔗糖或丙二醛显色反应物在53 2、450nm处的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛与硫代巴比妥酸显色反应中需要有一定的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100－300μg·g－1Dw，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3＋的终浓度为0.5nmol·L－1。
在532nm、600nm和450nm波长处测定吸光度值，即可计算出丙二醛含量。
三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：植物叶片。
2. 仪器设备：离心机，分光光度计；电子分析天平；恒温水浴；研钵；试管；移液管（1ml、5ml）、试管架；移液管架；洗耳球；剪刀。
3. 试剂：10％三氯乙酸；0.6％硫代巴比妥酸（TBA）溶液：石英砂。
四、实验步骤1. 丙二醛的提取称取受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2ml，研磨至匀浆，再加8ml10％三氯乙酸进一步研磨，匀浆以4000r/min离心10min，其上清液为丙二醛提取液。
植物体内丙二醛含量的测定
植物体内丙二醛含量的测定一、目的通过实验，掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。
二、原理丙二醛（MDA）是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。
它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。
测定植物体内丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸(T BA)在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应，生成红棕色的三甲川（3、5、5－三甲基恶唑2、4－二酮），三甲川最大的吸收波长在532nm。
但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450n m处，在532nm处也有吸收。
植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
此外在532nm波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除。
低浓度的铁离子能显著增加硫代巴比妥酸与蔗糖或丙二醛显色反应物在532、450nm处的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛与硫代巴比妥酸显色反应中需要有一定的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100－300μg·g－1Dw，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3＋的终浓度为0.5nmol· L－1。
在532nm、600nm和450nm波长处测定吸光度值，即可计算出丙二醛含量。
三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：植物叶片。
2. 仪器设备：离心机，分光光度计；电子分析天平；恒温水浴；研钵；试管；移液管（1ml、5ml）、试管架；移液管架；洗耳球；剪刀。
3. 试剂：10％三氯乙酸；0.6％硫代巴比妥酸（TBA）溶液：石英砂。
四、实验步骤1. 丙二醛的提取称取受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2m l，研磨至匀浆，再加8ml10％三氯乙酸进一步研磨，匀浆以4000r/min离心10min，其上清液为丙二醛提取液。
植物组织中SOD活性MDA含量的测定方法
植物组织中SOD活性MDA含量的测定方法超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量是评价植物细胞的氧化应激程度和损伤程度的重要指标。
下面将介绍常用的测定植物组织中SOD活性和MDA含量的方法。
一、SOD活性测定方法：1. 混合植物组织提取液：将适量的植物组织（如叶片、根部等）加入冰冻磨碎器中，加入适量的冰冷提取液（Tris-HCl缓冲液，pH 7.8或其他适宜缓冲液），按比例加入少量酒石酸、酚酸、DTT等，然后将混合物离心10分钟。
2.处理提取物：将上述所得的植物组织提取液加入活性溶液，如NBT、PIP等，混匀后放置在37°C水浴中反应一定时间。
3. 停止反应：将反应液加入组织破壁液（甘油、NaCl、Tween-20等混合物），混匀后放置一段时间，离心10-15分钟。
4.测定光密度：取上清液用比色计测定光密度（OD）值，以反映SOD的活性，活性越高，OD值越低。
二、MDA含量测定方法：1.组织提取：将适量的植物组织加入冰冷提取液（如磷酸盐缓冲液，pH7.4），用冷磨具磨碎并移至离心管中，离心5分钟收集上清液。
2.加入TBA液：取上清液与TBA液（三硝基苞球菌素溶液）按比例混合，混匀后在水浴中加热（100°C，10分钟），然后迅速冷却至室温。
3.离心沉淀：将样品离心10分钟，取上清液。
4.测定光密度：分别取上清液测定OD值，OD值越高，MDA含量越高。
三、优化与改进：1.提取液的选择：根据不同植物组织的特点选择合适的提取液，以提高SOD活性和MDA含量的测定效果。
2.比色反应的时间和温度的调整：根据植物组织中SOD活性的变化调整反应时间和温度，以保证测定结果的准确性。
3.重复测量：为了提高实验结果的可靠性，可以重复测量同一样本，并取平均值作为最终结果。
4.与对照的比较：将测定样本与对照组进行比较，以评估SOD活性和MDA含量的变化，进一步分析植物组织的氧化应激程度和损伤程度。
MDA测定方法
丙二醛(MDA)的测定方法一、实验原理植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有丙二醛、二烯轭合物、乙烷等。
其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可以通过检测MDA了解膜脂过氧化程度，以间接测定膜脂受损程度以及植物的抗逆性。
丙二醛在高温条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮），该物质在532nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。
根据其532nm处的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。
醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450nm处有以吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
二、仪器设备紫外可见分光光度计；离心机；电子天平；研钵；恒温水浴锅；试管；剪刀。
三、主要试剂1、10%三氯乙酸（TCA）2、0.5%硫代巴比妥酸（用10％的三氯乙酸溶解）；3、石英砂。
四、实验材料正常生长以及受逆境胁迫的小麦叶片五、实验步骤? ?1. 取小麦不同部位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成0.5 cm长的小段，混匀。
2. 称取叶片切断0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入2 ml 10％TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，4. 然后在 4℃，12, 000 g 离心 15 min，取上清。
? 5. 吸取离心的上清液1.5 ml（对照加1.5 ml 10％ TCA），加同体积 0.5% TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应30 min，迅速冷却后再离心。
6. 取上清液测定532nm、450nm和600nm波长下的消光度。
六、计算含量根据植物组织的重量计算测定样品中MDA的含量：MDA浓度(μmol L-1) = 6.45*(OD535-OD600)-0.56*OD450MDA含量(μmol/g FW）= (MDA浓度(umol/L)*提取液体积(ml)) / 植物组织鲜重(g)七、注意事项1. MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴15-30 min之内。
植物组织中丙二醛含量的测定实验报告
植物组织中丙二醛含量的测定实验报告一、实验目的本实验旨在测定植物组织中丙二醛（MDA）的含量，以评估植物在逆境条件下膜脂过氧化的程度，从而了解植物的抗逆性。
二、实验原理丙二醛（MDA）是膜脂过氧化的最终分解产物之一，其含量可以反映植物细胞膜脂过氧化的程度。
在酸性和高温条件下，MDA 可与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑 2,4-二酮），该物质在 532nm 波长处有最大吸收峰。
由于植物组织中的其他成分在该波长处也有吸收，因此需要同时测定 600nm 波长处的吸光度值进行校正。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的植物叶片（如菠菜、水稻等）2、实验试剂（1）05%硫代巴比妥酸（TBA）溶液：称取 05g TBA 溶于 100ml 20%三氯乙酸（TCA）溶液中。
（2）20%三氯乙酸（TCA）溶液3、实验仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）恒温水浴锅（4）研钵（5）移液器（6）容量瓶（7）刻度试管四、实验步骤1、提取称取05g 植物叶片，剪碎后放入研钵中，加入5ml 20% TCA 溶液，研磨成匀浆。
将匀浆转移至离心管中，在 4℃下以 10000r/min 离心10min，上清液即为 MDA 提取液。
2、反应吸取 2ml MDA 提取液于刻度试管中，加入 2ml 05% TBA 溶液，混合均匀。
将试管放入沸水浴中加热 15min，然后迅速冷却至室温。
3、测定以 20% TCA 溶液为空白对照，在分光光度计上分别测定 532nm 和600nm 波长处的吸光度值（A532 和 A600）。
五、实验结果计算根据以下公式计算 MDA 含量（μmol/g）：MDA 含量＝ 645×（A532 A600) × V ／（W × 1000)其中，645 为 MDA 与 TBA 反应产物在 532nm 处的消光系数；V 为提取液总体积（ml）；W 为植物组织鲜重（g）。
植物组织中丙二醛的测定
植物组织中丙二醛的测定一、实验目的和要求1.了解植物叶片衰老过程中丙二醛（MDA）含量变化；2.掌握测定丙二醛（MDA）含量的常用方法。
二、实验内容和原理植物器官在逆境条件下或衰老时，自由基代谢失调，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（MDA）是其产物之一，通常作为脂质过氧化指标，用于表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。
MDA在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸(TBA)反应，形成三甲基复合物，该复合物的最大吸收峰在532nm处，最小吸收峰在600nm处，消光系数为155 (mM)-1 cm-1。
三、实验材料和主要仪器材料：新老叶蛋白提取液仪器：移液枪，水浴箱，离心机，离心管，分光光度计试剂：磷酸缓冲液，TBA，TCA四、实验方法和步骤1.制取提取液（一周前进行）称叶龄差异明显的叶片各0.50g 左右，加入5ml 磷酸缓冲液（50mmol，pH值为7.8），于冰浴中研磨提取，匀浆液以8000g 离心力作用下（4℃）离心10min，其上清液即为提取液。
2.加试剂以及处理：实验管：分别向1mL新老叶提取液中加TBA与TCA混合液 4.0mL（92ºC水浴保温30min）空白管：1mL Pi-buffer +TBA与TCA混合液 4.0ml （92ºC水浴30min）3.冷却后，平衡，离心5min（10000rpm）4.测吸光度：测定A532, A450和A600五、实验数据记录和处理由上一次实验可知，新叶质量为0.50g，老叶为0.53g实验数据记录如下：项目A532值A450值A600值新叶0.147 0.771 0.009老叶0.244 1.530 0.026数据计算：MDA含量计算公式：MDA(mmol/L)=(A532-A600)/(155*L)，L为比色杯厚度(cm)，此次实验L=1cm。
蔗糖对MBA-TBA反应有干扰，可用下式消除：MDA(µmol/L)=6.45(A532-A600)-0.56A450进一步可以算出单位鲜重植物组织中的MDA含量。
丙二醛(MDA)含量的测定
硫代巴比妥酸
丙二醛
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）
仪器设备
1. 2. 3. 4. 5. 6. 分光光度计； 分光光度计； 研钵； 研钵； 剪刀； 剪刀； 恒温水浴； 恒温水浴； 试管： 试管：20 mL×4 × 离心机。 离心机。
试剂
1. 5 %三氯醋酸； 三氯醋酸； 三氯醋酸 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸 硫代巴比妥酸（ 硫代巴比妥酸 三氯醋酸 溶解定容）； 溶解定容）； 3. 0.05 mol · L–1磷酸缓冲液， 磷酸缓冲液， 磷酸缓冲液 pH 7.8。 。
计算结果
V MDA( mmol⋅ g FW) = 6.452×( D532 −D600 ) −0.559×D450 × t V ×W s
-1
• 式中，Vt：提取液总体积（mL）； 式中， 提取液总体积（ ）； • Vs：测定用提取液体积（ml）； 测定用提取液体积（ ）； • FW：样品鲜重（g）。 ：样品鲜重（ ）。
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2 丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸 TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´ （TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶 唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一 2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一 ），该物质在 吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收 处有较小光吸收。 吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量 的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 可溶性糖对此反应有干扰， nm处有一 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。Fra bibliotek注意事项
植物组织MDA含量测定
植物组织M D A含量测定 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT植物组织MDA含量测定一、目的要求1．掌握植物组织MDA含量测定的原理及具体测量步骤；2．深化理解MDA与逆境和衰老的关系，理解植物组织MDA含量测定的意义；3．了解膜脂过氧化、氧自由基和MDA形成的关系；4．能够根据待测材料的具体情况设计实验步骤测定MDA含量；5．学习分光光度计，低温离心机等仪器的使用方法。
二、实验原理植物遭受逆境胁迫或衰老时，体内会发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低，活性氧平衡失调及内源激素平衡失调等。
活性氧代谢失调直接导致植物体内活性氧的大量积累，从而引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。
膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。
其中丙二醛（Malondialdehyde，MDA）是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤。
因此在植物衰老生理和抗性生理研究中，MDA含量是一个常用指标，可通过测定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
MDA在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应，产生红棕色的产物3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮（Trimet—nine），又名三甲川，该物质在532nm处有最大光吸收，在600nm处有最小光吸收。
由于TBA也可与其它物质反应，并在532nm处有吸收，为消除硫代巴比妥酸与其它物质反应的影响，同时测定600nm 下的吸光度，利用532nm 与600nm 下的吸光度的差值计算MDA 的浓度。
即：A 532－A 600＝ε·C·L式中，A 532和A 600分别表示532nm 和600nm 处的吸光度值，C 是MDA 浓度，L 为比色杯厚度，ε=155L·mmol -1·cm -1。
丙二醛(MDA)含量的测定
丙二醛（MDA ）含量的测定丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物之一。
植物在逆境下遭受伤害与活性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。
一：原理植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。
其中丙二醛（MDA ：Malondialdehyde ）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA 了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA ）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm 处有一吸收高峰，并且在660n m 处有较小光吸收。
根据其532 nm 的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。
醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm 处有一吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
硫代巴比妥酸 丙二醛 3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）仪器设备1. 分光光度计；2. 研钵；3. 剪刀；4. 恒温水浴；5. 试管：20 mL ×46. 离心机。
二：试剂1. 5 %三氯醋酸；2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解定容）；3. 0.05 mol · L –1磷酸缓冲液， pH 7.8。
+100 C O HNS N HO O O H H HN HS NH OO HO OH N N H S 2O三：方法与步骤1．取三裂叶蟛蜞菊叶片4片（每株1片），洗净擦干，剪成0.5 cm 长的小段，混匀。
2．称取叶片切段0.1g ，放入冰浴的研钵中，加入1 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。
将匀浆转移到试管中，再用1 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，分2次冲洗研钵，合并提取液。
3．在提取液中加入2 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。
MDA含量的测定
植物组织中丙二醛（TBARS-硫代巴比妥酸产物）含量的测定---（TBA）法一、仪器设备紫外可见分光光度计1台；离心机1台；电子天平1台；10ml离心管4支；研钵2套；试管4支；刻度吸管：10ml 1支，2ml 1支；剪刀1把。
二、试剂10％三氯乙酸(TCA)；0.6％硫代巴比妥酸(TBA)：先加少量的氢氧化钠(1mol/L)溶解，再用10％的三氯乙酸定容；石英砂。
三、方法1．实验材料受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官。
2．MDA的提取称取剪碎的试材1g，加入2ml l0％TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，再加8mlTCA进一步研磨，匀浆在4000r·min-1离心10min，上清液为样品提取液。
3．显色反应和测定吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0.6％TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再离心。
取上清液测定532nm、600nm和450nm波长下的消光度。
四、计算含量1．直线方程法按公式[Y532=-0.00198+0.088D450]求出样品中糖分在532nm处的消光度值Y532，用实测532nm的消光度值减去600nm非特异吸收的消光度值再减去Y532，其差值为测定样品中MDA-TBA反应产物在532nm的消光度值。
按MDA在532nm处的毫摩尔消光系数为155换算求出提取液中MDA浓度。
2．双组分分光光度法按公式[C2(μmol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450]可直接求得植物样品提取液中MDA的浓度。
[C1=11.71D450C1：可溶性糖的浓度（mmol/L）]用上述任一方法求得MDA的浓度，根据植物组织的重量计算测定样品中MDA的含量。
：MDA含量(umol·g-1)＝MDA浓度(umol·L-1)x提取液体积(ml)／植物组织鲜重(g)。
MDA测定方法
丙二醛(MDA)的测定方法一、实验原理植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有丙二醛、二烯轭合物、乙烷等。
其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可以通过检测MDA了解膜脂过氧化程度，以间接测定膜脂受损程度以及植物的抗逆性。
丙二醛在高温条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮），该物质在532nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。
根据其532nm处的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。
醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450nm处有以吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
二、仪器设备紫外可见分光光度计；离心机；电子天平；研钵；恒温水浴锅；试管；剪刀。
三、主要试剂1、10%三氯乙酸（TCA）2、0.5%硫代巴比妥酸（用10％的三氯乙酸溶解）；3、石英砂。
四、实验材料正常生长以及受逆境胁迫的小麦叶片五、实验步骤1. 取小麦不同部位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成0.5 cm长的小段，混匀。
2. 称取叶片切断0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入2 ml 10％TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，4. 然后在 4℃，12, 000 g 离心 15 min，取上清。
5. 吸取离心的上清液1.5 ml（对照加1.5 ml 10％ TCA），加同体积0.5% TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应30 min，迅速冷却后再离心。
6. 取上清液测定532nm、450nm和600nm波长下的消光度。
六、计算含量根据植物组织的重量计算测定样品中MDA的含量：MDA浓度(μmol L-1) = 6.45*(OD535-OD600)-0.56*OD450MDA含量(μmol/g FW）= (MDA浓度(umol/L)*提取液体积(ml)) /植物组织鲜重(g)七、注意事项1. MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴15-30 min之内。
植物组织MDA含量测定
植物组织 MDA 含量测定一、目的要求1．掌握植物组织 MDA 含量测定的原理及具体测量步骤；2．深化理解 MDA 与逆境和衰老的关系，理解植物组织MDA 含量测定的意义；3．了解膜脂过氧化、氧自由基和MDA 形成的关系；4．能够根据待测材料的具体情况设计实验步骤测定MDA 含量；5．学习分光光度计，低温离心机等仪器的使用方法。
二、实验原理植物遭受逆境胁迫或衰老时，体内会发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低，活性氧平衡失调及内源激素平衡失调等。
活性氧代谢失调直接导致植物体内活性氧的大量积累，从而引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。
膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。
其中丙二醛（ Malondialdehyde， MDA ）是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤。
因此在植物衰老生理和抗性生理研究中， MDA 含量是一个常用指标，可通过测定 MDA 了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
MDA 在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（ TBA ）反应，产生红棕色的产物 3,5,5-三甲基恶唑 2,4-二酮（Trimet —nine），又名三甲川，该物质在 532nm 处有最大光吸收，在 600nm 处有最小光吸收。
由于TBA 也可与其它物质反应，并在 532nm 处有吸收，为消除硫代巴比妥酸与其它物质反应的影响，同时测定600nm 下的吸光度，利用 532nm 与 600nm 下的吸光度的差值计算MDA 的浓度。
即： A532－A 600＝ε·CL式中，A 532和 A 600分别表示 532nm 和 600nm 处的吸光度值，C 是 MDA 浓度，-1-1。
L 为比色杯厚度，ε =155L· mmol·cmO O OHO O O2H N+100 C H N NHHS NOH S N OHO NSH H HTBA MDA3,5,5-三甲基恶唑 2,4-二酮需要指出的是，植物组织中糖类物质可能对 MDA-TBA 反应有干扰作用。
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植物组织MDA 含量测定
一、目的要求
1．掌握植物组织MDA 含量测定的原理及具体测量步骤；
2．深化理解MDA 与逆境和衰老的关系，理解植物组织MDA 含量测定的意义； 3．了解膜脂过氧化、氧自由基和MDA 形成的关系；
4．能够根据待测材料的具体情况设计实验步骤测定MDA 含量； 5．学习分光光度计，低温离心机等仪器的使用方法。
二、实验原理
植物遭受逆境胁迫或衰老时，体内会发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低，活性氧平衡失调及内源激素平衡失调等。
活性氧代谢失调直接导致植物体内活性氧的大量积累，从而引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。
膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。
其中丙二醛（Malondialdehyde ，MDA ）是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤。
因此在植物衰老生理和抗性生理研究中，MDA 含量是一个常用指标，可通过测定MDA 了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
MDA 在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA ）反应，产生红棕色的产物3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮（Trimet —nine ），又名三甲川，该物质在532nm 处有最大光吸收，在600nm 处有最小光吸收。
由于TBA 也可与其它物质反应，并在532nm 处有吸收，为消除硫代巴比妥酸与其它物质反应的影响，同时测定600nm 下的吸光度，利用532nm 与600nm 下的吸光度的差值计算MDA 的浓度。
即：A 532－A 600＝ε·C ·L
式中，A 532和A 600分别表示532nm 和600nm 处的吸光度值，C 是MDA 浓度，L 为比色杯厚度，ε=155L·mmol -1·cm -1。
+
100 C
O
H N S
N H
O
O O
H
H
H N
H S
N
H
O O
H O
OH
N
N H
S
2O
TB
A MDA 3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮
需要指出的是，植物组织中糖类物质可能对MDA-TBA 反应有干扰作用。
可用下列公式消除由蔗糖引起的误差。
C（μmol·L-1）=×(A532－A600) －×A450
三、材料与设备
1．材料：四种菠菜样品，即绿色和黄色叶片的高温处理和室温对照。
2．仪器：
(1) 分光光度计；(2) 冷冻离心机；（3）水浴锅；(4) 天平；(5) 研钵；(6) 剪刀；
(7) 5ml刻度离心管；(9) 刻度试管(10ml)；(10) 镊子；(11) 移液管(5ml、2ml、1ml)；（12）冰箱。
3．药品
(1) L 磷酸钠缓冲液；(2) 5％三氯乙酸溶液：称取5g三氯乙酸，先用少量蒸馏水溶解，然后定容到100ml；(3) ％的TBA溶液：称取硫代巴比妥酸，用5％三氯乙酸溶解，定容至100ml。
四、实验步骤
1．MDA的提取：取样品（W），加入2ml预冷的L 的磷酸缓冲液，冰浴研磨成匀浆，转移到5ml刻度离心试管，将研钵用缓冲液洗净，清洗液也移入离心管中，最后用缓冲液定容至5ml。
4500rpm，4度，离心10min，上清液即为MDA提取液，测量提取液的体积（V）。
2．MDA含量测定：吸2ml（V2）的提取液于刻度试管中（空白为2ml缓冲液），加入3ml ％的TBA溶液，将试管放入沸水浴中煮沸10 min（自试管内溶液中出现小气泡开始计时）。
到时间后，立即将试管取出并放入冰浴中。
4500rpm，4度，离心10min，取上清液并量其体积（V1）。
上清液于532nm、600nm波长下测定吸光度。
3．结果计算:
MDA(nmol·g-1)＝×(A
532－A
600
) ×
W
V2
V
1
V
⨯
⨯
式中，V
1为反应液总量（ml）；V
2
为反应液中的提取液数量(ml)；V为提取液总量
（ml）； W为植物样品重量(g)。
五、实验报告?
六、思考题
1．TBA为什么要溶解在三氯乙酸中
2．提取液与TBA的混合液为什么要加热为什么加热时间又不能过长3．为什么要测定反应液在600nm下的吸光度
4．如果可溶性糖含量影响MDA含量的测定，你有什么办法消除其影响5．正常植物与衰老时相比丙二醛含量有什么变化，分析其原因。
七、注意事项
1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。
2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最终浓度为nmol · L-1）。
3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间。