锰过氧化物酶(Mnp)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
过氧化物酶活性测定
过氧化物酶（POD）活性测定一、原理：过氧化物酶含铁，广泛存在于植物组织中，可催化过氧化氢氧化酚类，产物为醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其他分子缩合，产生颜色较深的化合物。
本实验以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶的底物，当有H2O2 存在时，过氧化物酶可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的4-邻甲氧基苯酚，其在470nm处有最大吸收峰，故可用分光光度计在470nm处测定其吸光值，即可求出该酶的活性。
二、实验准备：仪器：分光光度计、离心机、秒表、研钵、磁力搅拌器、移液管、电子天平、冰箱、100ml 容量瓶、试管、胶头滴管、试管架、烧杯、吸水纸、比色皿、剪子试剂：0.05 mol/L愈创木酚；2%H2O2； pH 6.0的磷酸缓冲液；75%酒精；蒸馏水试剂配制:○1pH 6.0的磷酸缓冲液:0.2mol/l NaH2PO4 (27.6g NaH2PO4•H2O 用蒸馏水配成1000ml）取87.7ml和0.2mol/l Na2HPO4 （71.7g Na2HPO4•12H2O 或53.65g Na2HPO4•7H2O 用蒸馏水配成1000ml）取12.3ml后混合，用蒸馏水稀释至200ml即可。
○22%H2O2：取6.7ml 30%H2O2于烧杯中，再加入93.3mL蒸馏水（或加蒸馏水稀释至100mL），搅拌均匀。
○30.05 mol/L愈创木酚：准确称取6.2g愈创木酚，再用95%的乙醇配制定容至100ml即可。
三、步骤：○1粗酶液的提取：称取一定质量的植物材料放入研钵中，加入提取液1 mL(pH 6.0的磷酸缓冲液)，研磨，再加入9 mL提取液，将匀浆全部转入离心管中，于4 000 r/min 4 ℃离心10 min，上清液即为酶的粗提取液，收集上清液于冷处（冰箱4℃保存）。
○2酶活性的测定：将4 mL反应混合液( pH 6.0的磷酸缓冲液2 mL,酶液1 mL,0.05 mol/L 愈创木酚1 mL)和1 mL 2% H202加入试管中立即摇匀并迅速倒入比色皿中，于470 nm波长下用U 2800型紫外可见分光光度计比色，立刻记录吸光度值，以后每15 s记录1次，记录2 min ，另外以缓冲液代替酶液作为较零对照组。
过氧化物酶活性的测定实验报告
一、实验目的了解过氧化物酶（POD）在植物生理学中的重要作用，掌握测定POD活性的方法，并分析不同因素对POD活性的影响。
二、实验原理过氧化物酶是一种广泛存在于植物组织中的酶，能够催化过氧化氢（H2O2）分解为水（H2O）和氧气（O2）。
在实验中，通过测定在一定时间内POD分解H2O2产生氧气的量，来评价POD的活性。
反应方程式如下：2H2O2 → 2H2O + O2本实验采用愈创木酚法测定POD活性。
愈创木酚在POD催化下被氧化，生成对苯醌，进而与氯化铁形成紫色络合物，通过测定紫色络合物的吸光度变化来反映POD的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物叶片（如马铃薯、菠菜等）- 过氧化氢（H2O2）- 愈创木酚- 氯化铁- 磷酸氢二钠（Na2HPO4）- 磷酸氢钠（NaH2PO4）- pH计- 离心机- 分光光度计- 研钵- 试管- 移液器- 电子天平2. 实验试剂：- 0.1 M磷酸盐缓冲液（pH 7.0）- 0.1 M H2O2溶液- 0.5 M愈创木酚溶液- 0.1 M氯化铁溶液四、实验步骤1. 酶液提取：将植物叶片洗净、剪碎，加入预冷的磷酸盐缓冲液，在研钵中研磨成匀浆。
将匀浆液转移至离心管中，4℃、12,000 rpm离心10分钟，取上清液即为酶液。
2. 测定酶活性：取5支试管，编号为1-5，分别加入以下试剂：- 空白组：0.1 M磷酸盐缓冲液1.0 mL、0.1 M H2O2溶液1.0 mL、0.5 M愈创木酚溶液1.0 mL- 实验组：0.1 M磷酸盐缓冲液1.0 mL、0.1 M H2O2溶液1.0 mL、0.5 M愈创木酚溶液1.0 mL、酶液0.1 mL将各试管混匀，置于37℃恒温水浴中保温5分钟。
取出试管，立即放入冰浴中终止反应。
使用分光光度计在波长560 nm处测定各试管吸光度。
3. 计算酶活性：以空白组吸光度为基准，计算各实验组吸光度变化值（ΔA）。
根据下列公式计算酶活性：酶活性（U/g·min）= ΔA × 0.05 × 10^3 / 酶液浓度五、结果与分析1. 不同植物叶片POD活性比较：实验结果显示，不同植物叶片的POD活性存在差异。
过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制
过氧化物酶（POD ）活性测定【实验原理】过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H 202存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。
【实验试剂】 愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L 磷酸缓冲液（pH6.0）、反应混合液[100mmol/L 磷酸缓冲液（Ph6.0）50mL ，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL ，混合均匀保存在冰箱中]【方法步骤】（1）、粗酶液的提取 称取小麦叶片0.25g ，加20mmol/LKH2PO4 2.5mL ，于研钵中研成匀浆，以4000r/min 离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL 提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。
（2）、酶活性的测定 取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL ，KH2PO41mL ，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液3mL ，稀释后的酶液1mL （如表1），立即开启秒表，于分光光度计470nm 波长下测量OD 值，每隔1min 读数一次（4min ）。
以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD 值增加0.01定义为一个活力单位。
表1 紫外吸收法测定POD 酶活性配置表4.结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min · g （鲜重） ]表示之。
也可以用每 min内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。
POD 总活性[u/g(FW)]=式中：POD 总活性以酶单位每克鲜重表示。
其中 △470=ACK-AE比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示。
ACK ——照光对照管的吸光度。
AE ——样品管的吸光度。
Vt ——样品液总体积，mL 。
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC0090规格：50T/48S 产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体0.33mL×2瓶，4℃保存；用时每瓶加入5mL 试剂一；用不完的试剂4℃保存一周；试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
POD 催化H 2O 2氧化特定底物，在470nm 有特征光吸收。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二和三37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min。
3、样本测定表试剂名称（µL）测定管样本15蒸馏水270试剂一520试剂二130试剂三135在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s 后的吸光值A2。
木质素过氧化物酶(Lip)活性检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4257
木质素过氧化物酶（Lip ）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4257规格：50T/48S紫外分光光度法产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体85mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体11mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体6mL×1瓶2-8℃保存产品说明：木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）（Lip ）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，是木质素的生物降解过程中的主要木质素降解酶类。
Lip 在饲料资源开发以及废水、废物处理领域有着广阔的应用前景。
藜芦醇可以被Lip 催化发生氧化反应，其产物藜芦醛在310nm 处有最大吸收峰，以藜芦醇为反应底物，通过测定310nm 处藜芦醛的吸光值，可以判定Lip 的酶活性。
Veratryl AlcoholLip Veratraldehyde (310nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声波细胞破碎仪、研钵/匀浆器、1mL 玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照样本质量（g ）：试剂一体积（mL ）为1:5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆；10000g 4℃离心10min ，取上清置冰上待测。
2、细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL ）为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 试剂一）加入试剂一，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率300W ，超声3s ，间隔7s ，总时间3min ），10000g 4℃离心10min ，取上清置冰上待测。
过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制
过氧化物酶（POD）活性测定【实验原理】过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H202存在条件下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。
【实验试剂】愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0）、反应混合液[100mmol/L 磷酸缓冲液（Ph6.0）50mL，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL，混合均匀保存在冰箱中]【方法步骤】（1）、粗酶液的提取称取小麦叶片0.25g，加20mmol/LKH2PO4 2.5mL，于研钵中研成匀浆，以4000r/min离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。
（2）、酶活性的测定取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液3mL，稀释后的酶液1mL（如表1），立即开启秒表，于分光光度计470nm波长下测量OD值，每隔1min读数一次（4min）。
以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD值增加0.01定义为一个活力单位。
表1 紫外吸收法测定POD酶活性配置表管号S0（对照）S1（实验）S2（实验）反应混合液(ml) 3.0 3.0 3.0KH2PO4 (ml) 1.00.00.0酶液 (ml)0.0 1.0 1.04.结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA 470 /[min · g （鲜重） ]表示之。
也可以用每min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。
POD总活性[u/g(FW)]=FWtV.VA T⨯⨯⨯⨯147001∆式中：POD总活性以酶单位每克鲜重表示。
植物过氧化物酶(POD)检测试剂盒(愈创木酚比色法)说明书
检测试剂盒(愈创木酚比色法)说明书
4ml预冷的PODLysisBuffer研磨或匀浆，4 POD粗提液，-20℃冻存，用于过氧化物酶的
A测定0=加入PODAssaybuffer工作液后立即测定的测定孔吸光度值t=反应时间(min)=3
注意事项：
1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、POD酶液提取时注意低温操作，防止酶活性。
3、以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活。
4、POD氧化剂和POD终止液具有一定腐蚀性，请小心操作。
5、POD氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。
6、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
（精选）保护酶活性测定方法一、过氧化物酶（pod）活性测定1、酶液的制备...
保护酶活性测定方法一、过氧化物酶（POD）活性测定1、酶液的制备：称取样品3 g，加入预冷的0.05 mol/L pH7.8的磷酸缓冲液少量，用粗纱布过滤，定容至10ml，低温离心（12×104r/min,0~4℃）15min,取上清夜置于低温冰箱备用。
2、试剂：0.05 mol/L pH 5.5磷酸缓冲液0.05 mol/L 愈创木酚溶液（2-甲基酚）20%三氯乙酸溶液2%H2O23、仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸量管4、过氧化物酶活性测定：（1）加入反应混合液2.9 ml磷酸缓冲液1 ml愈创木酚溶液（2-甲基酚）1 ml H2O20.1ml酶液（2）37℃水浴锅中保温15min,迅速转入冰浴，并加入2ml三氯乙酸溶液终止反应（3）过滤，适当稀释。
在470nm处测OD470。
5、结果计算：以每分钟内OD变化0.01为1个酶活力单位。
即酶活力=OD×D / 0.01t酶的比活力= OD×D /（0.01tw）其中：OD为反应时间内吸光度的变化W为材料鲜重t为反应时间D为稀释倍数。
即提取的总酶液为反应系统内酶的倍数二、多酚氧化酶（PPO）活性测定1、酶液的制备：称取样品3 g，加入预冷的0.05 mol/L pH7.8的磷酸缓冲液少量，用粗纱布过滤，定容至10ml，低温离心（12×104r/min,0~4℃）15min,取上清夜置于低温冰箱备用。
2、试剂：0.05 mol/L pH 5.5磷酸缓冲液0.05mol/L儿茶酚溶液（邻苯二酚）20%三氯乙酸溶液2%H2O23、仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸量管4、多酚氧化酶活性测定：（1）加入反应混合液3.9 ml磷酸缓冲液1 ml 儿茶酚溶液0.1 ml酶液（2）37℃水浴锅中保温15min,迅速转入冰浴，并立即加入2ml三氯乙酸溶液终止反应。
（3）过滤，适当稀释。
锰超氧化物酶Mn-SOD
锰超氧化物酶Mn-SOD
锰超氧化物酶(Mn-SOD)是一种重要的酶类，能够在自由基反应中作为一种抗氧化剂进行保护作用，防止细胞和组织器官的损伤和疾病发生。
本文将从锰超氧化物酶的定义、特性、功能及应用等方面进行450字的详细介绍。
1. 锰超氧化物酶的定义
锰超氧化物酶(Mn-SOD)是一种四聚体酶，其分子量大约为80kDa。
与其它超氧化物酶相比，锰超氧化物酶是最早被发现和研究的一种，它是细胞内最重要的超氧化物歧化酶之一。
2. 锰超氧化物酶的特性
锰超氧化物酶富含在线粒体、细胞质和细胞核等部位，其中除了细胞核内相对较少。
它的基本特性在于它所用的金属离子是锰离子，而不是铜离子或铁离子等其他超氧化物歧化酶所使用的金属离子。
3. 锰超氧化物酶的功能
锰超氧化物酶的主要功能在于对细胞内的超氧阴离子(O2−)进行歧化作用，将其转变为较为对细胞不具有氧化作用的H2O2，防止其对细胞和组织器官的损伤和疾病发生。
此外，锰超氧化物酶还能够抑制乳酸脱氢酶等一些蛋白质的氧化作用，从而发挥一定的蛋白质保护作用。
4. 锰超氧化物酶的应用
锰超氧化物酶已经被广泛地用于研究一些生物学过程的机制，例如：癌症、糖尿病、神经退行性疾病、心血管疾病等的发生与发展过程。
同时，它也被广泛应用于医学诊疗中。
例如，它可以用于治疗以缺氧为特征的脑损伤、心肌梗死和其他疾病。
总之，锰超氧化物酶是一种重要的酶类，它能够在细胞内对超氧阴离子进行歧化作用，起到抗氧化剂的保护作用。
它的研究和应用对于维护人体健康具有重要意义。
多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0190规格：50T/24S产品简介：PPO主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在410nm有特征光吸收。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存，用前混匀；试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。
操作步骤：一、粗酶液提取：1.收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2.称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定操作表：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管对照管试剂一600600试剂二150150样本150煮沸的样本15037℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min后，迅速放入沸水中加热10min。
冷却后，5000g，常温离心10min，收集上清，用蒸馏水调零，410nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。
注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5 min沸水浴处理。
PPO活性计算：（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使410nm处吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。
锰过氧化物酶(Mnp)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4253
锰过氧化物酶（Mnp）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4253可见分光光度法规格：50T/48S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体80mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体6mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体11mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体200μL×1支2-8℃保存溶液配制：试剂四：临用前根据实验所需量按照试剂四（μL）：蒸馏水（μL）=1:49的比例配制，现用现配。
产品说明：锰过氧化物酶（Mnp）（EC1.11.1.13）是一种普遍存在于细菌和真菌中的微生物木质素分解酶，在微生物木质素分解系统中起着关键作用，它可以有效的降解木质素以及废水和土壤中比较难降解的化合物，在生物制浆、生物漂白和污染物的生物降解等工业领域具有广泛应用。
锰过氧化物酶在Mn2+环境下，可将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，四邻甲氧基连酚在465nm处有吸收峰，通过检测465nm处吸光值的变化，可测定锰过氧化物酶的活性。
Mn2+Guaiacol Tetra-o-methoxylianol(465nm)Mnp注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声波细胞破碎仪、研钵/匀浆器、1mL 玻璃比色皿、震荡仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照样本质量（g）：试剂一体积（mL）为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆；10000g4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2、细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一）加入试剂一，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率30%或300W，超声3s，间隔7s，总时间3min），10000g4℃离心10min，取上清置冰上待测。
Ca++Mg++__-ATP 酶活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4574
Ca++Mg++-ATP 酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：UPLC-MS-4574规格：50T/24S溶液的配制：1、试剂三：临用前取1 支加入1 mL 蒸馏水充分混匀待用；现用现配。
用不完的试剂-20℃分装保存一周。
2、试剂六：临用前加入15 mL 蒸馏水，溶解后2-8℃保存两周。
3、试剂七：临用前加入15 mL 蒸馏水，溶解后2-8℃保存两周。
4、标准品：10mmol/L 标准磷贮备液。
将标准品20 倍稀释，即取0.1 mL 标准品加1.9 mL 蒸馏水充分混匀，配成0.5 μmol/mL 标准磷应用液，现用现配。
5、定磷剂的配制：按H2O：试剂六：试剂七：试剂八=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。
若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂根据样本量现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：Ca++Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。
根据Ca++Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。
ATP ADP + PiCa++ Mg++-ATPaseMolybdenum BluePhosphomolybdate Blue（660nm）注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、低温离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500 万细菌或细胞加入1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
过氧氢酶的活性测定-高锰酸钾法
过氧化氢酶的活性测定-高锰酸钾滴定法一、原理过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。
即可求出消耗的H2O2的量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）仪器设备：1.三角瓶；2.酸式滴定管；3.恒温水浴；4.容量瓶等。
（二）试剂：1. 10%H2SO42. 0.1mol/L 高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L草酸溶液标定；3. 0.1mol/L H2O2市售30%H2O2大约等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1mol/L KMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定；4. 0.1mol/L草酸：称取优级纯H2C2O4·2H2O 12.607g，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml。
5H2O2+2KMnO4+4H2SO4→5O2↑+2KHSO4+8H2O+2MnSO4三、实验步骤（一）取50ml三角瓶4个（两个测定，另两个为对照），测定瓶加入酶液1ml，对照加煮死酶液1ml，再加入2.5ml 0.1mol/LH2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO4 2.5ml。
用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30s内不消失）为终点。
2MnO4-+5H2O2+6H+=2Mn2++8H2O+5O2↑四、计算方法酶活性用每ml过氧化氢酶在1min内分解H2O2的mg数表示：过氧化氢酶活性=（A-B）×n/(1×1.7×t)式中：A—对照KMnO4滴定ml数；B—酶反应后KMnO4滴定ml数；1—反应时所用酶液量（ml）；t—反应时间（min）；1.7—1ml 0.1mol/L KMnO4相当于1.7mgH2O2；n—酶液稀释倍数。
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书
过氧化物酶(POD)试剂盒说明书一、测定原理：利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理，通过测定420nm 处吸光度的变化得出其酶活性。
二、实际的组成和配置试剂一：液体60ml×4瓶，4℃保存6个月试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存6个月试剂二应用液的配置：临用每瓶粉剂加入10ml 的双蒸水溶解，4℃避光保存试剂三：液体5ml×1瓶，4℃保存6个月试剂三应用液的配制：临用前用双蒸水15倍稀释，使得1cm 光径，双蒸水调零时A240保持在0.4左右，现用现配。
若A 值太高，则加双蒸水稀释，若A 值太低，则加入适量试剂三。
（一般在25倍左右稀释）试剂四：液体50ml×2瓶，4℃保存6个月。
三、操作步骤：1、前处理：植物组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按照重量(g):体积(ml)=1:9的比列加入9倍体积的匀浆介质(推荐使用生理盐水或磷酸盐缓冲液:0.1 mol/L pH 7-7.4)，冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液，3500r/min 离心10min ，取上清液进行测定。
混匀后，3500r/min 离心10min ，取上清于波长420nm 处，1cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
四、计算及举例1、定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化1ug 底物的酶量定义为一个酶活力单位。
2、植物组织中过氧化物酶(POD)活力计算公式：10)/()min 30()()()1(12-)/(⨯÷÷⨯⨯=ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD 匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力 3.计算举例取新鲜桑叶，制备成10%匀浆，取100ul 匀浆上清，按照操作表进行操作，测得数据如下：对照OD 0.237；测定OD 0.665；同时测得10%桑叶匀浆蛋白浓度是1.80mgprot/ml 根据公式计算如下:mgprotU ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD / 26.42010001.80300.14.01120.237-0.6651000)/()min 30()()()1(12-)/(=⨯÷÷⨯⨯=⨯÷÷⨯⨯=匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力。
锰过氧化物酶的表达和白腐菌降解木质素机制中的锰调节
锰过氧化物酶的表达和白腐菌降解木质素机制中的锰调节FREDERIC H. PERIE AND MICHAEL H. GOLD俄勒冈科学技术研究所,化学和生物科学系木质素是一种复杂的、异质的，占植物纤维组分的20%~30%。
白腐担子真菌主要是负责引发木材分解木质素。
在白腐菌降解木质素培养条件下，研究得最透彻的是白腐担子菌，它可以产生两种胞外酶，分别是锰过氧化物酶（MnP）和木素过氧化物酶（LiP），沿同一H202生成系统，构成木质素降解系统的主要组成部分。
白腐真菌分泌过氧化物酶和氧化酶显然是独特的组合。
云芝和Phlebia 辐射每产生一个或多个漆酶在。
平菇sajor-凤尾菇分泌一种芳基醇氧化酶（5），一漆酶，和几个过氧化物酶（13）。
Bjerkendera夜蛾分泌一种芳基醇氧化酶（29），和Rigidoporus木质SUS 显然分泌漆酶和锰过氧化物酶一（14）。
以前报告显示，Dichomitus squalens （猪苓anceps）下各种条件，有效地降级自然从白桦木质素（2），白杨（30），和云杉木（8）和从小麦，大麦，和葡萄吸管（43）。
至扩大我们的的木质素降解酶的理解英文内容- orated 各白腐真菌，我们已进行了任务确定和特征外OXI- 的酶与格D。
squalens 及其调控。
在这种报告中，我们探讨D的能力squalens降解木质素合成在各种条件。
此外，我们演示该木质素的条件下这种微生物表达漆酶（34）和一个锰过氧化物酶和表达的锰过氧化物酶是由锰监管。
与此相反，既不外唇也不藜芦醇氧化酶的活性在检测文化根据各种各样的条件下生长。
材料与方法有机体。
Dichomitus squalens（喀斯特）里德（猪苓anceps派克）（CBS 432.34）由F. Zadrazil获得和维持在马铃薯葡萄糖，酵母提取物琼脂斜面。
菌丝夹连接为很容易观察到，indicat - ING的分离物保持在dikaryotic状态（12，35）。
酶活的测定方法
酶活测试及试剂1 木素过氧化物酶（Lip）：3ml反应体系：①0.1mol/L酒石酸缓冲液(pH3.0) 1.5mL；②10mmol/L藜芦醇1.0mL；③粗酶液0.4mL；④10mmol/L H202 0.1mL启动反应，25℃反应3min。
于310nm测其光密度，以1.0mL缓冲液代替藜芦醇作空白对照，定义每分钟使1μmol的藜芦醇氧化成藜芦醛所需的酶量为一个酶活力单位(U)，藜芦醛的摩尔吸光系数9 300 mol-1cm-1。
0.1mol/L酒石酸缓冲液(pH3.0)：配0.1mol/L的酒石酸和酒石酸钠溶液各100mL，然后分别取出部分混合均匀至pH值为3.0。
（酒石酸：分子量75，0.1mol/L溶液为7.5g/L。
酒石酸钠：分子量230，0.1mol/L溶液为23g/L）10mmol/L藜芦醇：1.682g藜芦醇添加到1L水中即可（试剂藜芦（3,4-Dimethoxybenzyl alcohol）的分子量为168.19）10mmol/L H202（按1L计算）：称取1.13g过氧化氢试剂加入到1L纯水中即可（原试剂含30% H202）2 锰过氧化物酶（MnP）：3ml反应体系：① 0.05mol/L琥珀酸缓冲液（丁二酸）(pH4.5) 2.0mL；②15mmol/LMnSO4 0.5mL；③粗酶液0.4mL；④10mmol/L H202 0.1mL启动反应，37℃反应3min。
240nm测吸光值变化。
三价锰离子的吸光系数为8100 M−1 cm−1）0.05mol/L琥珀酸缓冲液（丁二酸）(pH4.5)：配0.05mol/L的琥珀酸和琥珀酸钠溶液各100mL，然后分别取出部分混合均匀至pH值为4.5。
（琥珀酸：分子量118.09，0.05mol/L 溶液为5.9g/L。
琥珀酸钠：分子量270.15，0.05mol/L溶液为13.5g/L）15mmol/L MnSO4（按1L计算）：2.535g硫酸锰加入到1L纯水中溶解即可。
过氧化物酶活性的测定
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植物生理学实验报告
实验题目：过氧化物酶活性的测定
姓名
班级
四、数据分析
△A470的值太小可能是由于叶片放置过久导致过氧化物酶活性丧失。
五、思考题
1）过氧化物酶在植物体内的主要作用是什么？
答：它与光合作用、呼吸作用及生长素的氧化等都有关系。
在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。
一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。
这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度，而且发现早衰减产的水稻根系中过氧化物酶的活性增加，所以过氧化物酶可作为组织老化的一种生理指标。
（2）比色时为什么要在3min 内完成。
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答：因为这个反应的速度很快，在一定时间里反应物就被消耗光。
抗坏血酸过氧化物酶活性测定试剂盒使用说明
抗坏血酸过氧化物酶活性测定试剂盒使用说明分光光度法货号：BC0220规格:50管/48样产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入5ml 双蒸水充分溶解；试剂三：液体×1支，4℃保存。
产品说明：APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。
APX 具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上。
APX 催化H 2O 2氧化AsA，是植物AsA 的主要消耗者。
APX 的活性直接影响到AsA 的含量，在胁迫和解胁迫条件下，APX 与AsA 具有一定的负相关性。
APX 催化H 2O 2氧化AsA，通过测定AsA 的氧化速率，可计算得APX 活力。
试验中所需的仪器和试剂：低温离心机、紫外分光光度计、1ml 石英比色皿、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1ml 试剂一）进行冰浴匀浆。
13000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
二、测定操作表：1.分光光度计预热30min 以上，调节波长到290nm，用蒸馏水调零。
2.试剂一在25℃中预热30min以上。
3.测定管：依次在1ml石英比色皿中加入100μl上清液、700μl预热的试剂一、100μl试剂二和100μl试剂三，迅速混匀后在290nm测定10s和130s光吸收A2和A1，△A=A2-A1。
APX活力计算：(1)按样本蛋白浓度计算活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA为1U。
APX(μmol/min/mg prot)=△A÷(ε×d）×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T=1.79×△A÷Cpr（2）按样本质量计算单位的定义：每g组织每分钟氧化1μmol AsA为1U。
过氧化物酶活性测定方法
过氧化物酶活性测定方法过氧化物酶活性的测定(比色法)过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。
一、原理在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料:马铃薯块茎。
(二)试剂1 ( 100 mmol , L 磷酸缓冲液 pH7.0 (见附录)。
磷酸氢二钠。
磷酸二氢钠。
2 (反应混合液: 100 mmol , L 磷酸缓冲液( pH7.0 ) 50 mL 于烧杯中，加入愈创木酚((邻甲氧基苯酚) 28 μl ，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入 30 % 过氧化氢19 μl ，混合均匀，保存于冰箱中。
(三)仪器设备分光光度计，研钵，恒温水浴锅， 100 mL 容量瓶，吸管，离心机。
三、实验步骤1 (称取植物材料 1 g ，剪碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，以 4000 r , min 离心 10 min ，上清液转入 100 mL 容量瓶中，残渣再用 5 mL 磷酸缓冲液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，贮于低温下备用。
2 (取光径 1 cm 比色杯 2 只，于 1 只中加入反应混合液3 mL 和磷酸缓冲液 1mL ，作为对照，另 1 只中加入反应混合液 3 mL 和上述酶液 1mL (如酶活性过高可稀释之)，立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量波长 470 nm 下吸光度值，每隔 1min 读数一次。
四、结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA 470 /[min ? g (鲜重) ] 表示之。
也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位( u )表示。
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锰过氧化物酶（Mnp）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1620
规格：50T/24S
产品内容：
试剂一：液体75mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：
锰过氧化物酶（EC1.11.1.13）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、DTT，多环芳烃等。
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
操作步骤：
一、酶液提取
1.组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂一）加入
试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试
剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
3.培养液或其它液体：直接检测。
二、测定操作
对照管测定管
试剂一（μL）600500
试剂二（μL）100
试剂三（μL）200200
样品（μL）100100
试剂四（μL）100100
充分混匀，于37℃反应10min，于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定465nm处吸光值，
记为A对照管和A测定管，△A=A测定管-A对照管。
三、酶活计算公式
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/mg prot）=△A÷（ε×d）×V反总÷（V样×Cpr）÷T=83×△A÷Cpr 2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/g）=△A÷（ε×d）×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T=83×△A÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/104cell）=△A÷（ε×d）×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T
=83×△A÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/L）=△A÷（ε×d）×V反总÷V样÷T=8.3×104×△A
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；
V反总：反应总体积，1mL；V样：反应中样本体积，
0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓
度，mg/mL；
W：样本质量，g；T：反应时间，10min。