还原糖的测定方法_国标.pdf
食物中还原糖的测定方法
⾷物中还原糖的测定⽅法⾷物中还原糖的测定⽅法⼀、直接滴定法1.原理样品经除去蛋⽩质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的菲林⽒液，菲林⽒液被还原析出氧化亚铜后，过量的还原糖⽴即将次甲基蓝还原，使蓝⾊褪⾊。
根据样品消耗体积，计算还原糖量。
2.适⽤范围GB5009.7-85，本⽅法适⽤于所有⾷品中还原糖的检测。
检出限0.1mg。
3.主要仪器滴定管4.试剂除特殊说明外，实验⽤⽔为蒸馏⽔，试剂为分析纯。
（1）菲林甲液：称取15 g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及0.05 g次甲基蓝，溶于⽔中并稀释⾄1 L。
（2）菲林⼄液：称取50 g酒⽯酸钾钠与75 g氢氧化钠，溶于⽔中，再加⼊4 g亚铁氰化钾，完全溶解后，⽤⽔稀释⾄500ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（3）⼄酸锌溶液：称取21.9 g⼄酸锌，加3 ml冰⼄酸，加⽔溶解并稀释⾄100 ml。
（4）亚铁氰化钾溶液。
称取10.6g亚铁氰化钾，⽤⽔溶解并稀释⾄100ml。
（5）盐酸。
（6）葡萄糖标准溶液：精密称取1.000 g经过80 ℃⼲燥⾄恒量的葡萄糖（纯度在99%以上），加⽔溶解后加⼊5ml盐酸，并以⽔稀释⾄1 L。
此溶液相当于1 mg/ml葡萄糖。
（注：加盐酸的⽬的是防腐，标准溶液也可⽤饱和苯甲酸溶液配制）5.操作⽅法5.1样品处理：5.1.1乳类、乳制品及含蛋⽩质的⾷品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于100 ml容量瓶中，加50ml ⽔，摇匀。
边摇边慢慢加⼊5 ml⼄酸锌溶液及5 ml亚铁氢化钾溶液，加⽔⾄刻度，混匀。
静置30min，⽤⼲燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备⽤。
（注意：⼄酸锌可去除蛋⽩质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。
如果钙离⼦过多时，易与葡萄糖、果糖⽣成络合物，使滴定速度缓慢；从⽽结果偏低，可向样品中加⼊草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。
）5.1.2酒精性饮料：吸取50 ml样品，置于蒸发⽫中，⽤1mol/L氢氧化钠溶液中和⾄中性，在⽔浴上蒸发⾄原体积1/4后，移⼊100 ml容量瓶中。
食品中还原糖的测定方法
食品中还原糖的测定方法1. 概述还原糖（Reducing sugar）是指具有还原性的碳水化合物，能够还原其他物质。
在食品中，还原糖广泛存在于各种食材中，包括水果、蔬菜、谷物等。
准确测定食品中还原糖的含量对于食品质量的评估和营养分析具有重要意义。
本文将介绍食品中还原糖的测定方法。
2. 基本原理还原糖测定的基本原理是利用还原糖与碱性溶液中的某些金属离子（如铜离子）发生氧化还原反应产生沉淀物的特性。
在碱性条件下，还原糖与铜离子发生氧化反应，将铜离子还原为氧化铜（Cu2O），同时还原糖自身被氧化。
生成的氧化铜沉淀可以通过比色法或电化学法进行测定，从而确定还原糖的含量。
3. 还原糖测定方法3.1 Benedict’s试剂法Benedict’s试剂是一种常用于测定还原糖含量的试剂。
其成分包括硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸三钠。
该方法需要将待测溶液与Benedict’s试剂混合，加热反应一段时间后，观察溶液颜色的变化，通过比色法确定还原糖的含量。
实验步骤：1.准备试样：将待测食品样品加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。
2.配制Benedict’s试剂：按照一定比例将硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸三钠溶解在蒸馏水中，得到Benedict’s试剂。
3.反应：将试样加入Benedict’s试剂中，加热反应5分钟。
4.观察：根据溶液颜色的变化，可以初步估计还原糖的含量。
优缺点：•优点：操作简便、成本低廉。
•缺点：适用范围有限，无法测定低浓度还原糖。
3.2 蔗糖氧化法蔗糖氧化法是利用蔗糖与硫酸铜和氯化铜反应生成氧化铜沉淀的特性，间接测定还原糖的含量。
该方法适用于含有蔗糖的食品样品。
实验步骤：1.准备试样：将待测食品样品加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。
2.氧化反应：将试样加入含有硫酸铜和氯化铜的试剂中，反应一定时间。
3.沉淀溶解：将反应后的沉淀溶解，并根据氧化铜溶液的颜色进行测定。
4.计算含量：根据溶液颜色的浓度，计算出还原糖的含量。
优缺点：•优点：适用范围广泛，可以测定含有蔗糖的食品样品。
还原糖的检验方法和具体步骤
还原糖的检验方法和具体步骤如下：
1. 检验方法：使用班氏试剂或斐林试剂检测还原糖。
首先观察试剂的颜色变化，然后加入待测样品，将试管放入水浴加热的烧杯中。
2. 具体步骤：
（1）在试管中加入2ml待测样品溶液。
（2）向试管中加入5滴班氏试剂或斐林试剂。
（3）将试管放入水浴加热的烧杯中，观察颜色变化。
如果试管中出现砖红色沉淀或蓝色沉淀，则说明待测样品中含有还原糖。
这是因为班氏试剂或斐林试剂主要用于检测还原性糖，如葡萄糖，而葡萄糖在加热条件下会与组织中的蛋白质生成砖红色沉淀。
此外，斐林试剂还可以与醛基反应生成蓝色沉淀。
需要注意的是，检测还原糖需要待测样品中的还原糖与试剂发生反应，因此需要确保待测样品溶液是新鲜的、未被污染的。
此外，检测过程中需要控制好温度、时间等条件，以确保实验结果的准确性。
还原糖的测定方法
还原糖的测定方法还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，通常用来测定葡萄糖、果糖、麦芽糖等在食品和生物样品中的含量。
测定还原糖的方法有很多种，其中包括费林试剂法、硫酸铜比色法、硼酸硫酸铜比色法等。
本文将介绍硫酸铜比色法和硼酸硫酸铜比色法两种测定还原糖的方法。
硫酸铜比色法测定还原糖的方法如下：1. 准备样品，将待测样品溶解于适量的水中，得到一定浓度的溶液。
2. 配制硫酸铜溶液，取一定容量的硫酸铜溶液，通常浓度为0.1mol/L。
3. 反应，将样品溶液与硫酸铜溶液混合，加热至沸腾，使得还原糖与硫酸铜发生反应，生成红色的氧化铜沉淀。
4. 沉淀析出，待反应结束后，将溶液冷却，沉淀析出。
5. 比色，用分光光度计在特定波长下测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出还原糖的含量。
硼酸硫酸铜比色法测定还原糖的方法如下：1. 准备样品，将待测样品溶解于适量的水中，得到一定浓度的溶液。
2. 配制硼酸硫酸铜试剂，将一定量的硼酸溶液与硫酸铜溶液混合制备硼酸硫酸铜试剂。
3. 反应，将样品溶液与硼酸硫酸铜试剂混合，加热至沸腾，使得还原糖与硫酸铜发生反应，生成蓝色的氧化铜沉淀。
4. 沉淀析出，待反应结束后，将溶液冷却，沉淀析出。
5. 比色，用分光光度计在特定波长下测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出还原糖的含量。
以上两种方法均是通过还原糖与硫酸铜发生反应生成沉淀，再通过比色法测定沉淀的吸光度来计算还原糖的含量。
在具体操作时，需要注意样品的处理、试剂的配制、反应条件的控制以及仪器的使用等细节，以确保测定结果的准确性和可靠性。
总结，硫酸铜比色法和硼酸硫酸铜比色法是常用的测定还原糖的方法，通过与硫酸铜发生反应生成沉淀，再通过比色法测定沉淀的吸光度来计算还原糖的含量。
在实际操作中，需要严格按照方法步骤进行操作，以获得准确可靠的测定结果。
还原糖含量的测定—直接滴定法
还原糖含量的测定—直接滴定法实验六乳粉中还原糖含量的测定—直接滴定法（GB/T5009.7—2003第⼀法）教学⽬的要求：基本知识点1、掌握直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。
2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。
重点：1、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术2、直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。
难点：直接滴定测定还原糖的原理和控制要点课时教学⽅案：复习与提问：1、检查实验准备情况，（1）实验内容；（2）实验仪器与试剂有哪些？（3）直接滴定测定还原糖的步骤。
2、直接滴定测定还原糖的注意事项和控制要点【引⼊新课】乳糖是半乳糖经β-1，4糖苷键与葡萄糖结合的还原性⼆糖，称为4-O-β- d吡喃半乳糖-d-吡喃葡萄糖，还原基在葡萄糖单位上。
乳糖有两种异构体，即α-乳糖和β-乳糖。
乳糖是唯⼀没有在植物中发现的糖，因⾸次在⽜乳中发现，故称为乳糖。
乳糖是哺乳动物乳汁的主要成分，如⼈乳中约含6%～7%，⽜乳中约含5%。
乳糖是婴⼉主要⾷⽤的糖类物质。
初⽣婴⼉仅能消化乳糖、蔗糖、葡萄糖、果糖，对淀粉不易消化，故⽶、⾯淀粉⾷物应在3～4个⽉后才开始添加。
乳糖对婴⼉的重要意义还在于它能够保持肠道中最合适的肠菌种数，并能促进钙的吸收。
随着年龄的增⼤，肠道中将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖的乳糖酶活性急剧下降，甚⾄在某些个体中⼏乎降到0，因⽽成年⼈⾷⽤⼤量的乳糖，不易消化，⾷物中乳糖含量⾼于15%时可导致渗透性腹泻。
⼀、⽬的要求1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点；2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。
⼆、实验原理试样经除去蛋⽩质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指⽰剂，滴定标定过的碱性酒⽯酸铜溶液（⽤还原糖标准溶液标定碱性酒⽯酸铜溶液），还原糖将溶液中的⼆价铜还原成氧化亚铜。
以后稍过量的还原糖使次甲蓝指⽰剂褪⾊，表⽰终点到达。
根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。
反应⽅程式如下：CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4COONa COONa︱∣CHOH CHO╲∣+Cu(OH)2= ∣Cu +2H2OCHOH CHO╱∣∣COOK COOKCOONa COONa∣CHO ∣CHOHCHO╲∣CHOH ∣2∣Cu +(CHOH)4 +2H2O=2 ∣+ (CHOH)4+Cu2O↓CHO╱∣CHOH ∣∣CH2HO ∣CH2OHCOOK COOK亚甲蓝氧化型+还原糖——→亚甲蓝还原型(蓝⾊) （⽆⾊）三、实验试剂（GB/T5009.7-2003⾷品中还原糖的测定）1、盐酸。
还原糖测定
中华人民共和国专业标准还原糖测定法 ZB X 66040—87Determination of reduced sugar━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本方法适用于酿造酱油半成品的还原糖测定。
1 亚铁氰化钾快速法1.1 试剂与溶液1.1.1 费林氏甲液称取分析纯硫酸铜(CuSO4·5H2O)15g及四甲基蓝(次甲基蓝) 0.05g,用蒸馏水溶解, 淀容至1000mL。
1.1.2 费林氏乙液称取分析纯酒石酸钾钠50g,分析纯氢氧化钠54g及分析纯亚铁氰化钾4g,用蒸馏水溶解,定容至1000mL。
1.1.3 0.1%葡萄糖标准溶液精确称取在105℃烘2～3h至恒重的分析纯无水葡萄糖1.000g,放入100mL烧杯中,用蒸馏水溶解,定容至1000mL,为防染菌,可加 5mL浓盐酸后再定容。
1.2 测定方法1.2.1 样品处理及吸取精确吸取样品10mL,用蒸馏水稀释定容至100mL,摇匀吸取稀释液 1mL进行测定。
稀释度及吸取量根据含糖量可予增减。
1.2.2 空白滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL。
再用滴定管加入0.1%葡萄糖标准液9mL。
摇匀在电炉(或煤气灯)上加热,使其在2min内沸腾,沸腾30s后, 匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点。
记录沸腾前后共耗用葡萄糖液毫升数(A)。
1.2.3 预备滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL,再加1mL10%样品稀释液。
根据样品含糖量的高低(估计数),可用糖液滴定管先加入一定量的0.1%葡萄糖液(空白滴定耗用葡萄糖液一般在10mL以上),摇匀加热,沸腾30S后,匀速滴入0.1%葡萄糖液,至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液毫升数,作正式滴定时参考用。
1.2.4 正式滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶内,加蒸馏水10mL及1mL10%样品稀释液,再用糖液滴定管加入比预备滴定耗用量少0.5mL左右的0.1%葡萄糖标准液,摇匀后加热,使其在1～2min内沸腾,沸腾30S后匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液的毫升数 (B)。
还原糖的测定方法_国标
还原糖的测定方法（1）食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2）25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
《还原糖的测定方法国标》
《还原糖的测定方法_国标》还原糖的测定方法_国标一、范围本标准规定了用斐林试剂比色法测定试样中还原糖的含量。
本标准适用于所有食物样品中还原糖的测定。
二、原理还原糖与斐林试剂在加热条件下生成砖红色沉淀，通过与标准曲线对比，可以得出样品中还原糖的含量。
三、试剂和材料斐林试剂：甲液（称取14.3g硫酸铜（CuSO4·5H2O）和0.05g次甲基蓝（C13H16N3OClS）溶于水中，定容至100ml）、乙液（称取173g酒石酸钾钠（C4H4O6NaK·4H2O）和50g氢氧化钠溶于水中，定容至500ml）。
使用时将甲液、乙液等体积混合。
四、仪器和设备1.实验室用粉碎机2.水浴锅3.消煮炉或普通炉灶（能调节温度）4.容量瓶（100ml）5.移液管（10ml）6.比色管（10ml）7.试管（25ml）8.三角瓶（250ml）9.定时钟五、样品制备1.固体样品：取样品适量，用粉碎机粉碎，然后称取约0.2g样品置于试管中。
2.液体样品：直接取适量样品置于试管中。
3.在每个试管中加入4ml斐林试剂，充分混匀后静置10min。
4.将试管中的溶液倒入三角瓶中，加入约80ml水稀释，加热至沸后保持1min。
5.用移液管向每个试管中加入1ml样液，摇匀后置于试管架上。
6.在温度达到要求时将试管放入水浴中加热，同时开启计时器。
当时间达到要求时立即取出试管，用自来水冷却至室温。
7.将冷却后的溶液用移液管倒入比色管中，再加入约1ml的样液摇匀。
8.将比色管置于比色槽中，与标准曲线进行比色，得出样品的含量。
9.将整个测定过程中每个环节的时间、温度等条件记录下来，以便后续分析。
六、结果分析通过与标准曲线对比，可以得出样品中还原糖的含量。
计算公式为：含量=测定管吸光度÷校准管吸光度×标准品浓度。
其中吸光度需要在一定波长下测定。
同时需要注意实验过程中操作条件的控制，以保证结果的准确性。
如果操作条件不稳定或样品复杂性较高，需要进行适当调整或采取其他适合的方法进行测定。
还原糖的测定直接滴定法(GB法.
COONa
H (CHOH)4 CH2OH
C
O N ＋ N(H3C)2 S
蓝色
N (CH3)2Cl
+
-
+
H2O
COOH (CHOH)4 CH2OH
H N
+
N(H3C)2 S
无色
＋ HCl N (CH3)2
+
高锰酸钾滴定法
Cu2+ + 还原糖 MnO4- + Fe2+
高锰酸钾溶液需标定 称取草酸钠（GB1289基准物，105℃干燥2h，存于干燥器中） 0.1g，准确至0.0002g，溶于 50mL水中，再加硫酸溶液 （3.2）10mL，将此溶液加热至75～85℃，用配制好的高锰 酸钾（3.5）滴定,溶液呈现粉红色且1min不褪色为终 点,滴 定结束时,溶液温度在60℃以上, 同时作空白试验。
COOK CHOH Cu(OH)2 + CHOH COONa
COOK HC HC
O O
Cu+2H 2O
COONa
COOK HC 2 HC
O O
C Cu+2H2O +
O 2
COOK CHOH CHOH COONa COOH + (CHOH)4 CH 2OH + Cu2 O
H (CHOH)4 + 2H2O CH2 OH
Cu+ Fe3+ + MnO2
Fe3+ + Cu+ = Fe2+ + Cu2+
萨氏(Somogyi)法
Cu2+ + 还原糖
2Cu+ + I2 = 2Cu2+ = I2 + 2 Na2S2O3
实验法测还原糖标准版资料
摇匀，冷却后定容到1000mL。 。
5g 3，5－二硝基水杨酸溶于少量(shǎoliàng)水中，移入1000mL容量瓶中，参加2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再参加45g丙三醇，摇匀，冷却 后定容到1000mL。 准确(zhǔnquè)吸取0、 2、 3、 4、 5、6、 7mg/mL的葡萄糖标准溶液各1mL，样液2mL，分别置于25mL比色管中，各参加3，5－二硝基水 杨酸溶液2mL，用蒸馏水补齐至10mL刻度线，置沸水浴中煮5min显色，然后以流水迅速冷却，用水定容到25mL，摇匀。 实验法测复原(fù yuán)糖 准确(zhǔnquè)吸取0、 2、 3、 4、 5、6、 7mg/mL的葡萄糖标准溶液各1mL，样液2mL，分别置于25mL比色管中，各参加3，5－二硝基水 杨酸溶液2mL，用蒸馏水补齐至10mL刻度线，置沸水浴中煮5min显色，然后以流水迅速冷却，用水定容到25mL，摇匀。
－二硝基水杨酸溶于少量(shǎoliàng)水中 后定容到1000mL。
准确(zhǔnquè)吸取0、 2、 3、 4、 5、6、 7mg/mL的葡萄糖标准溶液各1mL，样液2mL，分别置于25mL比色管中，各参加3，5－二硝基水 杨酸溶液2mL，用蒸馏水补齐至10mL刻度线，置沸水浴中煮5min显色，然后以流水迅速冷却，用水定容到25mL，摇匀。 5g 3，5－二硝基水杨酸溶于少量(shǎoliàng)水中，移入1000mL容量瓶中，参加2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再参加45g丙三醇，摇匀，冷却
氧化钠溶液325mL，再参加45g丙三醇， 后定容到1000mL。
5g 3，5－二硝基水杨酸溶于少量(shǎoliàng)水中，移入1000mL容量瓶中，参加2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再参加45g丙三醇，摇匀，冷却 后定容到1000mL。 此法适用于各类食品中复原糖含量的测定(cèdìng)，具有准确度高、重现性好、操作简便、快速等优点，尤其适用于大批样品的测定(cèdìng)
27食品中还原糖的测定
＞100 g/L（甜黄酒）
浓缩橙汁
蔗糖（复原后）≤50g/kg
还原糖
• 还原糖：葡萄糖、果糖、乳糖和麦芽糖 • 在糖类中,分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游离
半缩醛羟基的双糖都具有还原性
原理
• 将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成 天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反 应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。
石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀 继续滴定，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液
由蓝色变为无色，即为滴定终点 根据样液的消耗量可以算出还原糖的含量。 滴定过程中颜色的变化
蓝色 红色 蓝色 无色
试验流程
1、费林试剂的标定 2、样品溶液的预测定 3、样品溶液测定
样品预处理
注意事项
• （1）热源强度应控制在使反应液在2min内沸腾，滴定 速度为每1d/2s,总沸腾时间为3min。
• （2）滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热 源上拿下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。
• （3）为了提高测定的准确度，要求用哪种还原糖表示结 果就用相应的还原糖标定碱性酒石酸铜溶液，如用葡萄 糖表示结果就用葡萄糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液。
镇江香醋（4.5%， 5.0%，5.5%， 6.0%）
还原糖（以葡萄糖计）≥2.00，≥2.20， ≥2.30，≥2.50 g/100mL
蜂蜜
葡萄糖和果糖≥60 g/100g； 蔗糖≤10g/100g（野桂花蜜），
≤10g/100g（其他蜂蜜）
黄酒
总糖含量≤15.0g/L（干黄酒）， 15.1g/L～40.0 g/L（半干黄酒）， 40.1 g/L～100 g/L（半甜黄酒），
项目46食品中还原糖的测定
任务四：检验结果的数据处理
项目名称
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
接样日期
检验依据
锥形瓶标记(标定)
V0初
标定
V0终
V0
10mL酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的量 m1=c0×V0
酒石酸铜溶液当量平均值m1
样品质量m
锥形瓶标记(正式滴定)
V初
正式滴定
V终
V
计算公式
葡萄糖含量（g/100g） 平均值（g/100g）
标准规定分析结果的精密度 本次试验分析结果的精密度
❖ 硫酸铜和氢氧化钠溶液—50~75mL样液加入10mL硫酸铜溶液和4mL氢 氧化钠溶液。
❖ 费林试剂法选用乙酸锌和亚铁氰化钾作为澄清剂,各5mL ❖ 注意： ❖ ①乙酸锌和亚铁氰化钾混合形成白色的氰亚铁酸锌沉淀，能使溶液中的
蛋白质等共同沉淀下来。
❖ ②采用中性醋酸铅做澄清剂时，澄清后的样液中残留有铅离子，在测定 过程中加热样液时，铅能与还原糖（特别是果糖）结合生成铅糖化合物， 结果使测得的还原糖含量偏低。因此必须除铅。
1g/L葡萄糖标准溶液的配制
❖ 精确称取1.0000g经过98～100℃干燥2h至恒重的纯 葡萄糖 ，加水溶解后移入到1000mL的容量瓶中，加 入5ml盐酸(防止微生物生长)，用水稀释到1000mL。
❖ （此溶液葡萄糖浓度相当于1.0mg/mL）
❖ 仪器：
25mL的酸式滴定管、可调电炉、150mL锥形 瓶4个、10mL量筒、5mL移液管2根、 250mL容量瓶1个、250mL锥形瓶2个、漏斗 2个、50mL烧杯1个
注：样品预处理的原则：除去样品中的蛋白质、淀粉、脂肪等干扰成分。
任务三、样品还原糖含量测定
1、费林试剂的标定 2、样品溶液的预测定 3、样品溶液测定
《还原糖的测定方法_国标》
《还原糖的测定方法_国标》还原糖是利用还原性固体物质与硫酸酸作用而形成的糖类物质，是各种天然糖和蔗糖等碳水化合物的主要成分。
还原糖的测定方法主要包括酚酞法和锁紫法两种。
一、酚酞法1.原理还原糖在酸性溶液中能够与酚酞形成红色络合物，按照这个特性可以利用测定还原糖的含量。
酚酞法是将酚酞加入葡萄糖溶液，并加入硫酸，使葡萄糖反应生成邻磺酸基苯甲醛，酚酞与邻磺酸基苯甲醛产生红色络合物，根据颜色变化来测定还原糖的含量。
2.步骤（1）样品处理：将样品取适量加入标准瓶中，加入适量蒸馏水稀释。
（2）试剂溶液制备①酚酞指示剂：0.1%酚酞水溶液，加入适量氢氧化钠溶液调节其pH值到8左右；②还原剂：0.05mol/L的亚硫酸钠溶液。
（3）测定操作①在滴定管中加入5ml淀粉指示液；②将50ml试剂用热水浴加热至60℃，在加热的过程中不断振荡，直到试剂完全溶解；③加入3ml样品，再加入1.5ml的硫酸；④加入恰好的量的还原剂，至混合溶液变成淡绿色，继续振荡至反应彻底；⑤从头部滴入酚酞指示液，直至溶液变为粉色，记录滴定管体积。
（4）计算还原糖的质量浓度二、锁紫法1.原理锁紫法是一种定量测定还原糖的方法，其原理是利用还原性糖在酸性条件下氧化生成醛酸物质，再与锁紫剂作用形成深紫色络合物，根据反应色深与被测样品中还原糖含量成正比关系的特点，来定量测定还原糖的含量。
2.步骤（1）样品前处理：将样品取适量加入到锥形瓶中加入适量蒸馏水稀释，搅拌溶解。
（2）试剂溶液制备①锁紫试剂：将0.2g锁紫用少量水样吸湿后加入10mL浓氢氧化钠（4mol/L），用水稀释到100ml，在加入5ml浓硫酸搅拌，备用；②还原剂：0.05mol/L的亚硫酸钠溶液。
（3）操作流程①在锥形瓶中加入1ml锁紫试剂和30ml蒸馏水；②加入3ml样品后加入2ml还原剂，充分搅拌均匀；③经过10分钟左右，样品溶液颜色变为紫色，放置待沉淀，用滤纸滤掉沉淀；④将过滤后的溶液转移到光度计试样池，用蒸馏水稀释至标线；⑤根据光度计读数计算样品中还原糖的质量浓度。
还原糖的测定方法国标
还原糖的测定方法国标 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】还原糖的测定方法（1）食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
碱性酒石酸铜甲液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
L高锰酸钾标准溶液。
1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
还原糖的测定方法_国标
还原糖得测定方法(1)食物中还原糖得测定方法：高锰酸钾滴定法与直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法ﻫ1、原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜,加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐,以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成得亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量. ﻫ2、适用范围ﻫＧB5009、７－8５,本法适用于所有食品中还原糖得测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖得非还原性糖类物质得测定。
3、仪器（1）滴定管ﻫ(2）2５ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（３）真空泵ﻫ(4）水浴锅４、试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
４、1 ６ｍｏl／Ｌ盐酸：量取５0ml盐酸加水稀释至100 ｍl。
４、2 甲基红指示剂：称取1０mｇ甲基红,用100ml乙醇溶解. ﻫ4、3５mｏl／L氢氧化钠溶液:称取2０g氢氧化钠加水溶解并稀释至１00ml。
4、4 碱性酒石酸铜甲液：称取３４、６39g 硫酸铜(CuＳＯ４·５H2Ｏ），加适量水溶解,加０、5ml硫酸,再加水稀释至5００ml，用精制石棉过滤。
ﻫ4、5 碱性酒石酸铜乙液：称取１73g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠,加适量水溶解，并稀释至5００ｍl，用精制石棉过滤,贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
ﻫ４、６精制石棉：取石棉先用3mol/Ｌ盐酸浸泡2～3天，用水洗净,再加2、5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液,再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时,用水洗净。
再以３mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细得浆状软县委,用水浸泡并贮存于玻璃瓶中,即可用做填充古氏坩埚用. ﻫ４、7 0、1000 mｏl/L高锰酸钾标准溶液。
4、8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠,加水溶解并稀释至１00mｌ。
ﻫ４、９硫酸铁溶液：称取５0ｇ硫酸铁,加入2０0mｌ水溶解后，慢慢加入1０0ml硫酸,冷却后加水稀释至1L。
还原糖的测定国标法
直接滴定法测还原糖1.实验原理实验经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝为指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还原糖含量。
2.实验药品与试剂硫酸铜、亚甲基蓝指示剂、酒石酸钾钠、氢氧化钠、乙酸锌、冰乙酸、亚铁氰化钾、葡萄糖、氢氧化钠溶液(40g/L)碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜及0.05g亚甲蓝加适量水溶解至1000ml碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠与75g氢氧化钠，加适量水溶解，再加4g亚铁氰化钾，完全溶解后稀释至1000ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
盐酸溶液：量取50ml盐酸加水稀释至100ml。
葡萄糖标液：称取1.0g干燥2h后的葡萄糖,加水溶解并加入5ml盐酸，并以水稀释到1000ml，此溶液每毫克相当于1.0mg葡萄糖。
3.仪器25ml滴定管、250 ml容量瓶、150ml锥形瓶、玻璃珠、真空泵、电子天平、可调电炉（带石棉板）4.实验步骤4.1 样品处理：一般食品是称取粉碎后的样品2.5~5g或吸取5～25g液体样品，置于250ml容量瓶中，加50ml水，摇匀。
加入5ml 乙酸锌溶液及5ml亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀。
静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
4.2标定碱性酒石酸铜溶液：吸取5.0g碱性酒石酸铜甲液及乙液，于150ml锥形瓶中加水10ml,加入玻璃珠两粒，从滴定管滴加约9ml葡萄糖或其他还原糖标液，控制在2min内加热至沸，趁热以1滴/2s的速度继续滴加葡萄糖或其他还原糖标液至蓝色刚好褪去，即为终点，记录消耗体积，平行测定3次并取平均值，计算每10ml酒石酸铜溶液（甲、乙各5ml）相当于多少葡萄糖或其他还原糖的质量（mg）。
4.3试样溶液预测：吸取5.0g碱性酒石酸铜甲液及乙液，于150ml锥形瓶中加水10ml,加入玻璃珠两粒，控制在2min内加热至沸，保持沸腾以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，病保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以1滴/2秒的速度滴定，直至蓝色刚好褪去即为终点，记录样液消耗体积。
还原糖的测定直接滴定法(GB法(精)
蓝色
COOH (CHOH)4 CH2OH
+
N(H3C)2
+ H2O
N+(CH3)2Cl-
H N
S
无色
＋ HCl N+(CH3)2
高锰酸钾滴定法
Cu2+ + 还原糖
Cu+
Fe3+ + Cu+ = Fe2+ + Cu2+
MnO4- + Fe2+ Fe3+ + MnO2
高锰酸钾溶液需标定
称取草酸钠（GB1289基准物，105℃干燥2h，存于干燥器中） 0.1g，准确至0.0002g，溶于 50mL水中，再加硫酸溶液 （3.2）10mL，将此溶液加热至75～85℃，用配制好的高锰 酸钾（3.5）滴定,溶液呈现粉红色且1min不褪色为终 点,滴 定结束时,溶液温度在60℃以上, 同时作空白试验。
还原糖的测定 直接滴定法（GB法）
菲林法、兰－艾农法、
改良的兰－艾农法（亚铁氰化钾、次甲基兰）
菲林试剂甲液：硫酸铜溶液（+次甲基兰）
菲林试剂乙液：酒石酸钾钠、氢氧化钠（+亚铁 氰化钾)
甲、乙液分别贮存，测定时甲、乙液等体积混合
硫酸铜＋氢氧化钠
氢氧化铜
COOK
Cu(OH)2 +
CHOH CHOH
碘量法（醛糖的测定）
I2 + 2NaOH
NaOH +
O
C
H (CHOH)4
CH2OH
NaIO +NaI + H2O
O
C
OH
(CHOH)4 + NaI
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食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法
1.原理
样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧
化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查
表得还原糖量。
2.适用范围
，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的
测定。
3.仪器
（1）滴定管
（2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚
（3）真空泵
（4）水浴锅
4.试剂
除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
碱性酒石酸铜甲液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石
棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
L高锰酸钾标准溶液。
1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
5. 操作方法
样品处理：
乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约～ 2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。
加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及 4 ml1mol/L氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。
静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
（注：此步骤目的是沉淀蛋白）
酒精性饮料：吸取100 ml样品，置于蒸发皿中，用 1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至
原体积1/4后（注：如果蒸发时间过长，应注意保持溶液pH为中性），移入250 ml容量瓶中。
加50 ml 水，混匀。
以下按自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
含多量淀粉的食品：称取2～10 g样品，置于250 ml容量瓶中，加200 ml水，在45℃水浴中加热 1 h，并时时振摇。
（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，
影响检测结果。
）冷却后加水至刻度，混匀，静置。
吸取200 ml上清液于另一250 ml容量瓶中，以下按自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
含有脂肪的食品：称取2～10 g样品，先用乙醚或石油醚淋洗3次，去除醚层。
加入50ml水混匀，以下按自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250 ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。
样品测定：
吸取50ml处理后的样品溶液，于400ml烧杯中，加入25ml碱性酒石酸铜甲液及25ml乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热，控制在4min内沸腾，再准确煮沸2min，乘热用铺好石棉的古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不成碱性为止。
（注：还原糖与碱性酒石酸铜试剂的反应一定要在
沸腾状态下进行，沸腾时间需严格控制。
煮沸的溶液应保持蓝色，如果蓝色消失，说明还原糖含量过高，
应将样品溶液稀释后重做。
）将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400ml烧杯中，加25 ml硫酸铁溶液及25ml水，用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以L高锰酸钾标准液滴定至微红色为终点。
同时吸取50ml水，加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲、乙液，硫酸铁溶液及水，按同一方法做试剂空
白实验。
6. 计算：
X1=（V-V0）×N×（1）
式中： X1--样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量，mg；
V--测定用样品液消耗高锰酸钾标准液的体积，ml；
V0--试剂空白消耗高锰酸钾标准液的体积，ml；
N--高锰酸钾标准溶液的浓度；
1mol/L高锰酸钾溶液相当于氧化亚铜的质量，mg。
根据（1）式中计算所得氧化亚铜质量，查附表"氧化亚铜质量相当于葡萄糖、果糖、乳糖、转化糖的质量表"，再计算样品中还原糖含量。
X2=（m1×V2）∕（m2×V1）×（100∕1000） (2)
式中： X2--样品中还原糖的含量，g/100g（g/100ml）；
m1--查表得还原糖质量，mg；
m2--样品质量（或体积）， g（ml）；
V1--测定用样品处理液的体积，ml；
V2--样品处理后的总体积，ml。
7.举例：
称取某食物样品，经过处理后用水定容至250ml。
取50ml进行测定，消耗 mol/L高锰酸钾标准液，同时测试剂空白为，则样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量为：
X1（mg） =（）×× =
查表得还原糖质量为相当于葡萄糖 mg，
样品中还原糖含量（以葡萄糖计）为：
X2（g/100g）=（×250）∕（×50）×（100∕1000）=
8.注释：
本法用碱性酒石酸铜溶液作为氧化剂。
由于硫酸铜与氢氧化钠反应可生成氢氧化铜沉淀，氢氧化铜沉淀可
被酒石酸钾钠缓慢还原，析出少量氧化亚铜沉淀，使氧化亚铜计量发生误差，所以甲、乙试剂要分别配制
及贮藏，用时等量混合。
还原糖的测定方法（2）
二、直接滴定法
1.原理
样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液，费林氏液被还原析出氧化亚铜后，
过量的还原糖立即将次甲基蓝还原，使蓝色褪色。
根据样品消耗体积，计算还原糖量。
2.适用范围
，本方法适用于所有食品中还原糖的检测。
检出限。
3.主要仪器
滴定管
4.试剂
除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）费林甲液：称取15 g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及 g次甲基蓝，溶于水中并稀释至 1 L。
（2）费林乙液：称取50 g酒石酸钾钠与75 g氢氧化钠，溶于水中，再加入 4 g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至500 ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（3）乙酸锌溶液：称取 g乙酸锌，加 3 ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100 ml。
（4）亚铁氰化钾溶液。
称取亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100ml。