人类染色体标本的制作及分析

• 取3滴GIEMSA原液加10滴磷酸缓冲液，混匀后滴在玻片标本上，染色6分钟。
• 显微镜下观察染色体分裂相的多少及分散情况。
• DMEM培养基+10%胎牛血清，肝素（500微升/毫升）、植物凝集素（PHA）（40微克/毫 升）、秋水仙素（0.4微克/毫升）、0.075摩尔/升 KCL低渗液、卡诺固定液（甲醇：冰醋 酸=3:1）、GIEMSA原液、磷酸缓冲液（PH6.8）等。
吸管吹打混匀
0.075mol/L KCl与淋巴 细胞的悬 浮液
转移培养 液到离心 管中
获得沉淀
低渗处理-预固定
加入1mL新 配制的固定 剂（甲醇： 冰乙酸=3:1）
0.075mol/L KCl与淋巴 细胞的悬 浮液
37℃恒温水浴锅低 渗处理15分钟
10ml棕红色 悬浮液
预固定
固定
加入10mL 新配制的固 定剂（甲醇： 冰乙酸=3:1）
人类染色体标本的制作与分析
遗传学实验三
染色体是遗传物质的载体
• 1
染色体标本及分析的应用
• 物种亲缘关系鉴定
• 生物进化 • 物种演化
• 染色体变异
• 临床医学诊断
• 杂种分析
• 新品系选育
问题1
◎染色体出现在什么时期？
或者说，在什么细胞中可以观察到染色体？
细胞分裂周期
间期
前期
中期
后期
末期
间期
• 但淋巴细胞在植物凝集素（PHA）的刺激下，能转变为具有细胞分裂能力的母细胞。
• 植物凝集素 PHYTOHAEMAGG LUTININ
• 具有凝集血红细胞，促进淋巴细胞的幼化和分裂的作用
微管抑制剂
• 秋水仙素
• 破坏纺锤体 • 阻断有丝分裂 • 使分离周期停滞在中期
标本制作
动物：低渗
分裂期细胞
• 取3滴GIEMSA原液加10滴磷酸缓冲液，混匀后滴在玻片标本上，染色6分钟。
• 蒸馏水洗去染液 • 气干
• 镜检
注意事项
• 收获淋巴细胞时
• 全部收获
• 离心时
• 注意配平
• 使用油镜
• 完毕用乙醇-擦镜纸清洁物镜镜头
• 1000RPM离心6分钟
• 注意先配平
• 1000RPM离心6分钟（注意先配平）。
化学试剂 固定染色体
滴片，染色
植物：解离
实验材料外周血预处理
• 抽取手臂静脉血 • 接种4滴到6毫升 DMEM+10%胎牛血清的培 养基中，并向其中加入植 物凝集素（PHA） • 37℃恒温培养箱中静置培 养72小时（每隔24小时摇 晃一次）
经预处理的外周血培养液
示例
淋巴母细胞 淋巴细胞
分裂期细胞
1000rpm离 心6分钟 弃上清
吸管吹打 重新悬浮 细胞
固定30分钟， 1500rpm离心6分钟， 弃上清 重复固定一次
重悬浮，滴片
• 1500RPM离心6分钟，弃上清液，根据细胞数量的多少适当加入数滴新配制的固定剂，吹 打细胞制成悬液。
• 吸取少量细胞悬液，滴2～3滴于冰冷干净的载玻片（冷冻于-20℃）上，吹散，气干。
图1. 人类女性外周血淋巴细胞染色体，100倍
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淋巴细胞
染色体
淋巴母细胞
图2. 人类女性外周血淋巴细胞染色体，400倍
染色体
淋巴母细胞
淋巴细胞
图2. 人类女性外周血淋巴细胞染色体，1000倍
淋巴母细胞细胞分裂，增殖
收获细胞-低渗处理
1000rpm离 心6分钟 弃上清
9毫升37℃预温的 0.075mol/L KCl溶液
• 弃上清液，加入37℃预温的0.075MOL/L KCL溶液9ML，用吸管轻轻吹打细胞团混匀后，置37℃恒温水浴锅低渗处理10-15分钟。 • 加入1ML新配制的固定剂（甲醇：冰乙酸=3:1），用吸管小心吹打、混匀，1000RPM离心6分钟。 • 弃上清，加入10ML固定剂，吹打细胞团制成细胞悬液后，室温下固定30分钟。 • 1500RPM离心6分钟。 • 弃上清液，重复固定一次。 • 弃上清液，根据细胞数量的多少适当加入数滴新配制的固定剂，吹打细胞制成悬液。 • 吸取少量细胞悬液，滴2～3滴于冰冷干净的载玻片（冷冻于-20℃）上，吹散，气干。
可用于制作染色体标本的材料
• 动物 • 植物
可用于制作染色体标本的材料
• 动物
• 1. 骨髓细胞 • 2.生殖腺生殖细胞（如精巢，卵 巢）等 • 3.羊水 • 4.外周血淋巴细胞
• 植物
• 1. 根尖 • 2. 植株顶端嫩芽等
人类外周血淋巴细胞
• 人类外周血的淋巴细胞是一种已成熟的不具有进行有丝分裂能力的细胞，。