实验三 植物冰冻切片制作及显微观察
植物切片相关实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解植物切片的制作过程及注意事项。
2. 掌握植物组织切片技术在植物学研究中的应用。
3. 通过观察植物切片，了解植物组织的结构特征。
二、实验原理植物切片技术是一种重要的植物学研究方法，通过将植物组织制成薄片，便于在显微镜下观察其结构特征。
本实验采用石蜡切片法，将植物组织固定、脱水、透明、包埋、切片、染色，最后进行封片。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶、马铃薯块茎、胡萝卜根等。
2. 仪器设备：切片机、显微镜、显微镜载物台、显微镜镜头、载玻片、盖玻片、酒精灯、酒精、二甲苯、甲醛、石蜡、刀片、剪刀、镊子、滴管、烧杯、滤纸等。
四、实验步骤1. 固定：将植物材料放入装有甲醛的烧杯中，浸泡24小时。
2. 脱水：将固定后的植物材料依次放入50%、70%、90%、95%、无水酒精中，每级酒精浸泡30分钟。
3. 透明：将植物材料放入二甲苯中，室温下浸泡，使组织透明。
4. 包埋：将透明后的植物材料放入熔化的石蜡中，使其成为石蜡块。
5. 切片：将石蜡块放入切片机中，切取5-10微米的薄片。
6. 染色：将切片放入染液中，如苏木精-伊红染色液，室温下染色30分钟。
7. 水洗：将染色后的切片用蒸馏水冲洗，去除多余的染液。
8. 封片：将冲洗后的切片用中性树胶封片，制成植物切片。
五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶切片观察：- 表皮细胞：细胞呈长方形，排列紧密，细胞壁较厚，细胞核较大，染色较深。
- 保卫细胞：位于表皮层，呈肾形，细胞壁较薄，细胞核较小。
- 保卫细胞间隙：保卫细胞之间形成的空隙，有利于气体交换。
- 气孔：保卫细胞之间形成的开口，是气体交换的主要通道。
2. 马铃薯块茎切片观察：- 表皮细胞：细胞呈多边形，排列紧密，细胞壁较厚，细胞核较大。
- 薄壁组织：位于表皮下方，细胞较大，细胞壁较薄，含有丰富的营养物质。
- 维管束：由韧皮部和木质部组成，负责水分和养分的运输。
3. 胡萝卜根切片观察：- 表皮细胞：细胞呈长方形，排列紧密，细胞壁较厚，细胞核较大。
切片观察实验实验报告
一、实验目的1. 掌握切片制作的基本步骤和技巧。
2. 学习显微镜的使用方法，观察植物细胞的结构。
3. 通过观察切片，加深对植物细胞结构特点的理解。
二、实验原理切片观察实验是生物学研究的一种基本方法，通过将生物材料制成薄片，在显微镜下观察其细胞结构。
本实验主要观察植物细胞的结构，包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、叶绿体等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶、水、碘液、刀片、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 实验仪器：显微镜、解剖镜、剪刀、镊子、烧杯、酒精灯、酒精、盐酸等。
四、实验步骤1. 制备洋葱鳞片叶切片（1）将洋葱鳞片叶洗净，用剪刀剪成薄片。
（2）将薄片放入装有水的烧杯中，用解剖针轻轻搅动，使薄片分散。
（3）用镊子夹取一片洋葱鳞片叶，平铺在载玻片上。
（4）用刀片轻轻刮取洋葱鳞片叶的表皮细胞，使其均匀分布在载玻片上。
（5）用盖玻片覆盖在载玻片上，用镊子轻轻按压，使切片与盖玻片紧密结合。
2. 观察洋葱鳞片叶切片（1）将载玻片放在显微镜载物台上，调整显微镜的焦距，使洋葱鳞片叶切片清晰可见。
（2）观察洋葱鳞片叶切片的细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、叶绿体等结构。
（3）用碘液染色，观察细胞核、叶绿体等结构的变化。
3. 实验记录（1）观察洋葱鳞片叶切片的细胞结构，记录观察结果。
（2）分析实验结果，总结植物细胞结构特点。
五、实验结果与分析1. 观察洋葱鳞片叶切片的细胞结构，发现细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、叶绿体等结构。
2. 在碘液染色后，细胞核和叶绿体更加清晰可见。
3. 分析实验结果，得出以下结论：（1）植物细胞具有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等基本结构。
（2）细胞壁具有保护和支持细胞的作用。
（3）细胞膜具有控制物质进出的作用。
（4）细胞核是细胞的遗传中心，含有遗传物质DNA。
（5）叶绿体是植物细胞进行光合作用的场所。
六、实验总结本次实验通过切片观察，掌握了切片制作的基本步骤和技巧，学会了显微镜的使用方法，观察了洋葱鳞片叶细胞的结构，加深了对植物细胞结构特点的理解。
植物实验切片观察
实验三 植物组织的观察
实验三 植物组织的观察
• 四、方法与步骤
1.绿豆芽徒手切片→载玻片→番红染色→盖片→观 察薄壁组织的观察 2.芹菜叶柄徒手切片→载片→1%番红→盖片→观察 厚角组织的观察 3.梨石细胞→载玻片→压碎→盖片→观察厚壁组织 4.洋铁酸模叶表皮→载玻片→加水→盖片→观察表皮、 气孔器 六、作业 绘出所观察的四种组织的显微结构图，标出结构名 称。
2、卷柏属的观察
• （1）观察卷柏属植物的孢子体（新鲜材料或腊叶标本） • 分清根、茎、叶三部分，注意根托与不定根的区别。 • 用小镊子和刀片从茎上取下一片叶置于载玻片上，加水观察其结构， 并与裸子植物、被子植物叶进行区别。（可以染色尝试） • 取卷柏属植物的茎作徒手横切，观察茎的横切结构，注意中柱类型、 横桥细胞的观察。
（4）叶肉：叶肉细胞的细胞壁具无数的皱壁向内腔伸展， 细胞内具叶绿体，在叶肉中有分泌细胞围成的树脂 道，注意树脂道的数目。 （5）内皮层：细胞排列整齐成为一圈，凯氏带也明显可见。
（6）叶脉：在内皮层之内，有两个维管束，维管束的木质
部靠近茎表面的一面，维管束的韧皮部，靠近叶表面 凸的一面。
（7）传输组织：内皮层与叶脉之间的细胞为传输组织。
裸子植物叶的结构（松针叶）
玉米叶的构造 ——单子叶植物的叶
取玉米叶的横切片置显微镜下观察
（1）上下表皮，表皮细胞排列较规则，切面稍近方形，细 胞的外壁有加厚的角质层，上下表皮上均有气孔分布，每 一气孔的内方，有一较大的细胞间隙叫做气室，在上表皮 细胞之中有一些特别大的细胞，其外壁无角质层，这便是 运动细胞。
蚕豆根横切
实验三 植物组织的观察
一、实验目的: 1.了解植物组织在植物体内的分布、类型；2.掌握不同组织的特 点和徒手切片技术。 二、实验材料：1. 9种永久切片 ；2.芹菜叶柄、豆芽、梨和酸模叶。 三、实验内容 1.分生组织：洋葱根尖纵切片观察分生组织 2.保护组织：蚕豆表皮装片 酸浆叶表皮装片 观察表皮细胞排列和气孔器 3.薄壁组织：双子叶植物茎横切片观察薄壁细胞 柿胚乳细胞切片观察薄壁细胞和胞间连丝 4.输导组织：南瓜纵切片观察导管、筛管 5.机械组织：大丽花叶柄、南瓜茎横切片 观察厚角组织 芹菜叶柄徒手切片 梨石细胞永久片和装片观察厚壁细胞 6.分泌结构：柑橘果皮切片观察分泌腔。 四、方法与步骤 1. 绿豆芽徒手横切片→载玻片→番红染色→盖片→观察薄壁组织的观察 2. 芹菜叶柄徒手切片→载片→1%番红→盖片→观察厚角组织的观察 3. 取少许梨果肉→载玻片→压碎→盖片→观察厚壁组织 4. 洋铁酸模叶表皮→载玻片→加水→盖片→观察表皮、气孔器 六、作业 绘出所观察的四种组织的显微结构图，标出结构名称。
冰冻切片制片实验步骤及注意事项
冰冻切片制片实验步骤及注意事项冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片制片实验步骤1、组织固定：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。
将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
2、脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底。
3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，组织周围滴上OCT包埋剂，将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。
4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚°8-10μm。
将干净的载玻片平放于切出的组织片上方即可将组织贴于载玻片上。
-20°保存备用。
注意事项1、组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2气（-78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（-80℃）③ 液氮（-190℃）④ 液氮冷却的丙烷（-19℃）。
液氮适用于组织化学，较安全。
缺点：组织块易发生龟裂。
2、为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。
但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。
故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定（10分钟左右）固定，可显示琥珀酸脱氢酶。
3、电镜出现后，需要保存细胞的超微结构，以4%缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7.）84ml；蔗糖8g）固定较好。
这些固定液主要用于水解酶，而不适于许多氧化还原酶和转移酶。
植物实验切片观察讲解
玉米茎横切
小麦茎横切
小麦成熟花药 横切
洋葱鳞片叶内表皮细胞
玉米叶切片
棉花叶横切
松针叶切片
胞 间 连 丝 切 片
南 瓜 茎 横 切
百合花药切片
百合子房切片
地 衣 切 片
轮藻短枝装片 （注：实验装片颜色为绿色）
念珠藻装片
水 绵 结 合 生 殖 装 片
团藻装片
衣藻装片
地钱胞芽杯纵切
茎的生长与结构
茎的顶端分生组织衍生出的细胞经过分裂、延长生长和分化，
形成由表皮、皮层和维管柱3部分组成的茎的初生结构。
双子叶植物：维管束 环状，环的内部为髓， 外 部 为 皮 层 ， 在 维 管 表皮
表皮 皮层 维管柱
束 间 为 细 的 髓 射 线 。 形成层
每 一 个 维 管 束 中 ， 木 维管柱 质部通常面向髓排列 髓 在内侧，而韧皮部通
柿胚乳细胞切片观察薄壁细胞和胞间连丝
4.输导组织：南瓜纵切片观察导管、筛管 5.机械组织：大丽花叶柄、南瓜茎横切片
芹菜叶柄徒手切片
观察厚角组织
梨石细胞永久片和装片观察厚壁细胞
6.分泌结构：柑橘果皮切片观察分泌腔。 四、方法与步骤
1. 绿豆芽徒手横切片→载玻片→番红染色→盖片→观察薄壁组织的观察 2. 芹菜叶柄徒手切片→载片→1%番红→盖片→观察厚角组织的观察 3. 取少许梨果肉→载玻片→压碎→盖片→观察厚壁组织 4. 洋铁酸模叶表皮→载玻片→加水→盖片→观察表皮、气孔器 六、作业
蚕豆根横切
实验三 植物组织的观察
一、实验目的: 1.了解植物组织在植物体内的分布、类型；2.掌握不同组织的特 点和徒手切片技术。
二、实验材料：1. 9种永久切片 ；2.芹菜叶柄、豆芽、梨和酸模叶。 三、实验内容
冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片制作方法与注意事项冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。
下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。
一、冰冻切片的制作方法：1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。
2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。
3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。
4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。
5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。
6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。
7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。
二、冰冻切片的注意事项：1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。
液氮和刀片冷冻架是常用的设备。
2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。
刀片的选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀片可以提高切片质量。
3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。
切片太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。
4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。
在切割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。
5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。
6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。
冰冻切片免疫荧光实验步骤
冰冻切片免疫荧光实验步骤1. 前言嘿，朋友们！今天我们来聊聊一个科学实验的酷炫玩法——冰冻切片免疫荧光实验。
你可能会想，这听起来有点高深，其实没那么复杂，咱们用轻松的方式来搞定它！这个实验就像是给细胞穿上五光十色的衣服，让它们在显微镜下闪闪发光。
是不是听起来有点像魔法？不过，魔法背后可是需要一系列精细的步骤哦，接下来就让我们一起踏上这趟科学之旅吧！2. 材料准备2.1 器材首先，咱们得准备好一些“武器”。
你需要的工具有：冷冻切片机、显微镜、抗体、荧光染料、冰块、以及小瓶子。
别担心，这些东西在实验室里一般都能找到。
好比去超市购物，准备齐全才能大干一场嘛！2.2 样本收集然后，咱们得搞定样本。
可以用小动物的组织，比如小鼠的肝脏或脑组织，当然也可以是细胞培养。
像选菜一样，找个健康的样本，才能做出美味的实验结果。
记得小心翼翼哦，样本可是你实验的“主角”！3. 冰冻切片3.1 制作切片接下来就是最重要的环节了！将收集到的样本放进冷冻机，设置好温度，通常是在20°C到80°C之间，具体要看你使用的试剂。
等样本冰冻得像冰棍一样，取出来，用冷冻切片机将它切成薄薄的片，厚度大约在510微米之间。
要知道，切片越薄，观察的时候越清晰，就像看电影的时候画面越高清，效果自然越棒！3.2 贴片固定切好的薄片就像鲜花一样，需要“小心翼翼”地处理。
将切片放到载玻片上，记得用一些固定液，比如丙酮或者甲醇，给它们来个“定妆”！这样能让你的切片在后续步骤中更加稳固。
让我们给这些切片点个赞，做得不错哦！4. 免疫染色4.1 抗体孵育好了，接下来的步骤就像给细胞化妆一样。
把固定好的切片放进抗体溶液里，让它们充分“泡澡”。
通常来说，先用一抗（即特异性抗体）孵育，时间可以在1小时到过夜之间，视情况而定。
这个时候，你可以想象细胞们正开心地吸收着抗体，准备好接下来的“盛宴”！4.2 荧光染料待一抗充分结合后，咱们再来一剂“荧光染料”！同样把切片浸泡在二抗（荧光标记抗体）里，接着再静置一会儿。
植物学实验3 植物组织的观察
南瓜茎纵切，示木质部导管、形成层、韧皮部
筛管 伴胞
导管
精品课件
5.分泌结构的观察 • 松针叶横切永久切片（示树脂道） • 橘皮徒手切片（示分泌腔）
精品课件
树脂道
100倍
精品课件
精品课件
分泌腔
精品课件
油滴
五、实验作业
思考题：
1. 在光学显微镜下如何识别导管和筛管？ 2. 2. 做好根尖压片的关键是什么？
4）保存 •75%酒精
精品课件
5）解离
（1）用酶或盐酸处理固定后的材料，使正在分裂的细胞分离，便于压片。 （2）方法：固定的材料蒸馏水冲洗2遍，放入预热的60℃的1mol/L盐酸中， 恒温处理5分钟左右，用蒸馏水冲洗3遍，将材料浸泡在蒸馏水中2小时，将 材料中酸洗净（也可用流水冲洗几分钟）。 （3）注意：掌握好解离时间。
绘图题：
1. 绘南瓜茎纵切中的导管、筛管和伴胞，并注明各部分名称。
2. 绘犁果肉内石细胞。
3. 绘松针叶内树脂道。
4. 绘洋葱根尖细胞有丝分裂各期细胞简图。
预习：藻类观察
精品课件
（1）间期 （2）前期 （3）中期 （4）后期 （5）末期
精品课件
前期 后期
精品课件
间期 后期
精品课件
2.薄壁组织的观察
• 南瓜茎横切永久封片
3.机械组织的观察
• 南瓜茎横切永久封片（示厚角组织、厚壁组织） • 芹菜叶柄横切水封片（徒手切片，示厚角组织） • 梨果肉细胞水封片（徒手切片，盐酸-间苯三酚染色，
• 永久封片：南瓜茎横切、南瓜茎纵切、松针叶横 切、洋葱根尖纵切
精品课件
三、实验用具和试剂
• 光学显微镜、载玻片、盖玻片、解剖用具等 • 盐酸间苯三酚溶液、蒸馏水、醋酸洋红
冷冻切片法流程
冷冻切片法流程冷冻切片法可是个很有趣的实验方法呢！让我来给你讲讲它的流程吧。
一、准备工作。
咱得先把要用的东西都准备好。
像冷冻切片机得提前检查好，确保它能正常工作。
还有载玻片、盖玻片，这些小物件可不能少。
冷冻剂也得备足了，这就像是给咱们的切片准备的“小冰箱”呢。
另外，取材工具也很重要，像手术刀之类的，要锋利又干净。
标本也是关键，要选取合适的组织，这个组织得具有代表性，就像选演员一样，得挑个能把整个故事讲清楚的“主角”组织。
二、取材。
这一步可不能马虎。
要快速地把组织取出来，为啥要快呢？因为时间一长，组织可能就会发生变化啦。
就像新鲜的水果放久了会烂一样，组织放久了结构可能就不那么准确了。
取出来的组织大小也要合适，不能太大也不能太小。
太大了放不进切片机，太小了又可能切不到想要的结构，就像穿衣服一样，得不大不小刚刚好。
而且在取材的时候，要尽量减少对组织的损伤，这组织可是很“娇弱”的呢。
三、冷冻。
把取好的组织放到冷冻切片机里面冷冻。
这个过程就像是把食物放进冰箱速冻一样。
冷冻的温度得调好，不能太冷也不能不够冷。
太冷了可能会让组织变得太硬，容易碎掉，就像冰块掉地上容易裂一样。
不够冷呢，组织又切不好，软趴趴的怎么能切出漂亮的切片呢。
在冷冻的时候还要注意观察组织的状态，就像看着锅里的菜有没有熟一样。
四、切片。
等组织冷冻好了就可以切片啦。
切片的时候手要稳，就像绣花一样。
切片的厚度也很有讲究，太厚了看不清楚细胞结构，太薄了又容易切坏。
这就需要不断地练习，找到那种恰到好处的感觉。
而且切出来的切片要完整，不能缺边少角的，不然就像漂亮的拼图少了几块，多可惜呀。
五、贴片。
切好的片子要贴到载玻片上。
这个时候要小心操作，就像把小宝贝轻轻地放在床上一样。
要确保片子贴得平平整整的，不能有褶皱，要是有褶皱就像衣服没熨平一样，看着就不舒服，而且还会影响观察呢。
六、染色。
贴片完成后就可以染色啦。
染色剂就像给组织穿上不同颜色的衣服，这样我们就能更清楚地看到不同的结构啦。
辽宁中学草药植物全草类切片标本制作方法
辽宁中学草药植物全草类切片标本制作方法
辽宁中学草药植物全草类切片标本制作方法
工具、材料：剪刀、切片仪、点斑麻醉液（多拉西酚美安酯）、甲醛、85%酒精、12%甲醛溶液、冰箱、冰水瓶、塑料袋、抗衡磁玻璃板、水、卡片、胶带
一、将植物放入冰箱冰冻，冰冻时间约为24小时；
二、将冰冻的植物放入冰水瓶中，加入点斑麻醉液，使植物昏睡；
三、将植物取出，使用剪刀剪去植物的叶片，留下叶茎和根部；
四、将叶茎放入85%酒精、12%甲醛溶液中浸泡30分钟，以防止菌落；
五、将叶茎及根部放入冰水瓶中，用塑料袋将叶茎捆扎；
六、将捆扎的叶茎放入切片仪，小心操作，以防叶茎损坏；
七、可根据需要，叠加胶带或使用抗衡磁玻璃板固定植物；
八、调节切片仪，将植物叶茎切片；
九、将切片置于混有水和甲醛的放入冰箱冷冻保存；
十、按照一定宽度，将冷冻的叶片切片，置于卡片上，完成制作。
冰冻切片实验步骤
冰冻切片实验步骤
嘿，咱今儿就来讲讲这冰冻切片实验步骤！
你可别小瞧这冰冻切片，就像是厨师要做出一道美味佳肴，每一步都得精心料理。
首先呢，得准备好新鲜的样本，这就好比是做菜得有好食材呀！把样本修整好，可不能随随便便就扔那儿了。
然后就是冷冻啦！把样本放到那专门的冷冻设备里，让它快速地冻起来，这就像是给样本穿上了一层“冰铠甲”。
接下来，切片环节可就来咯！要小心翼翼地操作，不能切得厚了薄了的，那得跟艺术品一样精致才行。
想象一下，要是切得乱七八糟，那后面还怎么观察呀！
切好片之后呢，还得给它贴上标签，可不能搞混了呀，这就像给每个小宝贝起个名字一样。
再之后，就是染色啦！给这些切片染上漂亮的颜色，让它们能更好地展示出自己的特点。
这就跟给人化妆似的，得恰到好处，才能凸显出美来。
染完色，可不能忘了清洗呀，把多余的染料洗掉，让切片干干净净的。
最后就是观察啦！在显微镜下，仔细地瞅瞅这些切片，看看能发现
啥秘密。
这就像是在寻宝一样，充满了惊喜和期待呢！
做冰冻切片实验呀，就跟走一条小路似的，每一步都得稳稳当当的，要是哪一步出了岔子，那可就前功尽弃啦！所以呀，得打起十二分的
精神来。
总之呢，冰冻切片实验可不简单，但只要咱认真对待，一步一个脚
印地去做，肯定能收获满满的成果呀！加油吧！。
冷冻切片操作指南
冷冻切片操作指南在医学、生物学和食品科学等领域中，冷冻切片是一种重要的技术，用于将样品冷冻固化后，切割成薄片以供进一步观察和研究。
本文将为读者提供一份冷冻切片操作指南，介绍冷冻切片的基本原理、实验室操作步骤和注意事项。
一、冷冻切片的基本原理冷冻切片是将样品通过快速冷冻技术使其迅速固化，然后使用切片机或显微切片机将固化的样品切割成薄片。
冷冻切片的目的是保留样品的形态和结构，避免切片过程中的伤害和变形。
冷冻切片一般适用于需要保留细胞和组织结构的实验。
二、实验室操作步骤1. 样品准备：将待切割的样品准备好，可以是细胞、组织或食物等。
样品处理过程中需要注意保持样品的完整性和活性。
2. 冷冻固化：将样品放置在冷冻剂中，例如液氮或冷冻盒中的冰水混合物中，进行快速冷冻固化。
冷冻时间需要根据不同样品的特性进行优化，一般在几分钟至数小时之间。
3. 选用切片仪器：根据实验需求，选择合适的切片仪器，可以是手动的切片机或半自动/全自动的显微切片机。
4. 切片调整：根据实验需求，调整切片仪器的切割参数，例如切片厚度和速度等。
通常，薄片的厚度在几微米至数十微米之间。
5. 切片过程：将冷冻固化的样品放置在切片仪器的切片台上，固定好，并且调整好切割参数。
使用手动或电动操作切片仪器，将样品切割成所需的薄片。
6. 切片收集：将切割好的薄片收集起来，可以使用切片刷或显微镊子等工具进行操作。
注意保持薄片的完整性和干燥，避免受到污染和损坏。
7. 切片处理：根据实验需求，进行切片的进一步处理，例如染色、免疫组化等。
三、注意事项1. 样品处理过程中需要注意保持样品的完整性和活性，避免样品受到损伤和变性。
在样品处理过程中，可以使用缓冲液或甘油等物质进行保护。
2. 冷冻固化的时间和温度需要根据不同样品的特性进行优化。
过长或过短的冷冻时间都可能导致样品质量下降。
3. 在选择切片仪器时，需要根据实验需求和预算等因素进行权衡。
手动切片机相对便宜，但操作较为繁琐；半自动/全自动的显微切片机操作更为方便，但价格较高。
冰冻切片实验步骤
冰冻切片实验步骤1.准备实验所需材料和设备：包括有机溶剂（如乙醇、氯仿、甲醇等）、30%的蔗糖溶液、液氮、切片刀、显微镜玻片、显微镜载玻片、切片盒等。
2.收集和处理样品：可以选择动植物的组织或细胞作为实验样品。
收集样品后，可以用生理盐水或缓冲液进行清洗和去除杂质。
如果是动物组织，可以选择将其冷冻在液氮中，以保持其完整性。
3.组织固定：将收集到的样品转移到含有组织固定剂的试管中。
常见的组织固定剂包括缓冲液、乙醛或霍乱毒素。
根据所需的实验目的和需要，可以选择适当的组织固定剂。
4.组织固定处理：组织固定的时间因组织类型和目的有所不同，一般在数小时至数天之间。
在固定过程中可以加入一些缓冲液，以维持组织的pH值和渗透压。
5.甘油渗透：将固定的组织置于甘油溶液中。
甘油的作用是提高组织的柔软度和切片的质量。
一般可选择10%左右的甘油溶液。
6.冰冻：将处理好的组织置于液氮中，直到其完全冰冻。
冰冻的温度通常为－20℃。
在冰冻过程中，可以使用冷冻托盘和冷冻盒等设备加快组织的冻结速度。
7.切片：使用预先冷却的切片刀，将冰冻的组织切成所需的薄片。
切片的厚度一般为10-100微米。
为了保证切片的质量，可以在切片过程中使用切片保护剂，如30%蔗糖溶液。
8.华里士染色：将切好的组织切片转移到显微镜载玻片上，使用华里士染色液进行染色。
华里士染色是一种常用的组织染色方法，可以染色细胞核和细胞浆。
9.覆盖玻片：将染色后的切片盖在显微镜玻片上，并使用透明胶片或封口剂固定切片。
10.显微观察：将制备好的切片置于显微镜下，观察和记录感兴趣的细胞或组织结构。
可以使用不同放大倍数的镜头进行观察和分析。
11.结果分析：对观察到的细胞或组织结构进行分析和解释。
可以使用图像处理软件进行图像的分析和处理。
12.结论和讨论：根据实验结果，得出相应的结论并进行讨论。
可以与已有的研究结果进行对比，验证实验的准确性和可靠性。
冰冻切片实验步骤
冰冻切片实验步骤全部实验步骤1 取新鲜组织于4%多聚甲醛固定24小时2 30%蔗糖脱水48小时以上3 -250C包埋（冰冻切片机内）4冰冻切片冰冻切片步骤冰冻切片免疫组化染色步骤：冰冻切片4~8μm，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3次。
用3%过氧化氢孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。
PBS冲洗，5分钟×2次。
下接石蜡切片免疫组化染色操作步骤。
(见我发的前面的帖子)你确定你是冰冻切片吗冰冻切片不能用热修复啊以下是我的步骤：1 冰冻切片室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS 洗，5分钟×3。
用3％过氧化氢孵育5~10分钟，PBS洗，5分钟×2。
2 5~10％正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。
倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小时或4℃过夜。
3 PBS冲洗，5分钟×3次。
4 滴加滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育30分钟。
PBS冲洗，5分钟×3次。
5 滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10~30分钟。
6 PBS冲洗，5分钟×3次。
7 显色剂显色（DAB）。
8 自来水充分冲洗，复染，封片。
冰冻切片免疫组化染色用的灭活内源性过氧化物酶，最好是用3%H2O2/甲醇溶液，室温20分钟。
此配方不易产生脱片。
配制方法是在9ml甲醇中加30%H2O2 1ml，混匀后使用，每次新鲜配制。
冰冻切片免疫组化染色步骤冰冻切片4~8mm，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3。
用3％过氧化氢孵育5~10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。
PBS洗，5分钟×2。
下接免疫组化染色操作步骤。
免疫组化染色步骤：（SP试剂盒为例)1 冰冻切片4~8um，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3。
冰冻切片制备 实验步骤
冰冻切片制备实验步骤冰冻切片制备是一种常用的实验技术，用于制备生物样品的切片，以便进行显微镜观察和分析。
下面将按照实验步骤的顺序进行详细介绍。
1. 样品的准备选择合适的样品进行制备。
样品可以是细胞、组织或生物体的一部分。
根据实验的需要，样品可以是新鲜的或者固定的。
2. 样品的固定如果选择的样品是新鲜的，需要先进行固定以保持其形态和结构。
常用的固定剂有福尔马林、戊二醛等。
将样品放入固定剂中，根据样品的大小和种类，固定的时间可以从几分钟到几小时不等。
3. 样品的冰冻将固定后的样品进行冷冻以减少切片时的变形。
可以使用液氮或冰冻机将样品迅速冷冻至零下20摄氏度以下。
冷冻的时间要尽量短，避免冰晶的形成对样品造成损伤。
4. 切片仪的准备将切片仪调整到适当的工作状态。
切片仪的刀片需要保持锋利，切片盒需要清洁干净。
5. 样品的切片将冷冻的样品取出，迅速放入切片盒中。
使用切片仪将样品切片，切割的速度和厚度根据需要进行调整。
切片时要保持手稳定，避免切出的切片变形或损坏。
6. 切片的收集将切下的样品片收集到盛有PBS（磷酸盐缓冲液）的培养皿中。
这样可以避免切片的干燥和变形。
7. 样品的染色根据实验需要，可以对切片进行染色以便于观察。
常用的染色方法有荧光染色、组织学染色等。
染色后的切片需要进行洗涤以去除多余的染料。
8. 切片的保存将染色后的切片放入玻片盒中，用透明胶带密封。
存放在适当的温度和湿度条件下，避免切片的变形和腐败。
通过以上步骤，我们可以得到冰冻切片制备的样品，以供显微镜观察和分析。
冰冻切片制备技术可以用于各种生物学研究，如细胞生物学、组织学和病理学等领域。
它可以帮助我们观察样品的细节结构，了解其功能和病理变化，为科学研究和临床诊断提供重要的依据。
冰冻切片实验步骤
冰冻切片实验步骤冰冻切片是一种常用的实验技术，用于研究生物样品的结构和功能。
在冰冻切片实验中，样品必须被快速冻结并制成非常薄的切片，以保持样品的原始结构和形态。
以下是一个冰冻切片实验的一般步骤，供参考。
1.准备工作：-准备所需的实验材料和设备，包括动物或细胞样品、细胞培养基、PBS缓冲液、冷冻剂（如液氮或干冰）、冷冻切片机、切片刀片、切片贴片和载玻片等。
-充分冷却冷冻切片机，并确保切片刀片处于锋利和清洁状态。
-确保实验环境卫生干净，并且操作台面上没有其他杂物和细菌。
2.过度冷冻：-在离心管或培养皿中收集样品，如组织块或细胞团。
-将样品迅速置于冷冻剂中，以快速冷冻样品。
在制备过程中，样品冷冻的速度非常重要，可以使用冰浴或液氮使样品迅速冷冻。
3.制备冷冻样品：-将冷冻固态样品放入冷冻切片机的样品夹内，确保样品与夹具接触良好。
-调整切片刀片的角度和位置，以确保薄片的切割。
-使用冷冻切片机制备冷冻样品，比如用于大脑切片的考尔密斯键切片机。
4.切片过程：-打开冷冻切片机的刀片和样品夹，以容纳载玻片。
-将切片刀片横跨切片机的切片口，并确保刀刃与样品夹接触。
-使用微调装置，轻轻地将切片刀片向下移动，以制备样品切片。
可以根据需要调整切片的厚度。
5.取样和处理：-将切制好的样品轻轻地使用毛刷或细针取下，并将其浸泡在PBS缓冲液或其他处理液中进行进一步处理。
-根据实验需求，可以进行染色、免疫标记和显微镜检查等处理。
6.制备切片贴片和载玻片：-取出切片贴片并将其浸泡在PBS缓冲液中，让其变湿。
-使用镊子或其他工具将处理好的样品放在切片贴片上，然后轻轻地将切片贴片放在载玻片上。
确保样品均匀分布在切片贴片上，并避免形成气泡。
7.干燥和封装：-将切片贴片从PBS缓冲液中取出，用纸巾或吸水纸轻轻地吸去多余的液体。
-将载玻片置于干燥盒中，确保切片在常温下彻底干燥。
-使用合适的密封胶将载玻片封装，以防止切片的氧化和损坏。
总结：冰冻切片实验是一种常用的技术，用于研究生物样品的结构和功能。
实验三 植物冰冻切片制作及显微观察
植物冰冻切片制作及显微观察一实验原理冰冻切片是利用低温使组织迅速冻结达到一定的硬度进行切片的一种方法，因其不需经过脱水和透明等步骤，具有快速、简便、易操作等特点，而且能比较好地保存组织的酶活性，较完好地保存组织抗原的免疫活性，是原位杂交、酶组织化学和免疫组织化学等实验中常用的方法。
冰冻切片的种类较多，常用的切片机主要分为两大类：开放式冰冻切片机和恒温冰冻切片机。
前者主要包括半导体制冷切片机、醇制冷切片机及老式CO2、氯乙烷等切片机等，开放式冰冻切片机由于暴露于空气中，温度不易控制，技术难度大，现多已淘汰。
后者主要是低温恒冷箱冰冻切片法，是目前应用最为广泛的方法。
冰冻切片在动物和人体的研究中已被广泛应用，但在植物上的应用相对较少。
原因是植物组织中存在液泡结构，而且由于细胞壁的存在细胞之间有较大间隙，细胞含水量远大于相同体积的动物细胞，更容易在低温冷冻过程中形成冰晶，损伤植物细胞的细微结构且比较容易破碎，难以切片和保持植物组织结构的完整性，也使得准备植物组织的冰冻切片存在一定的困难。
因此，在植物材料进行冷冻切片时常使用冷冻保护剂进行处理。
冷冻保护剂的作用就是能与组织细胞中的水分结合，降低细胞内溶液的冰点，使形成冰晶或较大冰晶的机会减小，从而减轻细胞内冰晶的损伤。
常用的的冷冻保护剂有蔗糖和甘油等，不同植物组织细胞结构不同，因此选择适合的保护剂的浓度非常重要。
另外，影响植物冰冻切片的主要因素还有包埋剂和切片厚度等，冰冻切片常用的包埋剂有水、普通胶水和OCT，用水做包埋剂，较难切出完整的切片；OCT包埋剂与普通胶水效果基本相同，都能切出完整的切片，如果在冰冻前将材料浸没在OCT或胶水中，让OCT或胶水充分渗透进组织中，切片效果更好。
切片不可过厚，否则细胞重叠不易观察；切片也不可过薄，否则切片容易破碎，需根据不同实验材料和实验目的进行优化。
二实验材料拟南芥茎段三主要仪器和试剂leica冰冻切片机、光学显微镜OCT、TBO、四实验方法1.取新鲜烟草茎段，切成0.5 cm左右的小段2.取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。
冰冻切片实验技术
实验技术：组织切片的制备点击次数：350 发布日期：2009-11-9 来源：长沙赢润仅供参考，谢绝转载，否则责任自负组织切片的制备二）切片方法-细节注意1 切片方法的选择光镜和免疫组化研究的切片一般为5μm，而神经组织切片为20-100μm，有利于追踪神经纤维的走行。
1.1 冰冻切片是免疫组织化学中最常用的一种切片方法，能够最大量的保存抗原、操作简便，主要适用于不稳定的抗原（如检测细胞膜的某些抗原成分），但标本来源受限。
冰冻切片时,组织中水分易形成冰晶,影响抗原定位。
冰晶小而多，对组织结构损害大。
因此可采用以下措施减少冰晶的形成：①速冻，缩短组织从-33～-43℃的时间。
具体方法是：⑴干冰-丙酮（乙醇）法：将150-200ml丙酮（乙醇）装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，再加干冰不冒气泡时，温度可达-70℃。
用一小烧杯（50-100ml）内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮（乙醇）饱和液内，至异戊烷温度达-70℃时即可使用。
将组织（约1cm×0.8cm×0.5cm）t投入异戊烷内速冻30-60s后取出，置-80℃低温保存或置恒冷冰箱内以备切片；⑵液氮法：将组织块平放于软塑料瓶盖或特制小盒内（直径约2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾。
此时小盒保持原位切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
取出组织块后立即置入-80℃冰箱贮存或作恒冷切片。
②将组织置于20%-30%蔗糖溶液中1-3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。
冰冻切片一般用恒冷切片机。
切片后如不染色，必须将切片吹干，贮存于低温冰箱内，进行短暂预固定干燥后贮存于低温。
【目的】组织标本必须首先被制成组织切片，再经过染色处理，然后才能在显微镜下进行临床诊断和科学研究。
【原理】苏木素染色结合伊红染色是常规组织学染色技术，也称为H & E染色。
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植物冰冻切片制作及显微观察
一实验原理
冰冻切片是利用低温使组织迅速冻结达到一定的硬度进行切片
的一种方法，因其不需经过脱水和透明等步骤，具有快速、简便、易操作等特点，而且能比较好地保存组织的酶活性，较完好地保存组织抗原的免疫活性，是原位杂交、酶组织化学和免疫组织化学等实验中常用的方法。
冰冻切片的种类较多，常用的切片机主要分为两大类：开放式冰冻切片机和恒温冰冻切片机。
前者主要包括半导体制冷切片机、醇制冷切片机及老式CO2、氯乙烷等切片机等，开放式冰冻切片机由于暴露于空气中，温度不易控制，技术难度大，现多已淘汰。
后者主要是低温恒冷箱冰冻切片法，是目前应用最为广泛的方法。
冰冻切片在动物和人体的研究中已被广泛应用，但在植物上的应用相对较少。
原因是植物组织中存在液泡结构，而且由于细胞壁的存在细胞之间有较大间隙，细胞含水量远大于相同体积的动物细胞，更容易在低温冷冻过程中形成冰晶，损伤植物细胞的细微结构且比较容易破碎，难以切片和保持植物组织结构的完整性，也使得准备植物组织的冰冻切片存在一定的困难。
因此，在植物材料进行冷冻切片时常使用冷冻保护剂进行处理。
冷冻保护剂的作用就是能与组织细胞中的水分结合，降低细胞内溶液的冰点，使形成冰晶或较大冰晶的机会减小，从而减轻细胞内冰晶的损伤。
常用的的冷冻保护剂有蔗糖和甘油等，不同植物组织细胞结构不同，因此选择适合的保护剂的浓度非常重要。
另外，影响植物冰冻切片的主要因素还有包埋剂和切片厚度等，冰冻切片常用的包埋剂有水、普通胶水和OCT，用水做包埋剂，较难切出完整的切片；OCT包埋剂与普通胶水效果基本相同，都能切出完整的切片，如果在冰冻前将材料浸没在OCT或胶水中，让OCT或胶水充分渗透进组织中，切片效果更好。
切片不可过厚，否则细胞重叠不易观察；切片也不可过薄，否则切片容易破碎，需根据不同实验材料和实验目的进行优化。
二实验材料
拟南芥茎段
三主要仪器和试剂
l eica冰冻切片机、光学显微镜
OCT、TBO、
四实验方法
1.取新鲜烟草茎段，切成0.5 cm左右的小段
2.取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻
台上，冰冻。
3.将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转
动旋钮，将组织修平。
4.调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄
切，纤维多细胞稀的可稍为厚切。
5.调好防卷板。
制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要
求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。
切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。
6.在干净的载波片上滴上一滴水，用预冷的解剖针将切好的材料挑
起，迅速置于载波片上的水中展片。
7.吸去多余水分，用1% TBO滴染展开的切片材料5s，迅速用水洗去
染料。
8.用80% 甘油封片。
9.显微镜拍照。
五冰冻切片时的注意事项：
1.防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑
除切片残余和用柔软的纸张擦。
有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。
因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。
2.当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取
出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大
拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。
另者，调高冰冻点。
3.用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。
因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。
如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。