高分辨染色体制备与识别

8号染色体
短臂末端为p23 长臂末端为q2 主要界标为p21、 q21 550条带时 p21分化为 p21.1、p21.2、 p21.3 , q21分 化为q21.1、 q21.2、q21.3
9号染色体
短臂末端为p24 长臂末端为q34 主要界标为 p21 、q21、 q31 550条带时
q21分化为 q21.1、 q21.2、 q21.3
注 意 事 项
高分辨染色体的识别
由于高分辨带（ISCN，1981）的命名体制是在巴黎会议 （1971）和人类细胞遗传学命名的国际体制（ISCN，1978） 基础上的发展，仅做了某些修改，此点清楚的说明，掌握常 规染色体和320条带显带染色体的识别，乃是一个细胞遗传工 作者进入高分辨领域的基础。 有关从550条带到850条带阶段各号染色体上的再分化及 其命名参考（ISCN，2005），此处不再赘述。（详见模式图）
12号染色体
短臂末端为p13 长臂末端为q24 主要界标为q21
550条带时
p13分化为p13.1、 p13.2、13.3 q21分化为q21.1、 q21.2、q21.3
12号染色体
短臂末端为p13
长臂末端为q24 主要界标为q21 550条带时 p13分化为p13.1、 p13.2、13.3 q21分化为q21.1、 q21.2、q21.3
5号染色体
短臂末端为p15
长臂末端为q35
主要界标为q21、 q31 550条带时q31分化 为q31.1、q31.2、 q31.3
6号染色体
短臂末端为p25 长臂末端为q37 主要界标为p21 、 q21 550条带时 p21分化为p21.1、 p21.2、p21.3
6号染色体
短臂末端为p25
16号染色体 短 臂末端为p13，长 臂末端为q24。主 要界标为q21 。
17号染色体 短臂 末端为p13，长臂末 端为q25。主要界标 为q21 。500条带时 q21分化为q21.1、 q21.2、q21.3 。
。
18号染色体 短臂 末端为p11.3，长 臂末端为q23。主 要界标为q21 。 500条带时q21分化 为q21.1、q21.2、 q21.3 。
1号染色体带型的的演变是我们确认一 个分裂期细胞阶段的标志，当p36.2带出现 时，该细胞即处于550条带阶段，当短臂末 端出现p36.32带同时p36.2再分化成p36.21、 p36.22、p36.23带时，则该细胞处于850条 带阶段，当q21分化成q21.1、q21.2、 q21.3，同时q21.2分化成q21.21、q21.22、 q21.23时，该细胞处于1000条带阶段。
长臂末端为q26 主要界标为q21 550条带时 q21分化为q21.1、 q21.2、q21.3
11号染色体
短臂末端为p15
长臂末端为q25 主要界标为q21 550条带时p15 分化为p15.1至 p15.5
11号染色体
短臂末端为p15
长臂末端为q25 主要界标为q21 550条带时p15 分化为p15.1至 p15.5
长臂末端为q37
主要界标为p21 、 q21 550条带时 p21分化为p21.1、 p21.2、p21.3
7号染色体
短臂末端为p22 长臂末端为q36 主要界标为p21 、 q21 、 q31 550条带时q21分 化为q21.1、 q21.2、q21.3 , q31分化为q31.1、 q31.2、q31.3
特点:
此种阻断的可逆性差,当阻断时间较长时,阻断释放 后许多细胞不能完成正常的有丝分裂而进行异常分裂。
高分辨染色体的制备
植物血球凝集素（PHA）刺激G0期的淋巴细胞 转化为淋巴母细胞，进而进行有丝分裂，可在体 外培养外周血可获得有丝分裂活跃的细胞群体。 当细胞增殖到一定数量时，加入5-氟尿嘧啶 和尿嘧啶核苷从而阻断DNA的合成，将其同步在S 期，17个小时后加入胸腺嘧啶核苷（TDR）释放细 胞，使细胞有丝分裂继续，进入分裂期后加入染 色体缩短抑制剂溴乙锭（EB），并加入秋水仙胺 破坏纺缍丝的形成，从而阻止到较多具有550条带 及850条带以上的分裂相，从而进行人类染色体高 分辨分析。
7号染色体
短臂末端为p22 长臂末端为q36 主要界标为 p21 、q21 、 q31 550条带时q21 分化为q21.1、 q21.2、q21.3 , q31分化为 q31.1、q31.2、 q31.3
8号染色体
短臂末端为p23 长臂末端为q2 主要界标为p21、 q21 550条带时 p21分化为 p21.1、p21.2、 p21.3 , q21分 化为q21.1、 q21.2、q21.3
细胞同步化
指自然的或经人为处理造成的细胞周期同步化.前者称为 自然同步化,后者成为人工同步化
人工同步化
选择同步化 人工同步化
诱导同步化 中期阻断法
DNA合成阻断法
人工同步化
—选择同步化
主要有有丝分裂选择法,使单层培养于培养皿 中的细胞处于对数生长期,此时分裂活跃,分裂指数 高,分裂细胞变圆、隆起,与培养皿的附着性降低. 此时轻加振荡,M期细胞即脱离器皿壁而浮于培养液 中，收集吸出培养液。再加入37 ℃的新培养液继 续培养.经1-2h,在依上法收集M期细胞,反复操作可 获得一定数量的M细胞,贮存于4 ℃冰箱备用.
特点:
1)优点:细胞不受药物等的伤害,同步化程度高,转入37℃中细胞即开 始同步分裂 2)缺点:分离的细胞少,对生化分析常感到数量不足.
人工同步化
—诱导同步化
诱导同步化:
通过药物的诱导而导致细胞分裂同步化
1)DNA合成阻断法
2)中期阻断法
人工同步化
—诱导同步化
DNA合成阻断法
选用DNA抑制剂可逆地抑制DNA合成而 不影响其它各细胞沿周期运转,最终可将 细胞群体阻断在S期、G1-S期交界处.
细 胞 周 期
合成前期（G1期） 分裂间期 细胞周期 分裂期 合成期（S） 合成后期（G2期） 前期、中期、后期、 末期
观察染色体的前提条件
细胞周期同步化
50年代之后由于细胞周期研究的发展,认识到处于细胞周 期不同阶段的细胞,其形态和生化特点有所不同,对辐射、药 物、病毒的感染、酶诱导的敏感性也均有不同,因而各种细胞 同步化的经验方法就应运而生.
基于中期染色体的形成中，DNA分子的非同步的多级螺旋 化是形成深带的物质基础，当我们从中期向前期逆向追溯染 色体不断延长的特征时，我们可以设想起螺旋也是非同步化 的。这样 ，由中期染色体上的一条深带分化出来的深带必然 是较深的，而由浅带分化出来的深带必然是较浅的。
高分辨染色体的识别
确定单组染色体带纹数的标志
实 验 原 理
高分辨染色体的制备
培养瓶、吸管、吸头、离心管、冰玻片、离心机、显微镜、 染缸、烧杯 25%的小牛血清RPMI1640培养基5毫升 同步化及显带所用试剂： 10-5M Frdu（五氟尿嘧啶) 10-4M Uridine（尿嘧啶核苷） 10-3M TDR（胸腺嘧啶核苷） 1mg/ml EB（溴化乙锭） 0.075M KCl低渗液 1/15M Na2HPO4 1/15M KH2PO4 0.85%的NaCl 2.5%胰酶 0.4%酚红 20g/ml的秋水仙胺 固定剂：甲醇:冰乙酸=3:1 Giemsa染色液等
19号染色体 短 臂末端为p13，长 臂末端为q13.4。 550条带时p13分 化为p13.1、 p13.2、p13.3 。
20号染色体 短臂末端为 p13，长臂末 端为q13.3。
21号染色体 短臂 末端为p13，长臂 末端为q13.3。。 550条带时q22分化 为q22.1、q22.2、 q22.3 。
实 验 用 品
高分辨染色体的制备
实 验 过 程
高分辨染色体的制备
1、四种药物均应避光，冷藏保存，可先配成母液，分装后 入-20℃冻存，需要时取出稀释成工作浓度入4℃，切忌反 复冻融； 2、四种药物工作液配好后使用不超过一个月期限，否则影 响效果； 3、低渗时间一般要长于常规G带收获； 4、如固定两次后仍见褐色沉淀，可加大冰醋酸的量2:1， 进行第3次固定。 4、滴片时采用高滴片效果好于低滴片过火。 5、显带试片一般从58秒开始。
13号染色体 短 臂末端为p13，长 臂末端为q34。主 要界标为q21、 q31 。550条带时 p21分化为p21.1、 p21.2、p21.3 。
14号染色体 短臂末端为 p13，长臂末 端为q32。主 要界标为q21、 q31 。
15号染色体 短臂 末端为p13，长臂 末端为q26。主要 界标为q21 。 500 条带时q21分化为 q21.1、q21.2、 q21.3 。
2号染色体
短臂末端为p25
长臂末端为q37
主要界标为p21、q21、 q31
550条带时q21分化为 q21.1、q21.2、 q21.3
2号染色体
短臂末端为p25
长臂末端为q37
பைடு நூலகம்
主要界标为p21、q21、 q31
550条带时q21分化为 q21.1、q21.2、 q21.3
3号染色体
短臂末端为p26 长臂末端为q29 主要界标为p21、 q21 550条带时p21分 化为p21.1、 p21.2、p21.3
9号染色体
短臂末端为p24 长臂末端为q34 主要界标为 p21 、q21、 q31 550条带时
q21分化为 q21.1、 q21.2、 q21.3
10号染色体
短臂末端为p15
长臂末端为q26 主要界标为q21 550条带时 q21分化为q21.1、 q21.2、q21.3
10号染色体
短臂末端为p15
4号染色体
短臂末端为p16
长臂末端为q35
主要界标为q21 、 q31 550条带时q21分化为 q21.1、q21.2、 q21.3, q31分化为 q31.1、q31.2、 q31.3
5号染色体
短臂末端为p15
长臂末端为q35
主要界标为q21、 q31
550条带时q31分化 为q31.1、q31.2、 q31.3
22号染色体 短 臂末端为p13，长 臂末端为q13。主 要界标为q12 。 550条带时q12分 化为q12.1、 q12.2、q12.3
X染色体 短臂末端 为p22.3，长臂末端 为q28。主要界标为 p21、q21 。 550条 带时p21分化为 p21.1、p21.2、 p21.3 , q21分化为 q21.1、q21.2、 q21.3 。
Y染色体 短臂末端为 p11.3，长臂 末端为q12。
3号染色体
短臂末端为p26
长臂末端为q29
主要界标为p21、 q21 550条带时p21分 化为p21.1、 p21.2、p21.3
4号染色体
短臂末端为p16
长臂末端为q35
主要界标为q21 、 q31 550条带时q21分化 为q21.1、q21.2、 q21.3, q31分化为 q31.1、q31.2、 q31.3
人工同步化
—诱导同步化
DNA合成阻断法——胸腺嘧啶核苷（TDR）双阻断法
特点:
此方法仅适于 (tG1+tG2+tM)>t S的细胞，同步 化程度高,适应 于任何培养体系, 可将几乎所有的 细胞同步化.
人工同步化
中期阻断法
—诱导同步化
某些药物可抑制微管的聚合,因而抑制有丝分裂装 置的形成,将细胞阻断于有丝分裂中期.同DNA合成阻断相 比,中期阻断的非平衡生长问题不十分明显,因此M期大分 子合成基本停止.中期阻断药物最常用为秋水仙素或者秋 水酰胺.
1号染色体
短臂末端为p36 长臂末端为q44
主要界标为p21、 p31、q21、q31、 q41
550条带时p31分化 为p31.1、p31.2、 p31.3。
1号染色体
短臂末端为p36 长臂末端为q44
主要界标为p21、 p31、q21、q31、 q41
550条带时p31分化 为p31.1、p31.2、 p31.3。