苯酚硫酸法测定乐颗粒中总糖的含量
实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2．方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3．主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
４．掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
５．试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程2）待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
苯酚_硫酸法测定围乐颗粒中总多糖的含量
Tab 1
样品含量 / mg 4 98 4 98 4 98 4 98 4 98 4 98
表 1 加样回收率试验结果( n = 6) Results of sample recovery test( n= 6)
加入量 /m g 5 10 5 13 5 12 5 16 5 08 5 09 测得量 / mg 10 09 10 01 10 02 10 15 10 01 10 00 回收率 /% 100 20 98 05 98 44 100 19 99 02 98 62 x /% RS D /%
( 收稿日期: 2007 - 08 - 22 修回日期: 2008 - 01 - 02)
Ch ina Pharmac y 2008 V ol. 19 No. 9
685
丁醇= 4 ! 1 ) 脱蛋白, 样品液与氯仿- 正丁醇的体积比为 4 ! 1, 分取上清 液, 精密量取 1 0 mL , 加无水乙醇 至含醇量 达 70% , 冷藏, 5 000 r min - 1 离心 30 m in, 取沉淀, 依次加乙醚、 无水乙醇洗涤 3 次, 挥干, 沉淀加水溶解, 定容至 100 m L , 即 得。 2 2 检测波长的确定 分别吸取一定量 的葡萄糖对照品 溶液和已处 理好的供 试 品溶液, 显色后在 280~ 600 nm 波长范围内扫描。结果表明, 葡萄糖对照品和供试品的最大吸收峰位一致, 均位 于 487 nm 波长处, 故本试验选用 487 nm 作为检测波长。 紫外吸收光谱见 图 1。
ABSTRACT O BJECT I V E: T o esta blish phenol- sulfuric acid m ethod fo r t he deter minatio n of the co ntent o f t otal polysac cha rides in W eile g r anules M ET HO DS: T he samples w er e depro teinized by Sev ag metho d, co lo red by phenol- sulfur ic acid m etho d ( w ater bat h at 60 fo r 30 m in) , and the co nt ent of to tal poly saccha rides in W eile g r anules w as de term ined w ith -1 G luco se as co nt ro l RESU L T S: T he linear r ange o f G lucose w as 20 47~ 102 36 g mL ( r = 0 999 4 ) , w ith an av er age re co ve ry of 99 09 % ( RS D = 0 92% , n = 6) T he content of to tal poly sacchar ides in W eile g ranules w as 41 63% CO N CL U S IO N : T his met hod w as sim ple, accur ate and r ep ro ducible, and suit able fo r q ualit y contr ol of W eile g r anules KEY WORDS W eile g ranules; T ot al p o ly sa ccharides; Pheno l- sulfur ic acid m etho d; Content det erm inat io n 围乐颗粒是根据治疗更年期综合征的经验方 ( 主含赤芍、 当归、 牡丹皮等药材) , 结合现代药理研究, 提取精制其中的芍 药总苷、 当归多糖等有效部位( 成分) 制备而成的新制剂。当归 多糖可促进造血细胞的形成, 加快血细胞的分化与成熟, 促进血 [1] 虚动物外周血细胞数量恢复正常 。其机制可能是通过诱导造 血微环境的成纤维细胞分泌某些造血生长因子, 从而促进造血 祖细胞的增殖分化[ 2 ] ; 另外, 当归多糖还有免疫调节作用 [3 ~ 5 ] 。 由 于当归多糖是与疗效有关的主要有效部位之一, 且在方中的比 例最大, 故为了控制该制剂的质量与疗效, 笔者把多糖含量作 为质控指标, 采用苯酚- 硫酸法进行了含量测定。 试药 D - 无水葡萄糖对照品 ( 中国药品生物制品检定所, 批号: 110833- 200503) ; 围乐颗粒 ( 南方医科大学中医药学院新药开 发实验室) ; 水为重蒸馏水, 其它试剂均为分析纯。 1 2
苯酚硫酸法测多糖含量计算公式
苯酚硫酸法测多糖含量计算公式多糖是一类高分子化合物，由多个单糖分子通过糖苷键连接而成。
多糖广泛存在于天然产物中，如植物、动物、微生物等。
多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等，因此在医药、食品、化妆品等领域有着广泛的应用。
测定多糖含量是多糖研究的基础，其中苯酚硫酸法是一种常用的测定方法。
苯酚硫酸法是一种比色法，其原理是将多糖与苯酚在硫酸存在下加热，生成一种紫色化合物，其吸光度与多糖含量成正比。
该方法具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，因此被广泛应用于多糖含量的测定。
苯酚硫酸法测定多糖含量的计算公式如下：多糖含量（%）=（A-B）×V×D/（C×m）其中，A为待测样品的吸光度值，B为空白对照的吸光度值，V为总体积，D为稀释倍数，C为苯酚硫酸试剂的浓度，m为样品的质量。
在进行苯酚硫酸法测定多糖含量时，需要注意以下几点：1.样品的制备：多糖样品需要经过适当的处理，如粉碎、溶解、过滤等，以获得均匀的样品。
2.空白对照的制备：空白对照是指不含多糖的样品，其制备方法与待测样品相同。
3.苯酚硫酸试剂的制备：苯酚硫酸试剂需要在使用前制备，其制备方法为将苯酚和浓硫酸按一定比例混合，制成苯酚硫酸试剂。
4.吸光度的测定：吸光度的测定需要使用紫外可见分光光度计，选择合适的波长进行测定。
5.计算公式的应用：在进行计算时，需要注意各参数的单位，如体积的单位为毫升，质量的单位为克。
苯酚硫酸法是一种简便、灵敏、重现性好的多糖含量测定方法，其计算公式简单易懂，适用于多种多糖的测定。
在进行测定时，需要注意样品的制备、空白对照的制备、苯酚硫酸试剂的制备、吸光度的测定以及计算公式的应用等方面，以保证测定结果的准确性和可靠性。
苯酚硫酸法测多糖含量
一、硫酸苯酚法测多糖含量1、试剂配制1.浓硫酸：分析纯，%%苯酚：取苯酚5g，置100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。
3.标准葡聚糖（Dextran,Pharmacia）或分析纯葡萄糖。
准确称取20mg经105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容。
2、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）10mg于250ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取、、、、、、及，各以蒸馏水补至，然后加入5%苯酚1ml及浓硫酸,摇匀冷却，室温放置20min以后于490nm测光密度，以水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
1 2 3 4 5 6 7 8 0标准葡萄糖溶液0 （mL）蒸馏水（mL）5%苯酚（mL）浓硫酸（mL）3注意事项（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数校正μg数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量。
光密度值最好在——之间。
比如：小于之下可以考虑取样品时取2克，仍取样品液，如大于可以减半取的样品液测定。
（5）正常的反应溶液是深棕色。
糖越多颜色越深。
注意硫酸的纯度。
空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。
操作的时候有几条你需要注意的，这些对你的检测结果影响极大1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。
2、样品检测的时候，向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀，加入硫酸基本操作：硫酸沿壁加，最好能旋转比色管，让硫酸能均匀的沿壁流下。
3、加完硫酸需要立即摇匀，前提是塞子要配套，不怕烫热、冷水浴，要准确。
苯酚硫酸法测多糖含量
一、硫酸苯酚法测多糖含量1、试剂配制1. 浓硫酸：分析纯，95.5%2. 5%苯酚：取苯酚5 g，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。
3. 标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。
准确称取20m g经105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容。
2、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）10mg于250ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8及0.9ml，各以蒸馏水补至1.0ml，然后加入5%苯酚1ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20min以后于490nm测光密度，以1.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
1 2 3 4 5 6 7 8 00.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0标准葡萄糖溶液（mL）蒸馏水（mL）0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 1.05%苯酚（mL）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸（mL） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.53 注意事项（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量。
光密度值最好在0.1——0.3之间。
比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
（5）正常的反应溶液是深棕色。
糖越多颜色越深。
注意硫酸的纯度。
空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。
苯酚_硫酸法测定保健酒药渣中总多糖的含量
时 间 /h 0 0.5 1.5 2 2.5 3
标准偏差 平均吸光度值
RSD%
对照品 Abs. 0.608 0.614 0.620 0.620 0.619 0.621 0.005 0.618 0.861
样品 Abs. 0.433 0.430 0.433 0.430 0.428 0.424 0.004 0.429 0.988
n
样重
1
空白
2
1.600
3
1.601
4
1.598
5
1.602
6
1.599
7
1.601
标准偏差 0.194
RSD% 2.957
Abs.
0.000 0.553 0.536 0.511 0.533 0.543 0.554
Conc. 多糖含量 多糖含量
/μg/mL /% 平均值/%
0.020
8.764 6.831
Abstract： The total polysaccharides were obtained from the herb residue of health wine with water extraction and alcohol precipitation method， and the polysaccharides content of the extraction was measured with the phenol-sulfuric acid method. The results showed that : the herb residue extract and standard glucose solution all had absorption maximum at 490nm; there was a good linearity relation between the absorbency and the content of standard glucose in the range of 2.277-11.387μg/mL. In addition， the Phenol-sulfuric acid method had good accuracy， stability， repeatability and recovery. By this method， the average content of total polysaccharides （glucose） in herb residue of health wine was 5.62%. Key words： herb residue； total polysaccharides； phenol-sulfuric acid method doi：10.3969/j.issn.1674-506X.2012.02-023
糖含量测定-苯酚硫酸法
1．1原理
多糖可以被浓硫酸在适当高温下水解，产生单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，该衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙黄色物质，在波长490nm处和一定浓度范围内，其吸光度值与糖含量呈线性关系，从而可用比色法测定其含量。
1．2实验步骤
1．2．1100μg/ml D-葡萄糖对照品溶液制备
精密称取10mg D-葡萄糖，加纯化水充分溶解，定容至100ml，作为对照品溶液。
1．2．26%苯酚溶液配制
称取6g苯酚，加入纯化水充分溶解，定容至100ml，备用。
1．2．3对照品管制备
取8支试管，按下表按下表加入100μg/ml D-葡萄糖对照品溶液：
1．2．4供试品管制备
将供试品采用纯化水稀释至D-葡萄糖标准曲线范围内，每步稀释应不超过10倍。
10倍及以内的稀释直接在玻璃试管中进行。
10倍稀释用移液器量取供试品100μl，加纯化水900μl，振荡混匀。
原倍稀释直接取供试品1.0ml加入玻璃试管中。
10倍以内稀释操作按下表在试管中加入相应溶液。
大于10倍的稀释需按下表操作在离心管中先做10倍或100倍稀释（2步10倍稀释）后，再在玻璃试管中按照下表量取稀释。
更高稀释倍数也按照上述原则进行。
1．2．5试验操作
向含有1ml标对照品和供试品的试管中加入0.6ml 6%苯酚溶液，混匀，迅速加入3ml浓硫酸，混匀，置沸水浴反应20分钟。
显色后，冷却至室温，依据紫外-可见分光光度计标准操。
实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸-苯酚法测多糖含量1.目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2.方法原理糖在浓硫酸作用下,水解生成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合成橙黄色化合物,且颜色稳定,在波长490 nm处和一定的浓度范围内,其吸光度与多糖含量呈线性关系正比,从而可以利用分光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量,本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3.主要实验仪器及材料浓硫酸,苯酚,蒸馏装置,分光光度计,电子天平,坐标纸或电脑等。
4.掌握要点硫酸显色的安全、准确操作,单糖到多糖的转换系数。
5.试剂配制1)葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液,摇匀后准确吸取10 mL该溶液,蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100ug/mL的葡萄糖标准液。
2)90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL,蒸馏水定容至100 mL,即得90%苯酚液,棕色瓶中避光保存3)6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%,即一体积储存液对应十四体积纯水,临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作,先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液,震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸,以不放热或微量放热为宜,摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处(490nm)测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标(ug/mL),吸光度Y为纵坐标,从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程2)待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解,定容至100 mL,取溶解后的溶液,按标准曲线中的测定方法,以样液为参比液,测定溶液的吸光值,按回归方程计算待测溶液的多糖浓度,注意乘换算系数。
实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸-苯酚法测多糖含量1.目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2.方法原理糖在浓硫酸作用下,水解生成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合成橙黄色化合物,且颜色稳定,在波长490 nm处和一定的浓度范围内,其吸光度与多糖含量呈线性关系正比,从而可以利用分光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量,本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3.主要实验仪器及材料浓硫酸,苯酚,蒸馏装置,分光光度计,电子天平,坐标纸或电脑等。
4.掌握要点硫酸显色的安全、准确操作,单糖到多糖的转换系数。
5.试剂配制1)葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液,摇匀后准确吸取10 mL该溶液,蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100ug/mL的葡萄糖标准液。
2)90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL,蒸馏水定容至100 mL,即得90%苯酚液,棕色瓶中避光保存3)6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%,即一体积储存液对应十四体积纯水,临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作,先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液,震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸,以不放热或微量放热为宜,摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处(490nm)测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标(ug/mL),吸光度Y为纵坐标,从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程2)待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解,定容至100 mL,取溶解后的溶液,按标准曲线中的测定方法,以样液为参比液,测定溶液的吸光值,按回归方程计算待测溶液的多糖浓度,注意乘换算系数。
苯酚-硫酸法测定多糖的含量
多糖浓度测定及标准曲线谭夕东苯酚-硫酸法1. 对照品的溶液的制备取干燥至恒重的无水葡萄糖0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
供试品的溶液的制备精密量取本品50ml，置250ml量瓶中，加30%硫酸锌溶液5ml，在水浴中加热5分钟后，在振摇下立即加入亚铁氰化钾试液5ml，冷却后加水至刻度，摇匀，滤过，弃取初滤液，取续滤液25ml，置500ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
测定方法精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置10ml量瓶中，各加2%苯酚溶液0.5ml，硫酸5ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法测定。
2.标准曲线的绘制：精密称取千燥恒重的葡萄糖100mg，用水溶解并稀释至100ml，备用。
精密吸取备用液10ml加水稀释至100ml定容，得葡萄糖标准液。
精密吸取标准液100、200、…700微升，分别置于试管内，各加水使成2ml，再各加5%苯酚试剂1.0ml，各管迅速滴加浓硫酸5.0ml，立刻摇匀。
沸水加热15分钟，迅速冷却，另取2ml水，同法操作加入试剂作空白对照．用紫外可见分光光度计在入=490nm测定吸光度。
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程海藻酸钠样品1g,用100mL蒸馏水溶解并定容。
壳聚糖溶液的配制：①先将50mL冰醋酸溶于1000mL的蒸馏水中制成5%的乙酸水溶液1000mL待用。
②称取壳聚糖5g溶于500mL5%的乙酸水溶液中配成10g/L的壳聚糖乙酸溶液。
或精密称取壳聚糖40 mg于100 mL量瓶中，用0. 5 mol·L-1’醋酸溶解并定容。
几丁质不溶于水、稀酸、稀碱及绝大部分溶剂中，据目前所知，几丁质仅能溶于少数溶剂，如六氟异丙酮，六氟丙酮水合物、吡咯烷酮的氯化锂溶液，一些氯醇和浓酸等。
1。
总糖含量的测定方法
总糖含量的测定方法
总糖含量的测定方法有以下几种：
1. 酚硫酸法：将样品与酚硫酸溶液反应生成花色素，然后用紫外分光光度计测定吸光度值，并通过标准曲线计算出总糖含量。
2. 比色法：将样品与苯酚溶液和硫酸溶液混合反应，生成芝麻酚，再用紫外分光光度计测定吸光度值，并通过标准曲线计算出总糖含量。
3. 酵母法：将样品加入含糖培养基，然后将培养基放入恒温摇床中培养，通过测定培养液中呼吸产生的二氧化碳量来计算总糖含量。
4. 红外光谱法：将样品与KBr混合制成透明的样品片，然后使用红外光谱仪进行测定，通过分析样品片的红外吸收光谱来计算总糖含量。
5. 高压液相色谱法：将样品通过高压液相色谱仪进行分析，通过分离出的糖类成分来计算总糖含量。
实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸-苯酚法测多糖含量1.目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2.方法原理糖在浓硫酸作用下,水解生成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合成橙黄色化合物,且颜色稳定,在波长490 nm处和一定的浓度范围内,其吸光度与多糖含量呈线性关系正比,从而可以利用分光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量,本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3.主要实验仪器及材料浓硫酸,苯酚,蒸馏装置,分光光度计,电子天平,坐标纸或电脑等。
4.掌握要点硫酸显色的安全、准确操作,单糖到多糖的转换系数。
5.试剂配制1)葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液,摇匀后准确吸取10 mL该溶液,蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100ug/mL的葡萄糖标准液。
2)90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL,蒸馏水定容至100 mL,即得90%苯酚液,棕色瓶中避光保存3)6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%,即一体积储存液对应十四体积纯水,临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作,先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液,震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸,以不放热或微量放热为宜,摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处(490nm)测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标(ug/mL),吸光度Y为纵坐标,从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程2)待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解,定容至100 mL,取溶解后的溶液,按标准曲线中的测定方法,以样液为参比液,测定溶液的吸光值,按回归方程计算待测溶液的多糖浓度,注意乘换算系数。
苯酚硫酸法测多糖含量
一、硫酸苯酚法测多糖含量之相礼和热创作1、试剂配制1.浓硫酸：分析纯，95.5%2. 5%苯酚：取苯酚5 g，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用.3.尺度葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖.精确称取20m g经105℃干燥至恒重的葡萄糖尺度品于500ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容.2、制造尺度曲线精确称取尺度葡聚糖（或葡萄糖）10mg于250ml容量瓶中，加水至刻度，分别汲取0.2、0.3、0.4、、、、及ml，各以蒸馏水补至1.0ml，然后加入5%苯酚1ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20min当前于490nm测光密度，以1.0ml水按异样显色操纵为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得尺度曲线.1 2 3 4 5 6 7 8 0 尺度葡萄糖溶液0 （mL）蒸馏水（mL）5%苯酚（mL）浓硫酸（mL）3 留意事项（1）此法简单、快速、灵敏、反复性好，对每种糖仅制造一条尺度曲线，颜色持久.（2）制造尺度线宜用相应的尺度多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数.（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成等到次要组分单糖的尺度曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量.光密度值最好在0.1——0.3之间.比方：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定.（5）正常的反应溶液是深棕色.糖越多颜色越深.留意硫酸的纯度.空白的颜色很深，阐明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色颜色过深的话阐明你的酚的难度过大，一样平常是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的做的好的时分颜色很浅，颜色深点也有肯能.操纵的时分有几条你必要留意的，这些对你的检测结果影响极大1、苯酚必要重蒸，配制的苯酚溶液必要妥善保管.2、样品检测的时分，向样品中加了苯酚溶液必要迅速摇匀，加入硫酸基本操纵：硫酸沿壁加，最好能旋转比色管，让硫酸能均匀的沿壁流下.3、加完硫酸必要马上摇匀，前提是塞子要配套，不怕烫热、冷水浴，要精确.。
苯酚硫酸法测多糖含量
一、硫酸苯酚法测多糖含量之吉白夕凡创作1、试剂配制1.浓硫酸：分析纯，95.5%2. 5%苯酚：取苯酚5 g，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。
3.尺度葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。
准确称取20m g经105℃干燥至恒重的葡萄糖尺度品于500ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容。
2、制作尺度曲线准确称取尺度葡聚糖（或葡萄糖）10mg于250ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.2、0.3、0.4、、、、及ml，各以蒸馏水补至1.0ml，然后加入5%苯酚1ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20min以后于490nm测光密度，以1.0ml水按同样显色操纵为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得尺度曲线。
1 2 3 4 5 6 7 8 0 尺度葡萄糖溶液0 （mL）蒸馏水（mL）5%苯酚（mL）浓硫酸（mL）3 注意事项（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条尺度曲线，颜色持久。
（2）制作尺度线宜用相应的尺度多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成等到主要组分单糖的尺度曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量。
光密度值最好在0.1——0.3之间。
比方：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
（5）正常的反应溶液是深棕色。
糖越多颜色越深。
注意硫酸的纯度。
空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。
操纵的时候有几条你需要注意的，这些对你的检测结果影响极大1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保管。
2、样品检测的时候，向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀，加入硫酸基本操纵：硫酸沿壁加，最好能旋转比色管，让硫酸能均匀的沿壁流下。