pH梯度法制备去氢骆驼蓬碱脂质体
脂质体的制备方法
脂质体的制备方法
脂质体是一种由磷脂类物质构成的微小球形结构，可以用来包封各种水溶性和不溶性的药物。
以下是制备脂质体的一般方法，不包含标题及重复文字。
1. 选择适当的脂质组分：按照需要包封的药物性质（如极性、脂溶性）选择相应的磷脂类物质，常用的有磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰甘油（PG）、磷脂酰丝氨酸（PS）等。
2. 选择合适的方法：制备脂质体的常用方法有薄膜法、乳化法、脂肪酸分散法等。
根据药物特性和制备要求选择合适的方法。
3. 薄膜法制备脂质体：将L-α-磷脂酰胆碱和药物以适当比例
溶解于有机溶剂中（如氯仿），用旋转蒸发器除去溶剂，形成薄膜。
加入适量水溶液，通过超声波处理或机械震荡破碎薄膜，生成脂质体悬浮液。
4. 乳化法制备脂质体：将磷脂、药物和辅助乳化剂（如表面活性剂）溶解于有机溶剂中。
将该溶液滴加到含有乳化剂的水相中，并用机械手段（如超声波）进行乳化处理，形成脂质体。
5. 脂肪酸分散法制备脂质体：将药物与脂肪酸（如硬脂酸）按一定比例共熔，然后迅速冷却。
通过乳化剂或超声波等方法将该混合物乳化成脂质体。
6. 脂质体的后处理：根据需要可以对脂质体进行一些后处理步骤，如冻干、冻融法提高脂质体稳定性等。
综上所述，脂质体的制备方法可以根据实际需求选择薄膜法、乳化法或脂肪酸分散法。
制备时要选择适当的脂质组分，并根据需要进行后处理以提高脂质体的稳定性。
脂质体包封率测定方法_脂质体包封率测定方法及影响因素
脂质体包封率测定方法_脂质体包封率测定方法及影响因素万方数据伟等”１以透析法分离利福平脂质体与游离利福平，结果显示，粒径在２．５—１０ｐａｎ范围内的占总数的８２．４％，其中５—１０ｔｔｍ的占３３．８％。
包封率３２．８％。
赵荣生等”１用薄膜．超声法制备两性霉索Ｂ脂质体，透析法分离含药脂质体和游离药物。
结果表明，试验制备的脂质体，其包封率为（７２。
９３±０．３４）％，含量为１．７０８±Ｏ．０１０ｒａｇ／ｒｉｄ。
王健松等”’采用透析－ＨＰＬＣ法测定阿齐霉素脂质体的含量和包封率，３个批号样品的包封率分别为７９．２％、７７．５％和８１．１％。
１．２超速离心法：超速离心法利用游离药物与含药脂质体的重力差异进行分离，计算包封率，该法适用于亚微米级粒子。
可用于样品浓缩。
但该方法成本较高，通常需要离心ｌｈ以上，且各批样品间重现性差，药物的包封率不高，原因可能是由于离心过程中造成一部分小脂质体丢失，或离心力导致脂质体中药物渗漏丢失。
穆筱梅等”…用超速离心机将果酸脂质体混悬液分为离心上清和沉淀两部分，分别计算包封率，最大为３５％。
当果酸质量浓度为０．３ｒ／Ｌ对，可以得到较好的包封率。
龚金红等”ＩＪ取利多卡因脂质体冷冻超速离心，计算包封率，结果利多卡因脂质体平均粒径为８８．３１ｉｌｍ，平均包封率为（６６．２１±４．８０）％。
王学清等”“经超速离心测定的包封率，结果分别为８４．４％、８５．５％和８４．８％。
脂质体的包封率均在８０％以上，且重现性良好。
Ｒｏｕｚｉ等””以离心法分离包封于脂质体的质粒ＤＮＡ，然后把脂质体分散在ＰＢＳ中，根据脂质体表面覆盖的￥３５的放射强度，估测脂质体对ＤＮＡ的包封率。
１．３凝胶柱层析法：常用的层析柱为葡聚糖凝胶（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）柱和琼脂糖凝胶（Ｓｅｐｈａｒｍｅ）柱。
利用脂质俸和游离药物相对分子质量的差异进行分离，但存在洗脱时间长、洗脱体积大、药物浓度低等问题。
徐丽君等…１在ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱上以ｐＨ７．０・７９０・中国生物制品学杂志２００７年１０月第２０卷第１０期ＣｈｉｎＪＢｉｏｌｏｇｌｃａｌＢＯｃｔｏｂｅｒ２００７，ＶｏＬ２０Ｎｏ，１０的磷酸盐缓冲液为流动相进行洗脱，分离盐酸小檗碱和游离的盐酸小檗碱。
一种改良的硫酸铵梯度法制备脂质体的方法[发明专利]
![一种改良的硫酸铵梯度法制备脂质体的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/bc8d3b839b6648d7c0c74641.png)
专利名称：一种改良的硫酸铵梯度法制备脂质体的方法专利类型：发明专利
发明人：平其能,吕文莉,石勇平,庄婕
申请号：CN200910234246.4
申请日：20091118
公开号：CN101703471A
公开日：
20100512
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种改良的硫酸铵梯度法制备脂质体的方法，在制备空白脂质体溶液后主动载药的方法为：在空白脂质体溶液中加入pH调节剂的水溶液、渗透压调节剂的水溶液或水，再加入药物或药物水溶液，进行主动载药。
本发明制备方法无需繁琐耗时的工艺步骤或昂贵的特殊设备，可简便实现主动载药，大大简化了生产工艺，提高了生产效率和重现性，同时大幅降低了生产成本。
申请人：中国药科大学
地址：210009 江苏省南京市童家巷24号
国籍：CN
代理机构：南京苏科专利代理有限责任公司
代理人：孙立冰
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脂质体制备工艺流程
脂质体制备工艺流程脂质体是一种由磷脂和胆固醇等成分组成的小型纳米载体，具有良好的生物相容性和生物可降解性。
脂质体在药物递送和基因治疗方面具有广泛的应用前景。
下面将重点介绍脂质体的制备工艺流程。
一、磷脂选择脂质体的制备以磷脂为主要原料，常用的磷脂有卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸等。
选择适合的磷脂是制备高质量脂质体的重要因素。
二、制备方法1. 薄膜分散法将磷脂溶解在有机溶剂中制备成薄膜，再加入药物或基因，利用机械或超声分散制备脂质体。
该法制备的脂质体颗粒分布比较均匀，适合制备小型脂质体。
2. 溶剂挥发法将磷脂溶解在有机溶剂中，加入药物或基因，通过挥发有机溶剂制备脂质体。
该法可以制备大量的脂质体，但颗粒大小分布不如薄膜分散法。
3. 冻干法将磷脂溶解在水相中，加入药物或基因，通过冻干、再溶解、超声或机械处理制备脂质体。
该法制备的脂质体稳定性较好，适合制备高含药量的脂质体。
三、性质调节为了满足不同的应用需求，可以通过改变脂质体的表面性质、大小、药物包载量和脂质组分来调节脂质体的性质。
常用的方法有加入表面活性剂、多肽等改变脂质体表面性质，改变磷脂组分、添加胆固醇等调节脂质体结构和稳定性。
四、质量检测在脂质体制备过程中，应注意生产环境的净化和卫生，保证脂质体的质量安全。
脂质体质量的检测方法包括颗粒大小、分布、多分散性、药物包载量、稳定性等方面的指标测定。
综上所述，脂质体的制备工艺包括磷脂选择、制备方法、性质调节和质量检测。
通过合理选择磷脂和制备方法以及进行性质调节和质量检测，可以得到性质稳定、药物包载量高的高质量脂质体，为药物递送和基因治疗等领域提供了广阔的应用前景。
天然产物去氢骆驼蓬碱糖基偶联物的合成及抗肿瘤活性评价
Journal of China Pharmaceutical University 2023，54（6）：729 - 742学 报天然产物去氢骆驼蓬碱糖基偶联物的合成及抗肿瘤活性评价刘晓涵1，谭云鹰1，李强1，陈旭1，傅俊杰1*，尹健1，2**（1江南大学生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室，无锡 214122；2江南大学生命科学与健康工程学院，无锡 214122）摘 要 基于本课题组前期工作基础，在天然产物去氢骆驼蓬碱（harmine ）的C 7位氧上引入环己基甲基，并在N 9位上通过不同长度的烷基链偶联甲基2-氨基-β-D -葡萄糖苷，设计并合成了8个去氢骆驼蓬碱糖基偶联物（14a ~ 14h ）。
体外抗肿瘤活性筛选和构效关系研究发现，偶联物的抗肿瘤活性随连接臂中烷基链长度的延长而增加。
化合物14h 对MDA -MB -231乳腺癌细胞的增殖抑制活性显著优于去氢骆驼蓬碱。
与去氢骆驼蓬碱相比，糖基的引入改善了化合物14h 的水溶性，并通过Warburg 效应提高了化合物14h 的肿瘤细胞选择性。
机制研究发现化合物14h 可诱导MDA -MB -231细胞凋亡和G 0/G 1期细胞阻滞，并能通过干扰细胞上皮-间充质转化进程抑制肿瘤细胞迁移。
本研究为基于去氢骆驼蓬碱的抗肿瘤药物的开发提供了新思路。
关键词 去氢骆驼蓬碱；2-氨基-2-脱氧-D -葡萄糖；糖基偶联药物；抗肿瘤活性中图分类号 R914 文献标志码 A 文章编号 1000 -5048（2023）06 -0729 -14doi ：10.11665/j.issn.1000 -5048.2023041101引用本文 刘晓涵，谭云鹰，李强，等.天然产物去氢骆驼蓬碱糖基偶联物的合成及抗肿瘤活性评价［J ］.中国药科大学学报，2023，54（6）：729–742.Cite this article as ： LIU Xiaohan ，TAN Yunying ，LI Qiang ， et al . Synthesis and antitumor activity evaluation of glycoconjugates derived from natural product harmine ［J ］.J China Pharm Univ ，2023，54（6）：729–742.Synthesis and antitumor activity evaluation of glycoconjugates derived from natural product harmineLIU Xiaohan 1, TAN Yunying 1, LI Qiang 1, CHEN Xu 1, FU Junjie 1*, YIN Jian 1,2**1Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry and Biotechnology (Ministry of Education), School of Biotechnology, Jiangnan University,Wuxi 214122; 2School of Life Sciences and Health Engineering, Jiangnan University, Wuxi 214122, ChinaAbstract Based on our previous work, the study herein designed and synthesized eight glycoconjugates of natu⁃ral product harmine (14a-14h )by introducing a cyclohexylmethyloxyl group at its C 7 position and coupling a methyl -2-amino -β-D -glucopyranoside to the N 9 position through different lengths of alkyl chains.In vitro anti -tumor activity screening and structure -activity relationship studies showed that the antitumor activity of the conju⁃gates increased with the lengthening of the alkyl chain in the pound 14h exhibited significantly better proliferative inhibitory activity against MDA -MB -231 breast cancer cells than harmine.As compared to harmine, the introduction of the carbohydrate moiety improved the water solubility of compound 14h and enhanced its tumor cell selectivity through the Warburg effect.Mechanism of action studies revealed that compound 14h induced apoptosis and G0/G1 cell cycle arrest in MDA -MB -231 cells, and inhibited tumor cell migration by inter⁃fering with epithelial -mesenchymal transition process.This study provides a new approach for the development of antitumor drugs based on harmine.收稿日期 2023-04-11通信作者 *Tel ：************* E -mail ：jfu@**Tel ：************* E -mail ：jianyin@基金项目 江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室开放课题资助项目（No.KLCCB -KF202003）·论 文·729学 报Journal of China Pharmaceutical University 2023，54（6）：729 - 742第54 卷Key words harmine; 2-amino-2-deoxy-D-glucose; glycoconjugate drugs; antitumor activityThis study was supported by the Open Project of Key Laboratory of Carbohydrate Chemistry and Biotechnology (Ministry of Educa⁃tion), Jiangnan University (No.KLCCB-KF202003)恶性肿瘤是全球第二大致命疾病，其发病率和病死率持续上升，严重威胁人类生命安全[1]。
脂质体制备方法
脂质体制备方法
脂质体是一种由脂质构成的微粒，常用于药物传递和基因转染等领域。
常见的脂质体制备方法包括以下几种：
1. 脂质薄膜混悬法（Thin-film hydration method）：将脂质和
药物按一定比例溶解在有机溶剂中，制备成薄膜，然后通过加入缓冲溶液或其他溶液来重悬薄膜，形成脂质体。
2. 油水乳化法（Emulsion method）：将脂质和药物溶解在水
相和油相中，通过机械剪切或超声波处理使两相乳化，并形成脂质体。
3. 水介质溶解法（Ether injection method）：将脂质和药物溶
解在有机溶剂中，然后使用高速搅拌或机械剪切射入水相中，并迅速挥发有机溶剂，使脂质形成粒状结构。
4. 反向脂质体法（Reverse phase evaporation method）：将脂质和药物按一定比例混合，加入有机溶剂形成混合体系，然后加入水相，通过振荡或加热使有机溶剂插入水相，形成胶束，最后去除有机溶剂，得到脂质体。
5. 膜片发育法（Lipid film hydration method）：将脂质溶解在
有机溶剂中形成薄膜，将溶剂挥发干燥后，加入含有药物的水相，经超声辐照或搅拌使薄膜与水相均匀悬浮，并形成脂质体。
这些方法各有优缺点，选择合适的方法取决于具体应用的要求和物质特性。
脂质体的制备方法
脂质体的制备方法脂质体是一种在医药和生物科学领域被广泛应用的载体系统，其制备方法对于药物传递和生物学研究具有重要意义。
下面将介绍脂质体的制备方法，希望能为相关领域的研究人员提供一些参考。
首先，脂质体的制备需要选择合适的脂质体成分。
常用的脂质体成分包括磷脂、胆固醇和表面活性剂。
磷脂是脂质体的主要成分，可以选择磷脂中的磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸等。
胆固醇可以增强脂质体的稳定性，而表面活性剂则可以增强脂质体的生物相容性。
在选择脂质体成分时，需要考虑其相容性、稳定性和生物相容性，以确保脂质体的制备质量。
其次，脂质体的制备需要选择合适的制备方法。
常用的制备方法包括薄膜溶解法、乳化法和脂质膜膨胀法。
在薄膜溶解法中，首先将脂质体成分溶解在有机溶剂中，然后通过旋转蒸发或溶剂挥发的方法制备脂质体。
在乳化法中，将脂质体成分和水相乳化，然后通过超声或机械剪切的方法制备脂质体。
在脂质膜膨胀法中，将脂质体成分溶解在有机溶剂中，然后通过加入水相使脂质体膜膨胀，最终制备脂质体。
在选择制备方法时，需要考虑脂质体成分的性质和制备条件，以确保脂质体的制备效果。
最后，脂质体的制备需要进行相关的表征和评价。
常用的表征方法包括透射电镜、扫描电镜、动态光散射和质谱分析等。
透射电镜和扫描电镜可以观察脂质体的形貌和结构，动态光散射可以分析脂质体的粒径和分布，质谱分析可以分析脂质体成分和稳定性。
在进行表征和评价时，需要综合运用多种方法，以全面了解脂质体的性质和质量。
综上所述，脂质体的制备方法包括选择合适的脂质体成分、制备方法和表征评价。
通过合理选择脂质体成分、优化制备方法和综合表征评价，可以制备出质量优良的脂质体，为药物传递和生物学研究提供有力支持。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究人员有所帮助。
脂质体的制备方法
脂质体的制备方法
脂质体是一种由脂质构成的微小囊泡，可用于药物传递和技术研究。
以下是脂质体的一种常见制备方法：
1. 脂质选择：选择适当的脂质作为载体，常见的脂质包括磷脂（如磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺）、胆固醇等。
根据需要可选择不同种类和比例的脂质。
2. 溶剂选择：将所选的脂质溶解在一个合适的溶剂中，常见的溶剂有无水乙醇、氯仿、二氯甲烷等。
溶剂的选择应该考虑到其对脂质的溶解性和对目标应用的安全性。
3. 溶剂去除：使用旋转蒸发仪、氮气吹干等方法将溶剂去除，以便得到脂质的薄膜或干燥物。
4. 水相制备：将药物或其他要包含在脂质体内的物质溶解在适当的水相中，形成水相溶液。
5. 水相与脂质相结合：将脂质的薄膜或干燥物加入水相中，并使用超声波处理、机械切割等方法将其混合均匀。
使脂质与水相形成乳液。
6. 制备脂质体：使用超声波处理、乳化机等方法对乳液进行进一步处理，使脂质体形成更加均匀和稳定的粒子。
7. 进一步处理（可选）：根据需要，可以进行进一步的处理，如使用超滤、离心、冷冻干燥等方法对脂质体进行纯化和浓缩。
以上是一种常见的脂质体制备方法，但具体的制备步骤和条件可能会因实际情况和目标应用的不同而有所差异。
因此，在制备脂质体时应结合具体要求和设备条件进行调整。
pH梯度法制备去氢骆驼蓬碱脂质体
主动载药法制备盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体杜松邓英杰张威沈阳药科大学药学院,，辽宁，沈阳110016摘要：目的：制备高包封率的盐酸去氢骆驼蓬脂质体。
方法：采用pH梯度法进行主动载药。
进行了处方前研究，测定了药物在不同pH值的缓冲液中溶解度及表观油水分配系数，为脂质体合理设计提供参考。
采用柠檬酸缓冲溶液制备空白脂质体，碳酸钠调节外相至中性造成pH梯度，进行主动载药。
采用超滤法分离脂质体与游离药，测定包封率。
考察了药脂比、孵化温度、外水相pH 值对包封率的影响。
结果：随pH值的增大，盐酸去氢骆驼蓬碱的溶解度降低，油水分配系数增大。
采用主动载药法，在药脂比（w/w）小于0.3时脂质体包封率达到80%以上。
包封率随脂质体内外相pH梯度的减小而降低，随药脂比的增大而降低，受孵化温度的影响不大。
结论：主动载药法可制得包封率较高的去氢骆驼蓬碱脂质体。
关键词：盐酸去氢骆驼蓬；脂质体；包封率；pH梯度；主动载药作者简介:杜松(1975--)，男，黑龙江省佳木斯市人，博士生，从事药物新剂型科研工作。
Tel：(024) 23917603 E-mail：dusong75@Preparation of harmine hydrochloride liposomes by active loading methodDu Song, Deng Ying-jie, Zhang Wei( School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016, China) ABSTRACT :OBJECTIVE:The aim of this study was to prepare a harmine hydrochloride liposomes formulation with high entrapment efficiency.METHODS: Harmine hydrochloride was encapsulated into liposomes by active loading method to get high entrapment efficiency. Preformulation test was carried for rational design. Soulibilities and partition coefficient of harmine in buffer of different pH was determined. Empty liposome is prepared with citrate buffer solution, and extravesicular pH was alklined to neutral by sodium carbonate solution. Harmine hydrochloride was encapsulated into liposomes by pH gradient. Encapsulation efficiency was determined after the free drug was separated from liposome by ultrafiltration. The influences factors on the entrapment efficiency including drug to lipid weight ratio, incubation temperature, pH of external water phase were investigated.RESULTS:As the pH value increasing, the soulibility of harmine was decreased, while the partition coefficient is increased. By active loading method, the entrapment efficiency could be more than 80% when the drug/lipid weight ratio was under 0.3. The pH gradient between intervesicle and intravesicle obviously influence the entrapment efficiency, while incubation temperature have little effect on entrapment efficiency.CONCLUSION: Active loading is suitable for preparing harmine hydrochloride liposome with high entrapment efficiency.KEY WORDS: harmine hydrochloride; liposomes; entrapment efficiency; pH gradient, active loading去氢骆驼蓬碱（harmine）是骆驼蓬(Peganum harmala L)种子中分离的一种β-咔保啉类生物碱。
(整理)脂质体制备方法
微脂体(又称脂质体)及其制备方法一二微脂体(又称脂质体)微脂体起源于1960 年代中期，Bangham博士等人首先提出，在磷酸脂薄膜上加入含盐分的水溶液后，再加以摇晃，会使脂质形成具有通透性的小球；196 8年，Sessa 和Weissmann 等人正式将此小球状的物体命名为微脂体（liposo me）并做出明确的定义: 指出微脂体是由一到数层脂质双层膜(lipid bilayer)所组成的微小的囊泡，有自行密合（self-closing）的特性。
微脂体由脂双层膜包裹水溶液形成，由于构造的特性，可同时作为厌水性（hydrophobic）及亲水性（hydrophilic）药品的载体，厌水性药品可以嵌入脂双层中，而亲水性药品则可包覆在微脂体内的水溶液层中。
如同细胞膜，微脂体的脂质膜为脂双层构造，由同时具有亲水性端及厌水性端的脂质所构成，脂双层由厌水性端相对向内而亲水性端面向水溶液构成，组成中的两性物质以磷酸脂质最为常见。
微脂体的形成是两性物质在水溶液中，依照热力学原理，趋向最稳定的排列方式而自动形成。
微脂体的性质深受组成脂质影响，脂质在水溶液的电性，决定微脂体是中性或带有负电荷、正电荷。
此外，磷酸脂碳链部分的长短，不饱和键数目，会决定微脂体的临界温度(transition temperature, Tc)，影响膜的紧密度。
一般来说，碳链长度越长临界温度越高，双键数越多则临界温度越低，常见的DPPC(dipalmitoylp hosphatidylcholine)与DSPC(distearoylphosphatidylcholine)的临界温度分别是42℃与56℃，而Egg PC(egg phosphatidylcholine)与POPC(palmitoyl oleoyl phosphatidylcholine)的Tc 则低于0℃。
临界温度影响微脂体包裹及结合药物的紧密度，当外界温度高于Tc时，对膜有通透性的药物，较容易通过膜；此外，当外界温度处于临界温度时，微脂体脂质双层膜中的脂质，会因为流动性不一致而使微脂体表面产生裂缝，造成内部药物的释出。
脂质体及其制备方法的选择
脂质体及其制备方法的选择1.脂质体概述1965年，英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现了脂质体。
磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为４纳米。
后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。
此两位学者曾获得过诺贝尔奖提名。
某些磷脂分散在过量的水中形成了脂质体，该脂分子本身排成双分子层，在磷脂的主要相变温度(Tm)以上，瞬间形成泡囊，且泡囊包围水液，根据磷脂种类及制备时所用温度，双分子层可以是凝胶或液晶状态。
在凝胶态时磷脂烃链是一种有规律的结构，在液态时烃链是无规律的，每一种用来制备脂质体的纯磷脂由凝胶状态过渡到液晶状态时均具有特征的相变温度。
这种相变温度(Tin)是根据磷脂性质而变(见下表)，它可在-20～+90℃之间变化，双分子层的不同成分混合物可引起相变温度的变化或相变完全消失，当双分子层通过相变温度时，被封闭的水溶性标示物的漏出量增加。
磷脂种类相变温度（℃）卵磷脂（卵磷脂胆碱）-15—7脑磷脂酰丝氨酸6—8二棕榈磷脂41氢化大豆磷脂51脂质体的相变行为决定了脂质体的通透性、融合、聚集及蛋白结合能力，所有这些都明显影响脂质体的稳定性和它们在生物体系中的行为。
脂质体根据其脂质膜的层数和腔室的数量，可以分为单层脂质体，多层脂质体和多囊脂质体，单层脂质体。
不同类型的脂质体其结构特点各不相同，见下图表。
1971年，英国Rymen等人开始将脂质体用作药物载体。
所谓载体，可以是一组分子，包蔽于药物外，通过渗透或被巨嗜细胞吞噬后载体被酶类分解而释放药物，从而发挥作用。
它具有类细胞结构，进入动物体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。
脂质体技术是被喻为“生物导弹”的第四代靶向给药技术，也是目前国际上最热门的制药技术。
脂质体的制备方法及工艺流程
脂质体的制备方法及工艺流程
脂质体是一种由脂质分子组成的微小球形结构体，具有良好的生物相容性和生物降解性，可用于药物传递、基因传递、基因治疗、疫苗制备等领域。
本文介绍了脂质体的制备方法及工艺流程。
脂质体制备方法：
1. 膜法制备法：将脂质分子溶解在有机溶剂中，再利用蒸发浓缩、旋转蒸发等方法制备脂质体。
2. 水相沉淀法：将脂质分子与胆固醇、表面活性剂等混合，再将其加入到含有生理盐水的水相中，以形成脂质体。
3. 反应溶液法：利用化学反应使脂质分子聚合成脂质体。
脂质体制备工艺流程：
1. 材料准备：准备脂质分子、胆固醇、表面活性剂等材料。
2. 溶解：将脂质分子、胆固醇等在有机溶剂中溶解，制备脂质体溶液。
3. 调节pH值：将脂质体溶液的pH值调节至合适的范围。
4. 加入水相：将脂质体溶液滴加入含有生理盐水的水相中。
5. 超声处理：利用超声波将脂质体均匀分散在水相中。
6. 离心：将制备好的脂质体溶液进行离心，分离出脂质体。
7. 洗涤：用生理盐水等洗涤剂洗涤脂质体，去除杂质。
8. 保存：将洗涤好的脂质体溶液保存在低温处，避免脂质体破坏。
以上就是脂质体的制备方法及工艺流程的介绍，希望能对相关
人员有所帮助。
ph梯度法制备脂质体的原理和方法
PH梯度法制备脂质体的原理和方法引言脂质体是一种由磷脂类物质构成的球形胶束结构，具有广泛的应用领域，如药物传递、基因治疗等。
其中，p H梯度法是一种常用的制备脂质体的方法，本文将介绍p H梯度法制备脂质体的原理以及详细的实验操作方法。
原理p H梯度法是通过利用不同p H值溶液之间的离子梯度，来促进脂质体的形成。
主要原理如下：p H敏感性脂质1.：p H敏感性脂质是一种特殊的脂质类物质，其结构中包含了酸性或碱性的功能基团。
在不同p H值条件下，这些功能基团会发生离子化或去离子化反应，从而导致脂质体的聚集或解聚。
p H梯度2.：制备脂质体时，需要选择两个具有不同p H值的溶液。
这两个溶液相互接触时，由于p H差异会形成一个p H梯度。
pH较高一侧的溶液中，酸性功能基团发生离子化，而pH较低一侧的溶液中，碱性功能基团发生去离子化。
脂质体的形成3.：在p H梯度作用下，p H敏感性脂质会发生相应的离子化或去离子化反应。
当两个溶液中的pH值达到平衡时，脂质体开始形成。
此时，p H敏感性脂质会在梯度区域上聚集，形成一个稳定的脂质体结构。
实验操作步骤材料准备-p H敏感性脂质：根据实验需要选择合适的p H敏感性脂质，如磷脂酰胆碱（P C）、磷脂酰甘油（P G）等。
-两个具有不同p H值的缓冲液：根据实验需要选择合适的缓冲液，如磷酸缓冲液（pH7.4）、醋酸缓冲液（pH4.0）等。
-脂质体制备设备：包括超声波清洗器、温度控制装置等。
实验步骤准备脂质体溶液1.：分别称取适量的pH敏感性脂质、缓冲液A和缓冲液B，并分别溶解在适量的无菌水中。
超声处理2.：将脂质体溶液A和溶液B分别放入超声波清洗器中，进行超声处理，以使溶液均匀混合和除去气泡。
温度控制3.：将超声处理后的溶液分别放入两个温度控制装置中，并将温度调节至实验所需的温度。
滴定性添加4.：将溶液A缓慢滴入溶液B中，同时用玻璃杯轻轻搅拌，使两个溶液充分混合。
反应平衡5.：经过一段时间的滴定添加和搅拌后，停止滴定，并继续搅拌溶液，使反应达到平衡状态。
脂质体的制备方法
脂质体的制备方法
脂质体是一种在生物医药领域中应用广泛的载体，可以用于药物传递、基因转
染等领域。
脂质体的制备方法多种多样，下面将介绍几种常用的制备方法。
首先，常见的脂质体制备方法之一是薄膜溶解法。
这种方法是将所需的脂质和
胆固醇按一定的摩尔比溶解在有机溶剂中，然后蒸发除去溶剂，得到薄膜，再用含有水溶液进行重溶，形成脂质体。
这种方法简单易行，制备的脂质体质量较好。
其次，还有脱水膜膨胀法。
这种方法是将所需的脂质和胆固醇溶解在有机溶剂中，然后蒸发除去溶剂，得到脂质膜，再用含有脱水剂的溶液使脂质膜膨胀，形成脂质体。
这种方法制备的脂质体内部结构较为均匀，适用于一些特殊药物的载体。
另外，还有超声法制备脂质体的方法。
这种方法是将所需的脂质和胆固醇溶解
在有机溶剂中，然后通过超声波作用使其形成脂质体。
这种方法制备的脂质体颗粒大小较为均匀，适用于一些需要粒径较小的药物载体。
除此之外，还有脂质体凝胶法。
这种方法是将所需的脂质和胆固醇溶解在有机
溶剂中，然后加入水溶液，形成脂质体凝胶，再用超声或机械方法使凝胶分散成脂质体。
这种方法制备的脂质体内部结构较为稳定，适用于一些需要长时间存储的药物。
总的来说，脂质体的制备方法多种多样，可以根据具体的需要选择合适的方法。
不同的方法制备的脂质体具有不同的特点，可以满足不同的药物载体需求。
希望以上介绍的方法可以为相关研究和实践提供一定的参考和帮助。
ph梯度法制备脂质体原理
ph梯度法制备脂质体原理脂质体是一种由磷脂组成的人工微细粒子，具有良好的生物相容性和药物传递能力。
通过调控脂质体的组成和结构，可以实现对药物的控制释放和靶向输送，因此在药物传递领域得到广泛应用。
ph梯度法是一种制备脂质体的方法，其原理基于不同ph值下脂质体的组装行为差异，利用ph梯度来实现药物的封装和释放。
ph梯度法制备脂质体的原理可以分为以下几个步骤：1. 选择适当的磷脂和药物：在制备脂质体之前，需要选择适合的磷脂和药物。
常用的磷脂有磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油等，而药物可以是水溶性或脂溶性的。
2. 调节ph值：根据药物的特性和目标应用，选择合适的ph范围。
ph梯度法通常采用酸碱中和的方式来调节ph值，可以使用酸或碱溶液进行调节。
3. 组装脂质体：在ph调节好之后，将磷脂和药物溶解在有机溶剂中，形成脂质体的前体溶液。
然后，将前体溶液滴加到调节好ph 值的水相中，并进行搅拌或超声处理，使磷脂分子在水相中形成脂质体。
4. 脱溶有机溶剂：制备好的脂质体溶液中可能还存在有机溶剂，需要通过适当的方法将有机溶剂去除，以获得纯净的脂质体。
5. 优化工艺条件：为了获得更好的脂质体制备效果，可以通过调节工艺条件来优化制备过程。
例如，可以改变磷脂和药物的浓度、溶液的ph值和温度等。
ph梯度法制备脂质体的原理主要基于脂质体在不同ph值下的组装行为。
在制备过程中，调节溶液的ph值可以改变脂质体的表面电荷和极性，从而影响脂质体的聚集和稳定性。
当溶液的ph值合适时，磷脂分子会自发地形成脂质体结构，将药物封装在内部。
这是因为在特定ph值下，磷脂分子的疏水烃链会聚集在一起，形成疏水核心，而亲水头基则暴露在溶液中。
ph梯度法制备的脂质体具有以下优点：1. 简单易行：制备过程相对简单，不需要复杂的设备和条件。
2. 可控性强：通过调节ph值和其他工艺条件，可以控制脂质体的组装和性质，实现对药物的控制释放。
3. 药物封装率高：ph梯度法制备的脂质体可以高效地封装药物，提高药物的稳定性和生物利用度。
制备大脂质体的一种简便方法
制备大脂质体的一种简便方法
1、逆相蒸发法：将磷脂等膜材溶于有机溶剂如氯仿、乙醚等，加入待包封药物的水溶液进行短时超声，直到形成稳定的乳剂，然后减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后，滴加缓冲液，旋转帮助器壁上的凝胶脱落，然后再减压下继续蒸发制得水性悬浮液，通过凝胶色谱或超离心法除去未包入的药物，即得脂质体。
2、冷冻干燥法：将类脂高度分散在水溶液中，冷冻干燥，然后再分散到含药的水性介质中，形成脂质体。
3、冻融法：先制备未包封药物的小单室脂质体，在冻干前将待包封的药物加入，在快速冷冻过程中，由于冰晶的形成，使形成的脂质体膜破裂，形成冰晶的片层与破碎的膜同时存在，此状态不稳定，在缓慢融化过程中，暴露出的脂膜互相融合，重新形成脂质体。
4、高压乳匀法：将整理系各成分加入溶媒中通过高压乳匀机均匀分散成脂质体。
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主动载药法制备盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体杜松邓英杰张威沈阳药科大学药学院,，辽宁，沈阳110016摘要：目的：制备高包封率的盐酸去氢骆驼蓬脂质体。
方法：采用pH梯度法进行主动载药。
进行了处方前研究，测定了药物在不同pH值的缓冲液中溶解度及表观油水分配系数，为脂质体合理设计提供参考。
采用柠檬酸缓冲溶液制备空白脂质体，碳酸钠调节外相至中性造成pH梯度，进行主动载药。
采用超滤法分离脂质体与游离药，测定包封率。
考察了药脂比、孵化温度、外水相pH 值对包封率的影响。
结果：随pH值的增大，盐酸去氢骆驼蓬碱的溶解度降低，油水分配系数增大。
采用主动载药法，在药脂比（w/w）小于0.3时脂质体包封率达到80%以上。
包封率随脂质体内外相pH梯度的减小而降低，随药脂比的增大而降低，受孵化温度的影响不大。
结论：主动载药法可制得包封率较高的去氢骆驼蓬碱脂质体。
关键词：盐酸去氢骆驼蓬；脂质体；包封率；pH梯度；主动载药作者简介:杜松(1975--)，男，黑龙江省佳木斯市人，博士生，从事药物新剂型科研工作。
Tel：(024) 23917603 E-mail：dusong75@Preparation of harmine hydrochloride liposomes by active loading methodDu Song, Deng Ying-jie, Zhang Wei( School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016, China) ABSTRACT :OBJECTIVE:The aim of this study was to prepare a harmine hydrochloride liposomes formulation with high entrapment efficiency.METHODS: Harmine hydrochloride was encapsulated into liposomes by active loading method to get high entrapment efficiency. Preformulation test was carried for rational design. Soulibilities and partition coefficient of harmine in buffer of different pH was determined. Empty liposome is prepared with citrate buffer solution, and extravesicular pH was alklined to neutral by sodium carbonate solution. Harmine hydrochloride was encapsulated into liposomes by pH gradient. Encapsulation efficiency was determined after the free drug was separated from liposome by ultrafiltration. The influences factors on the entrapment efficiency including drug to lipid weight ratio, incubation temperature, pH of external water phase were investigated.RESULTS:As the pH value increasing, the soulibility of harmine was decreased, while the partition coefficient is increased. By active loading method, the entrapment efficiency could be more than 80% when the drug/lipid weight ratio was under 0.3. The pH gradient between intervesicle and intravesicle obviously influence the entrapment efficiency, while incubation temperature have little effect on entrapment efficiency.CONCLUSION: Active loading is suitable for preparing harmine hydrochloride liposome with high entrapment efficiency.KEY WORDS: harmine hydrochloride; liposomes; entrapment efficiency; pH gradient, active loading去氢骆驼蓬碱（harmine）是骆驼蓬(Peganum harmala L)种子中分离的一种β-咔保啉类生物碱。
研究表明去氢骆驼蓬碱具有中枢神经系统和单胺氧化酶的抑制作用方面，还具有肯定的辐射防护作用和抗包虫作用.近年来发现去氢骆驼蓬碱还具有广泛的抗肿瘤活性，可以用于治疗肝癌等癌症[1]。
为提高药物的疗效，降低毒副作用，近年来对去氢骆驼蓬碱开展了许多新剂型研究，有脂质体[2]、乳剂[3]、脉冲释放胶囊 [4]、微球[5]等。
脂质体作为药物载体，具有被动靶向的作用。
可以改变药物的分布，可使药物较多的分布在肝脾等巨噬细胞丰富的器官，提高这些器官的血药浓度，降低全身的药物浓度。
对于提高去氢骆驼蓬碱的抗寄生虫和抗肝癌等方面的疗效，降低药物毒副作用应能起到较好的效果。
然而，目前制备的去氢骆驼蓬碱脂质体的包封率较低，国内有人采用乙醚注入法制备去氢骆驼蓬碱脂质体，包封率仅有30% [2]。
新近国外报道的制备去氢骆驼蓬碱脂质体，用来抗利什曼尼病，加入DCP负电荷脂类，制成多层脂质体,包封率达到65%[6]，但DCP为合成磷脂，价格较贵，且在体内不能被代谢，限制了它的实际应用。
为了更好的发挥药效，需要寻找较高包封率的脂质体的制备方法。
采用pH梯度法已经成功的将许多弱碱性的药物包封入脂质体[7],如抗癌药物阿霉素，长春新碱、拓扑替康等，可以达到很高的包封率。
本文为此进行了去氢骆驼蓬碱pH梯度法主动载药研究，以期制得较高的包封率的脂质体。
试药：盐酸去氢骆驼蓬碱（纯度98%，新疆医科大学孙殿甲教授赠送）大豆磷脂（EPIKURON 200，pc＞93%, Degussa，German)胆固醇（沈阳市医药公司，进口分装）仪器：UV-9100型紫外分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）ZFQ85A型旋转蒸发器（上海医械专机厂）Lipex挤出仪（Northernlipids，Canada)微孔滤膜（上海市新亚净化器厂）HPLC SPD-10AVP UV-VIS Detector （岛津公司）LC-10ATVP Liquid Chromatograph1盐酸去氢骆驼蓬碱处方前研究1.1含量测定方法HPLC色谱条件色谱柱：C18柱（Kromasil, 4.6mmID×150mm, 5μm）；流动相：甲醇：50mM 磷酸(三乙胺调 pH至3）=（50:50）；流速：0.8mL/min ；柱温：室温；检测波长：320nm；进样量：20μL。
标准曲线的测定:精密称取盐酸去氢骆驼蓬碱(Har)对照品0.0250g,置25mL容量瓶中，加水溶解并加至刻度，即得10.0mg/mL的盐酸去氢骆驼蓬碱标准母液，备用。
精密标准母液液适量，用蒸馏水稀释定容至10毫升，分别制成0.1，0.5，3.0，5.0，10.0，15.0，20.0μg/mL的系列标准溶液。
HPLC法测含量。
以峰面积A对浓度C进行线性回归，得回归方程：C(μg/mL) = 225144 A – 1460 (r=0.9995)图1 . 盐酸去氢骆驼蓬碱高效液相色谱图1.2不同pH条件下盐酸去氢骆驼蓬碱溶解度测定以50mM/L的柠檬酸和150mM/L的Na2CO3不同比例混合，配制成pH值为3.62、5.73、6.60、8.16、8.37的缓冲溶液。
分别精密称取Har适量，置10mL的容量瓶中，用不同pH值溶液定容，超声，制成不同pH值盐酸去氢骆驼蓬碱过饱和溶液，放置24小时，取上清夜，0.45μ微孔滤膜过滤，将滤液稀释至线性范围，HPLC 测定含量，求得去氢骆驼蓬碱不同pH值下的溶解度。
1.3不同pH条件下盐酸去氢骆驼蓬表观油/水分配系数测定量取不同pH值的Har溶液5mL和5mL水饱和正辛醇置三角瓶中混合， 25℃水浴中振摇2小时，取出静置，2000r/min下离心10min，取水相适量稀释至线性范围，HPLC测定水相中Har的浓度，以初始水相的药物浓度与正辛醇萃取后水相浓度差作为正辛醇相的浓度，计算油水分配系数 P=C正辛醇/C水。
2 盐酸去氢骆驼蓬碱脂质体的制备2.1空白脂质体的制备：按重量比4:1的比例称取磷脂、胆固醇，用适量的氯仿溶解，减压蒸发，制备磷脂膜后，一份加入50mM柠檬酸（pH 2.0）溶液水化，另一份加入300 mM/L柠檬酸缓冲溶液（pH 4.0）水化制备空白脂质体。
将所得的脂质体依次通过0.8, 0.45, 0.22μm微孔滤膜五次，进行整粒。
2.2载药工艺：取1ml整粒后的脂质体,加入适量10mg/ml去氢骆驼蓬碱溶液，并用150mM Na2CO3调外相适当pH值，置50℃水浴中温育10min，然后用5%的葡萄糖溶液定容至10mL即得去氢骆驼蓬碱脂质体。
2.3 包封率的测定采用超滤－紫外分光光度法测定包封率。
取适量HAR脂质体加入超滤器超滤，取滤液用蒸馏水稀释到线性范围，在301nm测吸光度A,代入标准曲线算出相应的浓度，按下式计算包封率：E%= (C T-C H)/C T×100%E%为包封率；CT 为加入脂质体中药品的浓度；CH为超滤后的游离药物的浓度。
因不同pH值下药物的紫外值吸收不同，在不同pH下测定药物的标准曲线：C(μg/mL)=0.035A－0.0242 r=0.9999 （pH＝6.8）C(μg/mL)=0.050A－0.1236 r=0.9999 （pH＝5.9）C(μg/mL)=0.050A－0.1111 r=0.9998 （pH＝5.3）3.结果：不同pH下药物的溶解度和表观油水分配系数如表1：表1 不同pH下盐酸去氢骆驼蓬溶解度、表观油/水分配系数pH Soulibility(mg/ml) Log D3.62 44.59 0.305.73 32.38 1.436.60 1.56 2.458.16 0.04 2.498.37 0.0003 未测3.2主动载药包封率：采用主动载药，包封率一般都可以达到80%以上3.3影响因素的考察：3.3.1不同pH梯度的影响：用50mM/L柠檬酸(pH 2.0)水化磷脂膜，取1ml空白脂质体，加入不同量的150mM/L Na2CO3溶液调外相的pH值，用pH梯度法载药。