检验仪器分析技术与应用讲义全

检验仪器分析技术及应用讲义

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一-绪论

临床检验技术技术分类：①临床化学检验分析技术（包括自动生化分析、千化学分析、血气分析'电解质分析、电泳分析）②临床免疫学检验分析技术③临床血液学检验和尿液检验分析技术（血细胞分析、血液凝a分析、血液流变分析'流式细胞分析'血红细胞沉降分析和尿液分析）④临床微生物学检验分析技术⑤临床分子生物学检验分析技术

二-血细胞分析技术

血液由血浆（55%）和血细胞（45%）组成。

（填空题）所谓血细胞计数主要是指计数单位容积中红细胞-白细胞和血小板的个数。

（填空题）白细胞被称为人体卫士 *它可以防止外来微生物的侵害及其他感染。

血细胞计数有变阻脉冲法（简称变阻法）'光电计数法和激光计数法。

（大题）变阻法血细胞计数原理：血细胞是电的不良导体，将血细胞覺于电解液中*由于细胞很小，一般不会影响电解液的导通程度。但是如果构成电路的某一小段电解液截面很小，其尺度可与细胞直径相比拟，那么当有细胞浮游到此时*将够显增大整段电解液的等效电阻。如果该电解液外接恆流源（不论负载阻值如何改变，均提供恆定不变的电流），则此时电解液中两极间的电压是增大的，产生的电压脉冲信号与血细胞的电阻率成正比0如果控制定量溶有血细胞的电解溶液*使其从小截面通过，也即使血细胞顺序通过小截面 > 则可得到一连串脉冲，对这些脉冲计数，就可求得血细胞数量。由于各科血细胞直径不同，所以其电阻率也不同，所测得的脉冲幅度也不同 > 根扌居这一特点就可以对各种血细胞进行分类计数。这就是变阻脉沖法原理。

（填空趣）变阻脉冲法计数在大多数细胞计数器中是利用小孔管换能爲装置实现的。

（填空题）脉冲的个数与通过小孔的细胞个数相当，脉冲的幅度与细胞体积成正比0脉冲信号经过下列步骤得出细胞计数结果：放大 > 阖值调节，甄别*整形0

（填空题）体积不同的红细胞'白细胞、血小板，其产生的脉冲幅度也不同，排列序列以白细胞最大*红细胞次之*血小板最小。（简答）什么叫细胞直方图：以体积为橫坐标，以细胞的相对数量为纵坐标。把细胞在一个个很小的体积S（小于2fld，又称通道 > 频道）的数董分布情况表达出来•我们称之为直方图。红细胞直方图（显示a从24- 36011）血小板直方图（显示S 0-36fl）白细胞直方图（显示ffl是30-450fl *在直方图上表现为3个白细胞亚群> 35-90fl a的淋巴细胞群，可以包括淋巴细胞，91-160fl IS的单个核细胞群，可以包括单核细胞、幼稚细胞• 161—450fI ffi的粒细胞群•可以包括嗜酸性细胞 ' 嗜碱性细胞、中性粒细胞。）

白细胞直方图徐显示分类外，还显示4个报竽区域，如果某个报鹫区域里的计数值异常增多*就在此区域出现R 报警，R1为直方图上淋巴峰左側区域有异借，可能有血小板凝块 ' 巨大血小板 ' 有核红细胞、不溶性红细胞和冷凝集素等因素的影响• R2为直方图上淋巴峰和单和峰之间的区域有异常*可能有异型淋巴细胞、幼稚淋巴细胞' 浆细胞'嗜酸性细胞或嗜碱性细胞等因素的影响，R3为直方图上核峰和中性粒峰之间的区域有异常有不成熟粒细胞、嗜酸性粒细胞尊因素的影响，R4为直方图上中性粒峰右側区域有异常 ' 粒细胞&量过多，Rm为以上区域2个或2个以上同时有异常。

存在着2个以上的细胞同时通过细孔的现象称为重合现票。

为了在物理上最大限度地减少重合现象' 开发出了鞘流法 > 具体方法为：具体做法是用一毛细管对准小孔管■细胞混悬液从毛细管喷出，同时与四周流出的躺液一起流过啟感区，保证细胞混悬液在中间形成单个排列的细胞液，四周被鞘液ffl绕•鞘流技术可应用于两种细胞计数原理：一为电阻抗原理•鞘流通过小孔的敏感区进行细胞计数，另一种为激光计数原理•细胞液流室校长，与激光垂直相交，激光光束对流经的每一个细胞照射后产生光散射■利用此原理进行细胞计数。

（大题）为控制细胞通过小孔时的精密度*除采用鞘流技术外，各厂家还采用了一系列相关技术：脉冲编辑-高精度体积分析*扌m流技术 ' 防反流装置VonBchrcns感应爲 ' 延时计数。

定董装置中的特殊部件主要有负压泵、压力调节器、废液瓶等。

（大题）白细胞分类技术：1•容量、电导-光散射法（VCS）体积（V）:测量使用的是电阻抗原理。电导法（C）: 根据细胞

璧能产生高频电流的性能采用高频电磁探针，测量细胞部结构、细胞核和细胞浆的比例以及细胞质粒的大小和密度。光散射（S）:是根据细胞表面光散射的特点提供了注重细胞类型的鉴别方式*来自激光光源的单邑光束直接进入计数池的敏感区，在

io~7（r时对每一个细胞进行扌m描分析，提供了细胞结构 ' 形态的光散射信息。

2.阻抗与鈔频联合法：此类仪爲白细胞分类通过三个不同检测系统完成.a嗜酸性细胞检测系统b嗜碱性细胞檢测系统C淋巴、单核 ' 粒细胞（中性 ' 嗜碱性 ' 嗜酸性）检测系统

3.光散射与细胞化学技术联合法

4.多角度偏振光散射技术。测量正常标本时*可以从这4个角度（（）<卜3>、10\7-11> ' 90’垂直光散射<70-110>对白细胞进行测量。同一种特定的程序自动存储和分析数据，将白细胞分为嗜酸性粒 ' 中性粒、嗜碱性粒 ' 淋巴和单核五种。

（大题）血红蛋白测量原理：血红蛋白的单位是gZIOOmK新制是g/L）•临床检验时因难以从血液中将其分离出来而采用相对比色法进行间接测量。用溶血剂将经过稀释的血液中的红细胞破坏•血红蛋白便溶解出来，再加入转化试剂进而转化为颜色稳定的氛化血红蛋白。血红蛋白含量越高 > 它的颜色就越深，透光性就越差（或吸光性越强）。用光电器件检测透射光强度，并与已定标的血红蛋白值相比校•即可得出血红蛋白含量。常用的光路系统为了防止光散射和外来光千扰，均采用双波长法测量。在血液样品中加入氟化钾> 将生成亂化血红蛋白，这是一种顏色很稳定的物质0它的光密度曲线在54（）iim处有一个吸收峰。

（填空）血样分析一般包括吸样、稀释、送样等过程。

三-流式细胞分析技术

（简答题）流式细胞仪（FCM）:主要功能：可进行细胞多参量分析•包括细胞大小、形状、蛋白荧光、氧化还原状态 ' 膜的结构、流动性 ' 微黏性、膜电位 ' 酶活性 ' 钙离子含量' pH '染色质结构' DNA合成 ' 城基比例等；进行细胞表型分析；细胞分选' DMA含量分析以及细胞分化周期分析等。

FCH工作原理：將待測细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的璘酸缓冲液在高压下从勒液管喷出•鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包国着样品高速流动，组成一个圆形的流束 > 待测细胞在鞘液的包被下单行排列'侬次通过监测区域。流式细胞仪通常以激光作为激发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下产生散射光和激光荧光。光散射信号在前向小角度进行检测'这种信号基本上反映了细胞体积的大小。这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核物质的浓度•经光电倍增管接收后可转换为电信号。细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而宪现的。

流式细胞仪中所用的淤;月有中性滤片、带通減月、带阻減月•长波通滅片、短波通減月、长波通双色性反射片

（填空题）影响流式细胞术分析的因素：细胞的荧光染色、激光光源的稳定性、细胞流速的稳定性、细胞悬液样品的影响（细胞黏连•团決常造成管道阻寒*重叠细胞可造成分析误差。）流式细胞仪的组成：光学系统*液流系统，电子系统'计算机系统和

数据转换处理系统。

（大题）流式细胞仪的临床应用：在免疫学中的应用（外周血T淋巴细胞亚群的测定，T淋巴细胞亚群用于器官移植后排斥反应的监测，肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群的测定，在艾滋病监测中的应用，细胞染色和细胞因子的测定）；在血液病学中的应用。

四-血凝分析技术

生物学方法：凝固法*即將凝血因子激活剂加入到待检血浆中，使血浆发生体外凝a，凝血仪连续记录血浆凝圏过程中的一系列变化*并将这些变化信号转变成数据'用计算机收集、处理数据后得出检测结果。

（填空题）可分为三类：电流法'鮎度法'光学法。

（判斷题）凝血仪根据这种由于血液凝固而导致光强度的变化来判斷凝固终点的方法称之为光学法。

（填空或判斷题）散鈔比浊法：根据待检样品在凝因过程中散鈔光的变化来确定凝a终点的检测方法。透射比浊法：根据待检样品在凝a过程中吸光度的变化来确定凝a终点的检测方法。粘度法：在待检样品中加入小铁珠，利用变化的礁场使小铁珠产生运动，随着血浆的凝圈，血浆粘稠度增加*小铁珠的运动强度逐渐减弱，仪器根据小铁珠运动强度的变化来确定凝圏终点0

生物化学方法是以酶学方法为基础的直接定董法，其优点是用酶学方法直接定量；测定结果准确；重复性好；便干自动化；标

准化；所需样品量小。

五-血液流变学分析技术

影响血液流变特性因素：红细胞的特性 ' 白细胞的变形性 ' 血小板的聚集性、纤维蛋白原浓度等

血液流变特性：红细胞聚集性*红细胞变形性 ' 血液猫度（全血鮎度〈与流变场中切变率有一定关系＞、运动黏度'相对猫度、比粘度'还原粘度）。血液粘度的测量是其中最重要的指标。

测量血液猫度的仪器目前普遍应用的是毛细管粘度计及回转锥板式黏度计。毛细管法测血粘度的理论依据是泊肃叶定律。