细胞冻存流程

细胞冻存流程

细胞冻存流程是一种常用的细胞保存方法，它可以将活细胞冻结并长

期保存，以便后续使用。下面是一个全面的详细的细胞冻存流程。

一、准备工作

1.选择合适的培养基：应根据不同类型的细胞选择不同的培养基，以保证其最佳生长状态。

2.准备液氮罐：液氮罐应该干燥、清洁，并且温度稳定在-196℃左右。

3.准备冷冻介质：常用的冷冻介质有DMSO、甘油等，应根据不同类

型的细胞选择不同的介质。

4.准备标签：在每个样品管上标记样品编号、日期和其他必要信息。

二、处理细胞

1.收集细胞：将生长良好的细胞用无菌PBS洗涤2-3次，然后用无菌PBS悬浮至适当浓度。

2.加入冷冻介质：将适量的冷冻介质滴加到悬浮好的细胞中，并轻轻混匀。

3.分装样品：将处理好的样品分装到标签好的样品管中，每个管中约有1-2×10^6个细胞。

三、冷冻细胞

1.放置样品管：将分装好的样品管放置于-80℃的冰箱中，使其快速降温。

2.移入液氮罐：将样品管从-80℃的冰箱中取出，立即移入预先准备好的液氮罐中进行长期保存。

四、解冻细胞

1.取出样品管：从液氮罐中取出需要使用的样品管，并迅速用37℃的水浴加热解冻。

2.稀释细胞：将解冻好的细胞用无菌PBS洗涤2-3次，然后用培养基稀释至适当浓度。

3.培养细胞：将稀释后的细胞接种到含有适当培养基的培养皿中，并在

恒温箱内进行培养。

以上就是一个全面的详细的细胞冻存流程。在实际操作过程中，还需注意以下事项：

1.所有操作都应在无菌条件下进行，以避免污染导致实验失败。

2.在加入冷冻介质时应轻轻混匀，以避免对细胞造成伤害。

3.在冷冻过程中，应尽量避免细胞间的接触，以防止细胞凝聚。

4.解冻后的细胞应尽快使用，并且需要注意培养条件的调整，以保证其最佳生长状态。

通过以上流程和注意事项，可以有效地进行细胞冻存和解冻操作，并且保证实验结果的准确性和可靠性。