多克隆抗体制备免疫小鼠 (2)
多克隆抗体的制备方法
多克隆抗体的制备方法多克隆抗体是由多个不同的免疫细胞（多克隆）产生的抗体混合物，可以识别并结合到目标生物标志物上。
多克隆抗体在科学研究、临床诊断和治疗中具有重要的应用价值。
制备多克隆抗体需要经过一系列复杂的实验流程，下面将详细介绍多克隆抗体的制备方法。
一、抗原的选择在制备多克隆抗体时，首先需要选择一个合适的抗原。
抗原通常是目标生物标志物的蛋白质或多肽片段。
选择抗原的关键因素包括其表达水平、稳定性和纯度。
抗原的选择直接影响到最终多克隆抗体的亲和力和特异性。
二、免疫小动物免疫小动物通常是用于制备多克隆抗体的主要实验动物，例如小鼠、兔子、大鼠等。
在免疫前需要确保小动物健康，并对其进行相应的预处理，如注射驱虫药物、进行适当的接种。
还需要根据具体实验要求决定预免疫、免疫计划以及免疫方案的制定。
三、免疫过程免疫过程是制备多克隆抗体的核心环节。
首先需将抗原与适当的佐剂混合，增强免疫原性，然后用于免疫小动物。
在免疫过程中需要控制免疫剂量和免疫间隔时间，以及监测动物的免疫应答情况。
免疫后还需要定期采集血清样本，监测抗体滴度的动态变化。
四、细胞融合与筛选经过一段时间的免疫后，需要从免疫动物的脾脏或骨髓中收集免疫细胞，然后与肿瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞。
随后采用限稀稀释法将杂交瘤细胞进行单克隆化分，筛选出高亲和力的多克隆抗体细胞株。
五、生产与纯化经过筛选的多克隆抗体细胞株需要进行扩大培养，生产足够数量的多克隆抗体。
之后通过蛋白质纯化技术，如亲和层析、离子交换层析等手段，从细胞培养上清液中纯化出多克隆抗体。
六、性质鉴定与应用纯化后的多克隆抗体需进行性质鉴定，包括亲和力、特异性、稳定性等方面的测试。
最后经过滤菌毒处理后，多克隆抗体可应用于科学研究、临床诊断、生物药物研发等领域。
多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，需要科学合理地选择抗原、合理设计免疫方案、熟练掌握细胞融合和筛选技术，以及对多克隆抗体进行严格的生产和性质鉴定。
多克隆抗体的原理及制作方法
多克隆抗体的原理及制作方法一、原理多克隆抗体是由针对多种不同抗原表位的抗体组成的混合物。
外源性抗原初次进入动物体内后，可引发机体初次免疫应答，即在抗原呈递细胞（antigenpresenting cell，APC）和T细胞的作用下，未成熟B细胞被激活分化为产生抗体的浆细胞，对于大多数可溶性蛋白抗原而言，动物注射后5～7天，血清中开始出现抗体，并在12天左右达到顶峰，然后逐渐下降。
初次免疫应答产生的抗体持续时间较短，亲和力也较低。
但是受抗原刺激的B细胞除了分化为抗体产生细胞外，还增殖形成大量记忆性B细胞，它们在实施加强免疫时被快速激活，加强免疫后抗体滴度迅速上升，并持续更长时间，抗体合成率也比初次反应增加几倍到几十倍，加强免疫后7～14天出现抗体的峰值。
由于记忆B细胞的存在，需要更少的抗原刺激即可引起再次免疫应答。
记忆B细胞是长寿细胞，因此，特异性抗体应答在最后一次加强免疫之后6个月到一年都会存在。
本节介绍用佐剂乳化的抗原免疫动物获得多克隆抗血清的方法。
该法可用于免疫家兔，小鼠、大鼠或地鼠，也可用于更大的动物如绵羊、山羊或马。
二、材料（一）动物选择根据需要可选择适当品系的家兔，小鼠，大鼠或地鼠等动物进行免疫获得抗体。
动物的选择取决于所需的抗血清量以及特异性抗原的物种来源和免疫动物物种之间进化上的差异。
家兔常被选作免疫动物，因为兔与人、兔与小鼠之间的遗传学差异大，而人和小鼠来源的蛋白是最经常被研究的对象。
每次获取25ml血清的采血量，对兔本身没有明显的损伤。
（二）抗原制备优质抗血清很大程度上取决于抗原的质量、纯度和数量。
常用纯化的抗原或部分纯化的抗原免疫动物，所用抗原往往是蛋白质或肽。
一般而言，细菌或病毒蛋白如血凝素或细菌包膜蛋白有很强的免疫原性，而哺乳动物蛋白如多肽类激素或细胞膜受体则免疫原性较弱。
有时也会用到与适当的蛋白质载体、细胞或细胞与组织提取物相交联的半抗原（多糖、核酸、脂类和小分子化学物质等）以增强半抗原的免疫原性，通过化学方法将半抗原连接到已知的免疫原性强的载体蛋白上，常用的载体蛋白有匙孔戚血蓝素（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵清蛋白（OVA）等。
免疫学实验：多克隆抗体制备-免疫小鼠
分组情况
免疫程序
组别 时间
Day 0 皮下注射
Day 10 皮下注射
Day 17 腹腔注射
有佐剂组
无佐剂对照组 阴性对照组
40ugOVA 弗氏完全佐剂
40ugOVA 弗氏不完全佐剂
40ugOVA 弗氏不完全佐剂
40ugOVA 40ugOVA 40ugOVA
生理盐水 生理盐水 生理盐水
Day 24
取血
取血
取血
颈部皮下注射要点
❖ 拇指与食指捏起颈部皮肤 ❖ 水平进针，针头脱空感，缓慢注射，迅速拔出
腹腔注射要点
❖ 抓住颈部皮肤和鼠尾，将小鼠翻转，头部偏下 ❖ 45度进针，靠近腹部中线，❖ 戴手套操作 ❖ 注射器针头用后及时盖帽 ❖ 文字记录标记方法 ❖ 经常检查标记保存状况
JLU
JLU
多克隆抗体制备-免疫小鼠
实验材料
❖ 小鼠 每组3只 ❖ 注射器 每组3只 ❖ 乳胶手套 每人1付 ❖ 线手套 每组1付 ❖ 记号笔、手术剪刀 公用 ❖ 弗氏注射液 公用 200ug/ml OVA in 弗氏佐剂 ❖ 无佐剂注射液 公用
200ug/ml OVA in 生理盐水 ❖ 生理盐水（对照） 公用
多克隆抗体的制备过程及原理
多克隆抗体的制备过程及原理
多克隆抗体是一种由多个不同的B细胞克隆所产生的抗体，能够识别并结合多个抗原表位。
其制备过程主要包括以下几个步骤：
1. 免疫原的选择：选择目标抗原，可以是蛋白质、多肽、细胞表面蛋白等。
2. 免疫动物的选择：根据抗原的物种来源，选择合适的免疫动物，如小鼠、兔子、山羊等。
3. 免疫动物的免疫：将免疫原注射到免疫动物体内，激发免疫反应。
通常采用多次免疫，间隔一定时间进行。
4. 细胞融合：从免疫动物体内提取免疫细胞，通常采用脾细胞或骨髓细胞。
与骨髓或脾细胞进行融合，得到杂交瘤细胞。
5. 杂交瘤细胞筛选：采用筛选培养基，筛选出杂交瘤细胞，一般是通过对杂交瘤细胞进行限稀稀释培养，进行单克隆细胞的筛选。
6. 克隆抗体的生产：将单克隆细胞进行扩增，并进行细胞培养，使其产生大量的抗体。
多克隆抗体制备的原理是利用免疫动物的免疫系统产生多个克隆的抗体。
当免疫
原进入免疫动物体内时，会激发免疫细胞产生对应的免疫反应，形成多个不同的克隆细胞。
这些克隆细胞会产生具有不同的抗体结构的抗体分子。
通过细胞融合和杂交瘤筛选的步骤，可以筛选出产生目标抗原特异性抗体的单克隆细胞，并进行大规模生产。
这样就获得了能够结合多个抗原表位的多克隆抗体。
小鼠LIGHT胞外段基因原核表达载体的构建及其多克隆抗体的制备
小鼠LIGHT胞外段基因原核表达载体的构建及其多克隆抗体的制备【摘要】目的：pcr扩增小鼠light胞外段基因（lightecd），构建含lightecd的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，并免疫新西兰兔，制备多克隆抗体。
方法：提取小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞中的总mrna，rt-pcr技术扩增lightecd，克隆至原核表达质粒pgex-6p-2中，构建重组表达载体pgex-6p-2-lightecd。
重组质粒进行pcr和基因测序鉴定后，转化大肠杆菌xl-1 blue，iptg 诱导表达。
融合蛋白纯化后纯化后免疫新西兰兔，elisa 及western- blot 分析兔血清中抗lightecd抗体的效价和特异性。
结果：rt-pcr扩增得到525 bp lightecd目的片段；经pcr和测序鉴定，证明构建的重组质粒中插入的片段为lightecd基因，测序结果经blast分析，与genbank上登录序列完全一致；经iptg诱导，重组质粒表达一相对分子量（mr）约为45kd的目的蛋白条带。
elisa 检测免疫兔血清效价为1∶20 000。
结论：成功地克隆了小鼠light胞外段基因，并表达了相应可溶性蛋白，准备了高效价的兔抗lightecd多克隆抗体，为进一步研究其功能奠定了基础。
【关键词】light；原核表达；免疫原性；多克隆抗体light （lymphotoxin-like inducible protein that competes with glycoprotein d for herpesvirus entry on t cells）最早是mauri等[1]在对单纯疱疹病毒入侵活化t细胞的研究中发现的，是肿瘤坏死因子超家族的第14个成员，又名hvem-l （herpesvirusentry mdeiator-ligand）或tnfsf14，是一种非cd28依赖的协同刺激分子。
light是一种ⅱ型跨膜糖蛋白，多以三聚体形式表达于活化的t细胞、未成熟dc、单核细胞、脾细胞及粒细胞膜上，也可以分泌型形式存在[2]。
单克隆及多克隆抗体制备
单克隆抗体制备
七、抗体纯化
• 硫酸铵沉淀法：简易价廉、浓度高，但纯度不高 • 辛酸沉淀法：纯化IgG类抗体，价廉，但纯度不高 • DEAE柱层析法：起始抗体PH只高于抗体等电点，抗体与 DEAE结合，用离子强度逐渐增强的缓冲液洗脱。 • 蛋白A、蛋白G柱纯化抗体免疫亲和层析：从多克隆血清 中纯化特异性抗体方法
• 免疫亲和层析法：
（1）用抗原免疫亲和柱纯化：对多克隆血清，纯化特异性
抗体唯一方法 （2）用抗Ig免疫亲和柱纯化抗体：分离大鼠单克隆抗体
八、抗体的保存
• 血清、组织或培养上清、腹水保存：0.02%NaN3;分装保 存
• 纯化抗体保存：PH值调整，PBS或其他等渗溶液，浓度 不宜过低，如果不用于标记可在低浓度抗体中加1%BSA 以提高蛋白浓度，加NaN3;分装冻存。
抗体制备
多克隆抗体制备 一、免疫动物
• 动物选择：种类多。哺乳类或禽类。选择适龄、健壮的动
物
• 原则：需要血清量、抗原从何种种属动物分离获得，需要 单抗时，有多少抗原可使用。 • 常用种类：兔、小鼠、大鼠、豚鼠、中国仓鼠 • 商品用动物：猪、马、牛、羊 • 多抗制备常用兔（得到500ml血清！）
动物选择
• 小鼠：首次50-100ug/次；大鼠：100ug-1mg/次，兔0.51mg/次 • 加强免疫的剂量为首次剂量的1/5-2/5 • 高度特异性抗血清：策略为低剂量抗原短程免疫法 • 高效价的抗血清：策略为大剂量抗原长程免疫法。
三、佐剂的应用
• 颗粒性抗原或全细胞抗原不需要佐剂 • 可溶性抗原须用佐剂，以增强抗原的免疫原性或改变免疫 反应的类型，刺激机体产生较强的免疫应答 • 佐剂种类：弗氏（Freund’s）佐剂、脂质体佐剂、氢氧化 铝佐剂，SAF-1和RAS • IFA：羊毛脂1份，石蜡油5份，每毫升IFA中加入1-20mg 卡介苗即为CFA。
TBa多克隆抗体的制备及其重组蛋白免疫活性的鉴定
Abstract: Objective:TBa is the major allergen in the tartary buckwheat. In order to research the relationship between the structure and the func tion of TBa and to identify the special immunocompetence of recombinant protein. Methods: The natural TBa was extracted and purified from the
TBa 多克隆抗体的制备及其重组蛋白免疫活性的鉴定
王岚 , 景巍 , 王转花
*
( 山西大学 化学生物学与分子工程教育部重点实验室 , 山西 太原 030006) 摘要 : 目的 : TBa( tartary buckwheat allergen) 是苦荞麦中的主要过敏原。为了研 究 TBa 的结构 与功能关 系并鉴定其 重组蛋白 的 特异性免疫活性。 方法 : 采用之前从种子中分离纯化的 天然 TBa 作为抗原免疫小鼠 , 制备抗血清 , 建立了 类似竞争酶联免疫吸 附 检测 TBa 的分析方法。 结果 : 对重组 TBa 的 免疫活性鉴定表明 , 采用该方法制备的多克隆抗体能满足重组 T Ba 的免疫活性鉴定 , 这为下一步研究其免疫学功能奠定了基础。 关键词 :T Ba; 过敏原 ; 多克隆抗体 ; 类似竞争酶联免疫吸附反应
参考文献 : [ 1] Colditz, G A, Brewer T F, Berkley C S, et al . Eff icacy of BCG vaccine in the prevention of tuberculosis. Met a analysis of the published lit erature[ J] . JA MA, 1994, 271( 9) : 698- 702. [ 2] Anonymous. Global tuberculosis control [ C ] . World Health Organizat ion Report, 2001, WHO CDS TB 2001. 287. [ 3] Huygen K . On t he use of DNA vaccines for the prophylaxis of mycobacterial diseases[ J] . Infect Immun, 2003, 71( 4) : 1613- 1621. [ 4] Food and Drug Administration. Points to consider on plasmid DNA vaccines preventive inf ectious disease indications [ Z] . Published December 22, 1996, Docket no. 96N- 0400. [ 5] 朱中元 , 王海波 , 谢 勇 , 等 . 结核分支 杆菌 inhA 基因 突变的 测序研 究 [ J] . 中华结核和呼吸杂志 , 2001, 24( 1) : 48- 51. [ 6] 萨姆布鲁克 J, 拉塞尔 D W. 分子克隆实验指南 [ M ] . 黄培堂 , 等 . 译 . 3 版. 北京 : 科学出版社 , 2002: 23- 59. [ 7] Silva C L and Lowrie D B. A single mycobact erial prot ein ( hsp65) ex pressed by a transgenic antigen- present ing cell vaccinat es mice against tuber culosis[ J] . Immunol, 1994, 82( 2) : 244- 248. [ 8] Col er R N, Skeiky Y A, V edvick T, et al. Molecular cloning and immuno logical react ivit y of a novel low molecular mass ant igen of Mycobacterium tuber cul osis [ J] . J Immunol, 1998, 161( 5) : 2356- 2364.
多克隆抗体的名词解释
多克隆抗体的名词解释多克隆抗体（Polyclonal Antibodies）指的是由多个免疫细胞分泌的抗体所组成的混合群集。
它们的产生源于免疫系统对外来抗原的免疫应答过程。
多克隆抗体的形成包括多个B细胞克隆繁殖和分化，每个克隆细胞产生的抗体略有不同，因此呈现多样性。
多克隆抗体的制备可通过动物免疫或体外方法获得。
动物免疫法是最常用的制备多克隆抗体的方法之一。
在此方法中，动物（如小鼠、兔子等）被注射具有抗原性的物质，刺激免疫系统产生抗体。
随着时间的推移，免疫系统会生成多个B细胞克隆，每个克隆都会产生特定的抗体。
继而，从动物体内采集血清以获得多克隆抗体。
体外方法也能制备多克隆抗体，它通过将抗原添加到体外培养的免疫细胞中，例如淋巴细胞或骨髓细胞。
这些免疫细胞与抗原接触后，会分泌出一系列具有不同特异性的抗体。
多克隆抗体在科学研究和诊断应用中具有广泛的用途。
首先，多克隆抗体能够同时识别多个抗原表位，因为通过免疫原处理产生的抗体是由多个克隆细胞所分泌，因此对目标抗原具有多个抗体的覆盖，增加了检测的灵敏性和特异性。
此外，多克隆抗体还具有在不同实验条件下鲁棒的可重复性，使其成为许多实验室中常用的工具。
在疾病诊断中，多克隆抗体也发挥着重要的作用。
通过制备针对特定疾病标记物的多克隆抗体，可以进行准确、敏感的疾病检测。
例如，在癌症早期筛查中，通过使用针对特定癌细胞标志物的多克隆抗体，可以帮助识别早期癌症病例。
多克隆抗体还广泛应用于生物医药研究中，在药物研发、蛋白质识别和定量分析等领域发挥着重要角色。
然而，多克隆抗体也存在一些局限性。
由于多克隆抗体是由免疫细胞分泌的抗体混合物，其中可能存在非特异性抗体，这些抗体无法区分目标抗原。
此外，多克隆抗体的制备涉及动物实验，存在动物福利和伦理问题，因此在科研界推动开发替代方法以避免或减少动物免疫的使用。
总的来说，多克隆抗体是一类由多个克隆B细胞分泌的抗体所组成的抗体混合物。
多克隆抗体广泛应用于科学研究和诊断应用中，具有多样性和灵敏性优势，为疾病检测和药物研发提供了有力的工具。
多克隆抗体的制备流程及原理
多克隆抗体的制备流程及原理
多克隆抗体的制备流程及原理可以参考以下步骤：
1. 抗原免疫：使用目标抗原免疫动物，例如小鼠，在一定时间间隔内多次免疫。
抗原可以是纯化的蛋白质、多肽片段或者细胞/组织提取物。
2. 细胞融合：将免疫小鼠脾脏与骨髓中的浆细胞混合，然后使用聚乙二醇等方法促使细胞融合，获得杂交瘤细胞。
3. 杂交瘤筛选：将杂交瘤细胞悬浮液分别分装于多个培养皿中，含有杀死未融合细胞的培养基中，通过限制性稀释法或离子交换法，筛选出高产、单克隆抗体的杂交瘤细胞。
4. 单克隆抗体培养与提取：将筛选出的单克隆杂交瘤细胞进行扩增培养，获取大量的细胞。
然后通过细胞培养上清液、腹水或腹水灌洗法获得单克隆抗体。
多克隆抗体制备的原理如下：
多克隆抗体是指由多个不同的抗体产生细胞(即多克隆细胞)产生的一类抗体。
其制备的原理是通过免疫动物多次免疫，激发机体产生大量的抗原特异性抗体。
不同的抗原特异性抗体由不同的抗体产生细胞产生，并经过体内的嫁接与筛选，获
得了多个具有抗原特异性的抗体。
多克隆抗体具有较广泛的抗原特异性，可以识别目标抗原的不同位点，因此可以广泛应用于免疫学、分子生物学、生物医学等领域。
多克隆抗体的标准制备流程
多克隆抗体的标准制备流程包括以下步骤：
1.免疫原的选择：选择合适的免疫原，可以是蛋白质、多肽、细胞表面抗原等。
2.免疫动物的选择：选择适合的免疫动物，常见的包括小鼠、兔子等。
3.免疫动物的免疫：将免疫原注射到免疫动物体内，刺激其免疫系统产生特异性
抗体。
4.收集免疫动物的血清：在免疫动物免疫一段时间后，收集其血清，其中含有特
异性抗体。
5.抗体的纯化和鉴定：利用亲和层析、离子交换等方法对抗体进行纯化，并通过
蛋白质印迹、ELISA等方法对抗体进行鉴定。
6.抗体的保存：将纯化的抗体进行分装，并加入适量的防腐剂，放入-20℃的冰
箱中进行保存。
多克隆抗体的制备过程中需要注意以下几点：
1.免疫原的纯度和浓度要高，以保证产生的抗体特异性高、效价高。
2.免疫动物的种属差异会影响抗体的质量和效价，因此要选择与免疫原同种属的
动物作为免疫对象。
3.在免疫过程中要保证免疫原的质量和安全性，避免对动物造成不必要的伤害。
4.在纯化和鉴定抗体时，要选择合适的方法和试剂，以保证抗体的质量和特异性。
5.在保存抗体时要注意温度和湿度等环境因素，避免抗体失活或变质。
总之，多克隆抗体的制备是一个相对复杂的过程，需要严格按照标准流程操作，以确保抗体质量和安全性。
小鼠抗人Myosin Va多克隆抗体的制备和鉴定
［ 中图分类号］ Ｒ ９ ． １ ３ ２ １
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
［ 文献标识码 ］ Ｂ
１ ２ １ Ｐ Ｔ ８／ ｏ ａ Ｔ重 组 质 粒 的 构 建 ． ． Ｅ ２ ａ ＭｙＶ Ｃ
人 Ｍｙｓ ａ基 ｏｉ Ｖ ｎ
ｅＢｎ Ｍ一 ０ ２ ９ ２ 肌 球 蛋 白是把 贮 存 在 Ａ Ｐ中的 化学 能转 化 为 机 因全 长 从 Ｇ ｎ ａｋ得 到 ，基 因 序 列 号 为 Ｎ ０ ０ ５ ． 。 用 Ｔ
ＩＳ １０ Ｓ Ｎ ０７—８ ３ 胞 与 分 子 免 疫 学 杂 志 （ ｈｎＪＣ ｌＭｏ ｈ ｍ ｎ１２ ０ ２ （ ７ ８细 Ｃ ｉ ｅｌ ｌ ｎ ｕ ｏ） ０９， ５ ５
４５１
・
论著 ・
文章编 号 ： ０ ７—８ ３ （ ０ ９ ０ ０ ５ — ３ １０ ７ ８ ２ ０ ） ５— ４ １ ０
合酶 购 自 Ｔ Ｋ Ｒ ａ ａ ａ公 司 ；Ｔ Ｎ ４ Ｄ Ａ连 接 酶 、大 肠 杆 菌 菌 株 Ｄ ５ｔ克 隆宿 主 ）和转 染试 剂 Ｌｐｆ ｔ ｎ ２０ Ｈ ｃ（ ｉｏ ｃａ ｅ ００购 自 Ｉ． ｅ ｍｉ ｎ
ｖｒｇｎ公 司 ；Ｂ ２ Ｄ ３ 表 达 宿 主 ）和 原 核 表 达 载 体 ｉｏｅ ｔ Ｌ １（ Ｅ ）（
鼠 ， 备 抗 血 清 。 通 过 Ｅ ＩＡ和 免 疫 荧 光 法 鉴 定 血 清 特 异 抗 制 ＬＳ
Ｍｙｓ ａ的检测及 功 能研究 奠定 了基础 。 ｏｉ Ｖ ｎ １ 材料 和方 法
１１ 材料 ． 限制性 内切酶购 自 Ｎ Ｂ公 司 ； Ｔ ｑ和 Ｌ ａ Ｅ ｒａ Ａ Ｔ ｇ聚
两类 ： 统肌 球 蛋 白（ 球 蛋 白 Ⅱ） 非传 统 肌球 蛋 传 肌 与 白。Ｍｙｓ ｏｉ Ｖ属 于 非 传 统 肌 球 蛋 白 ，可 分 为 Ｍｙｓ ｎ ｏｉ ｎ
多克隆抗体的制备技术
多克隆抗体的制备技术
多克隆抗体的制备技术是一种利用多个B细胞克隆的方法，用于生产特定抗原的抗体。
具体步骤如下：
1. 抗原制备：首先，需要制备抗原。
抗原可以是蛋白质、病原体、多肽或其他分子，可以通过基因工程技术在大肠杆菌等表达系统中表达、纯化或合成。
2. 免疫小动物：将制备好的抗原注射到小动物体内（如小鼠、兔子或大鼠）作为免疫原。
这样做可以激发动物的免疫系统产生抗原特异性的抗体。
3. 收集抗体：收集免疫小动物产生的抗原特异性抗体。
一般情况下，可以通过静脉采血或收集腹水来获得抗体。
4. 抗体纯化：对采集到的抗体进行纯化，可以使用亲和层析或离子交换层析等技术进行精确的纯化。
5. 克隆：将纯化的抗体进行多次稀释，然后分别稀释至单个细胞级别。
接下来，将单个细胞分别种植在含有培养液的孔中，使其形成克隆。
6. 验证：对每个克隆进行酶联免疫吸附测定（ELISA）或其他检测方法验证抗体的特异性和亲和力。
7. 扩大培养：对验证合格的克隆进行扩大培养，使其产生大量的抗体。
通过以上步骤，可以制备出多个来自不同克隆的抗体，这些抗体可以与同一抗原结合，用于生物学研究、诊断和治疗等领域。
多克隆抗体制备及效价评定ppt课件
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
（二）可溶性抗原制备： 指蛋白质、多糖和脂类等。
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
1）细胞的破碎（物理法、化学法）
• 反复冻融法 • 超声破碎法 • 自溶法 • 酶处里法 • 表面活性剂处理法
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
• 2）提取与纯化： ①超速离心分离—是一种根据分离物质的
比重特点，通过差速或梯度密度离心， 将分子大小不同的抗原颗粒分开的方法， 只适宜少数大分子物质的分离。
为了规范事业单位聘用关系，建立和 完善适 应社会 主义市 场经济 体制的 事业单 位工作 人员聘 用制度 ，保障 用人单 位和职 工的合 法权益
目的要求
• 掌握多克隆抗体制备的基本原理。 • 掌握多克隆抗体制备的操作步骤。 • 掌握肥达反应的实验原理、操作流程和结果判
断。
• 熟悉ELISA的实验原理、操作流程和结果判断。 • 了解细菌抗原和病毒抗原免疫程序上的异同。 • 了解免疫动物的选择原则。
QuickAntibody 系列免疫佐剂使用说明
QuickAntibody系列免疫佐剂使用说明规格：1ml保存温度：2~8ºC产品描述QuickAntibody系列免疫佐剂包括四种具有自主知识产权、独特配方的新型免疫佐剂，分别用于制备小鼠单克隆和多克隆抗体以及兔子多克隆抗体，与常规使用的弗氏佐剂相比，具有免疫针次少、抗原用量低、抗体产生快、抗体滴度高、抗体亲合力高、不破坏抗原天然构象和使用方便等多方面优点。
重要提示1、QuickAntibody只需两针免疫，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，与弗氏佐剂相比可减少免疫针次。
2、QuickAntibody通过减少免疫针次和降低每针次抗原用量，从而可大大节省总抗原用量。
推荐使用的抗原用量为（1）免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5~50μg（通常为小鼠5~20μg，兔子20~50μg）；（2）免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次1~10μg（通常为小鼠1~5μg，兔子5~10μg）。
3、QuickAntibody抗体产生快，抗体滴度高，抗体亲合力高，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，标准免疫程序只需要在三周内进行两针免疫，通常在第五周即可获得ELISA滴度（Cutoff值为0.1000）高达1:10000~1:10000000的高亲合力抗体水平。
4、QuickAntibody不破坏抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克隆抗体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。
5、QuickAntibody是一类水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可用于免疫动物。
6、QuickAntibody使用肌肉免疫途径，与常规小鼠单克隆抗体制备过程中使用足垫免疫或脾内免疫相比，极大地方便了使用。
7、QuickAntibody的一个重要用途是可方便地用于制备小鼠多克隆抗体。
常规多克隆抗体制备多使用兔子，不但免疫针次多、抗原用量大和抗体产生慢，而且由于技术要求较高而往往需要委托专门单位制备。
多克隆抗体实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习多克隆抗体的制备方法；2. 掌握多克隆抗体的纯化、鉴定及效价检测技术；3. 熟悉多克隆抗体的应用。
二、实验原理多克隆抗体是由多个B细胞克隆产生的抗体，具有特异性强、亲和力高、产量高等特点。
多克隆抗体制备过程主要包括抗原免疫、抗体提取、纯化、鉴定及效价检测等步骤。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠（6周龄）；2. 抗原：目的蛋白；3. 试剂：免疫球蛋白G（IgG）亲和层析柱、蛋白纯化试剂盒、SDS-PAGE凝胶、Western Blot试剂盒、酶标仪、凝胶成像系统等；4. 仪器：离心机、PCR仪、电泳仪、Western Blot仪、酶标仪等。
四、实验方法1. 抗原免疫（1）取抗原溶液，加入等体积的福氏完全佐剂，混匀；（2）将混合液注射入小鼠腹腔，免疫剂量根据抗原量和小鼠体重确定；（3）免疫后第2周，重复注射抗原和福氏不完全佐剂，加强免疫；（4）免疫后第3周，采集小鼠血清，进行抗体效价检测。
2. 抗体提取（1）将小鼠血清与蛋白提取缓冲液（pH 7.4）按1:4比例混合；（2）4℃条件下，以15000 rpm离心30分钟，收集上清液；（3）上清液经0.22μm滤膜过滤，得到抗体溶液。
3. 抗体纯化（1）将抗体溶液加入IgG亲和层析柱；（2）用蛋白纯化试剂盒进行梯度洗脱，收集抗体峰；（3）将抗体峰浓缩至适当体积，得到纯化抗体。
4. 抗体鉴定（1）SDS-PAGE电泳：将纯化抗体样品与标准蛋白进行SDS-PAGE电泳，比较分子量；（2）Western Blot：将纯化抗体样品与目的蛋白进行Western Blot检测，观察抗体特异性。
5. 抗体效价检测（1）将抗原溶液与纯化抗体溶液按一定比例混合；（2）加入底物溶液，酶标仪检测吸光度值；（3）根据吸光度值，计算抗体效价。
五、实验结果1. 抗原免疫：小鼠在免疫后第3周，血清抗体效价达到最高值。
2. 抗体提取：纯化抗体溶液经SDS-PAGE电泳，分子量与目的蛋白一致。
多克隆抗体制备免疫小鼠
多克隆抗体制备免疫小鼠多克隆抗体制备免疫小鼠是一种常用的制备多克隆抗体的方法。
下面是具体的步骤：1. 选择抗原：首先需要确定所需要制备抗体的抗原。
抗原可以是蛋白质、多肽、多糖等。
2. 免疫小鼠：将所选抗原注射到小鼠体内，以诱导其产生特异性抗体。
通常，抗原会和佐剂（如完全弗氏佐剂）混合，以增强免疫响应。
3. 免疫程序：将抗原注射到小鼠体内，通常分为初次免疫和加强免疫两个阶段。
初次免疫后，会进行一定的间隔时间（通常是2-4周）再次注射抗原，以增强免疫效果。
4. 细胞融合：在小鼠免疫后，从其脾脏中采集免疫细胞（通常是脾细胞），与骨髓瘤细胞（如SP2/0或NS1等）进行细胞融合。
5. 筛选和培养：将融合细胞进行稀释后，接种到培养基中，以培养成杂交瘤细胞。
培养基中通常会添加相应的选择剂，以选择出杂交瘤细胞。
6. 克隆筛选：将培养出的杂交瘤细胞进行单克隆化，即分离成单个克隆细胞。
这可以通过稀释法或细胞限 dilution法来进行。
7. 抗体鉴定：对筛选出的单克隆细胞进行抗体鉴定，通常采用酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫组化技术来检测抗体的特异性和亲和力。
8. 抗体生产：经过抗体鉴定后，将选出的单克隆细胞培养扩大，并进行大规模的培养和抗体生产。
多克隆抗体制备免疫小鼠的主要优点是可以获得多种不同的抗体，具有较高的灵敏性和多样性。
然而，由于免疫小鼠需要一定的时间来产生抗体，需要一定的动物资源和成本支出，而且制备的抗体可能存在一定的批次变异。
因此，每个实验室需要根据自己的需求和实际情况来选择适合自己的抗体制备方法。
免疫抗体和多克隆抗体的制备和应用
免疫抗体和多克隆抗体的制备和应用免疫抗体和多克隆抗体是在生物识别、生物学研究、疾病诊断、治疗和预防等方面广泛应用的研究工具。
本文将介绍免疫抗体和多克隆抗体的制备方法和应用领域。
1. 免疫抗体的制备免疫抗体是由动物免疫系统产生的抗体，经过分离、纯化和浓缩制备而成。
主要包括单克隆抗体和多克隆抗体。
1.1 单克隆抗体的制备单克隆抗体是一种高度特异性、亲和力强的免疫抗体，适用于复杂蛋白质分子的特异性检测和定量分析。
其制备主要包括以下步骤：(1) 免疫原制备：选择纯化后的单个蛋白或多肽作为免疫原，经过多次免疫小鼠、大鼠或兔子等动物。
(2) 制备淋巴细胞：从免疫动物的脾脏或淋巴结中获得淋巴细胞。
(3) 制备骨髓瘤细胞：从骨髓瘤患者中筛选出与免疫细胞融合的骨髓瘤细胞。
(4) 实现细胞的杂交：以多核融合剂将淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合。
(5) 选择和筛选：细胞融合后，使用一种名为“限制性稀释”法的技术来选择和筛选产生单克隆抗体的杂交瘤。
(6) 扩增：将杂交瘤扩增到满足免疫抗体生产的数量。
(7) 收集：从生产的杂交瘤中收集单克隆抗体。
1.2 多克隆抗体的制备多克隆抗体是由多个不同B细胞分泌的免疫抗体组成，在体内能针对不同的抗原位点金标记物。
其制备主要包括以下步骤：(1) 免疫原制备：选择纯化后的单个蛋白或多肽作为免疫原，经过多次免疫小鼠、大鼠或兔子等动物。
(2) 收集血清：收集免疫动物的血清。
(3) 分离抗体：将血清分离抗体，具体过程包括酸性与碱性裂解、硫酸铵法沉淀、Ion交换层析、凝胶过滤等。
(4) 纯化和鉴定：将分离的抗体再纯化，使用SDS-PAGE和Western Blot等方法进行鉴定。
2. 多克隆抗体的应用多克隆抗体的适用性很广，可以应用于免疫诊断、治疗和治疗等多个领域。
2.1 免疫诊断多克隆抗体在医学上的应用，尤其是在临床诊断中，具有非常重要的价值。
例如，乳腺癌和结肠癌等疾病仅有免疫Cl17-1A单抗才能检测出其产生的抗原，同时多克隆抗体也广泛用于生化分析、流行病学调查等领域。
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多克隆抗体制备免疫小鼠
简介
多克隆抗体制备是一种常用的实验技术，用于获得特定蛋白质及其表位的抗体。
免疫小鼠是多克隆抗体制备的常见动物模型之一。
本文将介绍多克隆抗体制备免疫小鼠的一般流程和关键步骤。
流程
多克隆抗体制备免疫小鼠的流程主要包括以下几个步骤：
1.抗原制备：准备目标蛋白质作为免疫小鼠的抗原，
可以是纯化的蛋白质、重组蛋白质或合成的多肽。
2.免疫小鼠：将抗原与适当的佐剂混合，注射到小鼠
体内，观察免疫反应情况。
3.收集抗体：采集小鼠的血液样本，离心分离血清，
获得抗体。
4.抗体筛选：使用各种筛选方法（如酶联免疫吸附试
验、免疫组织化学染色等）筛选出特异性较好的抗体。
5.抗体纯化：通过亲和层析、离子交换层析等技术，
对抗体进行纯化，得到高纯度的抗体。
关键步骤
抗原制备
抗原制备是多克隆抗体制备的关键步骤之一。
抗原质量的好坏直接影响免疫小鼠及最终制备的抗体的质量。
以下是一些常见的抗原制备方法：
•纯化蛋白质：通过基于亲和层析、离子交换层析等技术，从含有目标蛋白质的来源中纯化目标蛋白质。
•重组蛋白质：利用基因工程技术在大肠杆菌或其他表达系统中表达目标蛋白质，然后通过亲和层析或其他纯化方法纯化目标蛋白质。
•合成多肽：合成目标蛋白质的特定片段或多肽，用于免疫小鼠。
适当的佐剂
适当的佐剂对于免疫小鼠产生良好的免疫响应非常重要。
佐剂的作用是增强抗原的免疫原性和稳定性，促进免疫细胞的
活化。
常用的佐剂包括完全佐剂（如完全弗氏佐剂）和不完全佐剂（如不完全弗氏佐剂）。
免疫小鼠免疫
将抗原与适当的佐剂混合后，通过皮下注射、腹腔注射等
方式将抗原注射到小鼠体内。
注射后，可以观察小鼠的免疫反应情况，如产生抗原特异性抗体。
血液采集和抗体收集
一段时间后，如一般在免疫小鼠体内产生可检测到的抗体，可以采用静脉采血的方式采集小鼠的血液。
血液离心后，就可以获得含有抗体的血清。
抗体筛选和纯化
获得含有抗体的血清后，可以使用各种筛选方法对抗体进
行筛选，如酶联免疫吸附试验（ELISA），免疫组织化学染色等。
筛选出特异性较好的抗体后，可以通过亲和层析、离子交换层析等技术对抗体进行纯化，得到高纯度的抗体。
总结
多克隆抗体制备免疫小鼠是一种常用的实验技术，用于获
得特定蛋白质及其表位的抗体。
流程主要包括抗原制备、适当的佐剂、免疫小鼠免疫、采集血液和抗体、筛选和纯化抗体等步骤。
合理设计和选择抗原、佐剂以及免疫方案是制备高质量多克隆抗体的关键。
通过该技术，科研人员可以获得特异性强、亲和力高的抗体，为后续的研究提供强有力的工具。