种子生活力的测定

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种子生活力的测定
一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法
【原理】
凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。

当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。

当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。

TTC还原反应如下：
TTC（无色）TTF（红色）
【仪器与用具】
培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。

【试剂】
TTC溶液的配制：取1gTTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。

药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。

【方法】
1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。

2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。

3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。

4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～
60min.
5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。

表32-1染色法测定种子生活力记载表
方法种子名称供试粒数有生活力种
子粒数
无生活力
种子粒数
有生活力种子
占供式粒数的%
【注意事项】
1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。

2.染色温度一般以25～35℃为宜。

3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。

4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。

5.不同作物种子生活力的测定，所需试剂浓度、浸泡时间、染色时间不同。

现将主要作物种子生活力测定所需条件列入表32-2。

表32-2TTC法测定主要作物种子生活力要点
作物种子准备TTC浓度(%)
在35℃下染色时间(h)
水稻去壳纵切0.12～3
高粱、玉米及麦类作物纵切0.10.5～1
棉花、荞麦、蓖麻剥去种皮 1.02～3
花生甜菜大麻向日葵剥去种皮0.13～4
大豆菜豆亚麻二叶草无须准备 1.03～4
二、红墨水（酸性大红Ｇ）染色法
【原理】
有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性，有选择吸收外界物质能力，某些染料如红墨水中的酸性大红Ｇ不能进入细胞内，胚部不染色。

而丧失活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收的能力，染料进入细胞内使胚部染色，所以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。

【仪器与用具】
与TTC法相同。

【试剂】
红墨水溶液的配制：取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）作为染色剂。

【方法】
1.先将待测种子用水浸泡3～4h，待充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸3～5min，作为死种子。

2.取浸好的新种子、陈种子和死种子各50粒，如为小麦和玉米，则用单面刀片沿胚部中线纵切成两半，其中一半用于测定。

3.将备好的种子分别放在培养皿内，加入红墨水溶液，以浸没种子为度。

4.染色10～20min后倾出溶液，用自来水反复冲洗种子，直到所染颜色不再洗出为止。

5.对比观察冲洗后的新种子、陈种子和死种子胚部着色情况。

凡胚部不着色或略带浅红色者，即具有生活力的种子，若胚部染成与胚乳相同的红色，则为死种子，把测定结果记入表32-1（同TTC法）。