叶绿素的提取分离和测定(精)
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实验四 叶绿素的提取、分离和含量测定
一、叶绿素的提取、分离
（一）原理 叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a 和b、胡萝卜素及叶黄素）。这些色素 均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用 酒精或丙酮等提取。并可根据它们在不 同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附 剂上的吸附能力不同，将它们彼此分离 开。
（二）仪器和药品
取上述提取液以80%丙酮作为空白对照，于 663及645nm下读取光密度值
来自百度文库
三、实验结果
计算结果
代入公式求出各叶绿素的含量（单位mg/L） 最后计算时需考虑稀释因子 *25*2/1000
叶绿素a含量（mg/g鲜重）=CA*5
=0.25CA
叶绿素b的含量（mg/g鲜重）=0.25CB
叶绿素总含量（mg/g鲜重）
解方程式得
(二）步骤
1、称取0.5g叶片，剪碎后置于玻璃匀浆 器中加纯丙酮5mL，研成匀浆，用80%丙 酮10mL洗匀浆器，用80%丙酮定容到25mL， 避光静置5min。用移液管吸取上面的绿 色清液1mL置于一大试管中，加入丙酮 4ml稀释，摇动试管，作测定用。
2、测量光密度值
=0.25CT
二、叶绿素a和b含量的测定
（一）原理 叶绿素a、b在长波方面的最大吸收峰 分别为为663nm和645nm。 同时在该波长时叶绿素a 、b比吸收系 数k为已知，根据Lambert—Beer定律列出 浓度C与光密度OD之间的关系式：
OD663=82.04Ca+9.27Cb OD645=16.75Ca+45.6Cb Ca、Cb为叶绿素a、b的浓度，单位mg/L Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ct=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663
研钵、吸管、小烧杯、试管、培养皿等 95%酒精、石油醚
碳酸钙
（三）步骤
1、用天平称取15g鲜叶，剪碎放入研钵 中，加少量的CaCO3粉末及95%酒精510mL研成糊状，再加95%酒精20mL，充 分混匀以提取叶片匀浆中的色素，5-10 分钟后，过滤入三角烧瓶中加塞待用。
2、取一张色层分析纸或定性滤纸代用， 剪成圆形，直径应略大于培养皿的直径； 将圆形滤纸平放在培养皿上，用滴管吸 取叶绿素提取液，滴在滤纸的中心位置， 稍干后，再重复操作几次；然后取另一 滴管吸取石油醚，慢慢地推动叶绿素提 取液，不久即可看到分离的各种色素的 同心圆环,由内到外依次为：叶绿素a为 蓝绿色、叶绿素b为黄绿色、叶黄素呈 鲜黄色、胡萝卜素为橙黄色。
一、叶绿素的提取、分离
（一）原理 叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a 和b、胡萝卜素及叶黄素）。这些色素 均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用 酒精或丙酮等提取。并可根据它们在不 同有机溶剂中的溶解度不同以及在吸附 剂上的吸附能力不同，将它们彼此分离 开。
（二）仪器和药品
取上述提取液以80%丙酮作为空白对照，于 663及645nm下读取光密度值
来自百度文库
三、实验结果
计算结果
代入公式求出各叶绿素的含量（单位mg/L） 最后计算时需考虑稀释因子 *25*2/1000
叶绿素a含量（mg/g鲜重）=CA*5
=0.25CA
叶绿素b的含量（mg/g鲜重）=0.25CB
叶绿素总含量（mg/g鲜重）
解方程式得
(二）步骤
1、称取0.5g叶片，剪碎后置于玻璃匀浆 器中加纯丙酮5mL，研成匀浆，用80%丙 酮10mL洗匀浆器，用80%丙酮定容到25mL， 避光静置5min。用移液管吸取上面的绿 色清液1mL置于一大试管中，加入丙酮 4ml稀释，摇动试管，作测定用。
2、测量光密度值
=0.25CT
二、叶绿素a和b含量的测定
（一）原理 叶绿素a、b在长波方面的最大吸收峰 分别为为663nm和645nm。 同时在该波长时叶绿素a 、b比吸收系 数k为已知，根据Lambert—Beer定律列出 浓度C与光密度OD之间的关系式：
OD663=82.04Ca+9.27Cb OD645=16.75Ca+45.6Cb Ca、Cb为叶绿素a、b的浓度，单位mg/L Ca=12.7OD663-2.69OD645 Cb=22.9OD645-4.68OD663 Ct=Ca+Cb=20.2D645+8.02D663
研钵、吸管、小烧杯、试管、培养皿等 95%酒精、石油醚
碳酸钙
（三）步骤
1、用天平称取15g鲜叶，剪碎放入研钵 中，加少量的CaCO3粉末及95%酒精510mL研成糊状，再加95%酒精20mL，充 分混匀以提取叶片匀浆中的色素，5-10 分钟后，过滤入三角烧瓶中加塞待用。
2、取一张色层分析纸或定性滤纸代用， 剪成圆形，直径应略大于培养皿的直径； 将圆形滤纸平放在培养皿上，用滴管吸 取叶绿素提取液，滴在滤纸的中心位置， 稍干后，再重复操作几次；然后取另一 滴管吸取石油醚，慢慢地推动叶绿素提 取液，不久即可看到分离的各种色素的 同心圆环,由内到外依次为：叶绿素a为 蓝绿色、叶绿素b为黄绿色、叶黄素呈 鲜黄色、胡萝卜素为橙黄色。