希波氏-离子色谱用SPE-C18柱使用方法
C18色谱柱使用指南
C18色谱柱使用指南1.样品准备在进行C18色谱柱分析之前，样品通常需要进行预处理。
对于有机溶剂溶解的样品，可以通过过滤来去除杂质颗粒。
对于水溶性样品，可以使用有机溶剂混合溶解，以提高样品在有机相中的溶解度。
此外，还可以使用离心机除去悬浮物和沉淀物。
2.工作条件选择C18色谱柱可以在不同的工作条件下使用，包括流动相组成、流速、柱温等。
在选择工作条件时，需要考虑目标化合物的极性、分离程度和保留时间等因素。
常见的流动相组成包括水和有机溶剂的混合物，比如水/甲醇和水/乙腈。
流速的选择需要权衡分离效果和分析时间，一般流速在0.5-2 mL/min之间。
柱温的控制可以改变样品的保留行为，从而影响分离效果。
3.柱平衡在进行实际分析前，C18色谱柱需要进行柱平衡。
柱平衡的目的是使色谱柱内部的填料达到稳定的状态，从而提高分离效果和重复性。
柱平衡可以通过流动相运行一段时间来实现，一般需要10-20柱体积的流动相通过柱床。
4.样品注射在C18色谱柱中，样品通常是通过进样器注入。
选择适当的进样量是保证分析准确性和可重复性的关键。
进样量过大会导致色谱峰扩展和分离效果下降，进样量过小则可能导致分析信号过低。
通常情况下，进样量在1-10μL之间。
5.分析在进行C18色谱柱分析时，需要关注色谱峰的对称性、解析度和保留时间等指标。
色谱峰的对称性可以通过调整流速、压力、温度等因素来改善。
解析度是衡量两个相邻峰之间的分离程度，可以通过调整流动相组成和流速等来增加。
保留时间是指化合物在色谱柱中停留的时间，可以通过调整流动相组成和流速来改变。
总结：C18色谱柱是常用的反相色谱柱，在样品准备、工作条件选择、柱平衡、样品注射和分析等方面有一些注意事项。
正确的样品准备、选择合适的工作条件、进行柱平衡、控制进样量和关注分析指标可以提高C18色谱柱的分析效果和重复性。
在使用C18色谱柱进行实验时，需要严格按照相关的操作规范进行操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。
c18反相柱色谱过柱
C18反相柱色谱过柱技术是一种常用的分离方法，广泛应用于化学、制药、环境等领域。
本文将详细介绍C18反相柱色谱过柱的原理、操作步骤以及应用案例。
一、C18反相柱色谱过柱原理C18反相柱是一种基于亲水性原理的柱层材料，其表面被涂覆上疏水性的C18链状碳链。
它能够通过样品中溶质与固定相之间的亲疏水作用力来进行分离。
当样品进入柱中时，极性较小的溶质会迅速与柱内的疏水相互作用，而极性较大的溶质则会较慢地与疏水相互作用。
通过控制移动相的性质和流速，可以实现对不同化合物的选择性分离。
二、C18反相柱色谱过柱操作步骤1. 准备工作：检查仪器设备是否正常运行，确保柱子处于良好状态。
准备好所需的溶剂和移动相。
2. 样品制备：将待测样品溶解于适当的溶剂中，并进行必要的预处理，如过滤、离心等。
3. 柱子装填：将C18反相柱装入色谱柱架中，连接好进样系统和检测器。
4. 初始条件设置：设置移动相组成和流速，一般采用梯度洗脱方法，即开始时使用较弱的极性溶剂，逐渐改变为较强的极性溶剂。
5. 进样：将样品通过进样系统注入柱中，注意保持稳定的进样流速。
6. 色谱分离：开始进行色谱分离，根据需求调整流速和梯度条件，使不同组分得到有效分离。
7. 数据采集和解析：利用检测器对柱出口的化合物进行检测和记录，获取相应的色谱图。
8. 结果分析：根据色谱图进行结果分析，确定目标化合物的峰位置、峰高、峰面积等参数。
三、C18反相柱色谱过柱应用案例1. 药物分析：C18反相柱色谱过柱广泛应用于药物分析领域，可以用于分离和鉴定药物中的杂质、代谢产物等。
通过优化移动相的组成和流速，可以实现对复杂药物样品的高效分离。
2. 环境监测：C18反相柱色谱过柱也可用于环境样品中有机污染物的分析。
比如水样中的农药残留、土壤中的有机污染物等。
通过该技术，可以对这些污染物进行快速、准确的分离和定量。
3. 食品安全：C18反相柱色谱过柱可应用于食品中有害物质的检测，如农药残留、食品添加剂等。
C18色谱柱
在用的最多的就是反相C18色谱柱,在平时的工作中,个人积累了一些小经验,很管用的，在此与大家分享1、新柱的处理：我们每次新买的柱子虽然是经厂家测试过并密封好的，可是有的柱子到达手中时已经过很长的时间了，因此，我们每拿到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。
首先，是配制好65%的乙腈/水，再把色谱柱正确的连接在色谱仪上，出口放空（注意：出口端切不可连上检测器，以免污染了检测器），以低流速0.1ml/min~0.5ml/min（如果是LC/MC 柱子，则应以0.3ml/min进行）均可，不可以高流速进行，等看见柱子出口有液体流出后，过20分钟后再接上检测器，以循序渐进的方法将流速调至1.0ml/min（如果是LC/MC柱子则应以0.3ml/min进行），继续冲洗2~8小时。
2、新柱的使用：首先我们确认所分析样品流动相的PH是不是在色谱柱PH的耐受范围之内，以免损伤柱子!如果，确认在柱子的使用范围之内，就用做样品的流动相平衡柱子(如果流动相中含用缓冲盐溶液，在平衡柱子之前务必要先用5%甲醇或5%乙腈去过渡30分钟以上。
再用带盐的流动相去平衡色谱柱。
)当色谱柱平衡了足够时间，基线非常平稳的时候，方可进样分析。
不管是分析什么样的产品，由于各种各样的因素，样品中总有杂质。
因此，最好在色谱柱前端加上保护柱。
以增加色谱柱的使用寿命！3、色谱柱清洗：①如果样品分析中只用到一般的乙腈、甲醇和水的流动相，在做完样品之后可直接用55%~65%乙腈/水或者用55%~65%甲醇/水冲洗色谱柱40~80分钟，然后以纯甲醇或乙腈冲洗30分钟，即可保存；②如果样品分中流动相里含用缓冲液或酸或离子对试剂的流动相，在做完样品之后的清洗必须按照如下步骤进行清洗柱子:先用5%的甲醇/水或5%的乙腈/水，以1ml/min,冲洗1.5小时以上(如果色谱柱更长，则还需要增加适当时间);然后用55%甲醇/~水65%/水冲洗色谱柱30~60分钟.最后用甲醇或乙腈以1ml/min冲洗30分钟。
C18色谱柱通用使用方法
C18色谱柱通用使用方法1.柱的准备：a.检查柱的完整性和封闭性。
确保柱的端口和连接器没有损坏，没有杂质进入柱内。
b.检查柱的包装是否完好。
确保柱没有受到损坏或污染。
2.柱的预处理：a.将新的C18色谱柱进行预处理。
通常情况下，柱需要进行反相条件下的"洗涤"，以去除柱内的杂质和残留物。
b.使用适当的洗涤溶液，如乙腈/水或甲醇/水混合溶液，进行柱的洗涤。
通常需要使用高浓度有机溶剂，如100%乙腈或甲醇，进行洗涤。
c. 洗涤柱时，使用较高的流速，通常为1-2 mL/min，以加快杂质的去除。
3.样品的准备：a.样品前处理。
根据需要，对样品进行适当的前处理，如过滤、离心、稀释等。
b.样品溶剂的选择。
根据样品的性质选择合适的溶剂，通常为乙腈/水或甲醇/水混合溶剂。
c.样品的溶解。
将样品溶解于适当的溶剂中，并通过过滤器进行过滤，以去除悬浮物和固体杂质。
4.色谱条件的设置：a.流动相的选择。
根据需要选择合适的流动相组成，通常为乙腈/水或甲醇/水混合溶剂。
b.pH值的调节。
根据需要调节流动相的pH值，以适应目标化合物的分离。
c. 流速的设置。
根据样品的复杂性和分离的要求，设置合适的流速。
通常情况下，流速为0.5-2 mL/min。
d.分析温度的控制。
根据样品的性质和分析要求，设置合适的温度。
通常为室温或稍高温度。
5.色谱分离：a.样品注射。
将样品通过自动进样器或手动注射器注入到色谱柱中。
b.等待分离。
在流动相的作用下，样品组分将按照其亲水性和疏水性被分离。
根据需要，调节流动相的组成和温度，以实现最佳的分离效果。
c.收集分离的组分。
根据需要，收集分离出的目标组分，可以通过分级洗脱或梯度洗脱的方式进行。
6.柱的保养：a.柱的再生。
根据需要，可以使用适当的再生溶液（如有机溶剂）对柱进行再生，以去除残留的样品和杂质。
b.柱的保存。
在不使用柱时，将其存放在干燥、避光和低温的环境中，以保持柱的稳定性和使用寿命。
c18液相色谱柱的活化步骤
c18液相色谱柱的活化步骤
C18液相色谱柱的活化步骤如下：
1.在开始使用柱子之前，要用适当比例的有机溶剂（如甲醇或乙腈）洗涤
柱子。
例如，用3～5倍柱子体积的甲醇洗涤柱子。
2.将纯水通过柱子流通20～30min。
这一步可以去除残留的有机化合物和
杂质。
注意保持柱子湿润。
3.通过柱子流通一定比例的有机溶剂与水混合物。
例如，用70%乙腈+30%
水的混合物通过柱子。
这样可以逐渐增加有机相的浓度，有助于保护柱
子不被溶剂冲击。
4.接着，可以使用一定比例的有机溶剂溶解样品，并以柱洗涤液的方式通
过柱子。
可以考虑用一些柱洗涤液去除样品残留。
5.最后，洗涤柱子以消除任何残留的溶液，或将柱子存放在一定的缓冲液/
有机溶剂中，直到再次使用。
以上步骤仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。
C18色谱柱通用使用方法
C18/C8色谱柱使用方法
一、新柱活化：新的色谱柱活化：采用100%甲醇1ml/min冲洗60min，
再换成流动相进行平衡；如果流动相中含有缓冲盐，在换成流动相前，请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡；
二、色谱柱保存溶液与评价报告一致。
三、在使用过程中如果流动相没有磷酸缓冲盐的存在，新柱子在使用
之前需用100%的甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速平衡30min 左右，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用100%的纯甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速冲洗30min左右，最后用100%的纯甲醇（色谱纯）保存。
四、在使用过程中如果流动相有磷酸缓冲盐的存在，新柱在使用之前
需用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min 左右，将新柱高浓度甲醇溶液完全置换掉，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右，将色谱柱中缓冲盐溶液完全置换掉，最后用100%的纯甲醇清洗色谱柱30min，最后用纯甲醇保存色谱柱。
C18柱使用指南(1)
C18柱使用指南
1、新柱在使用前需用纯有机试剂（如甲醇、乙腈）低流速冲洗，冲洗体积以20倍柱体积
为宜，以便固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到巅峰状态；
2、使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱，尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中
的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积；
3、长期保存前要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗3-4小时以上，最后保存在纯有机试剂或高
比例的有机试剂溶液（如90%甲醇水）中；
4、日常保存溶剂（即第二天需继续使用）尽量与3中相同；
5、由于C18柱（极性改性处理的除外）的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用
高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响，Diamonsil（2）由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%；
6、色谱柱压力升高、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部
分柱效；
7、色谱柱压力骤升：通常由盐析出或筛板堵塞引起，若是盐析出，用10%甲醇水低流速冲
洗至压力恢复即可；若判断并非盐析出，以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱（将色谱柱反接，不接检测器），若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效，需寻找其他原因。
色谱柱再生程序：
按照下列次序冲洗色谱柱，冲洗体积均为20倍柱体积：
10%甲醇水→甲醇→异丙醇（或氯仿）→甲醇→10%甲醇水
（步骤3选用异丙醇时，由于异丙醇粘度较大，需适当降低流速，建议流速设为0.2-0.3ml/min）
体积计算表：
迪马应用实验室。
C18色谱柱的使用
C18色谱柱的使用C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱，广泛应用于化学分析、生物分析、药物研发等领域。
它具有良好的选择性和分离效果，对于疏水性化合物的分析具有很高的灵敏度和分辨率。
本文将详细介绍C18色谱柱的使用方法及其在不同领域的应用。
一、C18色谱柱的使用方法1.样品制备：将待分析的样品溶解在适当的有机溶剂中，通常是甲醇、乙腈等。
确保样品的浓度适当，以避免过高的浓度造成柱阻塞或过低的浓度造成分离不彻底。
2.色谱柱的准备：将C18色谱柱安装在色谱仪上，并根据柱子的要求进行预处理。
通常情况下，使用乙腈/水混合溶液进行洗脱，以去除柱子中的杂质和残留的有机溶剂。
3.流动相的选择：根据待分析化合物的性质选择合适的流动相。
C18色谱柱通常使用有机溶剂和水的混合物作为流动相，其中有机溶剂的比例越高，柱子的亲水性越低，适用于疏水性化合物的分离。
常用的有机溶剂包括甲醇、乙腈、异丙醇等。
4.色谱条件的优化：根据待分析化合物的性质和目标分离效果，优化色谱条件。
可以尝试不同的流速、温度、洗脱梯度等参数，以获得最佳的分离效果。
5.注射样品：将样品注射进色谱柱中，注意控制注射量，以避免样品过多造成柱阻塞或过少造成分离不完全。
通常情况下，使用自动进样器进行样品注射，以提高分析的准确性和重复性。
6.数据分析：通过检测器检测柱出口的化合物，得到色谱图。
根据峰的形状、相对保留时间等参数，对化合物进行定性和定量分析。
二、C18色谱柱的应用领域1.化学分析：C18色谱柱广泛应用于有机化学、环境分析、食品安全等领域的化学分析中。
通过C18色谱柱的分离效果，可以对复杂的混合物进行分离和鉴定，提高分析的准确性和灵敏度。
2.生物分析：C18色谱柱在生物分析中的应用也非常广泛。
例如，可以用于蛋白质和肽段的分离和纯化，用于核酸的分离和测序，用于药物代谢产物的分离和鉴定等。
C18色谱柱的选择性和分离效果能够满足对于生物分子的高分辨率分析需求。
3.药物研发：在药物研发中，C18色谱柱常用于药物的分离和纯化。
C18色谱柱的使用
• 样品的前处理
a.最好使用流动相溶解样品 b.使源自针头过滤器（0.45um滤膜）出去样品的可见异物
• 流动相配制
a.流动相对样品具有一定的溶解能力，并且保证样品不会在色谱柱内析出或长时间留在色 谱柱内 b.流动相不与样品发生反应 c.流动相粘度尽量小，使样品得到高效分离的同时降低柱压，延长色谱柱寿命 d.流动相沸点不能太低，避免有气泡产生，影响实验进行 e.流动相要保证现配现用，不能储存太久，避免流动相生成杂质微生物影响检测 f.流动相使用前先脱气
使用、维护
• pH适用范围
反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料，使用时 一定要注意流动相的PH范围。一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2 时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降 解。pH过高或过低还可能会损害密封圈和柱塞杆以及色谱柱更 严重的是当PH大于9.5 时会破坏流通池的石英玻璃如果发现上述情况，色谱柱入口会发生塌陷。
注意事项
• 新色谱柱使用： a.先用10-20倍柱体积的色谱级甲醇或乙腈由低流 速缓慢提高至正常流速冲洗，随后换至10%甲醇 低流速缓慢提高至正常流速冲洗 b.分清色谱柱方向 c.尽量在色谱柱前段加保护柱，并定期清洗保护柱 • 色谱柱冲洗 使用完毕先用10%甲醇/水冲洗，如果长时间不用 再用纯甲醇冲洗、保护（一般情况下，10%甲醇/ 水低流速冲洗过夜）
尽量在色谱柱前段加保护柱并定期清洗保护柱色谱柱冲洗使用完毕先用10甲醇水冲洗如果长时间不用再用纯甲醇冲洗保护一般情况下10甲醇水低流速冲洗过夜再生用相当于20倍体积的溶剂按顺序冲洗柱子尽可能按照色谱柱箭头方向冲洗尽量不反冲
C18色谱柱的使用
定义、区分
C18色谱柱使用指南
C18色谱柱使用指南一、准备工作1.选择适当的C18色谱柱，通常根据样品性质、分子量和分离效果选择合适的柱型和尺寸。
2.检查色谱系统，保证其正常运行，包括检查泵、检测器、进样器、流量计等设备是否正常工作。
3.根据样品的性质选择合适的溶剂和添加剂，准备好色谱用的溶剂和溶液。
二、样品处理1.样品的准备应尽量避免杂质的干扰，可以进行适当的前处理，如蛋白质沉淀、萃取等。
2.选择适当的溶剂溶解样品，避免过高浓度或过低浓度的样品，以避免柱堵塞或分离效果不佳。
三、操作步骤1.将C18色谱柱连接到色谱系统中，并用适当的溶剂进行洗脱，以去除杂质。
2.进行进样前的平衡，使用纯溶剂进行连续冲洗，直到检测器基线稳定。
3.进样器设定合适的进样量，确保样品进入柱后分离效果良好。
一般情况下，进样量不超过柱容量的10%。
4.选择合适的溶剂组成和梯度条件，进行分离。
可根据样品性质和需求进行优化。
5.在柱温和流速稳定的条件下进行分离，记录相应的信号。
6.柱洗脱后，用适当的溶剂进行冲洗，以保护色谱柱。
四、优化条件1.优化柱温：柱温对分离效果有重要影响，一般来说，提高柱温可以缩短分离时间，但也可能导致分离不彻底。
2.优化流速：流速过低可能导致峰形变宽，流速过高可能导致分离效果不佳，因此要选择合适的流速条件。
3.优化溶剂和梯度条件：针对不同的样品性质，通过调整溶剂和梯度条件，进行分离优化，以获得最佳的分离效果。
五、注意事项1.避免样品浓度过高，以免造成柱堵塞或分离效果不佳。
2.定期检查色谱系统的运行状况，及时更换或维修损坏的设备。
3.注意柱的保养，避免使用有害的溶剂或缓冲液，以免对柱产生损害。
4.储存柱时，应保持柱干燥和避光，以避免柱的老化和降解。
总结：C18色谱柱是一种常用的分析工具，使用C18色谱柱进行分离时，需要做好准备工作，合理处理样品，按照操作步骤进行操作，并根据需要优化条件。
使用C18色谱柱时，需要注意一些事项，以确保色谱柱的正常运行和延长其寿命。
C18色谱柱通用使用方法
C18/C8色谱柱使用方法
一、新柱活化：新的色谱柱活化：采用100%甲醇1ml/min冲洗60min，
再换成流动相进行平衡；如果流动相中含有缓冲盐，在换成流动相前，请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡；
二、色谱柱保存溶液与评价报告一致。
三、在使用过程中如果流动相没有磷酸缓冲盐的存在，新柱子在使用
之前需用100%的甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速平衡30min 左右，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用100%的纯甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速冲洗30min左右，最后用100%的纯甲醇（色谱纯）保存。
四、在使用过程中如果流动相有磷酸缓冲盐的存在，新柱在使用之前
需用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min 左右，将新柱高浓度甲醇溶液完全置换掉，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右，将色谱柱中缓冲盐溶液完全置换掉，最后用100%的纯甲醇清洗色谱柱30min，最后用纯甲醇保存色谱柱。
C18色谱柱使用指南
C18色谱柱使用指南1.前处理：在使用C18色谱柱之前，需要对柱进行适当的前处理，以去除可能存在的杂质和污染物，保证柱的稳定性和分离效果。
常用的前处理方法包括：-水洗：用纯水反复洗涤柱，直到洗涤液的pH值稳定在中性范围内。
-酒精洗涤：用纯乙醇或甲醇溶液洗涤柱，去除柱内的有机污染物。
-pH调节：根据需要，可以使用酸碱溶液调节柱内的pH值。
-热水洗涤：将柱放入热水中，加热洗涤一段时间，以去除柱内的有机物。
2.样品准备：在进行色谱分析之前，需要对样品进行适当的准备，以保证分析结果的准确性和可重复性。
常用的样品准备方法包括：-溶解样品：将样品溶解在适当的溶剂中，以便于进样和溶解度的提高。
-过滤：使用0.22μm的微孔滤膜过滤样品，去除颗粒物和杂质。
-浓缩：对于含有低浓度目标物的样品，可以使用浓缩技术进行提纯和浓缩。
-衍生化：对于不易分离或检测的化合物，可以使用衍生化技术进行改性，提高其分离性和检测灵敏度。
3.柱条件的选择和优化：选择合适的柱条件是保证色谱分离效果和分析结果准确的关键。
在选择C18色谱柱时，需要考虑以下因素：- 柱尺寸：根据样品量和分离需求选择合适的柱尺寸，常见的尺寸有4.6mm×250mm和4.6mm×150mm。
-颗粒大小：根据需要的分离效果选择合适的颗粒大小，常见的颗粒大小有3μm和5μm。
-流动相选择：根据样品的性质和分离要求选择合适的流动相组成和pH值。
-流速：根据分离效果和分析时间进行优化，一般情况下，流速较低可以提高分离效果，但也会增加分析时间。
4.常见问题和解决方法：在使用C18色谱柱的过程中，可能会遇到一些常见的问题，如峰形畸变、峰分离不良、背景噪声高等。
-峰形畸变：可能是由于流速过高或柱温度不稳定造成的，可以尝试降低流速或优化柱温度。
-峰分离不良：可能是由于流动相组成不合适或样品准备不当造成的，可以尝试调整流动相组成或改进样品准备方法。
-背景噪声高：可能是由于柱的老化或样品中存在杂质造成的，可以更换新的柱或改进样品准备方法。
C18色谱柱使用指南
C18色谱柱使用指南1.准备工作：在使用C18色谱柱之前，首先需要对柱进行适当的预处理。
先用纯溶剂（如甲醇或乙腈）进行均相柱平衡，然后再用适当的缓冲液进行反相柱平衡，可提高色谱分离效果。
2.样品处理：对于不同的样品，需要进行不同的预处理。
对于蛋白质或多肽等样品，可能需要进行脱盐、浓缩或去除杂质等步骤。
对于小分子有机物或天然产物等样品，可能需要进行提取、纯化或浓缩等步骤。
3.设置参数：根据实验要求，设置好色谱仪的参数，包括流速、波长和检测器类型等。
这些参数可以根据实验的需要进行调整，以获得最佳的分离效果和检测灵敏度。
4.进样：将经过预处理的样品注入色谱柱中。
可以使用自动进样器或手动进样器进行进样，注意保持进样量的一致性，避免浓度过高或过低对分离效果的影响。
5.优化分离条件：根据实验需要，逐步调整流速、缓冲液pH值、缓冲液浓度和梯度等参数，以获得最佳的分离效果。
在进行调整时，可以根据实验结果进行评估，通过增加或减少流速或调整梯度的斜率等方法来提高分离效果。
6.监测和记录结果：在整个实验过程中，需要及时监测和记录分离结果。
可以通过使用UV检测器、荧光检测器或质谱仪等设备进行监测，并将数据记录下来以备后续分析。
7.色谱柱保养：使用C18色谱柱后，需要进行适当的保养和维护，以延长色谱柱的使用寿命。
在每次使用后，需要进行均相柱平衡和反相柱平衡，以去除样品残留和保持色谱柱的稳定性。
8.解决问题：在实验中，可能会遇到一些问题，如分离不完整、峰形不对称、峰形畸变、背景噪音等。
这时，需要进行一些排查，如检查样品预处理是否合适、柱平衡是否充分、柱是否老化等。
可以根据问题的具体情况，调整柱温、流速、柱平衡时间等参数，以解决问题。
总之，C18色谱柱的使用需要注意一系列的步骤和条件，以获得最佳的分离效果和分析结果。
通过合理设置参数、优化分离条件和及时监测结果，可以更好地应用C18色谱柱进行样品的分离和分析。
同时，在使用过程中要保持良好的柱保养和解决问题的能力，以提高实验的成功率和效率。
C18色谱柱的使用
C18色谱柱的使用一、C18色谱柱的基本原理C18色谱柱是以正己烷或甲醇为流动相，以二甲基甲酰胺或醋酸为有机溶剂的反相色谱柱。
C18色谱柱具有亲水性较强的C18基团，能够吸附有机化合物，使其在固定相上进行分离。
在C18基团上减少了偶极作用和静电作用，因此能够对一些极性较强的化合物进行分离。
二、C18色谱柱的使用方法1.流动相的准备：C18色谱柱通常使用正己烷和甲醇作为流动相。
正己烷可以增加分离物与固定相的相互作用力，甲醇则有助于溶解非极性溶剂。
根据分析需要，可以调整正己烷和甲醇的比例。
2.样品的准备：样品的溶解度和纯度对分离效果有很大影响，因此在分析前需要充分溶解样品，并通过滤器除去杂质。
3.色谱柱的平衡：将使用的C18色谱柱连接到色谱仪上，并使其平衡。
在首次使用柱子或者柱子长时间没有使用时，需要进行平衡操作来使柱子恢复其初始性能。
4. 样品的进样：将样品注入到色谱柱中，流量通常为0.1-1.0mL/min，并使用UV检测器或质谱仪进行检测。
5.扫描波长的选择：根据分析物的特征，选择合适的扫描波长。
通常情况下，可先进行全波长扫描来确定样品的吸收峰。
6.数据处理与分析：根据检测到的样品峰进行数据处理，并进行峰面积计算和峰定量分析。
三、C18色谱柱的优缺点1.分离效果好：C18色谱柱对大多数有机化合物都具有很好的分离效果，可以分离极性和非极性溶剂，适用于广泛的分析范围。
2.稳定性高：C18色谱柱具有较高的化学稳定性和物理稳定性，可以在较高的温度和较高的流速下工作，并且具有较长的使用寿命。
3.选择性强：C18色谱柱的选择性较强，可以通过调整使用的流动相来改变分离效果，并对许多不同类型的化合物进行分离。
1.分离速度慢：C18色谱柱在较高流速下容易出现峰形变宽或峰分裂的情况，因此分离速度相对较慢。
2.分离性能受样品溶解度和纯度的影响：样品的溶解度和纯度对C18色谱柱的分离效果有重要影响，溶解度不高或杂质较多的样品可能会影响分离性能。
C18色谱柱使用方法
C18色谱柱使用方法一、准备工作1.检查色谱柱的外观，确保没有破损或污染。
2. 根据实验需求选择适当的色谱柱规格，一般情况下使用内径4.6mm的色谱柱。
3.准备好色谱柱所需的溶剂和样品，并通过滤器将溶剂过滤。
二、连接和平衡色谱柱1.将色谱柱连接到色谱系统中，并根据仪器的要求进行调节。
确保色谱柱的连接稳固，无泄漏。
2. 打开色谱系统的背压调节阀，逐渐加压至平衡背压。
一般情况下，平衡背压为100-200 bar。
3.对于新的色谱柱，首次使用时需要进行初次平衡。
这可以通过注射纯溶剂并保持一段时间进行实现。
注射溶剂的体积一般为色谱柱体积的2-5倍。
三、样品注射和分离条件设置1.根据实验需求调节进样器的体积。
一般情况下，进样体积为10-20μL。
对于高浓度样品，进样体积可以适当减小，对于低浓度样品则可以适当增加。
2.根据样品的特性选择合适的流动相组成。
对于一般的有机物分析，可以选择的流动相是甲醇和水的混合物。
根据样品的极性，可以调节甲醇含量。
3. 设置流速。
一般情况下，流速为0.8-1.5 mL/min。
流速过高会影响分离效果，流速过低则分析时间过长。
四、优化分离条件1.如果初始分离效果不理想，可以尝试调整流动相的组成。
可以尝试不同比例的有机溶剂和水，或添加缓冲剂来改善分离效果。
2.调节流速，适当降低流速可以改善分离效果。
3.调节柱温，提高柱温可以加速分离，但过高的柱温可能导致柱效降低。
五、分离结束和保养1.当要分离的组分通过柱时，停止进样，并继续使用纯溶剂进行洗脱，以保证所有样品都被顺利洗脱。
2.分离结束后，关闭背压调节阀，将色谱柱与系统断开。
3.按照厂家的要求进行色谱柱的保养。
一般情况下，可以用少量的纯溶剂进行保养，然后用乙腈或甲醇进行封存。
总结：以上就是C18色谱柱的使用方法。
在使用C18色谱柱时，需要进行适当的准备工作，在正式分离前要进行柱的连接和平衡。
根据样品的特性和分离需求，设置合适的样品注射和分离条件。
固相萃取小柱的常见问题及C18小柱操作步骤
SPE常见问题解答SPE常见问题解答固相萃取（Solid Phase Extraction SPE ）是一种用途广泛而且越来越受欢迎的样品前处理技术。
大多数用来处理液体样品。
萃取、浓缩和净化其中的半挥发性和不挥发性化合物；也可用于固体样品，但必须先把固体样品处理成液体。
目前国内主要应用于食品安全领域，如各类抗生素、抗菌药的在各类食品种的残留分析；农产品中农药残留分析；各类食品中合法、非法添加剂分析等。
在药物研究领域，广泛应用于药物药代、药动分析和中药分析。
在环保领域，应用于环境中多环芳烃（PAHs ） 、多氯联苯（PCBs ）、各类农药分析；饮用水、地下水和污水的有机物质分析。
根据应用原理可分为：反相萃取柱、正相萃取柱、离子交换柱、吸附柱四种；近年来，新开发的混合模式萃取小柱，由于其使用更方便，专属性更强，应用越来越广泛。
一、反相萃取柱反相基本方法反相基本方法Strata™C18-E, C18-U, C18-T•强疏水性选择性•适用于从水性样本和生物样本中保留大多数有机化合物 •增强碱性物质的保留*Strata™ C18-E 是疏水性最强的硅胶基质端基封尾键合相；Strata™ C18-U 是非封尾疏水性键合相，不推荐用于碱性化合物；Strata™ C18-T 是大孔径端基封尾键合相。
Strata™ C8•疏水选择性稍低于C18 •适用于中等极性化合物•提高对碱性化合物的选择性Strata™ Phenyl•强芳香性选择性•适用于含有苯环或其他芳香环的化合物和碱性化合物Strata™ SDB-L•固定相：聚苯乙烯-二乙烯基苯聚合物•疏水选择性强于C18•适用于大多数有机化合物•pH范围更宽，无二级副反应存在。
c18柱子使用手册
C18柱使用手册正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns注意此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1．简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。
2．色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。
如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
C．对于极性键合柱的特殊说明由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。
C18色谱柱的使用说明
C18色谱柱的使用说明
一、色谱柱使用前注意事项
色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
对于在正相条件下评价的色谱柱，如果使用的条件为反相时，请用一个中介流动相（如异丙醇）先置换掉柱内的储存液，然后再应用于反相条件，否则，会对色谱柱造成极大的伤害，将会明显地减少色谱柱的使用寿命。
在反相色谱柱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，一定不要把色谱柱直接接上，应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过度一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机中很容易析出，而使色谱柱堵塞，无法恢复。
二、色谱柱的使用方向
色谱柱标签上的箭头所示方向是装填和评价时流动相流动的方向，使用过程中流动相的方向也应按此方向。
三、流动相
流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能地使用色谱纯，或至少是分析纯试剂；配流动相的水最好是超纯水或者是全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45或0.22μm的滤膜过滤一次则更好，这一点对含盐的流动相尤为重要。
另外，装流动相的溶器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
总之，必须保证所使用的流动相和色谱系统是足够的清洁。
四、样品
样品也要尽可能的清洁，同样可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，如无特殊要求，所有的溶剂和样品都应严格脱水。
环球仪器公司C18 SPE 固相萃取柱的应用
环球仪器公司 C18 SPE 固相萃取柱的应用 我们实验室在摸索了 10 种磺酰脲除草剂的前处理方法后，确定了采用固相萃取技术（SPE） 小柱对土壤基质进行净化，方法建立了以后，与环球仪器公司合作使用其公司制作的 C18 SPE 固相萃取小柱作为净化过程中使用的柱子。
其应用主要集中在单个磺酰脲除草剂的不同土壤基质中的前处理过程中，前处理过程如下： 提 取 :取 10 克土壤（过 20 目筛后风干）于 50ml 具塞的离心管中，添加不同浓度的 1ml 磺 酰脲类除草剂的混标于离心管中,放置 10min。
加提取液 PB7.8:乙腈=8:2 体积为 10ml,涡旋 2min,超声 5min,离心 4000~8000r/min 10min。
反复提取 3 次,合并上清液.用磷酸 480µl 左右调 节 pH 值在 2.5 左右,(在空白样品中测得磷酸体积,以免提取的样品损失)。
活 化 :用 5ml 乙腈浸泡 C18 6ml 小柱 30min,用调节到 2.5 的提取液 5ml 预淋洗。
上 样 :在小柱液面未干之前上样,控制流速为 0.5ml/min,上样 1 个小时,抽真空 10min,除去多 余水分。
洗 脱 :用乙腈:PB7.8=9:1 的溶剂 5ml 洗脱,N2 吹,定容到 5ml,低浓度的用 3ml 洗脱,N2 吹至 1ml 以下,并定容至 1ml。
加大浓缩力度，可使浓度的检出限更低. 方法建立初始采用的 10 种磺酰脲除草剂的结构式和相关性质产品名称 结构式 原药含量% Mr 分子式 性质氯磺隆 92%357.8C12H12ClN5O4S381.36 甲磺隆 98.8%C14H15N5O6S395.4 苯磺隆 95% C15H17N5O6S甲嘧磺隆 95%364.4C14H14N4O5S吡嘧磺隆 99%414.4C14H18N6O7S胺苯磺隆 98%410.4C15H18N6O6S387.4 噻磺隆 95%C11H11N5O6S2氯嘧磺隆 96%414.82C15H15ClN4O6S烟嘧磺隆 95.6%410C15H18N6O6S苄嘧磺隆 97%410.40C16H18N4O7S做了 3 个水平的添加.实验结果如下表: Recovery 1 2 3 4 5 6 10ppm 1.04 1.11 1.12 1.14 0.92 1.10 1ppm 0.97 0.87 0.88 0.94 0.86 0.93 0.1ppm 0.95 0.88 1.04 0.93 0.91 1.037 8 9 100.37 0.85 0.94 1.160.17 0.83 0.86 0.86线性关系与相关系数0.35 0.90 1.01 0.87Table 7HerbicideLinear equations and correlation coefficientsLinear equation 3 rLinear range/(mg/ L)nicosulfuron thifensulfuron methyl metsulfuron methyl sulforneturon-methyl chlorsulfuron ethametsulfuron bensulfuron methyl tribenuron methyl pyrazosulfuron-methyl chlorimuron ethyl0.1~10.0 0.1~10.0 0.1~10.0 0.1~10.0 0.1~10.0 0.1~10.0 0.1~10.0 0.1~10.0 0.1~10.0 0.1~10.0y=13.028x+5.0699 y=17.851x+3.8571 y=17.851x+3.8571 y=10.051x+1.7622 y=5.6007x+1.9487 y=6.8508x+2.4757 y=11.35x+2.4985 y=19.875x+4.5357 y=12,401x+2.1205 y=25.577x-3.90650.9989 0.9986 0.9986 0.9986 0.9985 0.9979 0.9979 0.9986 0.9986 0.9964Y: peak area ; X: mass concentration , mg/ L.选取 1ppm 添加回收的质谱图 标样 1ppmIntens . x107 1.25 05060302.D : TIC+All MS1.000.750.500.250.00 6 8 10 12 14 16 18Time [min]样品 1ppmIntens . x107 1.2505060302.D : TIC+All M S1.000.750.500.250.00 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Tim e [m in]后来应用到了单个药品的实际样品的检测，主要做了三个药，甲嘧磺隆，烟嘧磺隆和噻吩磺 隆。
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离子色谱用C18柱
C18型前处理柱
C18型前处理柱是以平均粒度为40um C18为填料的样品前处理柱。
由于柱填料中不含阴、阳离子交换位点，其不会保留离子性物质，但可以保留疏水性物质，所以在进行离子交换分析以前，常常使用C18柱从样品基体中除去疏水性污染物。
技术指标
规格型号SPE-C18
官能团C18
填料克重250mg
使用范例有机物的去除
使用说明
1．为了能够给前处理柱必要的压力及适合的流速推荐使用10ml一次性针筒。
2．为了达到较好的前处理效果，每次处理前应使用5ml甲醇进行活化15ml高纯水（ > 17MΩ ）进行清洗。
当进行低浓度样品分析时，首先按照下表进行冲洗，然后再用2ml高纯水进行空白测定，如果空白值过高，表明冲洗不够充分。
应重新冲洗并进行空白测定。
规格型号冲洗试剂冲洗试剂体积流速
SPE-C
18
甲醇
高纯水5ml
15ml
< 3ml/min
3. 由于前处理柱是基于吸附原理进行，当样品流速< 2ml/min 时填料才能有效利用，
当所处理的样品浓度远小于柱容量时，流速可适当加快。
4. 在处理样品或标准液时，起初的流出液都应废弃不用。
例如：5ml 样品，弃去前3ml，收
集最后2ml进行离子色谱测定。
5．前处理柱在垂直使用时才会有理想的效果。