实验二 叶绿素的提取与分离
《叶绿体色素的提取和分离》 实验报告
《叶绿体色素的提取和分离》实验报告
叶绿体是植物细胞中的一种细胞质器，主要功能是光合作用。
叶绿体包括一系列色素，其中最重要的是叶绿素。
在本实验中，我们将提取和分离叶绿体色素，以便进一步分析其
结构和功能。
实验步骤：
1. 从新鲜的叶子中剪下片段，用无菌蒸馏水洗涤。
2. 用离心机将叶片离心，离心速度为1000 rpm，时间为5分钟。
3. 将上清液取出并过滤，过滤剂为细孔过滤纸。
5. 将上清液取出，并用1ml无菌蒸馏水洗涤叶绿体色素。
7. 取出上清液，将其光度值调至0.4-0.6。
（400nm处）
8. 将上述上清液转入紫外吸收仪中，观察叶绿素的吸收曲线。
实验结果：
实验得出的叶绿体色素提取液中，吸收最强的波长为680nm和430nm。
这对应着叶绿
体和类胡萝卜素的吸收峰。
实验得到的叶绿体色素移液后，需要经过离心的过程，这样可去除混杂物质，获得更
为纯净的叶绿素。
通过以上实验，我们成功地提取和分离了叶绿体色素。
叶绿素是植物所特有的，它起
到了光合作用的关键作用。
实验中的提取和分离方法，可以为进一步的分析叶绿素的结构
和功能提供帮助。
叶绿素的提取和分离实验报告
叶绿素的提取和分离实验报告叶绿素的提取和分离实验，这可真是个有趣的课题。
想象一下，阳光下的小植物，满身的绿色，就像穿着翠绿衣裳的小精灵。
你可知道，叶绿素可不是简单的东西，它可是植物的“魔法武器”。
今天咱们就来聊聊这个实验，顺便看看怎么把叶绿素提取出来，真是让人充满期待啊。
准备工作可得做足。
找几片新鲜的绿叶，最好是一些比较嫩的，比如菠菜或者其他绿叶蔬菜。
小伙伴们，记得洗干净哦，卫生第一。
然后，撕碎这些叶子，越小越好，这样才能让叶绿素更容易释放出来。
这一过程就像是在给小植物“做美容”，哈哈。
撕的过程中，脑海里不禁浮现出那些清新的味道，真是让人忍不住想咬一口。
咱们要用到一些工具。
把撕碎的叶子放进研钵里，加入一些酒精，建议用乙醇。
酒精可真是个好帮手，它能把叶绿素从叶子里“撇”出来。
用杵子慢慢研磨，直到叶子变成绿油油的糊状。
这一刻，感觉自己就像是个小炼金术士，手里的东西似乎在变得神奇。
油绿的汁液渐渐渗出来，真是让人心花怒放。
这时候，你会发现，液体的颜色开始变得浓郁。
小心翼翼地把混合物过滤到一个试管里，别让那些叶子的渣滓混进来哦，咱们要的可是纯粹的叶绿素。
就像在筛选黄金一样，真是小心翼翼。
一过滤，看到清澈的液体，那一瞬间，心里不禁乐开了花，感觉这就是成功的象征。
可以用薄层色谱法来分离叶绿素。
想象一下，在薄层板上，一滴滴的液体就像小小的水滴，兴奋地准备出发。
小心地把试管里的液体滴在板上，然后将薄层板放入含有溶剂的小容器里。
那一刻，真的感觉自己像是在观看一场精彩的表演。
随着时间的推移，液体在板上缓缓移动，颜色也在不断变化。
简直是科学和艺术的结合，太美了！经过一段时间，取出薄层板，看到上面的色带，一条条的，绿的、黄的、甚至还有些微微的蓝色。
这时候，心里默念：“这就是大自然的调色板！”咱们可以用尺子量量这些颜色的距离，分析一下不同色带的组成，原来叶绿素还有好几种呢。
真是让人意外，看来这小小的绿叶，藏着的秘密可真不少。
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》
实验八叶绿体中色素的提取和分离教学目的1．初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。
2．探索叶绿体中有几种色素。
实验原理1．叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。
2．色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。
实验程序1）称取5g绿色叶片并剪碎提取色素2）加入少量sio2、caco3和5ml丙酮收集到试管内并塞紧管口1）将干燥的滤纸剪成6cm长，1cm宽的纸条，剪去一端两角（使层析液同时到达滤液细线）制滤纸条2）在距剪角一端1cm处用铅笔画线1）用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线滤液划线2）干燥后重复划2-3次1）向烧杯中倒入3ml层析液（以层析液不没及滤液细线为准）纸上层析（2）将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中3）用培养皿盖盖上烧杯观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图）最宽：叶绿素a；最窄：叶绿素b；相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b；相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素。
实验关键1．选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。
如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。
2．画滤液细线时，应以细、直、颜色浓绿为标准，重复画线时必须等上次画线干燥衙再进行，重复2-3次。
3．层析时不要让滤液细线触及层析液。
注意事项1．因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。
2．在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研磨充分，有利于色素的提取；加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的色素受到破坏。
3．分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。
【同类题库】．下列哪一种液体不能作为叶绿体中色素提取液？（c）a．丙酮溶液b．酒精溶液c．水溶液 d．汽油．在叶绿体中色素的提取与分离实验中，扩散速度最快的色素是（d）a．叶绿素ab．叶绿素b c．叶黄素 d．胡萝卜素．将菠菜叶表皮细胞和人的口腔上皮细胞制成装片，从盖玻片一侧滴入30%的蔗糖溶液，另一侧用吸水纸重复吸收几次，分别放在显微镜下观察，其结果是（d）a．前者发质壁分离，后者也发生质壁分离b．前者发生质壁分离，后者破裂c．前者发质壁分离，后者质壁分离复原 d．前者发生质壁分离，后者皱缩．如果没有丙酮和菠菜叶，要保证分离后色素带清晰，可以用来替代的最佳实验材料是（a）a．酒精和麦苗 b．酒精和大白菜 c．蒸馏水和大白菜d．蒸馏水和麦苗．用韭菜做“叶绿体色素的提取和分离实验”，下列不能用作提取剂的是（a）a．水 b．丙酮 c．酒精 d．ccl4．为了提取绿色植物叶绿体中的色素，在研磨绿叶时加入少许碳酸钙，其作用是（b）a．调节ph，加速色素溶解 b．调节ph，防止叶绿素被破坏c．使绿叶研磨充分 d．有利于四种色素的分开．在研磨绿叶时，下列哪种物质不需要加入（b）a．丙酮b．层析液 c．碳酸钙 d．二氧化硅．（多选）某学生在做“叶绿体色素的提取和分离实验”时，收集到的滤液呈淡绿色，其原因可能是（ac）a．叶片较老较黄 b．加入的二氧化硅多了些c．研磨不充分d．漏斗基部塞的脱脂棉多了些．做色素提取和分离实验的正确装置是图中（d）．在进行叶绿素提取和分离实验时，不能让层析液没及滤液细线的原因是（c）a．滤纸条上几种色素会扩散不均匀而影响实验结果b．滤纸条上滤液细线会变粗而使色素太分散c．色素会溶解在层析液中而使结果不明显d．滤纸条上几种色素会混合起来．某人做叶绿体中色素分离实验时，使用的是圆形滤纸，装置如下图。
实验二 叶绿素的提取与分离
实验二叶绿素的提取和分离一、实验目的从富含叶绿素的菠菜叶片中提取叶绿素，并在薄层层析板上点样使叶绿素显示不同颜色。
二、实验原理要求同学们先查询资料，了解叶绿素相关知识，实验课上老师讲解。
三、实验材料、器具研钵、托盘天平、分液漏斗、干燥锥形瓶、毛细管、薄层层析板、饱和NaCl溶液、无水Na2SO4四、实验步骤1、叶绿素的提取在中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以．如果是冷冻的，解冻后包在纸中轻压吸左水分)。
加入10mL2:1石油醚和丙酮混合液，适当研磨。
将提取液用滴管转移至分液漏斗中，加入10mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除去水溶性物质，分去H2O层，再用蒸馏水洗涤两次。
将有机层转入干燥的小锥形瓶中，加2g无水Na2SO4，通风处理。
处理后的液体倾至另一锥形瓶中(如溶液颜色太浅，可在通风柜中适当蒸发浓缩)。
2、点样用一根内径1mm的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点在距薄板一端1cm 处，平行点两点，两点相距1cm左右。
若一次点样不够，可待样品溶剂挥发后．再在原处点第二次，但点样斑点直径不得越过2mm。
3、展开先在小烧杯中放入展开剂[用石油醚和丙酮按3：1的比例进行混合作为展开剂，再将薄层板斜靠于层析缸内壁。
点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中，密闭层析缸。
待展开剂上升到距薄层板另一端约1cm时，取出平放，用铅笔或小针划前沿线位置，在空气中晾干或用电吹风吹干薄层。
毛细管点样薄层色谱展开4、观察层析板并记录实验结果。
薄层层析时Rf值表示的是原点到层析斑点中心的距离与原点的到展层溶剂的前沿距离包括扩散最快的是什么，扩散最慢的是什么最宽的色素带是什么，最窄的色素带是什么哪两个色素带距离相距最远，哪两个最近等等各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快，反之则慢。
最快：胡萝卜素次之：叶黄素次之：叶绿素A最慢：叶绿素B颜色分别为：橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，最宽的是叶绿素A最窄的是胡萝卜素胡萝卜素和叶绿素B最远叶绿素A和叶绿素B最近实验十四、植物色素的提取和薄层色谱分析一、实验目的：1、了解薄层色谱的基本原理和应用。
叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定
植物生理学实验报告实验题目：叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定姓名班级学号一、实验原理和目的目的：1.练习叶绿素提取和分离的方法2.进一步了解叶绿素色素成分提取、分离原理：1、溶解性。
叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取2、吸附性。
滤纸对Chlb、Chla、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。
二、实验器具和步骤材料:新鲜植物叶片器具：研钵一个，漏斗一个，刻度试管两支，剪刀一把，长滴管一个，培养皿(直径9cm)一个，圆形滤纸（11cm和7cm)各一张，滤纸条一张试剂：95%乙醇，石油醚步骤：1.色素提取（乙醇粗提液）a.取新鲜叶片洗净擦干，去中脉称1g左右剪碎于研钵b.研钵中加3-5ml95%乙醇研磨成匀浆过滤于刻度试管残渣用少许乙醇冲洗一并过滤定容至10ml2.荧光观察将乙醇提取液试管放于太阳光下观察反射光和透射光下的颜色现象：透射光下呈绿色，反射光下呈红色为叶绿素荧光3.色素萃取（石油醚提取液）取乙醇提取液5ml与另一支试管加2ml石油醚摇荡静止片刻上层深绿色为石油醚提取液4.色素分离a.将（11cm)圆滤纸中间剪一小圆孔取滤纸条捻成紧实芯一端插入圆滤纸中心（孔缘与纸芯紧贴且露出少许，最好相平）用长滴管吸少许石油醚提取液滴于纸芯上端待风干后再滴加几次b.将盛有石油醚的内盖（不要过满）放于培养皿中央将插上纸芯的滤纸放在培养皿上纸芯下端浸入石油醚迅速盖好培养皿。
c.推动剂前缘接近滤纸边缘时取出滤纸，风干可见分离色带，用铅笔标出各种色素位置和名称三、实验数据和作业四、数据分析研磨叶片不充分，提取的叶绿体色素溶液浓度稀，荧光现象不明显分离色带较少的原因：提取的叶绿素的浓度稀胡萝卜素叶黄素。
“叶绿体中色素的提取和分离”实验中容易出现的问题和解决方法
“叶绿体中色素的提取和分离”实验中容易出现的问题和解决方法在高中生物实验中，“叶绿体中色素的提取和分离”是一个重要的实验,学生在做这个实验时容易出现以下几个问题：一是研磨植物叶片的时间过长，掌握不好加入二氧化硅的用量，往往是二氧化硅过量，致使滤液含有较多的二氧化硅，滤液颜色变浅，影响实验效果；二是毛细吸管易堵塞，色素线画得不够细、平、齐，使色素带重叠；三是层析液中含有苯，苯是一种毒性很强的有机物；四是在分离色素时，滤纸条上的滤液细线容易没及到层析液，使色素溶于层析液中，导致色素不清晰。
做这个实验，主要是让学生通过实验操作，学会提取分离叶绿体中色素的方法和技能，在探索、思考和主动实践中，吸取知识、应用知识、分析问题、解决问题，从而培养学生的科学素养、创新精神和实践能力。
一、实验前的知识准备1、证明叶绿体中存在色素。
取一支干燥的白色粉笔，将其一端（约0.7cm）竖直浸入预做好的叶绿体色素提取液中，充分吸液后，使其稍微干燥，接着将该端竖于95%的乙醇中，片刻后，粉笔会出现四条不同颜色的色带。
2、实验原理：由于光合作用色素位于叶绿体中的类囊体膜上，要把它提取出来就必须破坏叶表皮、细胞壁和细胞膜、叶绿体的双层膜，所以要剪碎叶片后加入二氧化硅进行研磨，以便使色素被充分提取，又因为叶绿体中色素不溶于水，但可溶于有机溶剂，如酒精或丙酮，形成色素液，所以要加入丙酮使色素溶解来提取各种色素。
另外要加碳酸钙以保护叶绿体中的色素，原因是碳酸钙可调节色素液中的酸碱度，防止叶绿素被破坏。
分离叶绿体色素常用的纸层析法是一种分配层析，即利用混合物各组分在流动相和固定相两种不同溶液中的分配系数差异将它们分离。
在纸层析中的流动相是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液可不断地由下向上流动。
由于滤纸纤维素上的羟基亲水性，因此水分子被吸附在纤维之间不易扩散而成为固定相。
在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经色素滤液细线时，滤液细线的色素就相继融入层析液，随层析液上升并发生再分配，即有一部分色素从层析液分配溶解到固定相中直到平衡。
叶绿体色素的提取分离和理化性质实验报告
生物学导论实验报告叶绿体色素的提取分离和理化性质一、提取与分离1、实验目的学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。
2、实验原理提取：叶绿体色素为有机酯类化合物，根据相似相容原理，常用有机溶剂提取。
如酒精、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等。
分离：薄层层析法是将吸附剂均匀的涂抹在玻璃板上形成一薄层，将此吸附剂薄层作为固定相，把待测分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂作流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂中。
流动相通过毛细管作用由下而上逐渐浸润薄层板，并带动样品在板上也向上移动，样品中各组成分在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、脱吸附、再吸附……的过程。
由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同，吸附能力强的物质相对移动慢一些，儿媳妇能力弱的物质相对移动快一些，从而使各组分有不同移动速度而彼此分开。
3、实验材料与试剂（1）新鲜的菠菜叶；（2）体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末、展开剂（3）钵体、漏斗、三角瓶、剪刀、点样本、毛细管、层析缸、硅胶预制板、滤纸。
4、实验步骤（1）色素提取液的制备取叶4~5片新鲜叶片，洗净，擦干叶表面，去中脉剪碎，放入钵体中。
加入少量碳酸钙，加2~3ml体积分数为95%的乙醇，研磨至糊状，再加入10ml乙醇，上清液过滤，残渣再用10ml乙醇冲洗过滤。
（2）叶绿体色素的分离取硅胶预制板一个，用点样毛细管取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘1cm处用毛细管划线，风干，重复操作3~4次；在干燥的层析缸中加入适量展开剂，高度0.5cm，将硅胶预制板带有色素一端放入，使其下端浸入展开剂中；当色素较好分离，展开剂前沿接近硅胶预制板的上端边缘时，取出，画线。
Rf=斑点中心到原点距离/溶剂前沿到原点距离5、实验结果与分析从上至下为胡萝卜素（橙色）：Rf=6.95/7.35=0.946叶绿素a（蓝绿色）：Rf=5.35/7.35=0.728叶绿素b（黄绿色）：Rf=4.95/7.35=0.673叶黄素（黄色）：Rf=4.10/7.350.558可知，胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素极性依次增大，与硅胶吸附能力依次增强。
实验二、植物叶绿素含量测定----丙酮提取法
二、植物叶绿素含量测定----丙酮提取法高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿体色素(光合色素)吸收的。
叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
叶绿体色素的提取、分离和测定是研究它们的特性以及在光合中作用的第一步。
叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，是反眏叶片生理状态的重要指标。
在植物光合生理、发育生理和抗性生理研究中经常需要测定叶绿素含量。
叶绿素含量也是指导作物栽培生产和选育作物品种的重要指标。
[原理]叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。
叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸收，用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液的吸光度(也称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下的吸收系数即可计算叶绿素含量。
利用分光光计测定叶绿素含量的依据是Lambert-Beer定律，即当一束单色光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的乘积成正比。
其数学表达式为：A=Kbc式中： A为吸光度；K为吸光系数；b为溶液的厚度；c为溶液浓度。
叶绿素a、b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于663、645nm 处。
叶绿素a和b在663nm处的吸光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时的吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。
根据Lambert-Beer定律,叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度（A663和A645）与溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十b，单位为g·L-1），的关系可分别用下列方程式表示：A663=82.04Ca+9.27Cb（1）A645=16.76Ca+45.60Cb（2）解方程（1）和（2）得：Ca=12.7 A663—2.59A645(3)Cb=22.9 A645—4.67A663(4)Ca十b＝20.3 A645—8.04A663(5)从公式（3）、（4）、（5）可以看出，只要测得叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度，就可计算出提取液中的叶绿素a、b浓度和叶绿素总浓度（a+b）。
叶绿素的提取和分离 (2)
叶绿素的提取和分离
叶绿素是植物中常见的一种色素，可以通过以下步骤提取和分离：
1. 选择适当的植物材料：选择含有较高叶绿素含量的植物材料，如深绿色的叶子。
2. 破碎细胞壁：将选取的植物材料破碎细胞壁，可以通过搅拌、研磨或者用搅拌机处理。
3. 提取叶绿素：加入适量的提取剂（如丙酮、乙醇、酒精等），使植物细胞中的叶绿素溶解到提取剂中。
可以将细胞破碎后的混合物过滤，得到含有叶绿素的提取液。
4. 离心：对提取液进行离心，以分离植物残渣和叶绿素提取液。
离心可以加快叶绿素的沉淀速度。
5. 分离和纯化叶绿素：可以使用色谱技术（如薄层色谱、柱层析等）对叶绿素提取液进行分离和纯化。
通过色谱技术可以将不同种类的叶绿素分离开来。
以上是叶绿素的提取和分离的一些常用步骤，具体的操作方法和条件可以根据具体实验目的和材料的不同而有所调整。
普通生物学实验实验报告叶绿素的提取分离与理化性质
普通生物学实验实验报告一、实验名称叶绿素的提取分离与理化性质二、实验目的1.学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法2.验证叶绿体色素的多种理化性质三、实验原理1.叶绿素中的叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素是色素蛋白复合体，不溶于水而易溶于有机溶剂，可以用乙醇进行提取。
2.由于硅胶板的吸附剂对不同色素的吸附能力不同，不同色素在展开剂中的溶解度不同，因而叶绿素提取液进行薄层层析时各组分移动速度不同而分开，因此可以用薄层层析法对色素进行分离，进而对色素进行观察鉴别。
3.叶绿素是由叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复合酯，能与碱性物质发生皂化反应生成甲醇和叶绿醇及能溶于水的叶绿酸盐，从而绿色素和黄色素分离。
4.叶绿素可以吸收光量子变成不稳定的激发态，当它变回基态时可发射红光量子产生荧光。
5.叶绿素的化学性质不稳定，在强光照下易被破坏，类胡萝卜素则较稳定。
6.叶绿素中的镁可被氢离子取代生成绿色的去镁叶绿素。
去镁叶绿素可与铜离子反应生成稳定的铜代叶绿素。
四、实验仪器和材料1.新鲜的菠菜叶片。
2.体积分数为95％的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂。
3.天平，研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，毛细玻璃管，层析缸，硅胶预制板，滤纸。
4.刻度试管，小试管，试管架，水浴锅，10mL移液管。
5.苯，醋酸铜粉末，质量分数为5％的稀盐酸，醋酸-醋酸铜溶液，氢氧化钾-甲醇溶液。
五、实验步骤1.叶绿素提取液的制备2.叶绿体色素的分离3．光对叶绿素的破坏作用取两只小试管，各加入2.5mL 的叶绿素提取液和2.5mL 的95％乙醇。
一支试管放在直射阳光下，另一支试管用锡箔纸包严，均静置40分钟。
4.皂化作用5.H 离子和Cu 离子对叶绿素Mg 离子的取代作用1) 取两只试管，试管1中加入5mL 叶绿素提取液作为对照。
试管2中加入5mL叶绿素提取液后再加入质量分数为5％的盐酸数滴并摇匀，当溶液变褐后再加入少量醋酸铜粉末，60℃水浴加热，观察溶液颜色变化并和试管1比较。
高中生物实验叶绿体色素的提取和分离
实验叶绿体色素的提取和分离
1、原理：( 1 )叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂无水乙醇(或丙酮)中，所以用无水乙醇可提取叶绿体中的色素。
( 2 )不同的色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得慢，因而可用层析液将不同色素分离。
3、结果分析：①从色素带的宽度可知色素含量的多少依次为：叶绿素a >叶绿素b >叶黄素>胡萝卜素; ②从色素带的位置可知色素在层析夜中溶解度大小依次是：胡萝卜素>叶黄素>叶绿素 a >叶绿素 b ; ③在滤纸上距离最近的两条色素带是叶绿素a 与叶绿素
b ，距离最远的两条色素带是胡萝卜素与叶黄素。
4、注意事项：(1)裁取定性滤纸时，注意双手尽量不要接触纸面，以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸。
(2)根据烧杯的高度制备滤纸条，让滤纸条长度高出烧杯1cm ，高出的部分做直角弯折。
(3)画滤液细线时，用力要均匀，速度要适中。
(4)研磨要迅速、充分。
a.因为丙酮容易挥发; b.为了使叶绿体完全破裂.从而能提取较多的色素;
c.叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而被破坏。
(5)制备滤纸条时，要将滤纸条的一端剪去两角,这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀,便于观察实验结果。
5、实验创新：在本实验中在圆形滤纸中央点上叶绿体色素的提取液进行层析，会得到近似同心的四个色素环，由内到外依次是黄绿色、蓝绿色、黄色、橙黄色。
叶绿素的提取和分离
实验名称：叶绿素的提取和分离一、实验目的（1）掌握叶绿素提取的方法。
（2）了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作方法。
（3）了解叶绿体中所含色素种类及其在滤纸层析上的分布情况。
二、实验器材95％乙醇、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油，量筒，滤纸，大培养皿，小培养皿，长滴管，剪刀。
三、实验过程（1）提取色素将深绿色的植物叶剪碎放入研钵中。
放入少量的SiO2 和CaCO3再加入3滴管无水乙醇后迅速、充分研磨至糊状。
将糊状研磨物倒入放有尼龙布的漏斗中，用研钵锤挤压，将滤液收集到小玻璃瓶中，并盖上瓶盖。
（2）制备滤纸条将干燥的定性滤纸剪成稍小于试管长与直径的滤纸条，将一端减去两角，并在距这一端1厘米处用铅笔画一条细线。
（3）画滤液细线用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线均匀划出一条细线。
干燥后，重复一两次。
（4）色素分离取适量层析液倒入烧杯中，将滤纸条轻插入层析液中（滤液细线不能触及层析液，以防止色素溶解于层析液中而无法分离）,用培养皿盖住（防止层析液挥发）。
（5）观察与记录四、实验现象五、实验结论绿叶中有一种细胞器叫叶绿体，植物通过叶绿体进行光合作用，把光能、二氧化碳、水转化成化学能。
叶绿素分布在叶绿体的类囊体薄膜上。
叶绿素 a、叶绿素 b、胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。
这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取经过色素分离后，叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶绿素占总量3/4。
叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。
类胡萝卜素占总量1/4。
完整版)《绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计
完整版)《绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计一、教材分析本实验是高中生物必修一第五章第四节《能量之源-----光与光合作用》的基本实验，是生物三大必修模块《分子与细胞》的核心内容之一。
在研究光合作用相关内容之前，通过教师适当的引导，学生可以完成对绿叶中色素的提取与分离的研究，从而增强学生探究研究的欲望和研究光合作用的兴趣，为后续光合作用内容的研究打下坚实基础。
此外，这也有助于提高学生的生物科学素养和科学探究能力。
二、学情分析我所带的是职业中学的体育班，全班29位学生，其中只有3名女同学，以男生居多。
由于学生研究的重视度和自觉性都比较差，加上文化课底子薄，对课堂教学兴趣不浓厚。
但学生好动，具有很大的好奇心和探究欲望，往往对实验课具有很高的兴趣，这为开展生物实验课提供了优势。
通过实验课的开展，可以激发学生研究生物课的兴趣，培养学生的实际动手操作能力。
三、教学目标知识目标：理解色素的提取和分离实验目的、实验原理，探索叶绿体中色素的种类。
能力目标：（1）初步学会提取、分离叶绿体中色素的方法和技能；（2）使学生掌握科学探究的程序和方法，培养学生创造性思维能力和动手实践的能力；（3）提高学生口头表达、相互交流的能力及思维的严密性。
情感态度目标：提高学生的研究兴趣，初步培养了学生科学探索的欲望和能力。
培养学生实事求是的科学态度，增强学生关心爱护绿色植物，关心发展农业的意识，进行生命科学价值观的教育。
四、重点难点重点：叶绿体中色素的种类和作用。
难点：对实验原理的理解，对照实验的设计和色素的提取。
五、实验原理提取原理：叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中，因此可以用丙酮提取叶绿体中的色素。
当没有丙酮时，也可以用其他有机溶剂替代，如酒精。
分离原理：分离色素的方法叫纸层析法。
分离色素与色素的溶解度有关，而与色素的浓度、含量无关。
因为不同色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的随层析液在虑纸条上扩散得快，反之则慢，从而将各种色素分开。
叶绿素的提取与分离
叶黄素是一种黄色色素，与叶绿素同存在于植物体中，是胡箩卜素的羟基衍生物，较易溶于乙醇，在乙醚中溶解度较小。
·＞＞＞根据它们的化学特性，可将它们从植物叶片中提取出来，并通过萃取、沉淀和色谱方法将他们分离开来。
2、薄层色谱
①薄层色谱是用来快速分离和定性分析微量物质的一种极为重要的实验技术，具有设备简单、操作方便而快速的特点。
②薄层层析按分离机制不同可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
(1)吸附层析中样品在薄层板上经过连续、反复的被吸附剂吸附及展开剂解吸附过程，由于不同的物质被吸附剂吸附的能力及被展开剂解吸附的能力不同，放在薄层上以不同速度移动而得以分离。通常用比移值（Rf）表示物质移动的相对距离：
Rf=
图注：1—起点线；2—展开剂前沿；a—色斑最高浓度中心至原点中心的距离；b—展开剂前沿至原点中心的距离。
3、点样
用根内径1mm的毛细管，吸取适量提取液，轻轻点在距薄板一端1.5cm处，平行点两点，两点相距1cm左右。若一次点样不够，可待样品溶液挥发后，再在原点处点第二次，但斑点直径不得超过2mm。
4、展开
先在层析缸中放入展开剂（石油醚（60~90℃）—丙酮—乙醚（体积比为3:2:1））加盖使缸内蒸气饱10min，再将薄板层斜靠于层析缸内壁。点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中，密闭层析缸。待展开剂上升到距薄板层另一端1cm时，取出平放，用铅笔或小针划前沿线位置，晾干。
2、试剂：硅胶、0.1%CMC、石油醚（60~90℃）、乙醇、丙酮、乙醚、饱和NaCl溶液、无水Na2SO4。
四、实验步骤
1、制板
将硅胶加0.1%CMC，调成浆状（硅胶：CMC=1:3~4），将其涂在载玻片上，为使其坦平，可将载玻片用手端平晃动，至平坦为止，放在平静平坦的台面上，晾干之后放入105℃烘箱中活化1小时，取出放入干燥器内待用。
叶绿体中色素的提取和分离,实验报告
叶绿体中色素的提取和分离,实验报告实验报告设计叶绿体中色素的提取和分离叶绿体中色素的提取和分离一、实验目标1、知识方面（1）探究叶绿体中含有几种种色素：理解它们的特点及与光合作用的关系（2）了解纸层析法的原理。
2、能力方面掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。
3、情感态度与价值观方面认识生物科学的价值，乐于学习生物科学，养成质疑、求实、创新及勇于实践的科学精神和科学态度二、实验原理1、色素提取的原理：叶绿体中的色素能溶于有机溶剂中，故可用丙酮和无水乙醇提取色素。
2、色素分离的原理：叶绿体中的各种色素在层析液中的溶解度不同。
溶解度大的色素，在滤纸上随层析液的扩散速度快；溶解度小的色素，在滤纸上随层析液的扩散速度慢。
三、实验准备实验材料：新鲜的绿叶（如新鲜菠菜叶片）。
实验仪器及用具：定性滤纸，研钵，玻璃滤斗，脱脂棉，尼龙布，毛细吸管，剪刀，药勺，量筒（10mL），天平，试管，试管架，滴管，培养皿，三角瓶，烧杯试验试剂：无水乙醇（或丙酮），层析液（CCl4），石英砂（SiO2）和碳酸钙（CaCO3）四、实验步骤1、叶绿体色素的提取（1）取菠菜新鲜叶片5g，洗净，擦干，去掉中脉，剪碎，放入研钵中。
（2）向研钵中加入少许碳酸钙和二氧化硅，再加10mL无水乙醇，进行迅速、充分研磨（二氧化硅有助于研磨得充分，碳酸钙可防止研磨中色素被破坏）。
（3）将研磨液迅速倒入漏斗（漏斗基部放一块单层尼龙布）中进行过滤。
将滤液收集到试管中，及时用棉塞将试管口塞严。
2、制备滤纸条用预先干燥处理过的定性滤纸，将滤纸剪成长10 cm、宽1cm 的滤纸条，在滤纸条的一端剪去两角（防止层析液在滤纸条的边缘扩散过快），并在距离这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
3、画滤液细线用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀地画出一条细而直的滤液细线。
待滤液干后，再画二三次。
4、分离叶绿体中的色素将3 mL层析液到入烧杯中，将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）略微斜靠着烧杯的内壁，轻轻地插入到层析液中，随后用培养皿盖盖上烧坏。
叶绿素提取分离实验报告
一、实验目的1. 学习叶绿素提取与分离的方法。
2. 了解叶绿素的理化性质。
3. 掌握薄层色谱法在叶绿素分离中的应用。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的主要色素，存在于叶绿体的类囊体膜上。
叶绿素具有吸收红光和紫光，反射绿光的特性，因此植物呈现绿色。
叶绿素主要分为叶绿素a和叶绿素b两大类，此外还有叶黄素和胡萝卜素等类胡萝卜素。
叶绿素的提取通常采用有机溶剂，如乙醇、丙酮等，将叶绿素从植物组织中溶解出来。
分离叶绿素通常采用薄层色谱法，根据叶绿素在不同溶剂中的分配系数不同，通过层析将叶绿素与其他色素分离。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶片、石英砂、碳酸钙粉、95%乙醇、层析缸、滤纸、毛细管等。
2. 实验仪器：研钵、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、电热恒温水浴锅、离心机、紫外灯等。
四、实验步骤1. 准备工作：将新鲜菠菜叶片洗净、擦干，去掉中脉剪碎。
2. 叶绿素提取：将剪碎的菠菜叶片放入研钵中，加入少量石英砂和碳酸钙粉，加入2-3ml 95%乙醇，研磨至糊状，再加入10-15ml 95%乙醇，离心35min，提取上清液过滤于三角瓶中。
3. 叶绿素分离：取圆形定性滤纸一张，将其剪成滤纸条（9cm×3cm），用滴管吸取乙醇叶绿素提取液，沿纸条的长度方向涂在纸条的一边（距边约1cm），使色素扩散的宽度限制在0.5cm以内，风干后，重复操作数次。
4. 层析：在层析缸中加入适量的推动剂，将滤纸条带有色素的一端插入层析缸中，使滤纸条下端浸入推动剂中。
迅速盖好层析缸盖，等待推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，即可观察到分离的各种色素条带。
五、实验结果与分析1. 色素条带观察：在紫外灯下观察，滤纸条上呈现出蓝绿色、黄绿色、黄色和橙黄色的条带。
2. 色素鉴定：根据色素条带的颜色和位置，鉴定出叶绿素a、叶绿素b、叶黄素和胡萝卜素。
3. 叶绿素含量测定：通过比较各色素条带的长度，计算叶绿素a和叶绿素b的含量。
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》在日常生活和工作中，我们都不可避免地要接触到报告，报告中涉及到专业性术语要解释清楚。
你还在对写报告感到一筹莫展吗？下面是我为大家收集的生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》，仅供参考，大家一起来看看吧。
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》1一、实验目的1.学会提取和分离叶绿体中色素的方法。
2.比较、观察叶绿体中四种色素：理解它们的’特点及与光合作用的关系二、实验原理光合色素主要存在于高等植物叶绿体的基粒片层上，而叶绿体中的色素能溶于有机溶剂中。
故要提取色素，要破坏细胞结构，破坏叶绿体膜，使基粒片层结构直接与有机溶剂接触，使色素溶解在有机溶剂中。
叶绿体中的色素有四种，不同色素在层析液(脂溶性强的有机溶剂)中的溶解度不同，因而随层析液的扩散速度也不同。
三、材料用具取新鲜的绿色叶片、定性滤纸、烧杯、研钵、漏斗、纱布、剪刀、小试管、培养皿、毛细吸管、量筒、有机溶剂、层析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸钙。
四、实验过程（见书Ｐ54）1.提取色素：2.制备滤纸条：3.色素分离，纸层析法。
（不要让滤液细线触及层析液）4.观察：层析后，取出滤纸，在通风处吹干。
观察滤纸条上出现色素带的数目、颜色、位置和宽窄。
结果是：4条色素带从上而下依次是：胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶绿素b(黄绿色)。
五、讨论1.滤纸条上的滤液细线为什么不能接触到层析液？2．提取和分离叶绿体中色素的关键是什么？生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》2一、实验目的1.学会提取和分离叶绿体中色素的方法。
2.比较、观察叶绿体中四种色素：理解它们的特点及与光合作用的关系二、实验原理光合色素主要存在于高等植物叶绿体的基粒片层上，而叶绿体中的色素能溶于有机溶剂中。
故要提取色素，要破坏细胞结构，破坏叶绿体膜，使基粒片层结构直接与有机溶剂接触，使色素溶解在有机溶剂中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验二叶绿素的提取和分离一、实验目的从富含叶绿素的菠菜叶片中提取叶绿素，并在薄层层析板上点样使叶绿素显示不同颜色。
二、实验原理要求同学们先查询资料，了解叶绿素相关知识，实验课上老师讲解。
三、实验材料、器具研钵、托盘天平、分液漏斗、干燥锥形瓶、毛细管、薄层层析板、饱和NaCl溶液、无水Na2SO4四、实验步骤1、叶绿素的提取在中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以．如果是冷冻的，解冻后包在纸中轻压吸左水分)。
加入10mL2:1石油醚和丙酮混合液，适当研磨。
将提取液用滴管转移至分液漏斗中，加入10mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除去水溶性物质，分去H2O层，再用蒸馏水洗涤两次。
将有机层转入干燥的小锥形瓶中，加2g无水Na2SO4，通风处理。
处理后的液体倾至另一锥形瓶中(如溶液颜色太浅，可在通风柜中适当蒸发浓缩)。
2、点样用一根内径 1mm的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点在距薄板一端1cm 处，平行点两点，两点相距1cm左右。
若一次点样不够，可待样品溶剂挥发后．再在原处点第二次，但点样斑点直径不得越过2mm。
3、展开先在小烧杯中放入展开剂[用石油醚和丙酮按3：1的比例进行混合作为展开剂，再将薄层板斜靠于层析缸内壁。
点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中，密闭层析缸。
待展开剂上升到距薄层板另一端约1cm时，取出平放，用铅笔或小针划前沿线位置，在空气中晾干或用电吹风吹干薄层。
毛细管点样薄层色谱展开4、观察层析板并记录实验结果。
薄层层析时Rf值表示的是原点到层析斑点中心的距离与原点的到展层溶剂的前沿距离包括扩散最快的是什么，扩散最慢的是什么最宽的色素带是什么，最窄的色素带是什么哪两个色素带距离相距最远，哪两个最近等等各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快，反之则慢。
最快：胡萝卜素次之：叶黄素次之：叶绿素A最慢：叶绿素B颜色分别为：橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，最宽的是叶绿素A最窄的是胡萝卜素胡萝卜素和叶绿素B最远叶绿素A和叶绿素B最近实验十四、植物色素的提取和薄层色谱分析一、实验目的：1、了解薄层色谱的基本原理和应用。
2、掌握薄层色谱的操作技术。
二、实验原理：1、原理薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。
样品在薄层板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间进行分离。
由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。
2、薄层色谱的用途：1）化合物的定性检验。
（通过与已知标准物对比的方法进行未知物的鉴定）在条件完全一致的情况，纯碎的化合物在薄层色谱中呈现一定的移动距离，称比移值（Rf 值），所以利用薄层色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。
但影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。
所以，要获得重现的比移值就比较困难。
为此，在测定某一试样时，最好用已知样品进行对照。
距离溶剂前沿至原点中心的点中心的距离溶质最高浓度中心至原2）快速分离少量物质。
（几到几十微克，甚至0.01µg）3）跟踪反应进程。
在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失，来判断反应是否完成。
4）化合物纯度的检验（只出现一个斑点，且无拖尾现象，为纯物质。
）此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。
3、色谱法色谱法是与植物天然色素的分离提取同时发展起来的.色谱法(纸色谱,薄层色谱和柱色谱)至今仍然是分离叶绿素等天然色素最有效的方法。
色谱法分离叶绿体色素的基本原理是利用不同色素在各种有机溶剂中的分配系数,或在吸附剂上的吸附能力的不同,当它们通过色谱柱/床时,这种分配或吸附过程反复多次地进行,最后将它们一一分离开来。
通常认为,纸色谱属于分配色谱.它是以滤纸为惰性支持物,滤纸纤维一般能吸收约20 % 的水分,其中有6~7 % 以氢键形式与纤维素上的羟基结合,构成纸色谱的固定相.在展开过程中,被分离组分在展开剂和固定相之间不断进行分配, 龙岩学院分析化学精品课程分析化学实验项目指导书 2达到相互分离.薄层色谱和柱色谱的吸附剂(固定相)有硅胶,氧化铝,硅藻土等无机物,也有糖类,纤维素,聚酰胺,C18 和离子交换树脂等有机物.它们的分离机理也各不相同,如吸附,分配,氢键,正相和反相色谱等。
对于纸色谱或薄层色谱,毛细管作用是推动溶剂展开的动力.被分离物质在图谱上的位置,可用比移值Rf表示Rf=原点至斑点中心的距离/原点至展开剂前沿的距离。
植物光合作用是自然界最重要的现象,它是人类所利用能量的主要来源.在把光能转化为化学能的光合作用过程中,叶绿体色素起着重要的作用.高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括叶绿素a,叶绿素b,β胡萝卜素和叶黄素四种. 叶绿素(chlorophylls)是叶绿酸的酯,它在植物进行光合作用中吸收可见光,并将光能转变为化学能.叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂.在绿色植物中叶绿素主要以叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)两种结构相似的形式存在,其差别仅是叶绿素a中一个甲基被叶绿素b中的甲酰基所取代。
三、实验装置四、实验操作步骤和内容：（一）步骤1、吸附剂的选择薄层色谱的吸附剂最常用的是氧化铝和硅胶。
1）、硅胶：“硅胶H”—不含粘合剂；“硅胶G”—含煅石膏粘合剂；其颗粒大小一般为260目以上。
颗粒太大，展开剂移动速度快，分离效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不理想。
化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因而Rf 值较小。
酸和碱> 醇、胺、硫醇> 酯、醛、酮> 芳香族化合物> 卤代物、醚> 烯> 饱和烃本实验选择的吸附剂为薄层色谱用硅胶G。
龙岩学院分析化学精品课程分析化学实验项目指导书 32、薄层板的制备（湿板的制备）薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。
薄层应尽量均匀且厚度要固定。
否则，在展开时前沿不齐，色谱结果也不易重复。
在烧杯中放入2g硅胶G，加入5—6ml 0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液，调成糊状。
将配制好的浆料倾注到清洁干燥的载玻片上，拿在手中轻轻的左右摇晃，使其表面均匀平滑，在室温下晾干后进行活化。
本实验用此法制备薄层板4片。
3、薄层板的活化将涂布好的薄层板置于室温凉干后，放在烘箱内加热活化，活化条件根据需要而定。
硅胶板一般在烘箱中渐渐升温，维持105—110℃活化30min。
氧化铝板在200℃烘4h可得到活性为Ⅱ级的薄板，在150—160℃烘4h可得活性为Ⅲ—Ⅳ级的薄板。
活化后的薄层板放在干燥器内保存待用。
4、点样先用铅笔在距薄层板一端1cm处轻轻划一横线作为起始线，然后用毛细管吸取样品，在起始线上小心点样，斑点直径一般不超过2mm。
若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。
若在同一板上点几个样，样点间距离应为1。
点样要轻，不可刺破薄层。
5、展开薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行。
为使溶剂蒸气迅速达到平衡，可在展开槽内衬一滤纸。
在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其高度不超过1cm。
将点好的薄层板小心放入层析缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。
盖好瓶盖，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快在板上标上展开剂前沿位置。
晾干，观察斑点位置，计算Rf值。
分离叶绿体色素的展开剂有:石油醚(60 ~ 90℃)-丙酮-乙醚(3:1:1);石油醚-丙酮(8:2);石油醚-乙酸乙酯(6:4);苯-丙酮(7:3)和石油醚(30 ~ 60℃)-丙酮-正丁醇(90:10:4.5)等.本实验将150 mL石油醚(60 ~ 90℃)-丙酮-乙醚(3:1:1)展开剂倒入层析缸中,并在层析缸的内壁四周贴一张5 cm高的滤纸,滤纸下部浸在展开剂中,盖好盖子平衡10~15 min.将点好样的硅胶板放入展开缸里,液面不能超过点样线,盖好盖子进行上行层析.待展开剂前沿上升到距硅胶板上端 1.5~2 cm时,取出硅胶板置于通风橱里晾干,可看到层析板上出现若干色素带,其排列顺序一般是β-胡萝卜素,去镁叶绿素,叶绿素a,叶绿素 b 和叶黄素等多条色带.用铅笔标记出样品斑点,计算各色素的比移值Rf.6、显色被分离物质如果是有色组分，展开后薄层色谱板上即呈现出有色斑点。
如果化合物本身无色，则可用碘蒸气熏的方法显色。
还可使用腐蚀性的显色剂如浓硫酸、浓盐酸和浓磷酸等。
对于含有荧光剂的薄层板在紫外光下观察，展开后的有机化合物在亮的荧龙岩学院分析化学精品课程分析化学实验项目指导书 4光背景上呈暗色斑点。
本实验样品本身具有颜色，不必在荧光灯下观察。
7、样品收集将层析板上分开的β-胡萝卜素,叶绿素a,叶绿素b的色带分别用干净的刮刀刮入试管中,加入5 mL丙酮提取,低温避光保存.8*、温度对薄层色谱分离的影响取两块1×5 cm 2 的商品硅胶板,点样后,以相同的展开剂,分别置于冰箱(4℃)和室温(20℃以上)展开.观察和对比它们的分离结果.(二)实验内容：（以下实验内容选做其一）1、检验甲基橙的纯度。
（通过与已知标准物对比的方法检验物质是否纯净）实验样品：甲基橙粗品（自制）、甲基橙纯品。
溶剂：乙醇：水=1：1展开剂：丁醇：乙醇：水=10：1：12、混合物的分离实验样品：圆珠笔芯油溶剂：95%乙醇展开剂：丁醇：乙醇：水=9：3：1（体积比）3、1%偶氮苯、1%间硝基苯胺、荧光黄(95%乙醇, 1mg/1ml)、次甲基蓝、环己烷:乙酸9:14、植物色素β-胡萝卜素,去镁叶绿素,叶绿素a,叶绿素b和叶黄素的提取与分离。
五、实验关键步骤：1、载玻片应干净且不被手污染，吸附剂在玻片上应均匀平整。
2、点样不能戳破薄层板面，各样点间距1—1.5cm，样点直径应不超过2mm。
3、展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。
否则，无法确定展开剂上升高度，即无法求得Rf值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。
六、思考题1、如何利用Rf 值来鉴定化合物？答：在条件完全一致的情况，纯碎的化合物在薄层色谱中呈现一定的移动距离，称比移值（Rf 值），所以利用薄层色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。
但影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。
所以，要获得重现的比移值就比较困难。
为此，在测定某一试样时，最好用已知样品进行对照。