天然产物化学 银杏内酯

天然产物银杏内酯研究概况

摘要：银杏内酯分子具有独特的十二碳骨架结构，嵌有一个叔丁基和六个五元环，包括一个螺壬烷，一个四氢呋喃环和三个内酯环。银杏酯对血小板活化因子(PAF)受体有强大的特异性抑制作用，其中银杏内酯的抗PAF活性最高。PAF是血小板和多种炎症组织分泌产生的一种内源性磷脂，是迄今发现的最有效的血小板聚集诱导剂，它与许多疾病的产生、发展密切相关。而银杏内酯目前被认为是最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂，其拮抗作用活性与化学结构密切相关。当内酯结构中R3为羟基或羟基数目增多时，对PAF的拮抗活性减弱;而当R2为羟基且R3为H时，则活性显著增强，其中以银杏内酯B对PAF产生的操拮抗作用最强，迄今对银杏内酯B的药理作用研究也最为集中。

关键字：理化性质提取分离及纯化药理作用

银杏（Ginkgobiloba L.）是我国古老树种之一，作为株罗纪的孑遗植物，基本保持了1.5亿年前的生态特征，因而成为一科一属一种的特殊植物。银杏主要含有黄酮、二萜内酯类化学成分。其中黄酮类化合物主要来源于银杏叶，含量较高，约占 2.5%—6%，种类约有50种之多。但目前的实验结果表明，此类化合物不大可能是银杏关键性的有效成分。20世纪80年代，研究发现银杏内酯是血小板活化因子（PAF）的强拮抗剂，对于心脑血管疾病具有显著的疗效，引起国际上银杏研究的高潮，其中的大部分研究是针对银杏内酯进行的。

理化性质

银杏内酯（ginkgolide）化合物属于萜类化合物，由倍半萜内酯和二萜内酯组成，是银杏叶中一类重要的活性成分。白果内酯(hilobalide;BB)属倍半萜内酯，是目前从银杏叶中发现的唯一的一个倍半萜内酯化合物。银杏内酯A(ginkgolide A；GA)、银杏内酯B(ginkgolide B；GB)、银杏内酯C(ginkgolide C；GC)、银杏内脂M(ginkgolide M；GM)、银杏内脂J(ginkgolide J；GJ)为二萜类化合物，其差别在于含有的羟基数目和羟基连接的位置不同。其分子结构图如下。

O O

Me

R 1H R 2H R 3

O O O O H

OH C(Me)3O

银杏内酯A OH H 银杏内酯B OH OH H

银杏内酯C OH OH OH

银杏内酯J OH H OH

银杏内酯M H OH OH H

R 1R 2R 3

银杏内酯的提取及纯化方法有：溶剂萃取法、柱提取法、溶剂萃取-柱提取法、超临界提取法及色谱或柱层析纯化法等。银杏提取物中内酯类成分的含量测定可采用HPLC-UV 法、HPLC-RI 法、GC 、HPLC-MS 、NMR 和生物测定方法等等，但因样品前处理技术不足，或因灵敏度不够，或稳定性和选择性相对较差，使结果均不太理想。目前，报道最有效的分析方法为HPLC-ELSD 法。检测器为蒸发光散射检测器(Evaporative Light-Scattering Detector ，ELSD)。这是一种HPLC 用的新通用质量型检测器，不受外部环境的干扰，流动相在检测器中全部挥发，不干扰检测。经过线形实验、回收实验、稳定性实验等证明：ELSD 检测银杏内酯的灵敏度和稳定性均能符合含量测定的要求，是一种较理想的简便实用的检测方法，其缺点主要是载气消耗较大。

银杏内酯的提取分离方法

1、溶剂法

银杏叶醇提物经石油醚脱脂后用乙酸乙酯萃取，萃取物经NaHCO3溶液洗涤除去酚性成分后，浓缩即得银杏内酯粗结晶， 经HPLC 检测含银杏内酯81.5%，产率为0.6%。

2、树脂吸附法

银杏叶醇提物依次经吸附树脂柱处理， 聚酰胺柱除鞣质，所得干浸膏经HPLC 测定含银杏内酯10.6%。

3、硅胶柱色谱法

Van Beek 等对银杏叶提取物进行溶剂处理后，在含有6.5%NaOAc 的硅胶柱上进行中压柱层析，可大量制备高纯度的银杏内酯A B C J 及白果内酯。

4、超临界流体萃取法

Chiu 等采用超临界二氧化碳流体从银杏叶中提取银杏内酯类成分。单独的二氧化碳流体并无作用，只有当加入乙醇作为改性剂时才能提取出来， 而且提取能力随着改性剂的增多而加强。

银杏内酯的药理作用

血小板活化因子(PAF)是一种由多种细胞产生又可作用于多种细胞的内源活性物质,具

有广泛的生物学作用。1985 年Piere G.Br aquat 发现银杏内酯是具有高度专属性的PAF 受体阻断剂, 它竞争性地抑制[ 3H] PAF与血小板膜受体结合, 其IC50 分别为:Ginkgol ide A : 0. 74 LM , Ginkgol ide B :0. 25LM, Ginkgol ide C: 7. 1LM 和Ginkgol ide J: 54. 0LM。其中BN52021( Ginkgol ide B) 活性最强。这一发现不仅推动了银杏内酯药理和临床的深入研究, 使之有望成为治疗许多疾病的新型药物, 还有助于阐明PAF在病理生理过程中的作用, 为PAF研究提供了有价值的参考。因此，从药理学和临床的研究方面而言, 银杏内酯类化合物是最先进的PAF拮抗剂。银杏内酯能竞争性地与PAF受体结合, 使PAF 失去作用, 从而表现出拮抗活性。其主要药理作用表现为:

1、对中枢神经系统的作用

PAF 是引起脑组织损伤的介质之一, 银杏内酯能有效地改变沙土鼠脑行为失调, 阻止脑损伤, 可用于中风的临床治疗。静注PAF 导致鼠脑脊髓炎严重恶化, 银杏内酯能阻止病情的恶化, 对治疗综合硬化症有效。研究表明, 沙土鼠脑中存在PAF 受体, 鼠脑能合成PAF, 在受到刺激时PA F 大大增多,PAF 作为神经调节剂, 通过改变受体的性质影响神经元传递作用。银杏内酯能拮抗PAF的作用, 对癫痫、焦虑不安等疾病有治疗作用。

2、抗炎作用

PAF 由多种炎症细胞( 包括中性粒细胞、巨噬细胞、嗜酸性细胞和血管内皮细胞等)和血小板产生, PAF 也可激活它们。对巴豆油所诱导的小鼠耳肿胀, 以消炎痛作对照,银杏内酯混合物0.2Lmol / L,抑制率48.1% ,等剂量的硬脂酰基卵磷脂(DPC)复合物抑制率达68. 5%,比消炎痛高57.4% 。

3、对缺血损伤的保护作用

在血液灌流不足的脑组织, 因血小板聚集可致多发性脑缺血, 也可导致中风,在缺血局部血小板聚集使得组织血流减少, 进而阻碍细胞机能的恢复。在某些病理情况下, 脑内PAF 量显著增加,与脑内PAF受体作用可致脑损伤, Ginkgo lide B 能明显改善缺血状态,对缺血引起的脑水肿、电解质紊乱、炎性细胞浸润、血小板聚集均有显著抑制作用。银杏内酯对其它形式的缺血损伤也有保护作用, 如Ginkg olide B 可保护自由基诱导的大鼠缺血再灌注肠粘膜损害, 也可用于防止器官移植中的再灌注损伤。

4、抗休克作用

休克是一个多因素参与的复杂病理过程, PAF 与休克的发生和发展关系密切。Ginkgol ide B 可显著降低脂多糖( LPS) 所致肺脉管系统和肺液平衡的破坏, 从而对羊因内毒素所致休克起到保护作用。Ginkgol ide B 对肾血管的收缩及抗原性休克引起的灌注液中组胺、血栓烷B2 ( T ×B2 ) 和慢反应物质A( SRS-A ) 水平的增高有明显拮抗作用, 亦可减少血栓素的释放。

5、对气管过敏性的作用

气管高反应性是哮喘的一个重要特征,PAF 是哮喘的重要介质之一, 可诱导支气管高反应。Ginkgo lide B 可干扰不同形式的豚鼠自动致敏反应, 逆转内毒素诱导的支气管对组胺的高反应性, 拮抗PAF 对豚鼠气管的作用, 抑制多种过敏反应, 对正常人摄入PAF 后引起的支气管收缩效应有部分保护作用。

6、对器官移植排斥反应的保护作用

Ginkgol ide B 可改善对肺的保护, 有利于肺长期保存后的肺移植, 这与移植肺的供氧、血管张力及顺应性的改善有关。Ginkgol ide B 能有效改善人肾移植后的肾功能, 可能与其预防移植器官缺血性再灌注损伤有关。研究表明, 口服银杏内酯可大大延长鼠移植皮肤的存活时间, 也延长从豚鼠到老鼠的异种移植心脏的存活时间。

7、其它作用

PAF 的生物学作用非常广泛, 在多种病理生理过程中具有重要意义。银杏内酯为PAF