乳腺癌HER2 FISH检测的问答

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乳腺癌HER2状态问题与解答(答医生)

什么是FISH?

FISH(荧光原位杂交)是指以标记荧光分子的DNA为探针而其结果于荧光显微镜下观察的一类杂交。“原位”是指固定于玻片标本的细胞核原有位置。

为了进行FISH分析,加热固定在玻片上的标本,使其染色体DNA伸展并将双链打开,令DNA探针易于与其结合,加上探针后冷却细胞,使DNA探针杂交于与其互补的靶序列,一旦杂交,探针上的荧光分子将于染色体上精确地显示靶DNA,依赖于靶DNA的设计,许多类型的遗传学改变都可以检测出来。

FISH的优势何在?

1)细胞内相对稳定的DNA靶;

2)逐个细胞定量分析遗传学改变;

3)在完整细胞内同时分析多种遗传学靶;

4)容易判读;

5)容易操作;

6)结果快速;

FDA批准的FISH检测HER2实验用于以下目的:

评价预后、基于阿霉素的化疗选择和赫赛汀治疗的选择。

DNA探针系统是怎样的?

FISH标本分析需进行:

1)肿瘤组织切片;

2)探针与切片上的肿瘤组织细胞核内的HER2基因序列杂交;

3)在荧光显微镜下观察结果

FISH信号判读应采用薄层切片。当处理肿瘤组织时,常会有“核截断”。因大多数细胞核约10微米厚,所以4-6μm切片最佳。

操作者以计数荧光信号来客观地分析结果。

FISH探针的标记有几种?

FISH已经是目前诊断实验室的主要技术之一,有两种标记探针的方法:直接标记和间接标记。

直接FISH:是采用了直接标记有荧光基团的探针,通过一步杂交,荧光信号即结合到靶序列上。这种方法步骤很少、简便且快速。非常适合临床诊断实验室。目前所做的HER2基因状态评价的探针就是采用了直接标记的方法。HER2基因评价由HER2基因特异性探针和17号染色体着丝粒探针共同完成。

间接FISH:是采用了半抗原标记的探针,多为地高辛或生物素标记,杂交后,以针对半抗原的荧光物质标记的抗体进行探针检测,例如采用抗地高辛抗体进行“夹层”分析。间接FISH大多需要封闭试剂和多个扩增步骤,常存在荧光背景问题。对于研究者来说,它有可以根据需要放大信号,价格相对低一些等特点。

为何评价17号染色体数目?

HER2基因位于17号染色体上,大约有47%的乳腺癌存在17号染色体异体性(aneusomy)。必须将17号染色体非整倍体(aneuploid)和真正的HER2基因扩增区分开。只有当HER2基因与17号染色体数目比值大于2时,才为HER2基因扩增。所以17号染色体着丝粒探针是杂交检测的内对照。

IHC及结果如何?

IHC是采用特异性抗体对玻片上的组织进行染色。病理学家可以通过IHC识别不同类型的肿瘤细胞,以利于更准确的最终诊断。IHC是目前HER2状态检测最常采用的方法,但有时采用抗体的不同、福尔马林和石蜡固定和贮存组织的过程,以及根据抗体染色后组织颜色的变化记分的主观性,都可能影响IHC的结果。

FISH检测乳腺癌HER2状态的意义何在?

通过FISH检测福尔马林固定、石蜡包埋的乳腺癌组织标本的HER2基因,在已知临床和病理信息的情况下,作为临床II期、淋巴结阳性乳腺癌病人的辅助预后因子。它可以帮助预测II期、淋巴结阳性且辅助环磷酰胺、阿霉素和5-氟尿嘧啶(CAF)化疗的乳腺癌病人的无病生存期和总生存期;它可以帮助评价是否采用赫赛汀(HERCEPTIN?或Trastuzumab)治疗。

什么是HER2/neu?

HER2/neu也叫做c-erbB2或HER2,是在调节细胞生长过程中起关键作用的基因,人类乳腺癌、卵巢癌和其它癌症都有HER2基因扩增,并且它在许多肿瘤的进展中起重要作用,该基因扩增,增加了mRNA的转录并继而导致基因产物过表达。大约25-30%乳腺癌有HER2基因扩增。检测HER2基因扩增在某些癌症的诊断、预后、选择适当的治疗方案和预测治疗效果等方面都是十分重要的。

HER2扩增的乳腺癌治疗重要性如何?

近年来,HER2扩增和随后的基因产物过表达已经成为乳腺癌预后和治疗的标记。该基因扩增与淋巴结阳性和淋巴结阴性的乳腺导管癌的快速增殖、无病生存期和总生存期短有关。随着单克隆靶向治疗药物如赫赛汀(Trastuzumab)的应用,准确的HER2评价更加重要。ASCD推荐每个原发乳腺癌都应做HER2评价。

HER2状态与选择阿霉素为基础的治疗的关系?

HER2扩增与阿霉素治疗反应之间的相关性已经得到证实。临床试验显示HER2扩增者得益于改进的强化剂量阿霉素为基础的治疗。阿霉素剂量增强对于无HER2扩增的病人来说,是无益的。

HER2状态与赫赛汀治疗的关系?

若要选择适于赫赛汀治疗的病人,必须进行HER2状态检测。最近,FDA批准Genentech的标签上增加了有关FISH检测HER2的注释。针对临床研究的660个病人(IHC 2+或3+)的回顾性分析数据证实,其肿瘤检测FISH(+)的病人比FISH(—)病人对赫赛汀治疗的受益更大。对于赫赛汀单药治疗来说,肿瘤检测为FISH(+)病人的总应答率为20%,而FISH(—)病人则无反应。

准确评价HER2状态的重要性何在?

专家已达成一致,HER2状态是阿霉素为基础的治疗反应的强有力的、独立的预测因子。目前HER状态已考虑视为乳腺癌选择许多辅助化疗的监护标准。准确评价HER2状态也有助于选择受益于赫赛汀治疗的病人。不正确的HER2状态评价意味着:假阳性可能导致不恰当的医疗决定,使病人得以不必要的治疗;假阴性可能使病人失去潜在有益的治疗。

应该评价HER2基因(DNA)还是其产物(蛋白质)?

DNA水平上过多的HER2基因拷贝数导致基因产物增多。直接在分子水平上的HER2评价优于抗体水平上的检测。在用赫赛汀单药治疗的IHC 2+和3+的男性乳腺癌病人中,仅FISH阳性者对药物有反应。

哪种方法检测HER2状态最准确?

目前,有两种方法检测HER2状态:一种方法是检测基因产物的基于抗体的免疫组化(IHC);另一种方法是直接检测HER2基因的荧光原位杂交(FISH)。两种技术都是常规采用福尔马林固定、石蜡包埋的乳腺组织。IHC已经广泛使用,问题是IHC和FISH所检测的结果哪个更准确。从临床病理的角度看,因IHC 固有的特点,其准确性上可能受到一些影响。组织的福尔马林固定对于稳定细胞形态非常重要,但对IHC结果所可能产生的某些变数是非实验室能控制的,尤其是福尔马林固定可能破坏HER2抗原,导致15-20%的假阴性。为了最大程度上减少此误差,采用了抗原修复技术,但不可避免地有可能导致假阳性的产生。另外,上述的17号染色体的多体性(polysomy)也是产生假阳性的原因,这种假阳性与IHC操作完全无关,是肿瘤固有的遗传学特征之一。FISH技术的靶是分子水平上稳定的DNA,福尔马林固定、石蜡包埋等必需的组织处理过程对DNA影响很小,弥补了IHC的不足。由于FISH结果分析是荧光信号计数,所以

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