IL-1β促肝星状细胞增殖与JNK_AP-1信号转导通路的关系

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ＪＮＫ通路后，ＩＬ－ｌＢ的促Ｈｓｃ增殖作用受到抑制。对

照组吸光度为１．５６０±０．１ｌＯ。而经ＳＰ６００１２５预处理

的各组细胞，吸光度均减低，ＳＰ６００１２５浓度分别为１０、

２０、４０肛ｍｏｌ／Ｌ时，吸光度分别为１．４２７±Ｏ．１１３、Ｏ．７７２

±０．０９３、０．６７５±０．０７４，与对照组相比其增殖反应均

明显降低（Ｐ＜０．０５、０．０ｌ、０．０１），且随ｓＰ６００１２５浓度增加，抑制作用愈加明显，ｓＰ６００１２５浓度分别为１０、２０、４０肛ｍｏｌ／Ｌ时，增殖抑制率分别为８．５２％、５０．５ｌ％、５６．７３％。

２．３ＩＬ－ｌＢ激活大鼠ＨＳＣＪＮＫ通路的动力学观察

Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ印迹显示，ＩＬ—ｌＢ同时激活ＪＮＫ蛋白的两种同型体，在大约４６ｋＤ及５５ｋＤ位置出现两条杂交带即ｐ—ＪＮＫｌ和ｐ．ＪＮＫ２，在大约４３ｋＤ位置出现内参照Ｂ．ａｃ—ｔｉｎ杂交带。将各杂交带进行灰度分析，结果显示：ＩＬ．１Ｂ可呈时间依赖性激活Ｈｓｃｓ中ＪＮＫ蛋白。未经ＩＬ．１Ｂ刺激的对照组ＪＮＫ活性为０．９８２±Ｏ．２９９；ＩＬ．１Ｂ（１０斗ｇ／Ｌ）刺激ＨＳＣ５ｍｉｎ后，即见ＪＮＫ活化增强（１．５０１±Ｏ．７２０），但无统计学意义；１５ｍｉｎ时明显增强（２．１３３±０．８８２，Ｐ＜Ｏ．０１）；３０ｍｉｎ时达到高峰（３．３６０±Ｏ．４５２，Ｐ＜０．０１），随后有所降低，６０ｍｉｎ时仍保持较高的活化状态（２．１８ｌ±０．７８９，Ｐ＜０．０１），１２０ｍｉｎ后则基本恢复初始水平（１．３８５±０．３６８）（见图１）。

图ｌＩＬ－ｌＢ作用大鼠ＨＳＣ时ＪＮＫ活性的时效变化

ＦｉｇｌＩＬ－ｌｐａｃｔｉＶａｔｅＪＮＫｉｎｔｉｍｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎⅡｅｒｉｎｒａｔＨＳＣ

２。４ＩＬ－ｌＢ作用大鼠ＨＳＣ后ＡＰ－ｌ活性的时效观察ＥＭＳＡ结果显示，对照组ＨＳＣ内有低水平的ＡＰ—ｌ活化（２４１．８ｌ±５３．０８），ＩＬ—ｌｐ（１０斗ｇ／Ｌ）作用Ｈｓｃｌｈ后，ＡＰ一１与寡核甘酸探针结合的滞后带较前明显增粗、变黑（５８４．６８±６５．０６，Ｐ＜０．０１），２ｈ达到高峰（６４１．３８±５０．９ｌ，Ｊ｝）＜０．０１），４ｈ有所同落但仍明显高于对照组（５５５．６４±４１．３９，尸＜０．０１），而经ＳＰ６００１２５（１０斗ｍｏｌ／Ｌ）预处理ＨＳＣ３０ｍｉｎ，再加入ＩＬ—ｌＢ（１０¨ｇ／Ｌ）培养２ｈ后，ＡＰ．１活性较ＩＬ一１ｐ２ｈ组明显受到抑制（３２５．４４±３３．７７，Ｐ＜０．０１）（见图２）。

３讨论

多种损害肝脏因素导致肝损伤后，在肝细胞炎症、环死刺激下，相关细胞分泌多种细胞因子，如转化生长因子（ＴＧＦ）、血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、ＩＬ一１、ＩＬ一６等，这些细胞因子所蕴涵的信

图２ＩＬ－ｌｐ促进ＨＳＣＡＰ－ｌ活化及ＳＰ６００１２５抑制ＩＬ·ｌＢ诱导的ＡＰ·ｌ活性ｌ：阴性对照；２：对照组；３：ＩＬ—ｌＢｌｈ；４：ＩＬ－ｌＢ２ｈ；５：ＩＬ·ｌＢ４ｈ；６：ｓＰ６００１２５＋ＩＬ—ｌＢ２ｈ；７：竞争实验

Ｆｉｇ２ＩＬ－ｌｐａｃｔｉＶａｔｅｄＡＰ－１ｉｎｔｉｍｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒａｎｄＳＰ６００１２５ｊｎｈｉｂｉｔｅｄＩＬ－ｌＢ－ｉｎｄｕｃｅｄＡＰ－ｌｂｉｎｄｉｎｇｉｎＩ’ａｔＨｓＣｓ１：ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｍｌ；２：ｃｏｎｔｍｌ；３：ＩＬ－ｌＢ１ｈ；４：ＩＬ—ｌｐ２ｈ；５：ＩＬ－ｌ母４ｈ；６：ＳＰ６００１２５＋ＩＬ—ｌＢ２ｈ；７：ｂｉｏｔｉｎ·ＩａｂｅＩｅｄＡＰ—ｌＤＮＡｐｌｕ８ｕｎｌａｂｅｌｅｄＡＰ一１ＤＮＡ（ｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒ）

息，需通过ＨＳＣ胞内信号转导系统传递，在某些转录因子的作用下，转导信号入核，从而启动ＤＮＡ复制、转录及翻译表达过程，实现ＨＳＣ活化、增殖、转型并分泌ＥＣＭ，最终导致肝纤维化的发生＂１。

ＩＬ．１为一种具有多种生物学功能的强有力的炎性细胞因子，几乎作用于所有体内细胞，调节炎症及多种反应。曾有研究证实，ＩＬ—ｌａ作用于ＨＳＣ，可使细胞分裂增加１６０％。ＩＬ．１ｄ与ＩＬ—ｌＢ的抗原性不同，但生物学活性相似。ＩＬ—ｌｐ是否也具有促Ｈｓｃ增殖作用尚乏报道。本研究结果显示，ＩＬ—ｌＢ作用于ＨＳＣ后，ＨＳＣ增殖反应明显增强。表明ＩＬ一１Ｂ也具有促ＨＳＣ增殖作用，为肝纤维化发生的重要致病因子。

ＭＡＰＫ是生物体内重要的信号转导系统之一，参与介导细胞生长、分裂、增殖等多种过程。在哺乳动物细胞中已成功克隆了ＥＲＫ、ＪＮＫ、ｐ３８ＭＡＰＫ、ＥＲＫ５四个ＭＡＰＫ亚族。这些ＭＡＰＫ亚族能被多种炎性刺激所激活，并对炎症的发生、发展起重要作用”芦’。Ｋｉｄａ等¨１发现，ＩＬ．１可通过ＪＮＫ通路上调齿龈成纤维细胞表达基质金属蛋白酶一ｌ（ＭＭＰｌ）及前列腺素Ｅ２。而ＩＬ一１Ｂ促Ｈｓｃ增殖及肝纤维化发牛的信号转导通路是否有ＪＮＫ的参与鲜有报道。本研究显示，ＩＬ—ｌＢ可在短时间内激活ＪＮＫ通路，刺激５ｍｉｎ后，ＪＮＫ开始活化，３０ｍｉｎ时达到高峰，随后逐渐降低，２ｈ后基本恢复初始水平。表明ＩＬ—ｌＢ可通过激活ＪＮＫ发挥生物学作用。

ＡＰ—ｌ作为转录调节蛋白，将细胞外刺激信号传导至细胞核，激活ＡＰ—ｌ位点的靶基因转录。ＡＰ一１为Ｊｕｎ家族成员（ｃ．ｊｕｎ、ＪｕｎＢ、ＪｕｎＤ）组成的同源二聚体，或Ｊｕｎ家族与Ｆｏｓ家族（ｃ．ｆｏｓ、ＦｏｓＢ、△ＦｏｓＢ、Ｆｒａｌ、Ｆｒａ２）组成的异源二聚体。许多基冈（如ＴＧＦ．Ｂ、纤维连接蛋白、层连蛋白、ＴＩＭＰ）的启动子中均存在与ＡＰ—ｌ结合的ＤＮＡ序列。ＡＰ．１与之结合即可调节该基因的转

录。因此ＡＰ．１活化在细胞增殖、转化及ＥＣＭ合成中万方数据

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IL-1β促肝星状细胞增殖与JNK/AP-1信号转导通路的关系

作者：张亚平， 姚洪森， 耿丽君， 姚希贤， ZHANG Yaping， YAO Hongsen， GENG Lijun，YAO Xixian

作者单位：张亚平,ZHANG Yaping(河北医科大学第三医院儿科,河北,石家庄,050051)， 姚洪森,YAO Hongsen(武警河北总队门诊部)， 耿丽君,GENG Lijun(河北省滦南县人民医院ICU)， 姚希

贤,YAO Xixian(河北医科大学第二医院消化内科)

刊名：

胃肠病学和肝病学杂志

英文刊名：CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY

年，卷(期)：2009,18(10)

本文链接：/Periodical_wcbxhgbxzz200910009.aspx