叶酸Folate定量测定-检验科免疫室作业指导书

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CA153定量测定-检验科免疫室作业指导书

CA153定量测定-检验科免疫室作业指导书

CA153定量测定1.原理抗原或抗体包被的微粒子,是由多孔高分子粒子制成,具有很好的亲水性,悬浮性极佳,微粒子可与玻璃纤维不可逆结合,从而提高了反应的特异性。

标本与微粒子以一定比例混合,标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应,以反应终了后,反应液的一部分被移到玻璃纤维上,洗去未反应的被检物质与其它的不要成份,加入基质液,基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferone。

当该物受荧光照射后就产生荧光,测定荧光强度的分化率,从而决定被测物质的浓度。

2.标本采集:2.1标本采集前病人准备:受检者应空腹。

2.2标本种类:血清或血浆。

2.3标本要求:采集血清样本,取被检者静脉血,用无菌取血针抽取病人静脉血3ml,收集干燥试管中,室温放置不超过8小时,2000转/分离心20分钟备用.采集血浆样本,用无菌取血针取被检者静脉血3ml,收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中,室温放置不超过8小时,2000转/分离心20分钟备用。

3.标本储存:待测样本室温不超过8小时,4-8℃不超过72小时,-20℃可长期保存,避免反复冻融。

4.标本运输:室温运输。

5.标本拒收标准:细菌污染,严重溶血或脂血标本不能作测定。

6.试剂:6.1试剂名称:CA153诊断试剂盒。

6.2试剂生产厂家:美国雅培制药有限公司6.3包装规格:100Test/kit6.4试剂盒组成:CA153诊断试剂。

6.5试剂储存条件及有效期:试剂盒贮存2-8℃条件,有效期12个月。

7.仪器设备:7.1仪器名称:AXSYM免疫自动分析仪7.2仪器厂家:美国雅培公司7.3仪器型号:AXSYMTm型7.4仪器校准:本仪器校准由厂家工程师负责校准。

8.操作步骤:8.1样本处理:取待测样本血清或血浆置于样本杯中(不能有纤维蛋白,不能有气泡)。

8.2仪器准备:检查纤维杯,反应杯数量满足实验需要,废物桶和废液桶是否连接好,仪器的光路是否正常,环境温度是否符合要求,打印机的连接。

检验医学SOP文件4--免疫室作业指导书

检验医学SOP文件4--免疫室作业指导书

ISO15189质量管理体系范本文件(第四册)免疫室作业指导书文件编号:ABCD-3-MY-01~52第A版编制:审核:批准:生效日期:2015年4月8日ABCD人民医院检验科目录修订页血清乙型肝炎病毒表面抗原检测(ELISA)1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体,配以酶标记抗体(HBsAb-HRP)及TMB等其它试剂,采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝表面抗(HBsAg)。

2.标本采集2.1 采集前病人准备:受检者应空腹2.2 标本种类:血清或血浆2.3 标本要求:采集病人静脉血3ml(可用EDTA抗凝),室温放置不超过4小时,分离血清备用。

3.标本储存:2-8℃保存不应超过1周,-20℃不应超过3个月,-70℃长期保存,应避免反复冻融。

4.标本运输:密封,室温运输。

5.标本拒收标准:污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

6.试剂6.1试剂名称:乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒6.2试剂生产厂家:英科新创(厦门)科技有限公司。

6.3包装规格:96Test/Kit6.4试剂盒组成:HBsAg微孔板,HBsAg酶标记抗体,HBsAg阳性对照血清,HBsAg阴性对照血清,浓缩洗涤液,底物A,底物B,终止液,封口膜,自封袋。

6.5试剂储存条件及有效期:2-8℃避光保存,有效期9个月。

7.仪器设备7.1仪器名称:自动酶标仪7.2仪器厂家:Rayto7.3仪器型号:RT-21008.操作步骤8.1平衡:将试剂盒各组分取出,平衡至室温(18-25℃),微孔板开封后,余者及时以自封袋封存。

8.2配液:浓缩洗涤液配制前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。

8.3编号:将微孔条固定于支架,按序编号。

8.4加样:分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50μl于相应孔中。

8.5加酶:分别在每孔中加入酶标记抗体50μl,轻拍混匀。

8.6温育:置37℃温育60分钟,室温平衡5分钟。

叶酸检测作业指导书

叶酸检测作业指导书
货号03005712190,ProbeWash M, 12 x70 mL 清洗液,用于在检测完毕后或更换试剂时清洗系统。
货号12102137001,分析杯/分析吸头 组合装 M, 48 分析杯x 84 反应管或加液器吸头,废物袋
货号03023150001, WasteLiner,废物袋
货号03027651001, SysClean 适配器M
5.操作方法
要获得最佳的测定结果,请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导,并参照分析仪特定检测的操作手册。
在使用前分析仪自动使微粒处于悬浮状态。通过各试剂条形码可读取其详细实验参数。在少数情况下,分析仪无法自动读取信息时,请输入标签上的15位数字序列。
E170及Elecsys2010分析仪:将各试剂降温至20°C左右,放到分析仪的试剂盘(20°C)上,
避免泡沫产生。分析仪将自动调节反应温度及各试剂瓶瓶盖的开关状态。
Modular Analytics E170免疫分析仪所需材料:
货号12135019190, ProCell M, 1 x 2 L系统缓冲液
货号12135027190, CleanCell M, 1 x 2 L检测池洗液
货号03023141001, PC/CC杯, 50杯用于在测定前预热Procell M及Cleancell M。
将反应液吸入检测池中,检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过ProCell 除去。在电极上加以一定的电压,使复合体化学发光,用光电倍增器检测发光的强度。
通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果,定标曲线是通过2点定标点和试剂条形码上获得的主曲线生成的。
2.标本要求
请勿使用血浆。
稳定性:在15–25°C可保存2小时,在-20°C可保存1月,只可冻溶一次14。避光。如果不是立即检测的样本,请放置于2-8°C。使用分离胶的试管收集血清的稳定性:2-8°C24小时。

医院检验中心铁蛋白叶酸VitB12测定标准操作程序

医院检验中心铁蛋白叶酸VitB12测定标准操作程序

医院检验中心铁蛋白、叶酸、VitB12测定标准操作程序(SOP)1.该SOP变动程序
本SOP因试剂说明、仪器操作程序的修改或其他原因所致的改动,可由化学发光免疫测定技术主管修改,并报经科主任批准签字。

2.操作方法
(1)样品收集和处理
样品类型:血清,至少400μl。

严重溶血标本拒收。

保存方法:血清室温下放置不超过8小时,2-8℃冷藏不超过48小时,超过应在-20℃以下冷冻。

样品
只能冷冻1次,且复融后应彻底混匀。

(2)试剂 (试剂、定标液、质控品均由BECKMAN公司提供) 铁蛋白、叶酸、VitB12检测试剂。

(3)定标
当使用新批号的试剂时需先定标,详见附表。

事先将标准曲线条码和定标液浓度条码扫描入仪器。

(4)质控
定标后必须做质控,判断样品测值是否准确也可做质控,事先将质控物浓度输入仪器。

(5)上机检测
参见ACCESS仪器标准操作程序。

3.参考值
铁蛋白男性:22-322μg/L 女性:10-291μg/L
叶酸 2.6-20.0μg/L
VB12 211-911ng/L
4.相关技术指标
项目铁蛋白叶酸VB12
测定范围 0.5-1650 0.25-20 20-2000 灵敏度 0.5 0.25 20
5.本SOP不尽之处请详阅相关项目试剂说明书。

叶酸代谢能力基因检测操作流程

叶酸代谢能力基因检测操作流程

MTHFR C677T , MTHFR A1298C, MTRR A66G基因检测操作流程实验流程一、操作步骤适用仪器:普通PCR仪样本要求:EDTA抗凝剂的静脉全血(100µl),室温保存不超过7天, 2~8℃保存不超过1个月,-20℃保存不超过3个月,反复冻融次数不超过5次;DNA的浓度应不低于5ng/μl, A260/ A 280应在1.6~2.0之间。

有血块的样本需经匀浆处理或用组织研磨仪研磨处理后再进行全血DNA的提取。

检验方法:(试剂盒中的检本测卡、阳性/阴性对照卡上标识解释如下:M表示突变型,WT表示野生型,C表示质控线,T表示检测线。

)A:样本DNA的制备试剂盒准备工作:1、清洗液BW-I:用50 ml量筒分别移取35 ml无水乙醇(分析纯)和35 ml异丙醇加入至清洗液BW-I试剂瓶中,颠倒混合均匀,在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期,备用。

2、清洗液BW-II:用50 ml量筒移取49 ml无水乙醇加入至清洗液BW-II试剂瓶中,颠倒混合均匀,在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期,备用。

3、蛋白酶K准备:取出蛋白酶K,室温解冻,涡旋混匀后备用。

4、磁性微粒准备:将磁性微粒涡旋混匀,保证均一。

实验操作步骤:1.将20 μl蛋白酶K溶液加入2 ml 离心管的管底。

依次加入100 μl全血、200 μl裂解液BL,用涡旋振荡器混合15 sec(以下简称涡旋混匀),56 ℃水浴20 min。

2.向步骤1裂解处理的样品中依次加入300 μl结合液BI、25 μl的磁性微粒(移取前必须充分涡旋混匀),涡旋混匀,室温静置5 min。

磁性分离5 min,弃上清。

3.从磁性分离器上取出离心管,加入400 μl清洗液BW-I,涡旋混匀,磁性分离至上清澄清(期间上下颠倒数次,以清洗离心管管壁),弃上清;重复本步操作,以400μl清洗液BW-I重复清洗一次。

4.从磁性分离器上取出离心管,加入400 μl清洗液BW-II,涡旋混匀,磁性分离至上清澄清(期间上下颠倒数次,以清洗离心管管壁),弃上清(尽可能弃去所有的清洗液BW-II)。

ISO实验项目

ISO实验项目
28
乙肝病毒核酸扩增荧光检测
5.5
检验程序
29
尿亚硝酸盐定性测定(干法学法
29
血清二氧化碳酶试剂法测定
29
丙肝病毒核酸扩增荧光检测
5.6
检验程序的质量保证
30
凝血酶原时间(PT)测定
30
血清糖化蛋白四氮唑蓝法测定
30
结核杆菌核酸扩增荧光检测
5.7
检验后程序
31
活化部分凝血活酶时间测定
31
尿液或脑脊液总蛋白测定
9
检验试剂耗材控制程序
4
血清乙型肝炎病毒e抗体检测
56
AU1000 ISE分析仪操作维护规程
5
尿液采集
10
医疗咨询服务管理程序
5
血清乙型肝炎病毒核心抗体检测
57
AU1000生化分析仪操作维护规程
6
粪便采集
11
投诉处理程序
6
甲型肝炎病毒--IgM检测
58
电泳仪操作维护规程
7
前列腺液采集
12
不符合检验工作程序
1
患者采血前的准备
6
新检验项目管理程序
1
血清乙型肝炎病毒表面抗原检测
53
血气分析仪操作维护规程
2
静脉血采集
7
委托实验管理程序
2
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测
54
Medical低温冰箱操作维护规程
3
末梢血采集
8
仪器设备采购控制程序
3
血清乙型肝炎病毒e抗原检测
55
MEDICA 90纯水机操作维护规程
4
动脉血采集
51
免疫学检验室间质量评价(EQA)

FPSA定量测定-检验科免疫室作业指导书

FPSA定量测定-检验科免疫室作业指导书

FPSA定量测定1.原理抗原或抗体包被的微粒子,是由多孔高分子粒子制成,具有很好的亲水性,悬浮性极佳,微粒子可与玻璃纤维不可逆结合,从而提高了反应的特异性。

标本与微粒子以一定比例混合,标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应,以反应终了后,反应液的一部分被移到玻璃纤维上,洗去未反应的被检物质与其它的不要成份,加入基质液,基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferone。

当该物受荧光照射后就产生荧光,测定荧光强度的分化率,从而决定被测物质的浓度。

2.标本采集:2.1标本采集前病人准备:受检者应空腹。

2.2标本种类:血清或血浆。

2.3标本要求:采集血清样本,取被检者静脉血,用无菌取血针抽取病人静脉血3ml,收集干燥试管中,室温放置不超过8小时,2000转/分离心20分钟备用.采集血浆样本,用无菌取血针取被检者静脉血3ml,收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中,室温放置不超过8小时,2000转/分离心20分钟备用。

3.标本储存:待测样本室温不超过8小时,4-8℃不超过72小时,-20℃可长期保存,避免反复冻融。

4.标本运输:室温运输。

5.标本拒收标准:细菌污染,严重溶血或脂血标本不能作测定。

6.试剂:6.1试剂名称:F-PSA诊断试剂盒。

6.2试剂生产厂家:美国雅培制药有限公司6.3包装规格:100Test/kit6.4试剂盒组成:F-PSA诊断试剂.6.5试剂储存条件及有效期:试剂盒贮存2-8℃条件,有效期12个月.7.仪器设备:7.1仪器名称:AXSYM免疫自动分析仪7.2仪器厂家:美国雅培公司7.3仪器型号:AXSYMTm型7.4仪器校准:本仪器校准由厂家工程师负责校准。

8.操作步骤:8.1样本处理:取待测样本血清或血浆置于样本杯中(不能有纤维蛋白,不能有气泡)。

8.2仪器准备:检查纤维杯,反应杯数量满足实验需要,废物桶和废液桶是否连接好,仪器的光路是否正常,环境温度是否符合要求,打印机的连接。

Folate中文说明书

Folate中文说明书

Elecsys2010分析仪需要· Elecsys系统缓冲液(ProCell)货号11662988· Elecsys 测量池清洗液(CleanCell)货号11662970· Elecsys 添加剂液(SysWash)货号11930346· Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean) )货号11933159· Elecsys 1010反应杯(Assay Cup) 货号11706829Elecsys 2010反应杯(Assay Cup) 货号11706802· Elecsys 2010吸样头(Assay Tip) 货号11706799E170分析仪需要· Elecsys系统缓冲液(ProCell M)货号12135019· Elecsys测量池清洗液(CleanCell M)货号12135027· Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯(PC/CC-Cup)货号03023141· Elecsys反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M)货号12102137· Elecsys废物盒(wasteliner)货号03023150· Elecsys系统清洗液支架(SysClean Adapter M) )货号03027651各种分析仪均适用的材料· Elecsys 系统清洗液(SysClean) 货号11298500 方法:按仪器操作说明进行操作。

检查试剂与消耗品是否充足。

使用前需混匀微粒。

仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数,不需手工输入。

如果特殊情况下仪器无法阅读条形码,可以手工输入15位数字。

Elecsys2010和E170:将冷藏试剂预温到20 度后放置于仪器的试剂盘上,避免产生泡沫。

植物叶酸FA酶联免疫分析

植物叶酸FA酶联免疫分析

植物叶酸(FA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:96T0.5μg/L -14μg/L使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中叶酸(FA)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物叶酸(FA)水平。

用纯化的植物叶酸(FA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入叶酸(FA),再与HRP标记的叶酸(FA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的叶酸(FA)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物叶酸(FA)浓度。

试剂盒组成标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

B12定量测定-检验科免疫室作业指导书

B12定量测定-检验科免疫室作业指导书

B12定量测定1.原理抗原或抗体包被的微粒子,是由多孔高分子粒子制成,具有很好的亲水性,悬浮性极佳,微粒子可与玻璃纤维不可逆结合,从而提高了反应的特异性。

标本与微粒子以一定比例混合,标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应,以反应终了后,反应液的一部分被移到玻璃纤维上,洗去未反应的被检物质与其它的不要成份,加入基质液,基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferone。

当该物受荧光照射后就产生荧光,测定荧光强度的分化率,从而决定被测物质的浓度。

2.标本采集:2.1标本采集前病人准备:受检者应空腹2.2标本种类:血清或血浆2.3标本要求:采集血清样本,取被检者静脉血,用无菌取血针抽取病人静脉血3ml,收集干燥试管中,室温放置不超过8小时,2000转/分离心20分钟备用。

采集血浆样本,用无菌取血针取被检者静脉血3ml,收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中,室温放置不超过8小时,2000转/分离心20分钟备用。

3.标本储存:待测样本室温不超过8小时,4-8℃不超过72小时,-20℃可长期保存,避免反复冻融。

4.标本运输:室温运输。

5.标本拒收标准:细菌污染,严重溶血或脂血标本不能作测定。

6.试剂:6.1试剂名称:B12诊断试剂盒。

6.2试剂生产厂家:美国雅培制药有限公司6.3包装规格:100Test/kit6.4试剂盒组成:B12诊断试剂6.5试剂储存条件及有效期:试剂盒贮存2-8℃条件,有效期12个月。

7.仪器设备:7.1仪器名称:AXSYM免疫自动分析仪7.2仪器厂家:美国雅培公司7.3仪器型号:AXSYMTm型7.4仪器校准:本仪器校准由厂家工程师负责校准8.操作步骤:8.1样本处理:取待测样本血清或血浆置于样本杯中(不能有纤维蛋白,不能有气泡)。

8.2仪器准备:检查纤维杯,反应杯数量满足实验需要,废物桶和废液桶是否连接好,仪器的光路是否正常,环境温度是否符合要求,打印机的连接。

叶酸检验操作规程

叶酸检验操作规程

1 感官要求取10g被测样品,置于洁净的白瓷盘中,用肉眼在自然光线下观察其色泽、组织形态、杂质,品尝其滋味,嗅其气味。

2一般规定本标准所用试剂除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 GB/T 6682—2008中规定的三级水。

试验方法中所需标准滴定溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时,均按GB/T 601、GB/T 603之规定制备。

3 鉴别试验3.1 试剂和材料氢氧化钠溶液:c(NaOH)=0.1 mol/L。

3.2 仪器和设备紫外分光光度计,附1㎝吸收池。

3.3 紫外吸收试验称取实验室样品,加氢氧化钠溶液制成每 1 mL中含10 μg实验室样品的溶液,用紫外分光光度计测定,在 256 nm±2 nm,283 nm±2 nm,365 nm±4 nm 的波长处有最大吸收,在 256 nm与365nm波长处的吸光度比值应为 2.8~3.0。

4 叶酸的测定4.1 试剂和材料4.1.1 甲醇:色谱级。

4.1.2 磷酸二氢钾。

4.1.3 氢氧化钾溶液:c(KOH)=0.1 mol/L。

4.1.4 氨水溶液:0.5→100。

4.1.5 叶酸对照品。

4.2 仪器和设备高效液相色谱仪。

4.3 色谱分析条件推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表 A.1,叶酸典型高效液相色谱图参见附录 B,其他能达到同等分离程度和柱效的色谱柱和色谱条件均可使用。

表1色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱柱长 25cm,柱内径 4.6mm,十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。

流动相6.8g磷酸二氢钾与 70 mL氢氧化钾溶液,加水稀释至 850 mL,并调节 pH至 6.3±0.1,加 80 mL甲醇,用水稀释成 1000 mL的溶液。

流速 1mL/min。

检测波长 254 nm。

柱温 30℃,控制精度±1℃。

4.4 分析步骤4.4.1 对照品溶液的制备:称取约 10 mg叶酸对照品,精确至 0.02 mg,置 50 mL容量瓶中,加 30 mL 氨水溶液溶解后,用水稀释至刻度,摇匀。

植物叶酸FA酶联免疫分析

植物叶酸FA酶联免疫分析

植物叶酸(FA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:96T0.5μg/L -14μg/L使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中叶酸(FA)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物叶酸(FA)水平。

用纯化的植物叶酸(FA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入叶酸(FA),再与HRP标记的叶酸(FA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的叶酸(FA)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物叶酸(FA)浓度。

试剂盒组成标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。

加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3。

8.洗涤:操作同5。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

叶酸检验操作规程

叶酸检验操作规程

1 感官要求取10g被测样品,置于洁净的白瓷盘中,用肉眼在自然光线下观察其色泽、组织形态、杂质,品尝其滋味,嗅其气味。

2一般规定本标准所用试剂除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 GB/T 6682—2008中规定的三级水。

试验方法中所需标准滴定溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时,均按GB/T 601、GB/T 603之规定制备。

3 鉴别试验3.1 试剂和材料氢氧化钠溶液:c(NaOH)=0.1 mol/L。

3.2 仪器和设备紫外分光光度计,附1㎝吸收池。

3.3 紫外吸收试验称取实验室样品,加氢氧化钠溶液制成每 1 mL中含10 μg实验室样品的溶液,用紫外分光光度计测定,在 256 nm±2 nm,283 nm±2 nm,365 nm±4 nm 的波长处有最大吸收,在 256 nm与365nm波长处的吸光度比值应为 2.8~3.0。

4 叶酸的测定4.1 试剂和材料4.1.1 甲醇:色谱级。

4.1.2 磷酸二氢钾。

4.1.3 氢氧化钾溶液:c(KOH)=0.1 mol/L。

4.1.4 氨水溶液:0.5→100。

4.1.5 叶酸对照品。

4.2 仪器和设备高效液相色谱仪。

4.3 色谱分析条件推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表 A.1,叶酸典型高效液相色谱图参见附录 B,其他能达到同等分离程度和柱效的色谱柱和色谱条件均可使用。

表1色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱柱长 25cm,柱内径 4.6mm,十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。

流动相6.8g磷酸二氢钾与 70 mL氢氧化钾溶液,加水稀释至 850 mL,并调节 pH至 6.3±0.1,加 80 mL甲醇,用水稀释成 1000 mL的溶液。

流速 1mL/min。

检测波长 254 nm。

柱温 30℃,控制精度±1℃。

4.4 分析步骤4.4.1 对照品溶液的制备:称取约 10 mg叶酸对照品,精确至 0.02 mg,置 50 mL容量瓶中,加 30 mL 氨水溶液溶解后,用水稀释至刻度,摇匀。

FOL操作流程

FOL操作流程

1 目的规范叶酸(FOL)检测实验,确保检测结果的准确性和重复性2 方法化学发光酶免测定法(CLCIA)3原理固相、竞争化学发光免疫量度检测。

将经过处理的标本和碱性磷酸酶标记的抗配基缓冲液以及叶酸结合蛋白加入到含有鼠单克隆抗叶酸结合抗体中。

形成抗原-抗体复合物,并固定在小珠上。

通过离心去除游离的部分。

加入发光底物产生光子。

光的强度与标本中的FOL的含量成反比。

根据校准后的标准曲线求出标本中的FOL的含量。

4标本4.1标本的类型:血清或肝素血浆4.2标本的采集4.2.1 静脉采血(避免溶血),收集至冰冻的EDTA试管,注明收集时间。

收集过程应保持在冰浴中进行。

4.2.2 标本用量样本预处理步骤需要200μL 的血清、血浆或溶血液样本。

单次检测需要100μL 经处理的样本:样本杯中经处理样本的加样量必须超过样本总用量至少250μL。

4.3 标本的保存4.3.1 如果样本在8小时内不进行实验,分装后-20℃保存:可稳定6~8周。

4.4 标本采集的注意事项4.4.1 使用低温离心机分离血浆和血细胞,然后立即用塑料或硅化玻璃管分装冷冻保存(不要使用未硅化的玻璃试管)。

推荐使用超速离心清除脂血样本。

溶血样本提示样本在送达实验室之前处理不当,因此检测结果将受到影响,应予以注意4.4.2 只能一次融解(室温)使用。

避免样本过度光线直射。

4.5 标本的预处理4.5.1 工作液配制注意:需要同时检测叶酸和维生素B12的病人样本预处理时请使用下面介绍的工作液。

每种组分的数量基于实验数量决定。

每个检测所需的以毫升表示的体积数列于下表,一定要保证用略大于待测样本数的数值乘以下列体积数(所提供的组分数量足可配制出20%余量的工作液)。

重要提示:工作液必须当天新鲜配制。

如果不立即使用,2~8℃冷藏不要超过24小时。

4.5.2 样本预处理4.5.2.1 向预先准备的试管中分别加入200μL校正、质控或病人样本-包括血清、血浆和溶血产物。

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叶酸Folate定量测定
1.原理
反应孔中的玻璃纤维先包被了高分子的四胺化合物,从而使纤维网的表面带正电,得以能够捕捉带负电的反应复合物,通过静电正负离子结合的原理,使反应复合物吸附在纤维上。

反应的复合物是通过抗原抗体反应的原理,并联以荧光标记物,这个复合物通过连接负电的多聚阴离子复合物,吸附到带正电的纤维表面,经过一系列彻底清洗等步骤后,测定荧光强度变化率,从而决定被测物质的浓度。

2.标本采集:
2.1标本采集前病人准备:受检者应空腹
2.2标本种类:血清或血浆
2.3标本要求:采集血清样本,取被检者静脉血,用无菌取血针抽取病人静脉血3ml,收集干燥试管中,室温放置不超过8小时,2000转/分离心20分钟备用。

采集血浆样本,用无菌取血针取被检者静脉血3ml,收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中,室温放置不超过8小时,2000转/分离心20分钟备用。

3.标本储存:待测样本室温不超过8小时,4-8℃不超过72小时,-20℃可长期保存,避免反复冻融。

4.标本运输:室温运输
5.标本拒收标准:细菌污染,严重溶血或脂血标本不能作测定。

6.试剂:
6.1试剂名称:Folate诊断试剂盒。

6.2试剂生产厂家:美国雅培制药有限公司
6.3包装规格:100Test/kit
6.4试剂盒组成:Folate诊断试剂
6.5试剂储存条件及有效期:试剂盒贮存2-8℃条件,有效期12个月。

7.仪器设备:
7.1仪器名称:AXSYM免疫自动分析仪
7.2仪器厂家:美国雅培公司
7.3仪器型号:AXSYMTm型
7.4仪器校准:本仪器校准由厂家工程师负责校准
8.操作步骤:
8.1样本处理:取待测样本血清或血浆置于样本杯中(不能有纤维蛋白,不能有气泡)。

8.2仪器准备:检查纤维杯,反应杯数量满足实验需要,废物桶和废液桶是否连接好,仪器的光路是否正常,环境温度是否符合要求,打印机的连接。

8.3试剂准备与检查:从冰箱取1号液放入仪器,检查所有试剂和缓冲液量是否足够,是否在有效期内。

8.4定标
8.4.1定标步骤:输入主标正曲线(工厂定标),从MAINMENU选择STOREDRESULTS,选择CALIBRATIONREVIEW,选择F4-NEWLOT,选择F4-SCAN用条码阅读器扫主标正曲线或用键盘手工输入条码数据,选择F6-SAVE储存主标正曲线数据。

8.4.2定标申请:从MAINMENU中选择ORDERLIST,选择F4-CAL,选择项目Folate,输入样品架位置,输入标准品的批号和有效期,选择F6-ADD确认,选择F1-EXIT追回。

8.4.3定标运行:检查试剂盒和消耗品,检查库存,按RUN运行。

8.5质控:质控品分高、中、低三种。

8.5.1质控定义:从MAINMENU中选择CONFIGURATION,选择CONTROL,选择Folate项目,输入质控名(每个质控名带一个质控水平,高、中、低),选择F2-ADDCONTROL,选择F6-CONTROLDETAILS,选择数据区域(2SD范围),输入质控信息,按ENTER键,选择F6-SAVE 保存质控信息。

8.5.2质控申请:从MAINMENU选择ORDERLIST,选择F5-CONTRL,选择项目Folate,输入样品架位置,选择分析的质控品水平,高、中、低,选择F6-ADD确认,按F1追加MAINMENU。

8.5.3质控运行:检查试剂,消耗和库存,按RUN键运行。

8.5.4质控浏览
8.5.4.1质控结果浏览:从MAINMENU选择STOREDRESULTS,选择VIEWSTOREDQCRESULTS,选择浏览Folate质控结果,选择F6-DETAILS。

8.5.4.2质控图浏览:从MAINMENU选择LEVERY-JENNINGSQC,选择项目Folate,选择质控水平,选择F5-GRAPH浏览。

8.5.5质控要求:所有质控水平必须控制在2SD范围内,每8小时运行一个质控水平。

9.标本检测常规操作:
9.1申请病人样品测试
9.1.1单个病人样品申请:从MAINMENU选择ORDERLIST,选择F6-PATIENT,输入样品架位置编号和样品编号,可选择输入病人编号、病人姓名、病人说明等资料,选择Folate项目,可选择是否急诊项目,选择F6-ADD确认。

9.1.2样品批处理申请:从MAINMENUT选择ORDERLIST,选择F6-PATIENT,选择F2-BATCH,输入起始样品等的位置,输入起始样品编号,输入测试的样品数,选择项目Folate,选择F6-ADD确认。

9.2检测结果查看:从MAINMENU选择STOREDRESULTS,选择PATIENTREPORT,选择要查看的编号,选择F6-DETAILS。

9.3检测结果打印和保存.清单打印和详情单打印,结果硬盘保存,软盘保存,传输到PC电脑保存。

10.结果计算:利用点对点数据产生方法来产生标准曲线利用率A 的方法来产生主标准曲线,并根据标准曲线计算最终样品浓度。

11.参考范围:2.9-18.7ng/ml
12.临床意义:叶酸缺少可引起巨幼细胞性贫血。

13.操作性能:FlexibleProtocolTMProcessing技术为免疫检测程序的最优化步骤,此技术被运用于样本处理,试剂处理,吸样处理和分析处理等整个检测过程中,检测程序各步骤被处理或完全独立的分析基元,不同的分析技术,步骤和过程可在同一台仪器上同时进行,使整个分析表现(如灵敏度,特异性,精密度,准确性等)达到最佳状态,同时使分析过程成为真正的随机连读分析步序,达到最快出结果的速度。

14.超出范围结果处理:检测样本中Folate值在20.0ng/ml范围内可
直接报告,如结果大于20.0ng/ml,可做相应的稀释后重测。

15.方法局限性:检测样本不能溶血,脂血或黄疸血,不同批量试剂不能混用,必须使用原厂试剂。

16.当检验系统(仪器)不能工作时,所采取的补救措施:当检验系统(仪器)不能工作时,可联系厂家代理商,进行紧急维修,如一时不能修好,如别实验室有同类仪器可到别的仪器上测试,如别的实验室无同类仪器,可改用其它方法进行检测(如酶联免疫法)。

17.参考文献:
朗江明,余俊文,余寿益,等,临床免疫诊断学,2003.1
18.其他:
18.1试剂只用于体外检测试剂。

18.2仪器必须严格按保养和维护进行。

18.3保持消耗品的清洁,消耗品必须在原包装条件下保存。

18.4样品中如有颗粒物质必须离心驱除,注意溶血,脂血或黄疸血的可能干扰,如是冷冻样品,融解后必须彻底混匀,避免样品反复冻融。

18.5只有人源样品可用于检测。

18.6所有废品应进行相应的处理后装在专用塑料袋中,丢弃在指定地点。

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