细胞凋亡实验步骤及注意事 项
细胞凋亡诱导技术的使用教程
细胞凋亡诱导技术的使用教程细胞凋亡是一种广泛应用于生物研究和药物开发领域的重要技术。
它是一种程序性细胞死亡的形式,通常由外界刺激或内源性信号引起。
本文将为您介绍使用细胞凋亡诱导技术的步骤、方法和注意事项。
第一步:选择适当的细胞凋亡诱导剂在进行细胞凋亡实验前,您需要根据实验目的和研究对象选择适当的细胞凋亡诱导剂。
常用的细胞凋亡诱导剂包括化学物质如顺铂和纤维芽细胞生长因子(FGF)等,以及光照、温度、药物等其他外界刺激。
确保所选的诱导剂具有稳定的活性和可重复性。
此外,在选择诱导剂时,还需考虑细胞类型和所需的凋亡研究重点。
第二步:确定适当的细胞系和培养条件选择适当的细胞系对于细胞凋亡实验至关重要。
不同类型的细胞对于细胞凋亡的响应可能不同,因此在开始实验之前,您应首先确认所选细胞系是否容易发生细胞凋亡。
一般来说,肿瘤细胞比正常细胞更容易发生凋亡反应。
此外,确定细胞的培养条件也是非常重要的。
不同的细胞系对培养基组分和培养条件的要求有所不同,在实验前应进行相关的优化。
第三步:优化诱导剂的浓度和处理时间在实验中,您需要确定诱导剂的最佳浓度和处理时间。
这些参数的选择应基于前期的实验数据和文献报道。
一般来说,使用较低剂量的诱导剂和较短的处理时间可以获得更为准确和可靠的实验结果,并减少不必要的细胞损失。
因此,在进行正式实验之前,先进行浓度梯度和时间梯度的预实验是非常重要的。
第四步:检测细胞凋亡的方法选择在细胞凋亡实验中,您需要选择适当的方法来检测细胞凋亡的程度。
常用的方法包括荧光染料染色、流式细胞术和电镜观察等。
荧光染料如荧光素酶染料(如Annexin V-FITC/PI染色)可用于进行早期和晚期凋亡细胞的区分,而流式细胞术则可提供关于凋亡细胞比例和细胞周期的详细信息。
根据实验需要和设备条件,选择适当的检测方法。
第五步:数据分析和实验结果解读在完成细胞凋亡实验后,您需要对结果进行合理的数据分析和解读。
根据实验所用的方法,计算并记录凋亡细胞比例、细胞周期等相关指标。
tunel法检测细胞凋亡实验步骤
tunel法检测细胞凋亡实验步骤细胞凋亡是一种重要的生物学过程,它在多种生理和病理情况下发挥着关键作用。
为了研究细胞凋亡的机制和调控,科学家们发展了多种方法来检测细胞凋亡。
其中一种常用的方法是使用tunel法。
本文将介绍tunel法检测细胞凋亡的实验步骤。
实验步骤如下:1. 细胞培养和处理我们需要选择一种适合的细胞系进行实验。
常用的细胞系有HEK293、HeLa和Jurkat等。
将细胞培养在含有适当培养基和补充物的培养皿中,并在37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中培养至细胞密度适当。
在进行实验之前,需要根据实验设计的需要处理细胞。
例如,可以给予细胞不同的处理,如药物刺激、放射线照射或感染病毒等。
2. 固定细胞将处理后的细胞用适当的缓冲液进行固定。
常用的缓冲液有4%的乙醛或4%的甲醛等。
将缓冲液加入培养皿中,使细胞完全覆盖,并在室温下固定15分钟。
3. 洗涤细胞将固定的细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次,每次5分钟。
洗涤的目的是去除固定液中的残留物质,以减少后续步骤中的非特异性背景。
4. 使细胞透膜使用蛋白酶K或蛋白酶XXIV等酶将细胞膜上的蛋白质降解,使细胞透膜。
将适量的酶加入细胞中,根据实验的需要,可以调整酶的浓度和作用时间。
一般来说,酶的浓度为20μg/ml,作用时间为30分钟。
5. tunel反应使用tunel试剂盒进行细胞凋亡检测。
tunel试剂盒中含有标记有荧光物质的dUTP,可以与DNA断裂的末端结合。
按照试剂盒说明书的要求,将tunel试剂加入细胞中,与细胞中的DNA断裂末端发生连接反应。
反应时间一般为1-2小时。
6. 洗涤和染色将反应结束后的细胞用PBS洗涤3次,每次5分钟。
然后,可以选择使用荧光染料(如DAPI)染色,以标记细胞核。
将染色液加入细胞中,孵育15分钟后再次用PBS洗涤。
7. 显微镜观察和图像获取将处理后的细胞放置在显微镜载玻片上,并使用合适的显微镜观察细胞。
可以调整显微镜的放大倍数和焦距,以获得清晰的图像。
细胞凋亡实验详细步骤及说明
细胞凋亡实验详细步骤及说明
细胞凋亡是细胞在正常发育或应激条件下程序性死亡的过程。
为了深入了解细胞凋亡的机制和影响因素,以下是细胞凋亡实验的详细步骤及说明:
步骤一:培养细胞
1. 准备培养皿并涂覆培养基,确保培养基的成分适合所使用的细胞类型。
2. 从培养细胞的主要来源(如细胞培养库)中获取细胞。
3. 将细胞转移到培养皿中并在适当的温度和湿度下孵育。
步骤二:处理实验组
1. 将培养的细胞分为实验组和对照组。
实验组是要进行细胞凋亡诱导的组,而对照组则用于对比分析。
2. 选择适当的方法诱导细胞凋亡,例如化学诱导剂(如某种药物)或物理刺激(如辐射)。
3. 根据实验需要,在指定的时间间隔内观察细胞凋亡的现象和变化。
步骤三:检测细胞凋亡
1. 使用合适的细胞凋亡检测方法,如细胞染色和流式细胞术。
这些方法可用于分析各种细胞凋亡标志物的表达。
2. 准备相应的染色试剂或抗体,并按照说明溶解或稀释。
3. 按照实验需求,将细胞标本与染色试剂或抗体共孵育,并进行相应的分析和读数。
步骤四:数据分析与结果
1. 对实验和对照组的数据进行统计学分析,如均值和标准差计算。
2. 进一步分析和解释实验结果,评估细胞凋亡发生的程度和影响因素。
3. 根据实验结果撰写实验报告,包括方法、结果和结论,并进行讨论和对比分析。
以上是细胞凋亡实验的详细步骤及说明。
通过进行这些实验,
我们可以更好地理解细胞凋亡的机制以及可能对其产生影响的因素。
请根据具体实验的要求和细胞类型的特点,调整实验步骤和方法,
并确保实验过程中的安全性和可重复性。
细胞凋亡实验详细步骤及说明
细胞凋亡实验详细步骤及说明实验概述本实验旨在研究细胞凋亡的过程和机制。
细胞凋亡是一种正常的细胞死亡方式,对于维持组织的稳态具有重要作用。
通过本实验,我们可以了解细胞凋亡的特征和调控通路,以及一些常用的检测方法。
实验材料- 培养皿- 细胞培养基- 不同处理条件下的细胞(例如药物处理、基因敲除等)- Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒- 显微镜实验步骤1. 培养细胞:将细胞按照常规方法培养至适当的细胞数目。
2. 细胞处理:根据实验设计,在细胞培养基中添加不同处理条件下所需的药物。
3. 收集细胞:根据实验设计决定收集细胞的时间点,使用适当的方法将细胞收集到离心管中。
4. 染色试剂处理:根据实验需求,使用 Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒中的染色试剂进行细胞染色,按照试剂盒说明书的操作步骤进行。
5. 检测细胞凋亡:将染色后的细胞标本放置在显微镜下观察,并使用适当的过滤器和荧光镜头进行观察。
6. 数据分析:根据观察结果,统计和分析不同处理条件下细胞凋亡的数量和特征。
实验注意事项- 操作过程中应严格遵守实验室安全规范,确保个人和实验室安全。
- 细胞培养过程中,注意细胞接种密度和培养基条件的控制,以维持细胞的正常生长状态。
- 在染色试剂处理过程中,按照试剂盒说明书的要求进行操作,避免试剂污染和误操作。
- 在显微镜观察过程中,注意调整适当的放大倍数和聚焦,以获得清晰的细胞图像。
实验结果与讨论根据实验结果可以获得不同处理条件下细胞凋亡数量和特征的数据。
结合相关文献和已有知识,可以对细胞凋亡的机制和调控通路进行深入的讨论。
实验结果可以为进一步研究细胞凋亡的相关领域提供有价值的数据基础。
以上是细胞凋亡实验的详细步骤及说明。
希望对你的研究有所帮助!。
细胞凋亡检测步骤
细胞凋亡检测步骤
细胞凋亡检测步骤一般包括以下几个步骤:
1. 收集细胞样品:收集需要检测凋亡的细胞样品,可以是培养细胞、动物组织或人体组织。
样品应保持新鲜和完整。
2. 处理细胞样品:根据实验需要,对细胞样品进行处理,例如给予某种刺激物或药物,或者采用特殊培养条件。
3. 准备细胞悬液:将处理后的细胞样品转移到离心管中,并加入适量的培养基或缓冲液,制备细胞悬液。
悬液中细胞应保持单细胞状态。
4. 染色:根据实验要求,选择适当的染料对细胞进行染色。
常用的凋亡染色方法包括荧光染色和酶标法。
5. 流式细胞仪检测:将染色后的细胞悬液通过流式细胞仪进行检测。
流式细胞仪可以检测和分析细胞中的荧光强度或酶标信号,进而评估细胞凋亡程度。
6. 数据分析:根据流式细胞仪检测到的数据,进行数据分析,计算细胞凋亡率或凋亡指数等参数。
细胞凋亡实验步骤及注意事项细胞爬片制备详细过程肿瘤细胞侵袭实验
细胞凋亡实验步骤及注意事项细胞爬片制备详细过程肿瘤细胞侵袭实验细胞凋亡实验步骤及注意事项一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。
凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。
它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。
细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。
在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触,细胞变园,细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体,凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。
在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外,不会影响其它细胞,因而不引起炎症反应。
在生物化学上,多数细胞凋亡的过程中,内源性核酸内切酶活化,活性增加。
核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断,降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。
如果对核DNA进行琼脂糖电泳,可显示以180-200bp为基数的DNA ladder(梯状带纹)的特征。
相比之下,坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。
细胞在坏死早期即丧失质膜完整性,各种细胞器膨胀,进而质膜崩解释放出其中的内容物,引起炎症反应,坏死过程中细胞核DNA虽也降解,但由于存在各种长度不等的DNA片断,不能形成梯状带纹,而呈弥散状。
一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡,通常这些因素在诱导凋亡的同时,也可产生细胞坏死,这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。
三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。
研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。
细胞凋亡实验报告
细胞凋亡实验报告细胞凋亡实验报告引言:细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式,它在维持生物体内部平衡和发育过程中起着关键作用。
本次实验旨在通过细胞凋亡实验,探究不同因素对细胞凋亡的影响,从而进一步了解细胞凋亡的机制和调控。
材料与方法:1. 细胞系:使用人类肺癌细胞系A549作为实验对象。
2. 药物:选择化学药物紫杉醇(Paclitaxel)作为细胞凋亡诱导剂。
3. 细胞培养条件:将A549细胞系在含有DMEM培养基和10%胎牛血清的培养皿中培养,保持在37℃、5% CO2的恒温培养箱中。
实验步骤:1. 细胞培养:将A549细胞系接种于培养皿中,培养至细胞密度达到80%左右。
2. 细胞处理:将培养皿中的培养基抽取,加入不同浓度的紫杉醇处理液,分为高、中、低三个浓度组,每组设置相应的对照组。
3. 细胞观察:将处理后的细胞培养皿放回恒温培养箱中,培养24小时后观察细胞形态和数量的变化。
4. 细胞计数:使用显微镜观察细胞数目,并通过计数室内的细胞数目,计算细胞存活率。
5. 细胞凋亡检测:使用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用荧光染料标记细胞并进行分析。
结果与讨论:在本次实验中,我们观察到不同浓度的紫杉醇处理后,A549细胞的形态和数量发生了明显变化。
在高浓度组,细胞数量明显减少,细胞形态发生变化,出现细胞收缩和凋亡体的形成。
而在低浓度组,细胞数量减少较少,细胞形态变化不明显。
对照组中,细胞数量和形态均与处理组相似。
通过细胞计数的结果,我们计算出了细胞存活率,并发现随着紫杉醇浓度的增加,细胞存活率逐渐降低。
这说明紫杉醇可以诱导A549细胞发生凋亡,并且凋亡率与药物浓度呈正相关。
进一步使用流式细胞仪检测细胞凋亡率,我们发现在高浓度组中,细胞凋亡率明显增加,而在低浓度组和对照组中,细胞凋亡率相对较低。
这与细胞存活率的结果相一致,进一步验证了紫杉醇可以诱导A549细胞发生凋亡的能力。
细胞凋亡是一种高度调控的细胞死亡过程,它在生物体内部平衡和发育过程中发挥着重要作用。
细胞凋亡检测
细胞凋亡检测目录一、实验原理二、实验设计原则三、实验操作步骤四、实验结果分析一、背景知识(1)细胞凋亡,又称程序性细胞死亡,是细胞在一定的生理或病理条件下,由基因控制的自主的、有序的死亡。
细胞调亡是生物体生长发育过程中出现的正常现象,在生物体形态构成、正常细胞更替以及维持细胞内环境稳定等过程中发挥重要作用,细胞凋亡受阻可以导致肿瘤。
(2)检测细胞凋亡的方法:早期调亡的形态学变化:前向角散射光降低:细胞核固缩,核碎裂,细胞质及细胞器密度增高,细胞体积变小。
侧向角散射光增高:染色体降解,细胞核碎裂,细胞内颗粒增多。
Annexin V-FITC/PI法:基本原理:细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。
这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。
PS是一-种带负电荷的磷脂,正常情况下主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时,细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。
AnnexinV是一种Ca2+依赖的磷脂结合蛋白,具有易于结合到磷脂类如PS的特性,对PS有高度的亲和性。
PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可发生在细胞坏死中。
两种细胞死亡方式间的差别是在调亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。
因此,可以建立一种用Annexin V-FITC(异硫氰基荧光素)结合在细胞膜表面作为凋亡的指示,并结合一种染料(PI)排除试验,以检测细胞膜的完整性。
凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如PI有抗染性,坏死细胞则不能。
细胞膜有损伤的细胞的DNA可被PI染色产生红色荧光,而细胞膜保持完好的细胞则不会有红色荧光产生。
因此,在细胞凋亡的早期PI不会着染而没有红色荧光信号。
二、实验设计原则1、样本类型:Live、Dead、Fixable2、检测指标:增殖还是凋亡3、荧光染料/检测通道例子:VGSC β3亚基诱导HepG2细胞的凋亡样本类型Live、HepG2(β3干扰)检测指标细胞膜完整性、有无PS荧光染料/检测通道PI、Annexin V-FITC三、实验操作步骤试剂盒名称::Annexin V-FITC/PI双染凋亡试剂盒染色步骤:1、贴壁细胞:用不含EDTA的胰酶消化后,300g,4℃离心5 min,收集细胞。
细胞凋亡检测实验步骤大全(精华版)
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概述
细胞凋亡检测实验是一种用于研究细胞程序性死亡的方法。
本
文档旨在提供细胞凋亡检测实验的详细步骤,帮助您顺利进行实验。
实验准备
1. 准备所需材料:细胞培养基、培养皿、细胞培养器、实验药
物等。
2. 检查仪器和设备是否正常工作。
3. 消毒实验台和使用的器具,确保实验环境清洁。
细胞处理
1. 用适当的方法将细胞分离并制备成单细胞悬液。
2. 将细胞转移到培养皿中,根据实验需要将其培养至合适的生
长期。
实验组设计
1. 根据实验目的设计不同的实验组,如对照组和处理组。
2. 确定实验组的处理剂量和时间。
细胞凋亡检测方法
1. 选择合适的细胞凋亡检测方法,如荧光染料法、DNA断裂检测法等。
2. 按照所选方法的要求进行实验操作。
数据分析
1. 使用适当的方法和工具对实验数据进行分析。
2. 统计和比较各实验组的凋亡率或其他相关指标。
结果解释
1. 根据实验结果进行结果解释,并对实验结果进行讨论。
2. 结果解释可以包括细胞凋亡的程度、机制等方面的分析。
结论
总结实验结果,并提出可能的结论和展望。
参考文献
列出使用的参考文献以支持实验步骤和结果解释。
以上是细胞凋亡检测实验步骤的精华版大全,希望对您的实验有所帮助。
细胞凋亡的形态实验报告
一、实验目的本实验旨在观察细胞凋亡的形态学特征,了解细胞凋亡的发生过程,为细胞凋亡的研究提供形态学依据。
二、实验材料1. 细胞培养:小鼠胚胎成纤维细胞(NIH 3T3细胞);2. 试剂:H2O2(双氧水)、Annexin V-FITC、PI(碘化丙啶)、RPMI-1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、PBS缓冲液;3. 仪器:倒置显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪、超净工作台、CO2培养箱。
三、实验方法1. 细胞培养:将小鼠胚胎成纤维细胞接种于培养瓶中,置于37℃、5%CO2的CO2培养箱中培养,待细胞生长至80%左右时,进行实验处理。
2. 实验分组:(1)正常组:不做任何处理,作为对照组;(2)凋亡组:加入0.8mol/L H2O2溶液处理细胞24小时。
3. 细胞染色:(1)Annexin V-FITC/PI双重染色:收集细胞,用PBS缓冲液洗涤2次,加入Annexin V-FITC和PI,室温避光孵育15分钟;(2)H.E染色:收集细胞,用PBS缓冲液洗涤2次,加入H.E染色液,室温避光孵育15分钟。
4. 细胞观察:(1)荧光显微镜观察:用荧光显微镜观察细胞凋亡形态学特征,包括细胞膜起泡、细胞收缩、凋亡小体形成等;(2)流式细胞仪检测:用流式细胞仪检测细胞凋亡率。
5. 数据分析:采用SPSS软件对实验数据进行统计分析。
四、实验结果1. 荧光显微镜观察:凋亡组细胞出现细胞膜起泡、细胞收缩、凋亡小体形成等形态特征,与对照组相比,凋亡组细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。
2. 流式细胞仪检测:凋亡组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),约为对照组的2倍。
五、实验讨论1. 细胞凋亡是细胞程序性死亡的一种形式,具有形态学特征,如细胞膜起泡、细胞收缩、凋亡小体形成等。
本实验中,凋亡组细胞出现这些形态特征,表明细胞凋亡已发生。
2. Annexin V-FITC/PI双重染色是一种常用的细胞凋亡检测方法,可以检测细胞凋亡率。
细胞凋亡实验步骤及注意事项
细胞凋亡实验步骤及注意事项一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。
凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。
它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。
细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。
在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触,细胞变园,细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体,凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。
在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外,不会影响其它细胞,因而不引起炎症反应。
在生物化学上,多数细胞凋亡的过程中,内源性核酸内切酶活化,活性增加。
核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断,降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。
如果对核DNA进行琼脂糖电泳,可显示以180-200bp为基数的DNAladder(梯状带纹)的特征。
相比之下,坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。
细胞在坏死早期即丧失质膜完整性,各种细胞器膨胀,进而质膜崩解释放出其中的内容物,引起炎症反应,坏死过程中细胞核DNA 虽也降解,但由于存在各种长度不等的DNA片断,不能形成梯状带纹,而呈弥散状。
一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡,通常这些因素在诱导凋亡的同时,也可产生细胞坏死,这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。
三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。
研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。
本实验用1μg/mlHT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。
细胞凋亡实验步骤及注意事项
细胞凋亡实验步骤及注意事项一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。
凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。
它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。
细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。
在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触,细胞变园,细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体,凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。
在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外,不会影响其它细胞,因而不引起炎症反应。
在生物化学上,多数细胞凋亡的过程中,内源性核酸内切酶活化,活性增加。
核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断,降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。
如果对核DNA进行琼脂糖电泳,可显示以180-200bp为基数的DNA ladder(梯状带纹)的特征。
相比之下,坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。
细胞在坏死早期即丧失质膜完整性,各种细胞器膨胀,进而质膜崩解释放出其中的内容物,引起炎症反应,坏死过程中细胞核DNA虽也降解,但由于存在各种长度不等的DNA片断,不能形成梯状带纹,而呈弥散状。
一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡,通常这些因素在诱导凋亡的同时,也可产生细胞坏死,这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。
三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。
研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。
本实验用1μg/ml HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。
流式细胞凋亡检测步骤
流式细胞凋亡检测步骤引言:细胞凋亡是一种正常的生理现象,它在维持机体稳态和调节细胞数量方面起着重要作用。
流式细胞凋亡检测是一种常用的方法,用于定量测量细胞凋亡程度。
本文将介绍流式细胞凋亡检测的步骤,并详细阐述每一步的操作方法和注意事项。
一、细胞准备在进行流式细胞凋亡检测之前,首先需要获得待检测的细胞样品。
这些细胞可以是体外培养的细胞系,也可以是从动物或人体组织中分离得到的原代细胞。
细胞样品应该在合适的培养条件下生长,确保其细胞活力和凋亡状态的稳定。
二、细胞收集细胞收集是流式细胞凋亡检测的关键步骤之一。
常用的方法有机械剥离、消化酶处理和离心等。
在收集过程中,需要注意尽量减少细胞损伤和凝聚物的形成。
收集的细胞应该进行适当的洗涤,以去除培养基中的残留物。
三、细胞固定细胞固定是为了防止细胞在后续处理过程中的损伤和凋亡。
常用的固定剂有甲醛、乙醛和乙酸等,可根据实验需要选择合适的固定剂和浓度。
固定处理后的细胞需要进行洗涤,以去除固定剂的残留物。
四、细胞染色细胞染色是流式细胞凋亡检测的核心步骤。
常用的染色剂有荧光素酶标记的Annexin V和PI(propidium iodide)等。
Annexin V 用于检测细胞外磷脂外翻的现象,而PI则用于判断细胞膜完整性。
染色剂的选择应基于实验目的和细胞类型,同时需要根据厂家提供的说明书进行操作。
五、流式细胞仪检测流式细胞仪是流式细胞凋亡检测的重要工具。
在进行检测之前,需要对流式细胞仪进行校准,包括激光功率、流速和检测通道的设置等。
校准后,将染色后的细胞悬浮液注入流式细胞仪中,通过激光的照射和细胞的流动,测量细胞的荧光强度和散射信号。
六、数据分析流式细胞仪检测得到的数据需要进行后续的分析和解释。
常用的数据分析软件有FlowJo、ModFit和Cyflogic等。
通过设置门,可以将细胞分为不同的亚群,分析细胞的凋亡率和凋亡类型等。
此外,还可以进行统计学分析,比较不同实验组之间的差异。
检测细胞凋亡的实验方法
检测细胞凋亡的实验方法一、形态学观察方法1、HE染色、光镜观察:凋亡细胞呈圆形,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状,细胞表面有“出芽”现象。
2、丫啶橙(AO)染色,荧光显微镜观察:活细胞核呈黄绿色荧光,胞质呈红色荧光。
凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧,可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
3、台盼蓝染色:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。
如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。
此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。
4、透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
二、DNA凝胶电泳(一)、检测原理细胞发生凋亡或坏死,其细胞DNA均发生断裂,细胞内小分子量DNA片断增加,高分子DNA减少,胞质内出现DNA片断。
但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间,出现180-200bpDNA片断,而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断,利用此特征可以确定群体细胞的死亡,并可与坏死细胞区别。
(二)结果判断正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状(LADDER)条带;坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。
三、酶联免疫吸附法(ELISA)核小体测定凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。
核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成,可由ELISA法检测。
(一)检测步骤1、将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体;2、在微定量板上吸附组蛋白体’3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合‘4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合’4、加酶的底物,测光吸收制。
(二)用途该法敏感性高,可检测5*100/ml个凋亡细胞。
可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。
该法不需要特殊仪器,适合基层工作,但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。
细胞凋亡实验步骤及注意事项 细胞爬片制备详细过程 肿瘤细胞侵袭实验
细胞凋亡实验步骤及注意事项一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。
凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。
它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。
细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。
在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触,细胞变园,细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体,凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。
在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外,不会影响其它细胞,因而不引起炎症反应。
在生物化学上,多数细胞凋亡的过程中,内源性核酸内切酶活化,活性增加。
核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断,降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。
如果对核DNA进行琼脂糖电泳,可显示以180-200bp为基数的DNA ladder(梯状带纹)的特征。
相比之下,坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。
细胞在坏死早期即丧失质膜完整性,各种细胞器膨胀,进而质膜崩解释放出其中的内容物,引起炎症反应,坏死过程中细胞核DNA虽也降解,但由于存在各种长度不等的DNA片断,不能形成梯状带纹,而呈弥散状。
一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡,通常这些因素在诱导凋亡的同时,也可产生细胞坏死,这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。
三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。
研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。
本实验用1μg/ml HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。
细胞凋亡流式检测实验方案
细胞凋亡流式检测实验方案掌握细胞凋亡的检测方法,了解细胞凋亡的发生机制。
二、实验原理细胞凋亡是一种程序性的细胞死亡过程,是正常细胞生长、发育和组织维持的重要机制。
细胞凋亡的发生涉及许多生物化学过程,包括蛋白酶的激活、蛋白磷酸化、核酸降解等。
目前,常用的细胞凋亡检测方法有DNA损伤、凋亡相关蛋白(如Caspase)的活性检测、Annexin V染色体外膜表面的磷脂酰胆碱变化等。
三、实验材料1. 细胞培养基、PBS缓冲液;2. Annexin V-PE/7-AAD染色试剂盒;3. 离心管、试管、离心机等。
四、实验步骤1. 将细胞接种于96孔或24孔板中,待细胞生长到适当密度后,按照不同处理方式分为不同组。
2. 处理细胞,如加入药物、病毒等,切换培养基等。
3. 用PBS缓冲液洗涤一次细胞,加入含Annexin V-PE/7-AAD染色试剂的PBS缓冲液,室温下酒暗处理15分钟。
4. 加入PBS缓冲液洗涤一次细胞,加入PBS缓冲液悬浮细胞,用流式细胞仪检测细胞的荧光强度。
五、实验结果分析1. Annexin V染色阳性、7-AAD染色阴性:表明细胞凋亡早期,细胞膜磷脂酰胆碱翻转,但细胞核仍完整无损。
2. Annexin V染色阳性、7-AAD染色阳性:表明细胞凋亡晚期,细胞膜磷脂酰胆碱翻转,细胞核已经破裂,DNA释放。
3. Annexin V染色阴性、7-AAD染色阴性:表明细胞无凋亡现象。
4. Annexin V染色阴性、7-AAD染色阳性:表明细胞处于坏死状态,细胞膜破裂,7-AAD染料可以进入细胞核结合DNA。
六、注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作;2. 实验前要将所有实验材料消毒;3. 实验过程中要加强个人防护,穿戴实验室专用实验服、手套、口罩等;4. 实验结果分析时要注意对比组间差异明显性,结果分析应结合其他指标进行综合分析。
细胞凋亡检测细胞凋亡实验步骤检测方法
细胞凋亡检测细胞凋亡实验步骤检测⽅法细胞凋亡检测,细胞凋亡实验步骤,检测⽅法⼀、定性和定量研究只定性的研究⽅法:常规琼脂糖凝胶电泳、脉冲场倒转琼脂糖凝胶电泳、形态学观察(普通光学显微镜、透射电镜、荧光显微镜)进⾏定量或半定量的研究⽅法:各种流式细胞仪⽅法、原位末端标记法、ELISA 定量琼脂糖凝胶电泳。
⼆、区分凋亡和坏死可将⼆者区分开的⽅法:琼脂糖凝胶电泳,形态学观察(透射电镜是是区分凋亡和坏死最可靠的⽅法),Hoechst33342/PI双染⾊法流式细胞仪检测,3) Telemerase Detection (端粒酶检测)3、⽣化检测:1)典型的⽣化特征:DNA ⽚段化2)检测⽅法主要有:琼脂糖凝胶电泳、原位末端标记(TUNEL)等3)TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺⼝末端标记)4)通过DNA末端转移酶将带标记的dNTP (多为dUTP)间接或直接接到DNA ⽚段的3’-OH端,再通过酶联显⾊或荧光检测定量分析结果。
可做细胞悬液、福尔马林固定或⽯蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。
4、LM-PCR Ladder (连接介导的PCR检测)当凋亡细胞⽐例较⼩以及检测样品量很少(如活体组织切⽚)时,直接琼脂糖电泳可能观察不到核DNA的变化。
通过LM-PCR,连上特异性接头,专⼀性地扩增梯度⽚段,从⽽灵敏地检测凋亡时产⽣梯度⽚段。
此外,LM-PCR 检测是半定量的,因此相同凋亡程度的不同样品可进⾏⽐较。
如果细胞量很少,还可在分离提纯DNA后,⽤32P-ATP和脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)使DNA标记,然后进⾏电泳和放射⾃显影,观察凋亡细胞中DNA ladder的形成。
上述两种⽅法都针对细胞凋亡晚期核DNA断裂这⼀特征,但细胞受到其它损伤(如机械损伤,紫外线等)也会产⽣这⼀现象,因此它对细胞凋亡的检测会受到其它原因的⼲扰。
需结合其它的⽅法来检测细胞凋亡。
)境,这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低,从⽽使细胞⾊素C(三羧酸循环中的重要组分)从线粒体内转移到细胞液中,启动凋亡效应器caspase的级联反应。
细胞凋亡流式实验步骤
细胞凋亡流式实验步骤
1. 细胞分离:分离被试细胞,如置于离心机中中心转速达到200 rpm,约5 分钟左右即可去除悬浮细胞上的血小板(如红细胞)。
2. 是否置于缓冲液中:将细胞置于缓冲液中,配制如下:PBS(无血清、不加钠)(50%),离心机中细胞悬液(50%);加入另一液体(如HBSS)使其总体百分比为80%;之后将液体混合至相对稳定,之后置于离心机中细胞悬液中稀释到所需浓度(常见为1∶1 的程度)。
3. 是否加入胁迫剂:是否加入胁迫剂,加入的胁迫剂应根据实验的要求添加,如应添加的为脂质体类胁迫剂,可以考虑使用多巴胺;如果应添加的为放射线,可以考虑使用γ射线或X 射线。
4. 活性检测:活性可以用活性抑制试验(LDH)、核碎裂染色试验等探测,探究细胞凋亡后会出现多大程度的染色,从而测定凋亡程度。
5. 数据获取:流式实验完成后,将数据获取到电子数据库中,避免混淆错乱,快速查看,从而获取凋亡程度及其他信息。
细胞凋亡实验步骤及注意事项
细胞凋亡实验步骤及注意事项Prepared on 22 November 2020细胞凋亡实验步骤及注意事项一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。
凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。
它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。
细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。
在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触,细胞变园,细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体,凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。
在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外,不会影响其它细胞,因而不引起炎症反应。
在生物化学上,多数细胞凋亡的过程中,内源性核酸内切酶活化,活性增加。
核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断,降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。
如果对核DNA 进行琼脂糖电泳,可显示以180-200bp为基数的DNAladder (梯状带纹)的特征。
相比之下,坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。
细胞在坏死早期即丧失质膜完整性,各种细胞器膨胀,进而质膜崩解释放出其中的内容物,引起炎症反应,坏死过程中细胞核DNA虽也降解,但由于存在各种长度不等的DNA片断,不能形成梯状带纹,而呈弥散状。
一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡,通常这些因素在诱导凋亡的同时,也可产生细胞坏死,这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。
三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。
研究表明HT 在~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。
凋亡流式检测步骤
凋亡流式检测步骤引言:凋亡流式检测是一种用于检测细胞凋亡的分析方法,通过检测细胞内凋亡标志物的变化来评估细胞是否处于凋亡状态。
本文将介绍凋亡流式检测的步骤,并详细解释每个步骤的操作原理和注意事项。
一、样本制备在进行凋亡流式检测之前,需要准备细胞样本。
首先,将需要检测的细胞分离并洗涤,去除外部污染物。
然后,将细胞悬浮液转移至离心管中,并进行离心,去除上清液。
最后,重新悬浮细胞并加入合适的缓冲液,使细胞适应流式细胞仪的操作条件。
二、细胞固定将悬浮的细胞样本进行固定,以保持细胞的形态和结构。
常用的固定方法包括用乙醇或甲醛进行固定。
将固定液加入细胞悬液中,充分混合后静置一段时间,使细胞得到固定。
三、膜破损为了使细胞内的凋亡标志物暴露在细胞外,需要对细胞进行膜破损。
常用的方法是使用洗脱缓冲液,将固定的细胞进行洗涤,去除固定液中的残留物质。
四、孔隙形成在凋亡流式检测中,需要使用荧光标记的抗体或荧光探针来检测凋亡标志物。
为了使这些荧光标记的物质能够进入细胞内,需要在细胞膜上形成孔隙。
孔隙形成的方法有多种,如使用洗脱缓冲液中的成分或特定的酶。
五、荧光标记在细胞凋亡检测中,常用的荧光标记物有PI、Annexin V等。
将荧光标记物添加到细胞悬液中,与凋亡标志物结合。
不同的荧光标记物对应不同的凋亡标志物,根据需要选择合适的标记物进行检测。
六、流式细胞仪检测将荧光标记过的细胞样本装入流式细胞仪,通过激光束的照射,荧光标记物会发出特定波长的荧光信号。
流式细胞仪会对这些荧光信号进行检测和记录,并生成相应的数据。
七、数据分析通过流式细胞仪检测得到的数据可以进行进一步的分析。
可以通过设置荧光信号的阈值来划分细胞的凋亡状态,将细胞分为未凋亡、早期凋亡和晚期凋亡三个亚群。
也可以通过计算荧光信号的强度来评估细胞凋亡的程度。
八、结果解读根据数据分析的结果,可以判断细胞样本中凋亡细胞的比例和凋亡程度。
通过与对照组的比较,可以进一步评估样本中的异常情况。
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细胞凋亡实验步骤及注意事项
一、实验目的
1、掌屋凋亡细胞的形态特征
2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法
二、实验原理
细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。
凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。
它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。
细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。
在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触,细胞变园,细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体,凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。
在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外,不会影响其它细胞,因而不引起炎症反应。
在生物化学上,多数细胞凋亡的过程中,内源性核酸内切酶活化,活性增加。
核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断,降解为180-200bp 或它的整倍数的各种片断。
如果对核DNA进行琼脂糖电泳,可显示以180-200bp为基数的DNA ladder(梯状带纹)的特征。
相比之下,坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。
细胞在坏死早期即丧失质膜完整性,各种细胞器膨胀,进而质膜崩解释放出其中的内容物,引起炎症反应,坏死过程中细胞核DNA虽也降解,但由于存在各种长度不等的DNA片断,不能形成梯状带纹,而呈弥散状。
一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡,通常这些因素在诱导凋亡的同时,也可产生细胞坏死,这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。
三尖杉酯碱(HT)是我国自行研制的一种对急性粒细胞白血病,急性单核白血病等有良好疗效的抗肿瘤药物。
研究表明HT在0.02~5μg/ml范围内作用2小时,即可诱导HL-60细胞凋亡,并表现出典型的凋亡特征。
本实验用1μg/ml HT在体外诱导培养的HL-60细胞发生凋亡,同时也有少数细胞发生坏死。
用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)对细胞进行双重染色,可以区别凋亡、坏死及正常细胞。
细胞膜是一选择性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿过质膜。
当细胞坏死时,质膜不完整,PI就进入细胞内部,它可嵌入到DNA或RNA 中,使坏死细胞着色,凋亡细胞和活细胞不着色。
而一些活细胞染料由于为亲脂性物质,可跨膜进入活细胞,因而可进行活细胞染色。
Hoechst33342是一种活性荧光染料且毒性较弱,它是双苯并咪唑的一种衍生物。
与DNA特异结合(主要结合于A-T)碱基区),显示凋亡细胞和活细胞。
凡是看到有凋亡小体的细胞都是凋亡细胞。
三、实验用品
1、试剂:三尖杉酯碱(HT),300μg/ml,100mmol/L Tris-
HCl(pH7.5),5mol/L EDTA缓冲液、碱性裂解液:0.2mol/L NaOH, 1%SDS、醋酸钠:3mol/L KAc(pH4.8);异丙醇;70%乙醇;溴酚蓝,蔗糖指示剂。
TBE电泳缓冲液,1%琼脂糖,溴乙锭。
PI母液:500μg/ml;Ho33342母液:2mmol/L。
2、仪器设备:荧光显微镜,电泳仪,电泳槽,微量加样器(1ml,100μl)0.5、1.5ml离心管,载玻片,盖玻片。
四、实验材料
人早幼粒白血病HL-60细胞,用含10%小牛血清的RPMI1640培养基在37℃,5%CO2条件下培养。
五、方法步骤
1、三尖杉酯碱诱发HL-60细胞凋亡
(1)实验前约24小时,接种两瓶HL-60细胞,标记①、②,每瓶含约6ml培养液,置37℃,5%CO2培养箱培养。
(2)实验前约2.5小时,当细胞密度达到70%,①号瓶加入三尖杉酯碱200μl,使终浓度为1μg/ml,②号瓶中加入同等量PBS(pH7.4)作对照。
共同放入培养箱中继续培养2.5小时。
2、Ho33342和PI双重染色鉴别三种细胞
(1)染色:将瓶中的细胞摇匀取200μl于1.5ml的离心管中,加入Ho33342母液2μl,PI 20μl,染色15分钟。
(2)滴片:取一载玻片用双面胶围成一小室,从离心管中各取以上染色后的细胞悬液10μl,加入小室内盖上盖玻片,荧光镜下用紫外激发光,高倍镜下观察,区别三种细胞,并注意三者比例。
注
意事项1. 诱导培养HL-60细胞时间要准确;
2. 荧光显微镜下观察细胞时,由于荧光易碎灭,观察时要尽量快。
细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。
凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。
它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。
细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。
其他在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触,细胞变园,细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体,凋亡小体最后被吞噬细胞吞噬消化。
在凋亡过程中细胞内容物并不释放到细胞外,不会影响其它细胞,因而不引起炎症反应。
在生物化学上,多数细胞凋亡的过程中,内源性核酸内切酶活化,活性增加。
核DNA随机地在核小体的连接部位被酶切断,降解为180-200bp或它的整倍数的各种片断。
如果对核DNA进行琼脂糖电泳,可显示以180-200bp为基数的DNA ladder(梯状带纹)的特征。
相比之下,坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。
细胞在坏死早期即丧失质膜完整性,各种细胞器膨胀,进而质膜崩解释放出其中的内容物,引起炎症反应,坏死过程中细胞核DNA虽也降解,但由于存在各种长度不等的DNA片断,不能形成梯状带纹,而呈弥散状。
一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋亡,通常这些因素在诱导凋亡的同时,也可产生细胞坏死,这取决于损伤的剧烈程度和细胞本身对刺激的敏感程度。