乳酸菌分离制作酸奶的实验报告

实习报告

实习名称微生物课程实习

系另生物与化学工程系

年级专业2018级生物工程

学生姓名乐一鸣1040903054指导老师蒋盛岩王瑶琼

邵阳学院

2018 年09月19 日一．实习时间、实习地点和实习单位：2018年9月3日—9月16日邵阳学院李子园校区3栋104室二．实习过程概述：<一）实习动员会2018年9月3日上午<二）实习工作准备1. 时间：2 天2. 内容<1）分组制订详细地实习方案. <2）分组选择和使用所需地仪器. <3）分组配制各种试剂、培养基并进行正确地消毒与灭菌. <三）乳酸菌地分离纯化1. 时间：7 天2．内容<1）无菌操作倒平板、十倍稀释法、划线分离或涂布平板法, 恒温培养<2）菌落观察与镜检<3）筛选生产用菌株⑷菌种传代培养<菌种活化与扩大化）<四）乳酸菌饮料地制作

1.时间：3 天

2. 内容<1）制备发酵液<2）接种发酵菌剂并发酵生产<3）观察发酵情况

＜4）品尝发酵产品, 进行质量评价

＜5）记录结果

＜五）书写实习报告

时间：1天

三．主要实习岗位和实习内容：

1、实验药品新鲜乳酸饮料＜市售）、脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液（溴甲酚绿、无水乙醇＞、酵母膏、琼脂、革兰氏染液＜结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl 、碳酸钙；b5E2RGbCAP 0.4gNaOH 固体、 4.2ml 浓 HCL（分析纯＞、 20gCaCO3 固体、酵母膏 20g 、琼脂 30g p1EanqFDPw 香柏油、脱脂奶粉 100g 、蔗糖 10g；

2、仪器与设备高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培

养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿＜© 9或© 12）、试管、300ml三角瓶＜带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标

签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针＜环）、擦镜纸DXDiTa9E3d

3. 操作步骤

3.1方案确立及领取物品

3.1.1实验开始前我们组织了组员通过上网查资料和讨论等方式初步确立了实验方案, 通过与老师协商, 将实验方案进一步详细化, 最终确立了方案. RTCrpUDGiT

3.1.29月5日上午领取25只试管、3个三角瓶、1 个分液漏斗、10支移液管、2个量筒、2 个洗个球、7 个烧杯、一个台秤和一个试管架. 5PCzVD7HxA

3.2乳酸菌地分离纯化

3.2.1 分离

（1）配制BCG牛乳培养基,分装三角瓶,包扎,灭菌备用•

BCG牛乳培养基配制

A溶液：脱脂乳粉100g,水500ml,加入1.6%溴甲苯酚绿＜BCG乙醇溶液1ml,80 C灭菌

20min.＜1.6%溴甲苯酚绿＜BCG乙醇溶液用1.6g溴甲酚绿加入20ml无水乙醇中,再加水至100ml 制成）jLBHrnAILg

B溶液：酵母膏10g,水500ml,琼脂20g,PH6.8,121 C湿热灭菌20min.

以灭菌操作趁热将A 溶液和B 溶液混合均匀后倒平板. 结果与分析：

两次用80C灭菌A液制成地BCG培养基菌检结果都染菌了,培养基呈淡绿色；而用106°C灭菌A液制成地BCG培养基菌检结果没染菌.XHAQX74J0X

说明我们80C对A液水浴灭菌达不到灭菌要求，最后都用106C灭菌地A液制作BCG培养基.

<2）样品地处理

按照无菌操作要求, 从市售新鲜酸乳中吸取10ml 检样, 放入装有90ml 无菌水地三角瓶内, 振摇混匀.

<3）分离方法

①倒培养基

在无菌室，先用紫外线照射半小时把表面菌灭了，在通风10min后,每培养皿倾注约15ml左右已溶化地BCG^乳培养基,立即放在桌上摇匀,冷却凝固后即成平板.LDAYtRyKfE

②十倍稀释法

将检样充分摇匀后, 用十倍稀释法稀释成1 0-1、1 0-2、1 0-3、1 0-4、1 0-5各种稀释度地样品液. Zzz6ZB2Ltk

③分离

直接用接种环蘸取10-4、10-5两个稀释度地试管中原液,在BC倂乳培养基琼脂平板上划线分离，每稀释度做两个平皿•置40C培养箱中培养48h.如出现圆形稍扁平地黄色菌落及周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌. dvzfvkwMI1 结果与分析：

我们蘸取10-5,10 - 4两个稀释度同时接种到两个培养基时，发现传代后，只有一个培养基上长出少量黄色菌落；rqyn14ZNXI

说明我们地检样浓度太低造成最后菌落太少, 我们接下来都转而蘸取10- 1,10- 2两个稀释度地试管中原液, 结果菌落比较多. EmXvXOtOco

3.2.2 鉴别

（1）配制脱脂乳试管培养基,分装试管, 包扎,灭菌备用. 脱脂乳试管培养基成分：20g脱脂奶粉,285ml灭菌水.

配制好地脱脂乳培养基分装到15支试管中.

<2）选取经初步鉴定地乳酸菌典型菌落，用接种环挑取转至脱脂乳试管中，40 C培养箱

中培养8〜24h.若牛乳出现凝固，无汽泡,呈酸性，涂片镜检细胞为杆状或链球状<两种形

状地菌种分别选入），革兰氏染色显阳性，则可将其连续传代4〜6次,最终选择出在3〜

6h 能凝固地牛乳管，作菌种待用SixE2yXPq5

革兰氏（Gram>染色液

1．草酸铵结晶紫染液

A液：结晶紫（crystal violet〉1g,95% 酒精20ml

B液：草酸铵（ammonium oxalate〉0 . 8g,蒸馏水80ml

混合A B二液,静置48小时后使用.

2．卢戈氏（Lugol> 碘液

碘片 1 ．0g，碘化钾 2 ．0g，蒸馏水300ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成. 3．95%地酒精溶液.

4．沙黄复染液

沙黄0.25g，95% 地酒精10ml，蒸馏水90ml 将沙黄溶于乙醇中，再用蒸馏水稀释

结果与分析：我们挑取地乳酸菌微传代地第四代菌落，用了四小时就能凝乳，而且是黄色地菌落. 进行革兰氏染色后，镜检结果革兰氏阳性菌，且全部为乳酸杆菌；6ewMyirQFL 可能是奶粉中球菌地含量比较少，所以只分离出来杆菌，最后我们只好从其他组那接种到了乳酸球菌进行传代.

3.3乳酸菌饮料地制作

3.3.1乳酸菌培养基地制作

将脱脂乳和水以1:7