组织切片制作步骤

徒手切片法：徒手切片前，应先准备好一个盛有清水的培养皿。

在切片时，用左手的拇指与食指、中指夹住实验材料，大拇指应低于食指2～3mm，以免被刀片割破。

材料要伸出食指外约2～3mm，左手拿材料要松紧适度，右手平稳地拿住刀片并与材料成垂直。

然后，在材料的切面上均匀地滴上清水，以保持材料湿润。

将刀口向内对着材料，并使刀片与材料切口基本上保持平行，再用右手的臂力（不要用手的腕力）向自身方向拉切。

此时，左手的食指一侧应抵住刀片的下面，使刀片始终平整。

连续地切下数片后，将刀片放在培养皿的水中稍一晃动，切片即漂浮于水中。

当切到一定数量后，可在培养皿内挑选透明的薄片用低倍镜观察检查。

好的切片应该是薄且比较透明、组织结构完整，否则要重新进行切片。

对经检查符合要求的切片，如果只作临时观察，可封藏在水中进行观察。

若要更清楚地显示其组织和细胞结构，可选择一些切片进一步通过固定、染色、脱水、透明及封藏等步骤，做成永久玻片标本。

徒手切片技巧如果不想切斜，要注意两点，一个是左手拿的露出来那截要短，尽量只能连续切2刀的样子(一般是可以切4，5刀的），一个是切口一定要水平，同时右手的刀片也要水平，拉刀的时候保持在一个平面上（拉快点容易做到）。

这是根和茎的切法，不过每次的量会有所减少。

对于叶，有三种切法，一个是直接切；一个是卷成管状，当茎来切；还有就是用三层刀片夹起来。

其中，第一种适合于裸子植物那种针叶，方法要领和上面说的差不多；第二种适合于比较软的叶片，要领是要卷的细，中间的洞不要太大（大了容易斜）；第三种适用于比较坚韧，硬的叶片，绝对要放在载玻片之类的地方，要用划的，凌空切会很不顺，容易切不断。

还有一种特殊的方法是切成小块的先，再夹到萝卜里面（事先挖个洞或切条槽），再一起切，这个适用于全部，根茎叶，软的硬的均可（就是那种针叶不太好用它，我都切不好）。

所以克服柔软就是要注意，想办法使它变厚变硬（对叶：卷，夹，或者垫玻璃；对根茎，夹，或者用左手捏紧一点，捏上面一点，使它不会晃）。

组织切片操作流程

组织切片操作流程切片法主要步骤1、取材与固（1）取材：从动物体取下所需的器官材料。

取材的动物要健康，材料愈新鲜愈好，应在致死后立即取材，防止组织细胞自溶变性；取材的器械要锋利；所取材料力求小而薄（以不超过0.5cm为宜），不能挤压和损伤。

（2）固定：将所取的材料立即投入固定液中，目的是使组织蛋白迅速凝固，使细胞内的结构和成分不再发生变化，保持组织细胞与活体相似的形态结构，固定后的组织块变硬，便于进一步处理。

常用的固定剂有甲醛、乙醇、苦味酸或混合固定液。

实验室常用Bouin固定液，固定时间为12～24小时，其固定的组织块不需进行水洗，可直接进行脱水。

2、脱水与透明（1）脱水：固定后的组织块内含有的大量水分要彻底脱去，以便石蜡的浸入。

常用的脱水剂为乙醇，脱水过程必须循序渐进，从低浓度开始，逐步升高，使组织块中的水分逐渐被乙醇所取代。

具体操作为：Bouin固定液固定的组织块可直接进入70％的乙醇进行脱水，时间12小时左右。

（若材料暂不制片，可保存于70％乙醇中。

）然后将组织块依次移入85％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各8-12小时，→95％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各2小时，→100％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各1小时。

因无水乙醇对组织有脆化作用，故在无水乙醇中时间不能超过2小时。

（2）透明：由于乙醇与石蜡不能相溶，故浸蜡前要对脱水后的组织块进行透明。

常用透明剂有二甲苯、氯仿、苯、香柏油或冬青油等，透明剂能同与乙醇和石蜡相溶，并能增强组织块的折光系数，故透明后的组织块呈半透明状。

使用二甲苯作透明剂的透明过程为：将脱水后的组织块放入无水乙醇与二甲苯混合液（1:1）中30分钟，再移入二甲苯中15-20分钟。

3、浸蜡与包埋（1）浸蜡：将透明后的组织块置于刚过熔点的熔化石蜡中浸渍，使石蜡逐渐渗入并完全置换出透明剂。

过程为：先将透明的组织块移入二甲苯与石蜡混合液（1:1）中，在60℃温箱中放置30分钟，再移入熔化的石蜡（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）中，在温箱中每级各1小时。

组织病理切片的制作流程

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------组织病理切片的制作流程组织病理切片的制作流程 1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。

取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1) 材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2) 组织块的大小：所取组织块较理想的体积为 2. 0cm 2. 0cm 0. 3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取 0. 1～0. 2cm 即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取 0. 3 ～0. 5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3) 勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。

1/ 17夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4) 规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。

(5) 选好组织块的切面: 根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。

纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。

(6) 保持材料的清洁: 组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。

(7) 保持组织的原有形态: 新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。

组织切片流程

组织切片流程常规石蜡包埋社团切片（常规切片）制备的操作流程及要求㈠社团块依序进行：①水洗，②脱水，③透明，④浸蜡，⑤包埋和⑥切片。

㈡社团切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物，必须专人管理，2m以内不患上有有焰的火，局部环境应有良好的透风和救火设施。

㈢常规切片的手工操作（步骤次序和各步骤的持续时间）1．水洗：用水流冲洗已经固定的社团块30min。

2．脱水（常温下）（1）乙醇－甲醛（AF）液固定60~120min（2）80%乙醇60~120min（3）95%乙醇Ⅰ60~120min（4）95%乙醇Ⅱ60~120min（5）无水乙醇Ⅰ60~120min（6）无水乙醇Ⅱ60~120min（7）无水乙醇Ⅲ60min［注意事项］①未经充分固定的社团不患上进入脱水程序。

②用于脱水的试剂容积应为社团块总体积的5～10倍以上。

③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。

④脱水试剂应及时过滤、更换（500ml乙醇可用于500个社团块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换）。

⑤较大社团块的脱水时间长于较小者，应将两者分隔进行脱水。

⑥社团置于无水乙醇内的时间不宜过长（以免硬化）。

⑦丙酮脱水性能强，会使社团块过缩、硬脆，不宜用以替换无水乙醇。

3．透明（1）二甲苯Ⅰ20min（2）二甲苯Ⅱ20min（3）二甲苯Ⅲ20min［注意事项］①二甲苯的容积应为社团块总体积的5～10倍以上。

②社团块在二甲苯中透明的时间不宜过长（以防社团硬、脆），并依不同品类社团及其大小而异；社团出现棕黄或暗红色透明即可。

③二甲苯应及时过滤、更换。

④社团经二甲苯程度适当处理后不显透明时，常提示该社团的固定或脱水不充分，应查找原因并妥帖处理。

4．浸蜡（1）石蜡Ⅰ（45~50℃）60min（2）石蜡Ⅱ（56~58℃）60min（3）石蜡Ⅲ（56~58℃）60min［注意事项］①熔化石蜡必须有专人负责，必须在熔蜡箱内或水浴中（70℃）进行，不患上用有焰的火加温。

组织切片制作方法

组织切片制作方法
组织切片是制备病理学标本的主要方法之一，以下是其制作步骤：
1. 收集组织样本，并在一定时间内将其放入固定液中进行固定。

2. 将组织样本从水中逐渐转移到酒精中进行脱水。

3. 将样本置于包埋剂中，使其逐渐转移到蜡块中。

4. 用切片机将蜡块切割成极薄的切片，并用染色剂染色，以便在显微镜下进行观察和分析。

5. 将切片封入载玻片中。

此外，为了确保切片的质量，需要注意以下几点：
1. 载玻片应干净无油，如有云雾斑点，则不能使用。

2. 切片制作过程中，应将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上，使蜡块的切面与刀口成平行方向。

刀的倾斜度通常为15℃，转动轮转推进器，调节切片厚度为6μm，切成厚度均匀的切片。

3. 切片贴附后，放在空气中稍晾干，然后进行烤片。

烤片的温度以蜡溶解为准，也可以放置60℃烘箱内烘烤过夜。

血块组织、皮肤组织须及时烤片，但脑组织、脂肪组织待完全晾干后才能进行，这样可防止产生气泡而影响染色。

以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。

组织病理切片制作流程(完整版)

组织病理切片的制作流程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。

取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。

夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。

(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。

纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。

(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。

(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。

为此可将组织展平，以尽可能维持原形。

2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本和固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。

故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。

组织病理切片制备流程

组织病理切片制备流程组织病理切片制备流程是临床病理诊断的基础。

下面将详细介绍组织病理切片制备流程。

1. 采集组织样本首先需要采集病人的组织样本。

组织样本可以来自手术标本、活检标本或尸检标本等来源。

在采集样本时，需要严格遵守无菌操作的原则，以避免样本受到外部污染。

2. 固定组织样本采集的组织样本需进行一定的处理，以保持其组织结构和形态不变。

常用的固定剂有福尔马林、甲醛、丙酮等。

其中福尔马林是最常用的固定剂，能够快速稳定组织，但是对人体危害较大，需要注意安全操作。

3. 制备组织样本固定后的组织样本需要进行切片处理。

首先，需要将组织样本浸泡在甲醛液中，并使用匀浆器进行均匀处理。

接着，将固定后的样本打蜡，然后使用切片机将样本切成薄片。

在切片的过程中，需要注意操作方法，以保持切片的质量。

4. 染色处理切片后需要进行染色处理，使细胞结构更加清晰明了。

常用的染色方法有血液学染色、肿瘤学染色、免疫组化染色等。

其中，免疫组化染色方法能够更明确地确定病理诊断。

5. 镜检染色后的切片需要进行镜检。

首先，需要将切片放在显微镜下观察，并进行病理学分析。

医生需要根据组织的形态、排列方式和染色效果等来进行分析和诊断。

6. 诊断报告根据镜检结果，医生需要撰写诊断报告。

诊断报告应准确地描述组织病变的程度、性质和位置等信息，并建议相应的治疗方案。

通过上述组织病理切片制备流程的介绍，可以看出，组织病理切片制备是一项复杂而严谨的工作。

医生和技术人员需要严格遵守操作规程，从而确保切片质量和诊断准确性。

组织切片制备技术

组织切片制备技术在生命科学领域中，组织切片制备技术是一项基本且重要的技术，它被用于组织学、解剖学、病理学和神经科学等诸多领域。

组织切片制备技术可以产生高质量的组织切片样本，以便进行研究和分析。

本文将探讨组织切片制备技术的具体步骤和注意事项。

1. 组织处理在进行组织切片制备之前，需要对样本进行处理。

处理的目的是保护组织结构和细胞形态，以便在组织切片过程中得到高质量的切片。

处理的方法包括固定、脱水和浸渍。

2. 组织固定组织固定是组织切片制备技术中的一个重要步骤，目的是停止组织活动并保护组织结构。

固定的方法包括乙醛、甲醇和布氏液等。

3. 组织切片组织切片是组织切片制备技术的核心步骤之一。

合适的切片厚度应该根据需要来决定。

切片的方法包括手工切片和机器切片。

机器切片可通过旋转式、滑动式或挤压式制备。

4. 切片染色切片染色是组织切片制备技术中的关键步骤，可使细胞和组织结构变得更明显。

切片染色的方法主要有荧光染色和显微镜染色。

5. 成像和分析成像和分析是组织切片制备技术的最后一步。

通过显微镜成像和分析，可以观察到细胞和组织结构的形态和分布。

这种方法还可以被用于研究细胞和组织中的基因，蛋白质和其他特定目标。

注意事项：- 操作中要注意安全，佩戴手套和眼镜等防护设备；- 操作环境要保持清洁，防止异物进入；- 操作材料要储存妥善，避免过期或者污染；- 操作流程要规范，避免操作过程中发生错误。

结论：组织切片制备技术是在生命科学领域中非常基本的技术。

制备高质量的组织切片样本是开展组织学、解剖学、病理学和神经科学等领域的基础工作。

研究人员在进行组织切片制备时，必须依据标准的步骤和注意事项，以确保所获得的数据是可靠且具备参考价值的。

组织切片制作步骤

如何做出一张合格的组织切片？一般要先取材→固定→透明→包埋→切片，最后进行染色组化等操作。

本文着重叙述取材以后如何进行包埋和切片。

包埋可分为OCT包埋（冰冻切片）与石蜡包埋。

.冰冻切片对于组织的抗原性保留比较好，但是形态保留比较差，一般用来做原位杂交ISH，免疫荧光IF。

冰冻切片较厚一般厚度8~15μm。

冰冻包埋步骤较为简洁，固定之后，直接用镊子将样品放置到样品托上，挤压OCT完全包裹组织，放入冷冻机待OCT凝固即可。

凝固后就可以直接切片。

如果不能及时切片，用锡箔纸包装好，放入-80℃存放。

.石蜡切片，一般用来做HE染色或者免疫组织化学IHC。

厚度更薄，一般为4um，工艺较为复杂并且制作样本的好坏取决于不同组织的种类和组成，更加依赖制作者的经验，需要在实验过程中不断优化才能得到最佳的实验条件。

下面是石蜡包埋和切片的具体步骤：一、实验材料动物组织，4%多聚甲醛（PFA），PBS，ddH2O，二甲苯，梯度乙醇，石蜡，石蜡包埋机。

二、实验步骤1、取材：针对各组织部位规范化取新鲜组织，并用刀片单向切割成约3-4mm大小组织块，不要超过5mm。

2、固定：将切好的组织块放入4%多聚甲醛（PFA）中固定，以组织块与4%多聚甲醛体积比1：7为宜。

PFA最好现用现配，一般在4度固定24~48h即可，固定时间因组织而异。

冰冻切片可以直接用丙酮固定。

其他固定液比如缓冲福尔马林PBS配的福尔马林含有K+和Na+，PH=7.4。

固定的原理是采用蛋白质凝固剂，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构、位置和除水以外的物质的过程。

固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物、酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构和生活时相仿。

关于固定液的选择可以参考这篇文章[1]。

3、洗去PFA：固定完毕后，流水冲洗3次，每次5分钟。

4、脱水透明：此步骤应根据不同组织设置合适时间，基本流程如下脱水：30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇（关键步骤：可当日2H也可过夜）→95%乙醇1→95%乙醇2→无水乙醇根据不同组织大小和类型调整脱水时间，对于小鼠肝组织95%乙醇控制在30min-1H，100%乙醇5min-30min。

组织病理切片制作流程(完整版)

组织病理切片的制作流程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。

取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。

夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。

(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。

纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。

(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。

(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。

为此可将组织展平，以尽可能维持原形。

2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。

故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。

组织切片制作过程

组织切片制作过程一、组织切片技术1、取样：样品长度0.5—1cm，切面光滑（最好一刀切）2、样本处理：取样后立即放入Bowin氏固定液中固定（24—48h一般24h）3、组织冲洗：将组织用纱布或包埋盒包住，装入容器中，兑水冲洗过夜，一般为一夜。

4、组织脱水：70%酒精—80%酒精—85%酒精—90%酒精—95%酒精（各50min）无水酒精I—无水酒精II (各40min)5、组织透明：纯酒精（2）：二甲苯（3）（体积比为2:3混合液）（10min）纯酒精（1）：二甲苯（3）（体积比为1:3混合液）（5min）纯二甲苯(2min)6.透明石蜡和包埋：（两个蜡杯，一个1h,一个1—2h）,烘箱温度65—70℃（蜡的熔点为55—60℃）①接着步骤5马上取出样品后放入第一个蜡杯1h后转移到另一个蜡杯中，在第二个蜡杯中放置时间也为1h。

②包埋：a.制作中昌状包埋盒凹b.j将蜡倒入包埋盒中，然后用加热的镊子夹住样品让人包埋盒中（防止气泡）。

③修块：a.将蜡块修整为长方形或正方形，方便切片b.切片、展片、贴片①切片厚度为5—7μm，刀片要新，勿磨损，先用15—20μm厚度将蜡块修平，然后再将厚度调整到5—7μm②展片：温度调为43—44℃，与刀片相接触的面朝下，等到片子完全摊平（无白点）方可捞出。

（注：载玻片必须用盐酸浸泡清洗干净，无灰尘）③烤片：温度为45℃，烘烤时间为10—20分钟④再将玻片放入烘箱中（37—45℃）数小时，片完全贴住即可。

二、HE染色过程（苏木精—伊红染色）1.脱蜡：①二甲苯I 8min ②二甲苯II 5-8min2.洗去二甲苯：③无水酒精I 3min④无水酒精II 3min3.复水：⑤95%酒精5min—90%酒精5min—80%酒精5min—70%酒精5min—60%酒精5min—50%酒精5min—自来水5min—蒸馏水5min4.核染：⑥苏木紫 8min（染成蓝色）5.洗去苏木紫：⑦自来水 8—10min（拿出片子直接在自来水中冲洗）6.盐酸酒精分色（颜色由蓝变红即可）：⑧醇酸30s—1min(洗去其他细胞器染色，核染较深)注：醇酸配制：浓盐酸0.5—1ml，70%—95%酒精100ml7.蓝化：⑨10min—数小时（由红变蓝，一般半小时即可）将染缸放入盛满自来水的脸盆中，打开水龙头，小流速。

组织切片制作步骤

组织切片制作步骤1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。

取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为50px×50px×7.5px，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～5px即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～12.5px，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。

夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。

(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。

纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。

(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。

(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。

为此可将组织展平，以尽可能维持原形。

2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。

故取组织块的大小一般为50px×50px×7.5px。

法医病理学组织切片制作

3．苏木素的配方①自然氧化（Ehrlieh）苏木素：苏木精 2g 铵明矾 3g 无水酒精 100ml 甘油 100ml 蒸馏水 100ml 将上述药品配在一起后装入玻璃瓶中，瓶口罩上数层纱布以防灰尘落入染液，暴露于阳光中或空气中自然氧化（成熟过程），约6周—8周以上，染液配制越久其染色能力越强，可以一次大量配制以备用。
常用脱水剂：溶于水和透明剂的试剂，如酒精、丙酮、正丁醇等。（1）酒精步骤：70％ 80％ 90％ 95％ 100％Ⅰ 100％Ⅱ，一般数小时到12小时，更换一次酒精。配低浓度酒精时，可用市售95％酒精配制。70％酒精：95％酒精70ml加蒸馏水25ml至95ml；80％酒精：95％酒精80ml加蒸馏水至95ml，依次类推。（2）丙酮脱水作用与酒精相似，虽其脱水作用比酒精强，但可引起组织块的收缩较，价钱较贵，故不宜用于一般组织脱水，它即有脱水作用又有透明作用，用丙酮固定的材料要小，脱水1～8小时即可。
（三）蜡的种类：1．蜂蜡：是动物体内提取的蜡，颜色微黄故也称为黄蜡，溶点在54℃左右。特点是润滑带有粘性，冬天用量比夏天多。2．石蜡：是由矿物质中提取，质地较疏松，色白。根据蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡。软蜡：50℃以下的石蜡。硬蜡：溶点在50℃以上的石蜡。两种蜡可以混合在一起使用。石蜡熔点有52℃～54℃，56℃～58℃，58℃～60℃，60℃～62℃。
七、切片工具：切片刀、磨刀机、切片机、水浴锅，干燥箱等；载薄片、手术刀、毛笔、弯镊子、托盘、大平皿（展片使用）、烤片盒、蛋白甘油等。（一）切片机种类：轮转式切片机、滑行式切片机（滑动式）、冰冻切片机、超薄切片机等（电镜用）。（二）构造：由四个基本部分组成：刀台、标本台、旋转轮、控制切片厚度的微动装置（标有 l～25或1～50的数字，每一数字代表一个微米）。根据需要调节厚度，一般采用5μm～7μm。蛋白甘油：用鸡蛋清（不要鸡蛋黄）用玻璃棒充分搅拌后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加数颗麝香草酚。

HE组织切片制备标准操作程序

HE组织切片制备标准操作程序一、Purpose 目的保证病理切片质量，以达到准确的病理诊断。

二、Scope范围石蜡包埋组织切片三、Reagents and instrument试剂，仪器苏木素、伊红、切片机、水浴箱。

四、Process工作流程（一）切片1、将切片刀安装在持刀座上；2、将蜡块固定于支持器上；3.、细心移动刀座或蜡块支持器，使蜡块与刀刃接近，旋紧刀座，观察蜡块面是否与刀座相平，如不平须调节支持器，使蜡块面与刀面平行；4、修块（粗切）：用右手匀速旋转切片机轮，修切蜡块表面至包埋其中的组织块全部切到。

修块粗切片的厚度为15-20微米（注意：对于医嘱再次深切片特别是在原切片中发现了有意义病变而进行的深切片应尽量少修块，以尽量好地获得有关病变的连续性）；5、调节切片厚度调节器（一般为2-4 微米），进行切片。

切出的蜡片应连续成带状，完整无缺，厚度适宜（3-5 微米）、均匀，无刀痕、颤痕、皱褶、开裂、缺损、松解等；6、以专用镊子轻轻夹取完整、无刀痕、厚薄均匀、干净的蜡片，放入漂片机的温水中（40-50℃左右），使切片全面展开；每切完一个蜡块后必须认真清理水面，不得遗留其它病例的组织碎片以免污染。

7、将蜡片附贴于处理过的载玻片上，蜡片应放在载玻片右2/3处的中央，留出载玻片左1/3的位置用于贴附标签；蜡片与载玻片之间无气泡；为防止蜡片滑落，蜡片的一角（远离组织的）可粘在载玻片边缘上；若一片载玻片上捞两片以上的蜡片，必须把蜡片均匀贴附在载玻片上，保持制片的美观。

8、必须立即在置放了蜡片的载玻片一端（待贴标签处），用铅笔准确清楚地标记其相应的病理号（包括次级号），外借白片，需在每张白片上注明对应的病理号。

9、将置放了蜡片的载玻片呈45度斜置片刻；待载玻上的水分流下后，将其插入专用的染色架中，最后置于恒温箱中烘烤（72℃左右，15分钟），然后即可进行染色。

10、切片注意事项（1）切片前蜡块要冷冻，这样容易切片（甲状腺、淋巴结及胃镜等特殊组织，必须控制冰冻时间）。

组织切片制作步骤

组织切片制作步骤1.从组织中提取材料的方法是制作切片的重要步骤。

根据教学，科研和外部检查的具体要求，从人体（手术标本，活检标本，尸检标本）或动物中提取，确定取材的部位和方法。

取材者需要掌握解剖学，组织学和病理学的基本理论知识，还需要掌握实际的手术技术。

每个组织器官都有一定的位置和方法，不能随意切割组织作为生产材料，否则就无法实现教学，科研和临床诊断。

具体要求如下：（1）材料的新鲜度：获得的组织越新鲜越好。

通常将人体组织分离，并杀死动物组织后将其快速固定以确保原始的形态结构。

（2）纸巾块的大小：所取纸巾块的理想体积为50p某某50p某某7.5p某，以使固定液能快速，均匀地渗透到组织中，但纸巾块的理想体积因不同的准备材料和目的。

例如，在进行病理检查和科学研究切片时，可以将组织块变薄0.15p某，这可以缩短固定脱水的时间和透明度。

如果制作示教部分，则厚度为0。

（3）请勿挤压纸巾块：用于切割纸巾块的刀子和剪刀应锋利，并且在切割过程中切勿来回锉刀。

请勿将组织夹得太紧，以免因挤压而使组织和细胞变形。

（4）标准化采样位置：准确地根据解剖位置，并根据不同的病理位置和性质标准化病理标本的采样。

（5）选择组织块的切片：根据各器官的组织结构，确定切片的方向。

纵向或横向切割通常是显示组织形态结构的关键，例如，横向切割更适合长管状器官。

（6）保持材料清洁：如果组织块上有血液，污垢，粘液，食物，粪便等，可以用水冲洗，然后放入固定溶液中。

（7）保持组织的原始形状：固定好新鲜组织后，它会或多或少地收缩，有时甚至完全变形。

为此，组织可以被弄平以尽可能地保持其原始形状。

2.固定（1）小组织固定方法：这是最常用的方法。

从人体或动物身上获取的小组织必须立即放入液体固定剂中进行固定。

通常，标本与固定剂的比例为1：420，但组织块不应太大或太厚，否则固定剂不能快速渗透。

因此，所取组织的大小通常为50p某某50p某某50p某某7.5p某（2）注射和灌注固定方法：由于某些组织块太大或固定溶液很难渗透到内部，或者需要固定整个器官或动物体。

组织切片制作步骤

组织切片制作步骤组织病理切片的制作过程组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。

一、取材切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。

组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。

切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。

二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。

材料取下后，应迅速固定。

固定液数量应为病理组织块的5到20倍。

由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。

因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。

最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。

三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。

一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。

及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色四、脱水经过固定的组织，冲洗后要进行脱水。

脱水的目的在于将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，为石蜡等其他包埋剂浸入组织创造条件。

五、透明透明的目的是将组织内的酒精用矿物油或植物油置换出来，并溶解石蜡，帮助石蜡浸透组织。

由于经过透明剂处理的组织块用肉眼观察呈透明状，故称这一过程为透明。

六、浸蜡浸蜡是指组织经过透明作用以后，放入溶化的石蜡中浸渗，使石蜡浸入组织块中，冷却后，才能进行切片。

七、包埋包埋就是将已浸渗好的组织包埋于浸渗剂中。

根据需要，包埋的方法常有石蜡包埋法和火棉胶包埋法。

石蜡包埋法：八、组织切片不同的切片制备方法，其切片方法也有较大差别，组织切片法包括石蜡切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、石蜡包埋半薄切片法、树脂包埋薄切片法和大组织石蜡切片法等。

常用的切片工具包括组织切片机、切片刀和自动磨刀仪器等。

组织病理切片的制作流程

组织病理切片的制作流程第一篇：组织病理切片的制作流程组织病理切片的制作流程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。

取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。

夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。

(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。

纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。

(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。

(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。

为此可将组织展平，以尽可能维持原形。

2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。

组织切片的制作步骤

组织切片制作过程：1.固定：10%甲醛溶液内固定24～28h组织块大小为15×15×5mm2.水洗：流水冲洗24h需用到胶皮管、烧杯、纱布组织块放于烧杯中，用纱布将烧杯口封死，在纱布中间部位留出供胶皮管插入的豁口，胶皮管一头接到水源，另一头插入烧杯中。

有水注入后，尽量让组织块不要沉底。

3.脱水：不同浓度的酒精50%——70%——80%——95%——95%——无水酒精——无水酒精30m-1h 2-4h 2-4h 2h 2h 1h 1h其中70%酒精可以长时间保存，并且在脱水过程中随时可返回70%酒精中。

但是返回后，仍需按顺序进行，即80%开始。

4.透明：无水酒精：二甲苯（1：1）——二甲苯30m 30m透明过程中，在二甲苯中时，需注意观察组织块是否已透明，无需按固定时间来计算。

5.浸蜡与包埋：将石蜡融化后置于52℃～60℃烘箱中二甲苯：石蜡（1：1）——石蜡（1）——石蜡（2）——石蜡（3）30min 30min 30min 30min6.切片：按需要厚度一般将切片机设为5-7um厚，厚度视组织块而定。

7.展片：用水浴锅，将温度设为40℃，用毛笔将切好的蜡片从切片机上卷下，放入水浴锅中。

8.粘片：需准备蛋白甘油，蛋白甘油由鸡蛋蛋清和甘油调配而成，比例为1：1。

先将一滴蛋白甘油涂抹在干净的载玻片上，然后用载玻片从水中将展好的蜡片捞起，平放入烘箱内进行烘干，烘干温度为50℃，时间为12～24h。

9.染色：二甲苯（1）——二甲苯（2）——无水酒精（1）——无水酒精（2）——5-10min 5-10min 5min 3-5min95%酒精（1）——95%酒精（2）——80%酒精——70%酒精——50%酒精——2-3min 2-3min 2min 2min 2min蒸馏水——苏木精——自来水洗——蒸馏水——1%盐酸酒精——自来水蓝化2min 5-15min 2min 2min3-5s 15-30min——蒸馏水——50%酒精——70%酒精——80%酒精——伊红——95%酒精(1)2min 2min 2min 2min 1-2min 2-5min——95%酒精（2）——无水酒精（1）——无水酒精（2）——二甲苯（1）2-5min 5min 5min 5min——二甲苯（2）5-10min10.封片：树胶封片，置于35℃～38℃之间烘干。

组织切片制作步骤

组织切片制作步骤
制作过程如下：
1、固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶，腐败分解，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化；
2、脱水：将组织细胞所含水分除去。

此过程还使组织块进一步硬化；
3、透明：用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的有机溶剂，将组织中的酒精取代，以便石蜡浸入。

通常用二甲苯为透明剂；
4、浸蜡：在温箱内进行。

已透明的组织块放入加热融解的石蜡中，让石蜡浸透组织，作为支持介质；
5、包埋：将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中，迅速冷凝，组织决便被蜡包埋；
6、切片：切片厚度随制片目的而调整；
7、贴片烤干：石蜡切片在温水上展平后，移在玻片上，烤干，即可供染色处理。

染色后用树胶、盖坡片封固，可永久保存。