苏木素-伊红染色液 一步法
HE(苏木素-伊红)染色试剂盒操作说明及注意事项
HE（苏木素-伊红）染色试剂盒操作说明及注意事项货号：G1120规格：3×10ml/3×100ml保存：常温保存，复检期至少1年。
产品内容G1120-10G1120-100苏木素染液10ml100ml分化液10ml100ml伊红染液10ml100ml注意：环境温度时，分化液可能会结晶析出，将分化液37℃水浴融化后即可，不影响使用。
产品说明：苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining)，简称HE染色法，是病理学常规制片中最基本的染色方法。
苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。
例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。
胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。
本产品所包含试剂均为工作液，可直接使用。
操作说明（以下步骤仅供参考）：（一）石蜡组织切片染色。
1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，切片。
2．石蜡切片脱蜡水化：①二甲苯（I）中脱蜡5min。
②换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5min。
③无水乙醇5min。
④95%乙醇2min。
⑤80％乙醇2min⑥70%乙醇2min。
⑦蒸馏水2min。
3．苏木素染液染色5-20min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。
4．分化液分化30s。
5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。
6．置伊红染液几秒-2min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。
7．自来水浸泡5min。
8．脱水，透明，封片：①95％乙醇（I）1min②95％乙醇（Ⅱ）1min③100％乙醇（I）1min④100％乙醇（Ⅱ）1min⑤二甲苯石炭酸（3：1）1min⑥二甲苯（I）1min⑦二甲苯（Ⅱ）1min⑧中性树胶封固，镜下观察。
标本脱水的过程
标本脱水的过程
第一天：晚上标本进入50%-60%的乙醇；
第二天：早晨进入70%-80%的乙醇，晚上6点进入第一瓶95%乙醇，晚上11点-12点进入第二瓶95%乙醇；
第三天：早晨8点进入第一瓶无水乙醇，10点进入第二瓶无水乙醇，12点进入第一瓶二甲苯，下午1点半进入第二瓶二甲苯，3点进入第一瓶熔蜡（60-65摄氏度），4点半进入第二瓶熔蜡，6点半从蜡缸中拿出来，此时即可包埋标本或选择以后任意时间包埋。
试剂配置
1、苏木素染色液
甲液：碘酸钠0.2克，明矾（水合硫酸铝铵）17.6克，溶解于730毫升蒸馏水。
乙液：苏木素2.3克，溶解于乙二醇250毫升。
甲液和乙液混合后加入20毫升冰乙酸即为染色液
2、伊红染色液
储备液：伊红20克溶解于500毫升蒸馏水，过滤，滤液加浓盐酸10毫升，过滤，滤渣用蒸馏水洗3遍，将滤渣烘干后溶解于1000毫升95%乙醇中。
工作液：取适量储备液加入等量95%乙醇即可。
3、饱和碳酸锂溶液（自来水）
4、1%盐酸分化液（自来水）
1毫升39%浓盐酸+99毫升蒸馏水。
苏木素伊红染色实验流程
苏木素伊红染色实验流程
选材料，这可得仔细挑。
咱们得找那些合适的组织标本，才能
进行后面的实验。
挑好后，咱们就得处理它们了，让它们的形态和
结构固定下来，这样才能看得更清楚。
染色啦！首先，咱们得把标本泡进苏木素染料里，这样细胞核
就能染上漂亮的蓝色。
等它们吸饱染料后，咱们再用水洗一洗，去
掉多余的染料，让细胞核的颜色更均匀。
接下来，就是给细胞质上色了。
这时候，咱们用伊红染料，把
细胞质染成红色。
跟蓝色的细胞核一对比，特别明显！染完色，再
洗一洗，去掉多余的染料，标本就准备好了。
最后一步，封片！咱们把标本固定在玻璃片上，再盖上一层薄
薄的封片剂，这样，细胞的样子就被永久地保存下来了。
以后想看，直接在显微镜下瞅一眼就行！
整个实验过程得特别小心，每个步骤都不能马虎。
只有这样，
咱们才能看到清晰、准确的染色效果，为医学研究提供有用的帮助。
石蜡切片(苏木精-伊红对染法)
石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
一、器材及试剂：1. 器材：切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。
切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。
2．试剂：中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液， 1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
3. 材料：鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。
二、实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
三、试剂配法：1．中性甲醛固定液：甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度） 100mL磷酸氢二钠 6.5磷酸二氢钾（钠） 4g双蒸水 900mL 2．苏木精、伊红染色液为碧云天产品3．1%盐酸乙醇液盐酸 1份70%酒精 100份4．甘油蛋白贴片剂：蛋白 50 ml甘油 50 ml水杨酸钠（防腐剂） 1g配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。
苏木素伊红混合染色液(一步法)
苏木素伊红混合染色液(一步法)简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。
苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。
在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。
在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
Leagene苏木素伊红混合染色液是把苏木素和伊红混合在一起，只需对细胞、组织等样本染色一次，既能使苏木素上色亦可使伊红上色的新型染色液，可用于染色样本的类型有石蜡切片、冰冻切片、血液涂片、培养细胞以及体液涂片(如宫颈粘液涂片、脑脊液涂片等)等，本产品尤其适用于血液涂片和体液涂片染色。
染色原理：1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。
细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA 双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。
苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。
细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。
当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。
伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。
在HE染色中常用盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。
细胞爬片he染色方法[整理版]
![细胞爬片he染色方法[整理版]](https://img.taocdn.com/s3/m/41258eed760bf78a6529647d27284b73f2423649.png)
细胞爬片HE染色方法一、原理苏木素（Hematoxylin）－伊红（Eosin）染色法，简称HE染色法。
HE染色法采用两种染料即碱性染料苏木素和酸性染料伊红分别于细胞核和细胞质发生作用，使细胞的微细结构通过颜色而改变它的折光率，从而在光镜下能清晰地呈现出细胞图像。
该染色过程既有化学反应，又有物理作用参与。
从化学反应看，组织细胞内含有酸性物质和碱性物质，细胞的酸性物质与碱性染料的阳离子结合，而细胞核的碱性物质与酸性染料的阴离子结合，使其中酸性细胞核被碱性的苏木素染成蓝色，而碱性的胞浆被酸性染料伊红染成红色。
其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。
从物理现象看，主要有吸附、吸收之说。
HE 染色提供良好的核浆对比染色，是细胞化学染色最常用的一种方法。
二、实验用品1、固定液：常用95％乙醇和冰丙酮2、苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用。
3、伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中。
4、稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1％盐酸。
5、系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。
6、培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。
三、实验步骤1、样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×105/ml，滴加于盖玻片上（置于6孔板中），培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS洗涤3次。
2、样品固定：95％乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1mi n。
3、染核：苏木素染液染色2－3min，自来水洗涤。
4、分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1％盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。
5、染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。
6、吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封片。
HE染色法
苏木素 1克
碘酸钠 0.2克
钾明矾 50克
水合氯醛 50克
蒸馏水 1000ml
柠檬酸 1克
将苏木素及碘酸钠用蒸馏水加温溶解,呈樱 桃红色,再加入钾矾, 使溶液变为兰紫色,煮沸5min后,再加入水合氯醛搅拌,此时液体变为红紫色,溶解完后加入柠檬酸,取下冷却,滤过后即可使用。此液能长久保存。
(三)Harris氏苏木素液:
苏木素 0.9克 铵明矾(或钾)20克
甲液 无水酒精 10ml 乙液 蒸馏水 200ml
一氧化汞 0.5～1克
甲、乙两液分别溶解,然后两液混合,加热熬沸,再加入一氧化汞, 以玻棒搅至溶液呈深紫色,置于凉水中急速冷却,静置一夜后,滤过密封保存。用前若加入少许5%冰醋酸,则染色效果更好。此液经2～3个月后,着色力减退,故宜少配。
(3)入苏木素染液,1%盐酸分化,水洗 兰化;
(4)入0.5～1%酸性复红液5～30min,水洗 至红色不退;
(5)蒸馏水洗30秒钟以上,入买洛里氏染色液20min,流水冲洗2～5min;
Devil入95%酒精分化,入无水酒精脱水,二甲苯透明,封固。
结果:胶元纤维, 网状纤维呈深红色、粘液、淀粉样物呈淡兰色,纤维素、 肌纤维、胶质纤维酸性颗粒呈红色.红细胞、髓鞘呈红色,细胞核呈兰色。
3.移入90%酒精中(二瓶),约2min。
4.移入80%酒精中(二瓶),约2min。
5.移入70%酒精中,约2min。
6.移入水中,洗去酒精,约2～3min。
7.移入蒸馏水中,约2min。
(二)染色:
1.移入苏木素中,浸染8～15min,一般以稍深染为宜。
2.移入水中,洗去苏木素和浮色,约1～2min。
(仅供参考)苏木素伊红染色液说明书
苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。
苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。
带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。
伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。
此染色法可观察到清晰的细胞结构。
样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。
伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。
返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。
由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。
使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。
【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。
保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。
产品使用效期为2年，具体效期见标签。
【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。
为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。
根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。
苏木素-伊红染色切片褪色的解决办法
（ 稿 日期 ：０ ０ ０ — ２ 收 ２ １－ ６ ０ ）
有机溶剂， 与水互不相溶， 因此需要借助乙醇使组织切片从无
水状态进入到 乙醇 中进行染色反应Ｉ ④放人 １０ 。 】 。 ０ ％乙醇 Ⅱ ５
ｍｎ ⑤放人 ９％乙醇 ５ｍｎ再放入 ８％ ７％７醇各 ５ｍｎ ｉ。 ５ ｉ， ０ 、０ － － ， ｉ，
水水洗是洗去未与组织 结合 的染液 ，将切片表面的浮色洗干
１～ ４ ， ２２ 盖玻片 自 ｈ 动脱落。②将带有组织的盖玻片用镊子整
齐地夹放在染 色架 ， 泡入二 甲苯 Ⅱ溶液 以浸过盖玻 片为宜 ， 时
间 ３ ～ ５ｍ ｎ 洗净黏附在组织上的 中性树胶 吸水 纸吸干 Ｏ ４ ｉ， 用 液体 。③放入 １０ ０ ％乙醇 Ｉ ｎ 由于二 甲苯属于非水性 的 ５ｍｉ，
不易脱落 ， 将其浸泡在二甲苯 Ｉ 溶液时 ， 放人 ３ ～ Ｏ℃烤箱内 ７４
陈旧褪色的石蜡切 片重染方法 ，通常都采 用酸性高锰 酸
钾氧化 、 酸氧化 漂白还原 法日 １ ％冰醋酸１ 高锰酸钾 、 草 和 ０ ３ ］ ， 草 酸氧化漂 白还原法会使组织略带 酸性 ， 破坏组 织正 常结构 ， 形 成空洞和脱落。１ ％冰醋酸脱色法通常需要 ２ ３ｂ作用 时间 ０ － ， 长， 不易掌握 。 笔者 经过 反复试 验证 明 Ｈ Ｅ染色 ，％盐 酸 乙醇分 色 和 １ １ ％氨水 溶液返蓝 ， 重染着色效 果理想 ， 苏木 素染 色后的 自来
３ 章克萍 ， 龙飞． 组织苏木素 一 伊红染 色的石蜡切片褪色后 还原 对 比染色 ． 实用临床医学 ， ０ ８ １ ９ ： ６ ２ ０ ， （ ） １．
来水流水 冲洗 １～ ０ ｉ。 ０２ ｎ ⑩蒸馏水过洗 １２ 。 ｍ ⑩放入 ８％、 ｓ ０ ７％乙醇各 ５ ｉ ⑩ ０ ％ ０ ｎ ｍ 。 ． 伊红乙醇溶液 ３５ ｉ ５ ￣ ｎ ｍ 伊红乙醇
苏木精-伊红(HE)染色
苏木精-伊红（HE）染色（一）染色程序
1.石蜡切片HE染色
（1）二甲苯Ⅰ：10min；
（2）二甲苯Ⅱ：10min；
（3）无水乙醇Ⅰ:1-3min；
（4）无水乙醇Ⅱ:1-3min；
（5）95%乙醇Ⅰ：1-3min；
（6）95%乙醇Ⅱ：1-3min；
（7）80%乙醇：1min；
（8）蒸馏水：1min；
（9）苏木精液染色：10min;
（10）流水冲洗去苏木精液：1min；
（11）1%盐酸-乙醇：1-3s（显微镜下观察效果）；（12）稍水洗：1-2s；
（13）返蓝（用温水或1%氨水等）：5-10s；（14）流水冲洗：1-2min；
（15）蒸馏水洗：1-2min；
（16）0.5%伊红液染色：1-3min；
（17）蒸馏水稍洗：1-2s；
（18）80%乙醇：1-2s；
（19）95%乙醇Ⅰ：2-3min；
（20）95%乙醇Ⅱ：2-3min；
（21）无水乙醇Ⅰ：3-5min；
（22）无水乙醇Ⅱ：3-5min；
（23）二甲苯Ⅰ：3-5min；
（24）二甲苯Ⅱ：3-5min；
（25）中性树胶封固。
2.冰冻切片HE染色
（1）冰冻切片固定：1-2min；
（2）稍水洗：1-2s；
（3）苏木精液染色（60℃）30-60s；
其余同石蜡切片。
（二）染色结果
细胞核呈蓝色，细胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。
钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。
苏木精-伊红染色使用说明
苏木精-伊红染色使用说明【试剂配制】苏木精染液苏木精配方很多，现介绍常用的是Harris苏木精染液。
苏木精1g95％乙醇溶液10ml钾矾或铵矾20g蒸馏水200ml氧化汞0.5g冰醋酸8.0ml先将苏木精溶于乙醇溶液。
钾矾加温溶解烧瓶后，将倒入，继续加热1min。
加热停止后，缓慢加入氧化汞0．5g，再继续加热煮沸1min。
迅速将烧瓶移人冰水内。
染液冷却呈深色时，加冰醋酸过滤后即可使用。
棕色磨口瓶保存。
室温保存2个月，4℃保存4个月左右。
1.0％伊红染液将1.0g水溶性伊红溶100ml蒸馏水中，每100ml伊红液中加0.2ml冰醋酸。
【实验步骤】(1)石蜡片经脱蜡、水化，单层细胞片经漂洗固定。
(2)苏木素染液染5～10min(染色时间与温度、染液成熟度有关)。
(3)自来水换数次，标本转为深蓝色。
(4)分色：浸入1％稀盐酸乙醇液(100ml 75％乙醇溶液中加1d盐酸)分色数秒钟至1min，脱去多余的蓝浮色，标本转为淡紫红色镜下呈紫红色，胞质无色或灰蓝色(后者为幼稚细胞)。
(5)蓝化：自来水浸洗10min或数小时，甚至更长，标本从淡紫红色转为鲜艳的浅蓝色。
注意：为缩短自来水浸洗时间，使苏木素更加显色，可将标本置淡氨水溶液(400ml自来水加氨水2滴)中10min，切片很快呈鲜艳的浅蓝色，经此处理的标本，要经自来水充分浸洗，否则会影响伊红染色。
(6)蒸馏水漂洗。
(7)伊红染液5～10min，进行对比染色。
(8)用蒸馏水洗去玻片的浮色,经70％、80％、90％梯度乙醇溶液脱水各一次，再分别经95％、100％乙醇溶液脱水各两次，每次1min。
(9)浸入二甲苯两次，每次1min。
中性树胶封片【注意事项】(1)Harris苏木精染液即配即用，不能久存，宜少量配用。
(2)HE染色时，除大批标本采取浸染外，一般以滴染为好。
染液反复使用而被水稀释,使特异性染色和染色速度下降。
(3)苏木精染液出现沉淀现象，是染液变质的一种指示，但滤液仍可使用一段时间。
形态学技能-苏木素-伊红染色
2.二甲苯：①染色前：溶解切片中的石蜡，以使染液可以进入细胞和组织，因此，石蜡的存在妨碍水和染料进入细胞；②染色后：透明切片的作用，以利于光线透过，否则组织切片透明度达不到光学显微镜观察时透光度的要求，在显微镜下看不清细胞和组织结构。
苏木素-伊红（HE）染色操作
【试剂和材料】
已烤片的石蜡切片、二甲苯、无水乙醇、90%乙醇、70%乙醇、Ehrlich苏木素颜色液、0.5%盐酸70%酒精分色液、稀氨水返兰液、1%伊红染色液、中性树胶、自来水、蒸馏水
【耗材和设备】
染缸、盖玻片、玻璃棒、显微镜
【具体步骤】
1.实验准备：按步骤顺序摆放好染缸，准备计时器用主要依靠盐酸在水中容易电离出氢离子，用来改变组织的电荷性质，使过染和吸附在组织表面的染料从组织中及表面脱落下来，从而达到分化的目的。根据盐酸的性质，盐酸在水中电离出的氢离子要比在乙醇中电离出的氢离子多，我们认为传统的盐酸乙醇用于分化乙醇在这里并不起作用，相反，由于乙醇的存在致使切片更易脱落，因为乙醇具有脱水及使组织收缩的作用，分化后水洗时组织又发生吸水、膨胀，而造成脱片。为此，改用盐酸水溶液进行分化，可避免脱片现象的发生。
分化和返兰的作用
1.分化作用：苏木素染色后，用水洗去为结合在切片中染液，但是对细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用酸性分化液脱去，保证细胞核和细胞浆染色分明。
2.返兰作用：分化之后苏木精在酸性条件下处红色离子状态，呈红色，若在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色，所以在酸性溶液中分化之后用水洗去酸而中止分化，后用弱碱水（稀氨水）使细胞核中苏木素呈蓝色，呈返兰作用。
苏木伊红染色
（I9）无水酒精 I 1—2分钟
（20）无水酒精II l－2分钟
透明
（21）二甲苯I 5—10分钟
（22）二甲苯II 5—10分钟
可作透明度试验：在黑色背景下以光线照于切片如果见有乳白色斑片系脱水不足，需
再行脱水。
封固
（23）盖玻片下封固
4．分化十分重要。分化步骤的准确也是染色成败的关键，若分化失当则必然引起染色不匀或过淡，过深等现象，因此分化后一定要镜检，观察胞核是否清晰，胞浆呈淡白色。否则需再次分化，不然一旦复染后，组织会呈紫蓝色即“蓝盖红”现象。
5．还原液不宜过浓，若碱性太强易使组织脱落故以淡为宜。
6．伊红宜淡染，复染过深胞核会不清晰，影响镜检。
逐级降浓度酒精水化
（3）无水酒精I（变为不透明） 1－2分钟
（4）无水酒精II 1－2分钟
（5）95% 酒精 1－2分钟
（6）80% 酒精 1－2分钟
（7）自来水洗 片刻
染色
（8）蒸馏水 片刻
（9）苏木素液染核 10—15分钟ຫໍສະໝຸດ （10）自来水洗 片刻
（11）1%盐酸酒精分化 0.5—1分钟
结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈桔红色，其它成分呈深浅不同红色。
二、染色过程中的加热
为了缩短某些程度的染色时间，通常可用加热的方法来实现。一般是将切片或涂片浸在染色液内，连同染色皿置于37℃或56℃温箱内至所需时间。
有的染色需用煮沸或近于煮沸的技术，可将染色液在试管内煮沸后倾在载玻片上；或在注满染液的载玻片下面直接加热，直接加热会因溶剂蒸发而使染色剂发生沉淀。这可在倾人染色剂以前在切片上覆盖一块方形滤纸束加以防止。染色完成后冲洗切片时可以很容易地除掉滤纸而又不会损伤切片。
(仅供参考)苏木素伊红染色液说明书
苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。
苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。
带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。
伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。
此染色法可观察到清晰的细胞结构。
样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。
伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。
返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。
由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。
使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。
【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。
保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。
产品使用效期为2年，具体效期见标签。
【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。
为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。
根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。
苏木精染色液的配制
1，Harris氏苏木素苏木素 2.5g 五水酒精25ml 硫酸铝钾50g 蒸馏水500ml 黄色氧化汞 1.25g 冰醋酸20ml配制：先将苏木素溶于酒精，取一个2000ml的三角烧瓶，倾入硫酸铝钾，加入蒸馏水，在电炉上加热，熔解硫酸铝钾，完全熔解后，待温度到90℃左右时，加入预先溶解好的酒精苏木素，继续加热至分i额疼，延续3-5min,此时溶液逐渐加深，变为紫红色，拔离电源，加入黄色氧化汞，当充分氧化后，重新插上电源继续加热3-5min，此时溶液变为深紫色，拔去电源，直接将三角烧瓶插入预先备好的冰水中，放于暗处，第二天过滤后加入冰醋酸，即可使用三个月。
注意事项：(1)苏木素一定要预先溶解，否则较难彻底溶解(2)加入黄色氧化汞后，可产生大量的气泡，因此，配制500ml的溶液，一定要选择2000以上的容器，否则液体便会溢出。
(3)当溶液变为深紫色后，应终止氧化，烧瓶应直接插入冰水中，不要担心玻璃瓶会爆裂，因三角烧瓶经过特殊处理的，不会有爆裂的危险。
(4)溶液过滤后方可加入冰醋酸，不要颠倒过来。
如果加入冰醋酸后再过滤，过滤速度将非常慢，这是因为醋酸会使滤纸中的纤维膨胀，增加了密度，使溶液不易通过，导致过滤时间延长。
(5)该苏木素在使用一段时间后，可以在表面产生金属膜，当出现这种现象时，可用粗滤纸捞取，否则贴于切片上将较难除去。
(6)苏木素加入冰醋酸后，其PH值在2-2.8之间。
2，Mayer苏木素苏木素0.1g 蒸馏水100ml 硫酸铝钾5g 柠檬酸0.1g 水合氯醛5g 碘酸钠20mg 用其进行核染时间可在20min-30min,核染色质清晰可见，核呈灰黑色。
配制溶液时，先将蒸馏水稍加温，加入苏木素并不停搅拌直至完全溶解，继而加入硫酸铝钾，令其充分溶解后，加入柠檬酸和水合氯醛，继续搅拌均匀，全部溶解后再加入碘酸钠，搅拌均匀，此时溶液的颜色变为深棕色，过滤后即可使用。
3，伊红染液的配制用于细胞浆的染色。
苏木素-伊红染色试剂盒使用说明书
注意：当跳过此步骤时，不使用二甲苯透明，酒精将会保存于组织切片上，导致伊红从切片 上流出。
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13 封片：中性树胶封片，自然风干或烤干，显微镜观察。
注意事项 HE 染色是一个对经验要求非常高的染色，上述实验流程中所提供的染色时间都是参考时间， 要根据实验原理，结合具体情况而定。
染色较弱是由于：1）组织切片过薄；2）染色时间不足；3）随后 95%酒精分化过度。 染色过度是由于：1）染液浓度较高（可能是由于过度蒸发）；2）组织切片过厚；3）染色时 间过长；4）随后 95%酒精分化不足。
伊红染色未分化（一种颜色）是由于： 1）固定不彻底； 2）过度染色，a）染色时间过长；b）染液浓度过高。
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4. 水洗：苏木素染色后，用水洗组织是非常重要的。这一步以及随后的水洗，可将多余的 染料，媒染剂等去除。适当的漂洗可以去除表面金属光泽，金属光泽可阻止苏木素的染色。 注意：跳过此步，将产生不好的结果，例如沉淀的形成，染液的稀释，表面金属光泽的存在。 5. 酸酒精：酸酒精分色剂 3~5sec。在苏木素染色方 注意：如果没有此步骤，组织切片将变为暗紫色。嗜酸结构，例如，胶原，将不会呈现明亮 的粉红色。组织结构之间将很难区分。很难对切片做出正确的判断。 分色过度可能是由于：1)酸浓度过高；2)脱色时间过长等。分色不足是由于：1)酸浓度过低； 2)脱色时间不足；3)在切片上有多余的蛋白或者明胶等。
结果 细胞核染为蓝色；细胞质染为红色。
温馨提示 1. 为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。 2. 试剂应保存于阴凉、干燥、通风良好的环境中。
储存温度 避光储存于室温。
包装清单 货号
HCY112A HCY112B
伊红染液(Eosin staining solution)使用说明书
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1 伊红染液
伊红染液（Eosin staining solution ）
为了正确区分胞内结构，伊红常常用于苏木素染色后的复染。
伊红是酸性染料，可染细胞质，尤其是线粒体、分泌颗粒和胶原。
它可以区分细胞内不同的细胞器以及不同的结缔组织。
实验流程
1.样品处理
1)对于石蜡切片
二甲苯中脱蜡2×3~5min。
无水乙醇5 min 、90%乙醇2 min 、70%乙醇2 min 、PBS 漂洗2 min 。
2)对于冰冻切片
PBS 漂洗2 min 。
3)对于培养细胞
用4%多聚甲醛固定10 min 以上；PBS 洗涤2×2 min 。
2. 伊红染色
伊红复染30~60sec ，可根据染色结果和要求调整染色时间。
注意：使用伊红复染组织切片的失败，将导致组织切片的低分化。
染色较弱是由于：1）组织切片过薄；2）染色时间不足；3）随后95%酒精分化过度。
染色过度是由于：1）染液浓度较高（可能是由于过度蒸发）；2）组织切片过厚；3）染色时间过长；4）随后95%酒精分化不足。
结果
细胞质：红色。
温馨提示
1. 为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。
2. 试剂应保存于阴凉、干燥、通风良好的环境中。
储存温度
避光储存于室温。
包装清单 货号
品名 包装 HCY106
Eosin staining solution 100mL 说明书 1份。
伊红配制
伊红，是我们常用的染料，英文名为Eosin，又叫四溴荧光素，是一种混合物。
伊红是生物学上常用的染料，一般观察细胞用的HE染色，其中的E就是伊红的简称。
伊红的分子式，但是实际试用的是混合物，而非纯净物，根据溶解度不同，分为水溶性和醇溶性的两种，水溶性的并不是不溶于醇，而是溶解度较小的缘故。
加入浓盐酸之后，原来的水溶液，竟然分成两层了。
因为常用，所以科里面有许多以前购买的伊红试剂，反正我们上班之后一直用的就是那些试剂，技术员说，从来没有购买过。
不过最近技术员说配置的伊红不怎么着色，她用的方法大概是2.5-5g伊红，溶于500毫升蒸馏水中配称伊红染液；后来我看了一下，还有其他的方法，就用另外一种方法：伊红0.5克，蒸馏水75毫升，95%的酒精25毫升，以前用这种方法配的着色还行，不过这次用这种方法配，着色效果也不是很好。
大家找不到原因，最后担心是不是试剂时间太长，过了失效期了？不过试剂瓶上并没有有效期一说。
就想到到病理技术网上问问，后来丁老师给了一个方法：2.5克溶于500毫升水当中，然后加入10毫升浓盐酸，静置过夜然后过滤，之后把放置烤箱内烤干，用这些干燥物，加95%的酒精1000毫升配称原液，用时可以用1：1到1：2的比例稀释。
其实这个方法以前看到过，只不过没有看明白。
最主要的疑惑就是不知道用水溶解之后过滤剩余的该如何处理？难道要把这些滤液倒掉吗？所以一直有着用的一个疑问。
这个疑问是因为我们用的是水溶性的伊红，在水中的溶解度比较高，简单的方法直接就可以使用，这些滤液倒掉岂不可惜。
但是实际操作的时候，发现原来自己的担心是多余的。
因为伊红溶解添加浓盐酸10毫升之后，原来的水溶液逐渐出现浑浊，最后慢慢地出现分层，上层的是淡黄色的清亮液体，而下面粉红色的絮状沉淀。
原来是添加酸之后，水溶液里出现了絮状沉淀。
这样伊红是不会随着过滤流掉的。
看到这个现象才明白了这样做的目的，这样第二天过滤之后，原来的伊红不仅没有减少，似乎反而多了点。
常用染色步骤HE,马松,糖原
常用染色步骤HE,马松,糖原联系人:周昌斌137******** 133********苏木素伊红染色液一.苏木素伊红染色液套装组合:Harris苏木素染色液50ml水溶性伊红染色液50ml苏木素染色分化液50ml苏木素染色返兰液50ml概述:苏木素伊红染色是组织病理学经典的常规染色方法,历经上百年的应用历史至今仍无可替代。
因此,苏木素伊红染色是病理切片制作中极为重要的技术环节。
二.染色方法:1. 切片脱蜡二甲苯I 5分钟,2. 切片脱蜡二甲苯II 5分钟,3. 100%1、100%2、95%1、95%2、70%梯度乙醇各30,秒钟,4. 自来水流水冲洗1分钟,5. 苏木素染色5—8分钟(依染液新旧调整染色时间),6. 自来水流水冲洗1分钟,7. 进入分化液分化数秒钟,8. 自来水流水冲洗1分钟,9. 进入返兰液处理5—10秒钟,10. 自来水流水冲洗2分钟,11. 进入伊红染色液1-3分钟,12. 自来水冲洗30—60秒钟,13. 75%I、75%II乙醇脱水分色各10秒钟,14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脱水10秒钟,15. 100%乙醇1、100%2脱水30-60秒钟,16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分钟,17. 中性树胶封固。
三.染色技术要点:苏木素染色液在静止由于时染液表面于空气中的氧分子接触极液体代表面水分蒸发会产生氧化作用并形成氧化膜。
因此,在使用前应使用滤纸吸附去除氧化膜以免污染切片。
一般情况下应建立良好的使用习惯,每隔2~3天将苏木素染液彻底过滤一次。
为保证HE切片的恒定染色质量建议每500ml苏木素染色液染1200~1500张切片为宜。
苏木素染色液在用于免疫组织化学染色的的复染时应注意调控染色时间,核染色过浅不易辨识组织结构而核染色过深则喧宾夺主,一般复染的时间应控在10-30秒以内。
此外,复染后的分化和返兰步骤不应省略否则将造成整张切片呈淡蓝色,使DAB呈现土黄色。
分化和返兰步骤是HE染色关键点,应在染色实践中依据分化液和返兰液的新旧调整分化和返兰的处理时间。
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苏木素-伊红染色液(H-E)说明书
【产品名称】
苏木素-伊红染色液(H-E）
【型号】
苏木素染色液分别为：Mayer型、改良Harris型、改良Lillie-Mayer型；
伊红染色液分别为：水溶型、醇溶型；
苏木素-伊红染色液混合型。
【包装规格】
货号：DH0006
单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；
每套/盒包装规格分别为：2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。
【预期用途】
主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规
制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必
不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由
酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)
的亲和力较大。
因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细
胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红
苏木素-伊红染色液混合型苏木色精、伊红【储存条件及有效期】
5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6
个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。
【检验方法】
l、石蜡切片于二甲苯I、II中各脱蜡若干分钟；
2、经无水乙醇和95%乙醇各约若干分钟，经8O%乙醇若干分钟，自来水冲洗若干分钟；
3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer或改良Harris)染色若干分钟，自来水洗若干分钟；或苏木素染色液(Mayer)染色若干分钟；或苏木素-伊红染色液(混合型)染色若干分钟；
4、苏木素染色后用l%盐酸乙醇溶液分化数秒(l%盐酸乙醇溶液配制：99m1 75%乙醇加1ml浓盐酸）；
若用苏木素染色液(Mayer)和苏木素-伊红染色液(混合型)染色后则不需分化；
5、自来水冲洗返蓝若干分钟；亦可用碳酸锂水溶液返蓝若干秒，自来水洗若干分钟；
6、入伊红染色液(水溶)染色若干分钟，稍洗；若用伊红染液(醇溶），切片应先经80%乙醇脱水后，再
入伊红染液(醇溶)染色若干分钟(忌水洗）；此步骤苏木素-伊红染色液(混合型)不适用。
7、95%乙醇I、II中各调色约若干秒，时间不宜过长；
8、无水乙醇I、II中各脱水若干分钟，二甲苯I、II中各透明I、II中各透明若干分钟；
9、封片胶封片，镜检。
【检验结果的解释】
细胞核呈蓝紫色，细胞质、间质、各种纤维呈不同程度的红色。
【检验方法的局限性】
仅供细胞和组织形态学观察染色使用。
【注意事项】
1、温度较低时苏木素染色液不易着色，可适当延长染色时间。
2、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)染色时，亦可考虑不用分化，但应相应缩短苏木素染色时间。
3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)、苏木素(改良Harris)不含汞等有毒物质，其着色强度可能会因使用日期不同而稍有差异，故开封后可先试染，根据试染结果稍调整苏木素染色时间以保证较佳染色效果。
4、盐酸乙醇分化时间应根据染色结果的具体情况而定。
5、碳酸锂水溶液的配方：取本产品附送的碳酸锂粉末一包，完全溶解于1000ml蒸馏水中，即为碳酸锂水溶液。
6、该染色液主要用于组织切片的染色，亦可用于某些细胞染色，但染色时间应作调整。
7、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。
8、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。
9、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司
住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房。