动物体内过氧化物酶活性的
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动物体内过氧化物酶活性的测 定
廖百建
1、原理
过氧化物酶
过氧化物酶[perox idase, POD] 广泛存 在于各种动物体内。催化由过氧化氢参 与的各种还原剂的氧化反应:
RH2+ H2O2→2H2O + R 通过测定420nm处吸光度的变化得出酶的
活性
•2 POD 分子结构特点
POD 是一种由单一肽链与卟啉构成的血 红素蛋白, 脱辅基蛋白分子须与血红素结 合才构成全酶。
3、POD的主要生理功能
参与活性氧代谢过程；
注：除了与动物正常代谢和生长发育相关的 结构型POD 外, 很大部分POD的合成属于诱导 表达型。
4、实验材料与试剂
实验材料：
蝗虫的幼虫 420nm的分光光度计 恒温水浴箱
试剂
试剂一：60ml液体*4瓶，4℃保存6个月。
试ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ二;粉剂*3瓶，4℃保存6个月。 试剂二应用液的配制：临用每瓶粉剂加入10ml的双蒸馏水溶 解，4℃保存避光 试剂三：5ml瓶液*1瓶 4℃保存6个月。 试剂三应用液的配制：临用前用蒸馏水15倍稀释，使得1cm 光径，双蒸馏水调零时A240保持在0.4左右，现用现配。若 A值太高，则加双蒸馏水稀释，若A值太低，则加入适量试 剂三。（一般在25倍左右稀释） 试剂四：50ml液体*2瓶，4℃保存6个月
2.操作表
测定管
对照管
试剂一（ml)
2.4
2.4
试剂二应用液(ml)
0.3
0.3
试剂三应用液（ml) 0.2
双蒸馏水（ml)
0.2
样本
0.1
0.1
37℃水浴准确反应30分钟
试剂四（ml)
1.0
1.0
6、计算酶活性
选取OD值变化较均匀的一段数据，代入公式计算； 以每分钟OD值变化0.01作为1个过氧化物酶活力单 位（U）。
/ 酶活力=（测定OD值-对照OD值）*反应总体积(ml)*1000 12*
比色光径（cm)*取样量(ml)*反应时间（30分钟）*匀浆蛋白浓度 (mgport/ml)
7.注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用， 酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验 误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用 排枪加样。。
3． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 4．底物请避光保存。 5．试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 6．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 7．本试剂不同批号组分不得混用。
5、实验步骤
1. 前处理
蝗虫幼虫匀浆的制备，准确称取幼虫的重量，按照重 量（g):体积（ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介 质（建议使用生理盐水或磷酸盐缓冲液：0.1mol/l PH 7~7.4) 冰浴下制备成10%的幼虫匀浆液，4000转/ 分离心10分钟后，取上清420nm处，1cm光径。 100ul进行OD值的测定
廖百建
1、原理
过氧化物酶
过氧化物酶[perox idase, POD] 广泛存 在于各种动物体内。催化由过氧化氢参 与的各种还原剂的氧化反应:
RH2+ H2O2→2H2O + R 通过测定420nm处吸光度的变化得出酶的
活性
•2 POD 分子结构特点
POD 是一种由单一肽链与卟啉构成的血 红素蛋白, 脱辅基蛋白分子须与血红素结 合才构成全酶。
3、POD的主要生理功能
参与活性氧代谢过程；
注：除了与动物正常代谢和生长发育相关的 结构型POD 外, 很大部分POD的合成属于诱导 表达型。
4、实验材料与试剂
实验材料：
蝗虫的幼虫 420nm的分光光度计 恒温水浴箱
试剂
试剂一：60ml液体*4瓶，4℃保存6个月。
试ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ二;粉剂*3瓶，4℃保存6个月。 试剂二应用液的配制：临用每瓶粉剂加入10ml的双蒸馏水溶 解，4℃保存避光 试剂三：5ml瓶液*1瓶 4℃保存6个月。 试剂三应用液的配制：临用前用蒸馏水15倍稀释，使得1cm 光径，双蒸馏水调零时A240保持在0.4左右，现用现配。若 A值太高，则加双蒸馏水稀释，若A值太低，则加入适量试 剂三。（一般在25倍左右稀释） 试剂四：50ml液体*2瓶，4℃保存6个月
2.操作表
测定管
对照管
试剂一（ml)
2.4
2.4
试剂二应用液(ml)
0.3
0.3
试剂三应用液（ml) 0.2
双蒸馏水（ml)
0.2
样本
0.1
0.1
37℃水浴准确反应30分钟
试剂四（ml)
1.0
1.0
6、计算酶活性
选取OD值变化较均匀的一段数据，代入公式计算； 以每分钟OD值变化0.01作为1个过氧化物酶活力单 位（U）。
/ 酶活力=（测定OD值-对照OD值）*反应总体积(ml)*1000 12*
比色光径（cm)*取样量(ml)*反应时间（30分钟）*匀浆蛋白浓度 (mgport/ml)
7.注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用， 酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验 误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用 排枪加样。。
3． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 4．底物请避光保存。 5．试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 6．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 7．本试剂不同批号组分不得混用。
5、实验步骤
1. 前处理
蝗虫幼虫匀浆的制备，准确称取幼虫的重量，按照重 量（g):体积（ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介 质（建议使用生理盐水或磷酸盐缓冲液：0.1mol/l PH 7~7.4) 冰浴下制备成10%的幼虫匀浆液，4000转/ 分离心10分钟后，取上清420nm处，1cm光径。 100ul进行OD值的测定