动物体内过氧化物酶活性的
过氧化物酶(pod)对应的基因
过氧化物酶(pod)对应的基因
过氧化物酶（POD）是一种重要的酶类，它在植物和动物体内起
着重要的生物学作用。
在植物中，POD参与了抗氧化反应，帮助植
物对抗外界环境的压力，比如干旱、病原体侵染等。
在动物体内，POD也参与了多种生理过程，包括免疫反应和氧化应激反应等。
在植物中，过氧化物酶对应的基因包括但不限于POD1、POD2、POD3等。
这些基因编码了植物细胞中的过氧化物酶，通过转录和翻
译过程产生功能性的酶分子。
这些基因的表达受到环境因素的影响，比如植物受到逆境压力时，这些基因的表达水平可能会上调，从而
增加POD酶的活性，帮助植物应对压力。
在动物中，过氧化物酶对应的基因也存在多个类型，比如POD1、POD2等。
这些基因编码了动物体内的过氧化物酶，参与了多种生理
过程。
在动物体内，POD也发挥着重要的抗氧化作用，帮助清除自
由基，维持细胞内稳定的氧化还原平衡。
总的来说，过氧化物酶对应的基因在植物和动物体内都发挥着
重要的作用，通过调控这些基因的表达水平，可以影响过氧化物酶
的活性，进而影响生物体对抗外界压力的能力。
这些基因的研究对于揭示生物体的抗逆机制、抗氧化机制等方面具有重要意义。
酶活性的测定
式中
A—对照KMnO4滴定毫升数； B—酶反应后KMnO4滴定毫升数；
VT—酶液总量（ml）； V1—反应所用酶液量（ml）;
W—样品鲜重（g）；
1.7mg
1.7—1ml H2O2。
0.1mol/L旳KMnO4相当于
紫外分光光度法:
H化测2O氢量2在，吸2使光40反率nm应旳波溶变长液化下吸速有光度强度即烈可(吸A测2收40出)，随过过反氧氧应化化时氢氢间酶酶而旳能降活分低性解。。过根氧据 以1min内A240降低0.1旳酶量为1个酶活单位（u）。
硫酸盐缓冲液，盐酸羟胺，黄嘌呤，黄嘌 呤氧化酶，醋酸等。
试验环节：
计算措施：
每毫升反应液中SOD 抑止率达50％时相应 旳SOD 量为一种SOD 活力单位（U），待测 样品中旳SOD 活力由下式计算：
SOD克制率（％）＝（A2-A1）/A2×100% SOD 活力（U/ml）＝（A2-A1）
据此，可根据H2O2旳消耗量或O2旳生成量测定该酶活力大小。 在反应系统中加入一定量（反应过量）旳H2O2溶液，经酶促反 应后，用原则高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多出旳H2O2
。
即可求出消耗旳H2O2旳量。
酶表活达性 ：用每克鲜重样品1min内分解H2O2旳毫克数
酶活(mgH2O2/gFW·min)=
测定茶树鲜叶APX活性旳最佳条件
PVPP旳加入量为鲜叶重旳1.5倍，提取液pH 为7.8，反应液pH为7.0，底物AsA浓度为 0.5mmol/L。
注意事项：
（1）因为测定反应是经过加液量控制在60s内，使产生旳A290光值下 降呈良好旳线性关系。
1.试剂： 0.1mol/L Tris-HCl 缓冲液
(pH8.2
过氧化物酶活性的测定实验报告
过氧化物酶活性的测定实验报告实验名称：过氧化物酶活性的测定实验实验目的：1. 了解过氧化物酶（CAT）的性质及其在生物体内的作用；2. 学习如何测定CAT活性。
实验原理：CAT是一种重要的氧化酶，在生物体内主要负责清除细胞内的过氧化氢（H2O2）。
CAT能够将H2O2分解为水和氧，从而减少H2O2引起的细胞损伤。
因此，CAT的活性是衡量生物体抵抗氧化损伤能力的重要指标。
该实验通过比色法对CAT活性进行测定，其原理是：CAT能够快速分解H2O2，导致溶液中H2O2浓度的降低，从而使紫外吸收波长为240nm处的吸光度降低。
实验步骤：1.制备1mg/ml的CAT标准溶液；2.制备一定浓度的H2O2溶液；3.将CAT标准溶液和H2O2溶液分别稀释为不同浓度；4.将待测样品（如动物组织、血清等）加入混合液中，使得CAT参与H2O2的分解反应；5.反应10min后，加入硫酸铨（K2Cr2O7）溶液并混匀，其中硫酸铨是一种催化剂，能够加速反应速度；6.反应后，在240nm处测定溶液的吸光度；7.根据不同CAT标准溶液的吸光度值，绘制标准曲线；8.根据待测样品的吸光度值，利用标准曲线计算出CAT的活性。
实验结果：利用如上实验步骤，我们测得样品A的吸光度为0.56，样品B的吸光度为0.36，样品C的吸光度为0.22。
依据标准曲线的测定结果，我们可分别计算出样品A、B、C的CAT活性分别为12.3、8.4、5.2 U/g。
实验结论：本实验采用比色法测定了不同样品中CAT的活性。
结果表明，样品A的CAT活性最高，样品C的CAT活性最低。
通过该实验，我们可以了解CAT的性质及其在生物体内的作用，同时也掌握CAT活性的测定方法。
超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶和过氧化物酶_概述说明
超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶和过氧化物酶概述说明1. 引言1.1 概述：在细胞内，氧化还原反应是生物体正常代谢过程中不可或缺的部分。
然而，在这些氧化还原反应中产生的活性氧种（ROS）却可能对细胞结构和功能造成损害。
为了保护细胞免受活性氧物质的侵害，细胞内存在着一系列抗氧化酶系统。
其中包括超氧化物歧化酶（SOD），抗坏血酸过氧化物酶（APX）和过氧化物酶（POD）。
这些抗氧化酶通过催化活性氧的转化和清除，起到维持细胞内稳态、减少氧自由基对生物体的伤害的重要作用。
1.2 文章结构：本文将分为五个部分来探讨超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶和过氧化物酶的定义、功能、结构、机制以及其在生理作用和临床意义方面的研究。
在第二部分，我们将详细介绍超氧化物歧化酶。
首先，我们将解释其定义和功能，包括其在生物体内的重要作用。
然后，我们将探讨其结构和催化机制，揭示超氧化物歧化酶如何通过催化超氧阴离子（O2.-）的转化来清除活性氧物质。
第三部分将聚焦于抗坏血酸过氧化物酶。
我们将解释该酶的定义和功能，并探究它在细胞中是如何通过消除过氧化氢（H2O2）来保护细胞免受氧自由基的损伤。
第四部分将涵盖过氧化物酶。
我们将描述该酶的定义、功能和结构，并讨论其通过催化有机底物或无机底物的转变来减少细胞内活性氧物质积累的机制。
最后，在第五部分结论中，我们将总结本文提到的要点，并展望未来对这些抗氧化酶系统研究的方向。
1.3 目的：本文旨在增进读者对超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶和过氧化物酶这些重要抗氧化酶系统的认识。
通过了解它们的定义、功能、结构和机制，以及在生理作用和临床意义方面的研究进展，我们可以更好地理解细胞对抗活性氧物质的保护机制，并为未来的研究提供一定的指导和启示。
2. 超氧化物歧化酶:2.1 定义和功能:超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，简称SOD）是一种重要的抗氧化酶，它参与细胞内超氧阴离子（O2-）的清除，以保护细胞免受过氧化损伤。
超氧化物歧化酶与畜禽氧化应激
程皇座动物氧化应激是指动物体内产生过多的自由基引发机体氧化还原平衡失调的现象，是引起动物疾病和降低生产性能的重要原因之一[1]。
这是因为氧化应激产生的活性氧自由基积累过多，超过了体内抗氧化酶系统的清除能力，而过量自由基会攻击细胞中的脂质、蛋白质和DNA 等生物大分子，对细胞造成不可逆转的伤害，从而影响动物生理机能。
在防止氧自由基对细胞破坏的抗氧化系统中，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)在保护细胞免受氧自由基的攻击中发挥重要作用[2]。
1 SOD 的发现与分类1930年，Keilin 和Mann 研究发现了SOD，不过当时认为SOD 是一种蛋白质，并命名为血铜蛋白。
1969年，McCord 和Fridovich 发现该蛋白具有酶的活性，并正式命名为超氧化物歧化酶[3]。
SOD 是一种金属酶，催化中心含有一个金属离子，根据金属离子的不同，SOD 家族可以分为4种类型：Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD 和Ni-SOD。
其中Cu/Zn-SOD 主要存在于真核细胞的细胞质和叶绿体以及细菌的细胞质和周质空间中；Mn-SOD 主要存在于原核生物和真核生物的线粒体中；Fe-SOD 存在于原核生物和少数植物中；Ni-SOD 主要存在于链霉菌属细菌及蓝细菌等海洋生物中[4-5]。
2 SOD 生物学重要性SOD 对呼吸细胞的存活至关重要。
氧是一切生命活动的基础物质之一，但氧在参与机体生命代谢活动中会转化成氧自由基，为应对自由基氧化损伤，细胞需要SOD 来清除氧自由基。
对大量微生物的调查表明，很多需氧和耐氧生物均含有SOD。
SOD 通过抗氧化途径在防御氧中毒、抗辐射损伤、预防衰老、治疗疾病等方面发挥重要作用[6]。
3 SOD 抗氧化机理自由基是一些单独存在的具有不配对电子的分子、原子、离子或原子团，其显著特征是外层轨道上具有未配对的电子。
由于电子倾向于配对，中图分类号：S816 文献标志码：A 文章编号：1001-0769(2024)02-0093-04摘 要：超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)能够清除各类生物体内因氧化应激产生的过多自由基，通过歧化反应将氧自由基转化为氧气和过氧化氢。
动物血中超氧化物歧化酶的提取和活性测定
动物血中超氧化物歧化酶的提取和活性测定原理超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase，简称SOD)广泛存在于生物体内的含Cu、Zn、Mn、Fe的金属类酶。
它作为生物体内重要的自由基清除剂，可以清除体内多余的超氧阴离子，在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。
离子(02-)是人体氧代谢产物，它在体内过量积累会引起炎症、肿瘤、色斑沉淀、衰老等疾病，超氧阴离子与生物体内许多疾病的发生和形成有关。
由于SOD能专一消除超氧阴离子(O2 -)而起到保护细胞的作用，SOD作为一种药用酶，具有广阔的应用前景，并引起了国内外医药界、生物界和食品界的极大关注。
按金属辅基成分的不同可分成3种类型。
最常见的一种含有铜锌金属辅基(CuZn-SOD)，主要存在于真核细胞的细胞质中，在高等植物的叶绿体基质、类囊体内以及线粒体膜间隙也有存在，CuZn-S0D 酶蛋白的分子量约为3.2×104，纯品呈蓝绿色，每个酶分子由2个亚基通过非共价键的疏水基相互作用缔合成二聚体。
每个亚基(肽链)含有铜、锌原子各一个，活性中心的核心是铜。
第二种含有锰离子(Mn-SOD)，主要存在于真核细胞的线粒体和原核细胞中，在植物的叶绿体基质和类囊体膜上也有存在，纯品呈粉红色，由4条或2条肽链组成。
第三种是Fe-S0D，过去一直认为只存在于原核细胞中，近来发现有一些真核藻类甚至某些高等植物中也有存在。
Fe-SOD纯品呈黄色或黄褐色，由2条肽链组成，多数情况下每一个二聚体中含有一个Fe原子。
l969年，McCord和Fridovich第一次从牛血中提纯到超氧化物岐化酶。
自然界中SOD分布极广，其含量随生物体的不同而不同，即使同一种生物的不同组织或同一组织的不同部位，其SOD的种类和含量也有很大差别。
迄今为止人们已从细菌，真菌、原生动物。
藻类、昆虫、鱼类、植物和动物等各种生物体内分离得到SOD。
为拓宽提取SOD的原料，筛选或基因过程开发产SOD量较高的菌株。
氧化酶 过氧化物酶
氧化酶过氧化物酶
以氧化酶过氧化物酶为标题，写一篇文章。
过氧化物酶是一类广泛存在于生物体内的酶，它们在生物体内起着重要的催化作用。
过氧化物酶可以催化过氧化物的分解，将有害的过氧化物转化为无害的物质，从而保护细胞免受氧化损伤。
过氧化物酶的命名一般以酶催化的底物名称结尾，例如过氧化氢酶催化过氧化氢的分解，过氧化氯酶催化过氧化氯的分解等。
这些过氧化物酶具有高度的专一性，只能催化特定的底物。
过氧化物酶的活性受到多种因素的影响，如温度、pH值、金属离子等。
过氧化物酶在生物体内起着重要的保护作用。
例如，过氧化氢酶广泛存在于细胞内和细胞外，它能够将有害的过氧化氢分解为水和氧气，避免过氧化氢对细胞的损伤。
过氧化物酶还可以参与细胞的氧化还原过程，维持细胞内的氧化还原平衡。
过氧化物酶在生物体内的分布也十分广泛。
它们存在于植物、动物和微生物中，甚至存在于一些非常原始的生物体中。
不同种类的生物体中过氧化物酶的结构和功能有所差异，但它们都能够催化过氧化物的分解。
过氧化物酶在医学和生物工程领域也有重要应用。
例如，过氧化物酶可以用于食品加工中的漂白剂去除，医学诊断中的生化分析，以
及生物工程中的酶工程等。
过氧化物酶的应用潜力还在不断扩大。
总结起来，过氧化物酶是一类广泛存在于生物体内的酶，它们能够催化过氧化物的分解，起着重要的生物保护作用。
过氧化物酶在生物体内的分布广泛，不同种类的生物体中过氧化物酶的结构和功能有所差异。
过氧化物酶在医学和生物工程领域也有重要应用。
随着对过氧化物酶的研究不断深入，相信它们的应用前景会更加广阔。
过氧化氢酶对肉鸡生产性能、抗氧化能力、盲肠微生物及代谢物的影响
中国畜牧兽医 2024,51(3):1086-1093C h i n aA n i ma lH u sb a n d r y &V e t e r i n a r y Me d i c i n e 过氧化氢酶对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及代谢物的影响张文翔1,王建平2(1.固始县动物卫生监督所,信阳465200;2.河南科技大学动物科技学院,洛阳471023)摘 要:ʌ目的ɔ本试验旨在研究过氧化氢酶(C A T )对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及其代谢物的影响,为C A T 在动物上的应用提供理论依据㊂ʌ方法ɔ选用1日龄黄羽肉鸡600只,随机分为5组:空白对照组(C O N )㊁抗生素组(A n t i )和C A T 低㊁中㊁高剂量组(C A T 1㊁C A T 2和C A T 3),每组6个重复,每个重复20只㊂其中,C O N 组饲喂基础饲粮;A n t i 组在基础饲粮中添加50m g /k g 金霉素;C A T 1㊁C A T 2和C A T 3组在基础饲粮中分别添加100㊁150和200U /k g C A T ,试验期42d ㊂试验结束后,测定生产性能;采集血清㊁盲肠食糜用于测定抗氧化指标㊁微生物菌群及其代谢物含量㊂ʌ结果ɔ与C O N 组相比,C A T 各剂量组平均日增重和平均日采食量均显著提高(P <0.05),且达到了A n t i 组水平,但是增加C A T 剂量没有进一步提高这些指标㊂与C O N 组相比,C A T 各剂量组和A n t i 组血清C A T 和超氧化物歧化酶活性均显著提高(P <0.05),丙二醛㊁蛋白羰基和8-羟基脱氧鸟苷含量均显著降低(P <0.05),且C A T 各剂量组8-羟基脱氧鸟苷与A n t i 组持平㊂盲肠微生物分析显示,与C O N 组相比,C A T 各剂量组变形菌门㊁乳杆菌属和粪杆菌属的数量显著增加(P <0.05),但是梭菌属数量显著降低(P <0.05)㊂与C O N 组相比,C A T 各剂量组盲肠内容物中乳酸㊁乙酸㊁异戊酸含量显著提高(P <0.05),戊酸含量显著降低(P <0.05);C A T 各剂量组甲胺㊁色胺㊁腐胺㊁尸胺和总胺的含量显著降低(P <0.05);C A T 2和C A T 3组亚精胺显著降低(P <0.05),C A T 剂量效应比较分析显示,C A T 2和C A T 3组腐胺㊁尸胺和总胺含量显著低于C A T 1组(P <0.05)㊂ʌ结论ɔ饲粮添加150或200U /k g C A T 可促进动物生长和健康㊂关键词:肉鸡;过氧化氢酶;生产性能;抗氧化能力;盲肠微生物中图分类号:S 829.1文献标识码:AD o i :10.16431/j.c n k i .1671-7236.2024.03.020 开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):收稿日期:2023-08-29基金项目:国家自然科学基金(31272466)联系方式:通信作者张文翔,E -m a i l :584287678@q q.c o m E f f e c t o fC a t a l a s e o n t h eP r o d u c t i o nP e r f o r m a n c e ,A n t i o x i d a n t C a p a c i t y,C e c a lM i c r ob e a n dM e t a b o l i t e s i nB r o i l e r sZ H A N G W e n x i a n g 1,WA N GJ i a n p i n g2(1.S u p e r v i s i o n I n s t i t u t e o f A n i m a lH e a l t ho f G u s h iC o u n t y ,X i n y a n g 465200,C h i n a ;2.C o l l e g e o f A n i m a lS c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,H e n a nU n i v e r s i t y o f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,L u o y a n g 471023,C h i n a )A b s t r a c t :ʌO b je c t i v e ɔT h eef f e c to f c a t a l a s e (C A T )o nt h e p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c e ,a n t i o x i d a n t c a p a c i t y ,c e c a lm i c r o b ea n d m e t a b o l i t e s i nb r o i l e r sw a s i n v e s t ig a t e di nthi ss t u d y ,f o r p r o v i d i n g t h e o r e t i c a l f o u n d a t i o n i nt h ea p p l i c a t i o no fC A Ti na n i m a l p r o d u c t i o n .ʌM e t h o d ɔ6001-d a y-o l d Y e l l o w F e a t h e r e d b r o i l e rc h i c k e n s w e r es e l e c t e d a n dr a n d o m l y d i v i d e di n t o5g r o u ps :B l a n k c o n t r o l g r o u p (C O N ),a n t i b i o t i c g r o u p (A n t i ),a n dl o w ,m e d i u m a n dh i g h -d o s e C A T g r o u ps (C A T 1,C A T 2a n dC A T 3),w i t h6r e p l i c a t e s i ne a c h g r o u p a n d20c h i c k e n s i ne a c hr e p l i c a t e .A m o n g t h e m ,C O N g r o u p w a s f e dw i t hb a s i c f e e d ,A n t i g r o u p a d d e d 50m g /k g c h l o r a m ph e n i c o l t o3期张文翔等:过氧化氢酶对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及代谢物的影响t h eb a s i cd i e t,a n dC A T1,C A T2a n dC A T3g r o u p sw e r es u p p l e m e n t e dw i t h100,150a n d200U/k g C A Ti n t h eb a s i cd i e t,r e s p e c t i v e l y.T h e f e e d i n g t r i a l l a s t e df o r42d.A f t e r t h ee x p e r i m e n t,t h e p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c ew a sm e a s u r e d,a n ds e r u ma n dc e c a l c h y m ew e r ec o l l e c t e df o rm e a s u r i n g a n t i o x i d a n t i n d i c a t o r s,m i c r o b i a lc o m m u n i t i e sa n d m e t a b o l i t ec o n t e n t.ʌR e s u l tɔC o m p a r e d w i t hC O N g r o u p,t h eAD Ga n d A D F Io fe a c hd o s e g r o u p o fC A T w e r es i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P<0.05),r e a c h i n g t h e l e v e lo f t h eA n t i g r o u p.H o w e v e r,i n c r e a s i n g t h eC A T d o s ed i dn o t f u r t h e ri m p r o v e t h e s e i n d i c a t o r s.C o m p a r e dw i t hC O N g r o u p,t h es e r u m C A Ta n ds u p e r o x i d ed i s m u t a s e a c t i v i t i e sw e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d i na l l d o s e g r o u p s o fC A Ta n dA n t i g r o u p(P<0.05).T h e l e v e l so f m a l o n d i a l d e h y d e,p r o t e i n c a r b o n y la n d8-h y d r o x y d e o x y g u a n o s i n e w e r e s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d(P<0.05),a n dt h e8-h y d r o x y d e o x y g u a n o s i n el e v e l s i na l ld o s e g r o u p so fC A T w e r e c o n s i s t e n tw i t h t h o s e i nA n t i g r o u p.C e c a lm i c r o b i o t aa n a l y s i s s h o w e dt h a t c o m p a r e dw i t hC O N g r o u p,t h en u m b e ro fP r o t e o b a c t e r i a,L a c t o b a c i l l u s a n d F a e c a l i b a c t e r i u m i ne a c hd o s e g r o u p o f C A Ts i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P<0.05),b u t t h en u m b e ro f C l o s t r i d i u m d e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y (P<0.05).C o m p a r e dw i t hC O N g r o u p,t h e l e v e l so f l a c t i c a c i d,a c e t i c a c i da n d i s o v a l e r i c a c i d i n t h e c e c a l c o n t e n t s o f e a c hd o s e g r o u p o fC A T w e r e s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P<0.05),w h i l e t h e c o n t e n to f v a l e r i c a c i d w a s s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d(P<0.05);T h el e v e l s o f m e t h y l a m i n e, t r y p t a m i n e,p u t r e s c i n e,c a d a v e r i n e,a n d t o t a l a m i n e i ne a c hd o s e g r o u p o fC A T w e r e s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d(P<0.05);T h el e v e l so fs p e r m i d i n e w e r es i g n i f i c a n t l y r e d u c e di n C A T2a n d C A T3 g r o u p s(P<0.05),a n dac o m p a r a t i v ea n a l y s i so fC A T d o s ee f f e c t ss h o w e dt h a t t h el e v e l so f p u t r e s c i n e,c a d a v e r i n e a n d t o t a l a m i n e i nC A T2a n dC A T3g r o u p sw e r es i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a n t h o s e i nC A T1g r o u p(P<0.05).ʌC o n c l u s i o nɔA d d i n g150o r200U/k g C A Tt of e e dc o u l d p r o m o t e a n i m a l g r o w t ha n dh e a l t h.K e y w o r d s:b r o i l e r;c a t a l a s e;p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c e;a n t i o x i d a n t c a p a c i t y;c e c a lm i c r o b e氧化是生命衰老和疾病的最大威胁,环境㊁营养和病原等因素会导致生理过程中产生许多氧化物,同时,机体会本能地启动自身抗氧化系统清除这些氧化物㊂通常情况下,生命自身的氧化和抗氧化是处于相对平衡状态[1-2]㊂但是,对于畜禽而言,在经济性状高度选育㊁集约化生产以及促生长抗生素禁用的综合背景下,动物自身的抗氧化能力变得极其脆弱㊂抗氧化能力降低将对免疫力产生负面影响,对病原的抵抗力下降,最终导致生产性能下降,甚至发生疾病或死亡㊂由此,外源性抗氧化剂的应用随之兴起㊂外源性抗氧化剂主要包括药物类㊁维生素类㊁植物活性成分㊁抗氧化酶类㊁微生物及其代谢物等[3-4]㊂过氧化氢酶(C A T)是机体内的一种抗氧化酶,主要分布于肝细胞㊁红细胞和肠细胞中,约占过氧化物酶体酶总量的40%[5-6]㊂最近研究发现,饲粮添加0.10%C A T能提高乌苏里貉生长前期生产性能㊁养分消化代谢㊁血清生化和免疫指标[7]㊂饲粮添加200U/k g C A T能改善黄羽肉鸡生长性能㊁肠道组织形态和抗氧化能力[8]㊂在母猪和断奶仔猪饲粮分别添加C A T100U/k g和1.5g/k g,显著提高了母猪㊁哺乳仔猪和断奶仔猪的生产性能和抗氧化能力[9-10]㊂可见,C A T在动物肠道内发挥着抗氧化作用,这种作用是否对家禽肠道微生物及其代谢产生影响鲜见报道㊂本研究旨在研究C A T对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁微生物及其代谢的影响,为C A T 在动物上的应用提供理论参考㊂1材料与方法1.1主要试剂和仪器C A T购自洛阳欧科拜克生物技术股份有限公司;兽用金霉素购自金河生物科技股份(银川)有限公司;血清抗氧化物质和氧化产物试剂盒均购自南京建成生物研究所;D N A试剂盒购自生工生物工程(上海)股份有限公司;氨态氮试剂盒购自哈希公司㊂气相色谱仪(7890A型号)和液相色谱仪(1100系列)均购自安捷伦科技(中国)有限公司㊂1.2试验动物与基础饲粮黄羽肉鸡苗购自洛阳立华禽业有限公司㊂试验在河南科技大学动物试验基地进行㊂试验选用1日7801中 国 畜 牧 兽 医51卷龄黄羽肉鸡600只,随机分为5组:空白C O N 组㊁A n t i 组㊁C A T 1㊁C A T 2㊁C A T 3,每组6个重复,每个重复20只㊂其中,C O N 组饲喂基础饲粮;A n t i 组在基础饲粮基础上添加50m g /k g 金霉素;C A T 1㊁C A T 2㊁C A T 3组在基础饲粮基础上分别添加100㊁150㊁200U /k g C A T ㊂试鸡采用地面刨花垫料平养,每个重复为一圈,自由采食和饮水㊂每日检查鸡群健康状况两次㊂试验鸡体重和采食量每周称量一次㊂病死鸡及时捡出并称量体重㊂试验期间,记录初始体重(I B W )㊁终末体重(F B W ),计算平均日采食量(A D F I )㊁平均日增重(A D G )㊁料重比(F /G )和死亡率㊂饲养试验持续至42日龄㊂基础饲粮营养水平参照黄羽肉鸡饲养标准N Y /T3645 2020配制,其原料组成和营养水平见表1㊂表1 基础饲粮组成与营养水平(风干基础)T a b l e 1 C o m p o s i t i o na n dn u t r i t i o n l e v e l s o f b a s a l d i e t (a i r d r y b a s i s )%原料I n g r e d i e n t s 含量C o n t e n t s 营养成分N u t r i e n t c o m p o n e n t s ②含量C o n t e n t s 玉米C o r n 66.3代谢能M E /(M J /k g)12.83豆粕S o y m e a l 21.0粗蛋白质C P 21.22玉米蛋白粉C o r n g l u t e nm e a l5.0钙C a 0.98豆油S o y o i l 3.0总磷T o t a l P 0.66赖氨酸L y s 0.3非植酸磷N o n -p h y t a t eP 0.40蛋氨酸M e t 0.2赖氨酸L ys 0.84食盐S a l t 0.3蛋氨酸M e t0.48石灰粉L i m e s t o n e1.5蛋氨酸+胱氨酸M e t +C y s -C ys 0.75磷酸氢钙D i c a l c i u m p h o s p h a t e 1.4预混料P r e m i x①1.0总计T o t a l100.0①预混料为每千克饲粮提供:维生素A9000I U ;维生素D 34000I U ;维生素E50I U ;维生素K2m g ;维生素B 12mg ;维生素B 25m g ;维生素B 515m g ;维生素B 340m g ;维生素B 62m g ;维生素B 70.1m g ;维生素B 90.55m g ;维生素B 120.01m g ;M n 120m g ;I 1.2m g ;F e 40m g ;C u16m g ;Z n100m g ;S e 0.3m g㊂②依据中国饲料数据库(2020)计算值①P r e m i x p r o v i d e d p e r k g o f d i e t :V A9000I U ;V D 34000I U ;V E50I U ;V K2m g ;V B 12m g ;V B 25m g ;V B 515m g ;V B 340m g ;V B 62m g ;V B 70.1m g ;V B 90.55m g ;V B 120.01m g ;M n 120m g ;I 1.2m g ;F e 40m g ;C u 16m g ;Z n 100m g ;S e 0.3m g .②C a l c u l a t e db y Ch i n e s eF e e dD a t a b a s e (2020)1.3 样品采集饲养试验结束,每个重复随机抽取5只试验鸡,C O 2窒息,心脏采血制备血清,用于测定血清抗氧化活性和氧化产物指标㊂解剖,摘取两侧盲肠,无污染收集内容物,干冰暂时冻存,然后转至-80ħ冻存,以备微生物代谢物㊁种群定量及其代谢物含量分析㊂1.4 样品检测饲料样品C A T 活性,按照G B /T5522 2008分析㊂血清中的C A T ㊁超氧化物歧化酶(S O D )㊁谷胱甘肽过氧化物酶(G P x )㊁丙二醛(M D A )㊁蛋白羰基(P C O )和8-羟基脱氧鸟苷(8-O H d G )按照相应试剂盒说明书测定㊂盲肠微生物菌群由上海派森诺生物科技有限公司采用I l l u m i n aM i s e q 测序平台测定㊂试验鸡盲肠微生物测序及生物信息学分析中,将每个重复的盲肠内容物样品合并,混匀,提取D N A ㊂采用微生物16S r R N A 特异性引物[11](F :5'-T C G T C G G C A G C -G T C A G A T G T G T A T A A G A G A C A G C C T A C G G G -N G G C WG C A G -3',R :5'-G T C T C G T G G G C T C G G -A G A T G T G T A T A A G A G A C A G G A C T A C H V G G -G T A T C T A A T C C -3')对微生物V 3-V 4区进行扩增㊂P C R 扩增体系20μL :5ˑH i g h -F i d e l i t y G C 缓冲液5μL ,D N A 模板2μL ,上㊁下游引物(10μm o l /L)各1μL ,2.5m m o l /L d N T P s 2μL ,H i g h -F i d e l i t yD N A 聚合酶(5U /μL )0.25μL ,d d H 2O8.75μL ㊂P C R 扩增条件为:98ħ预变性2m i n ;98ħ变性15s ,55ħ退火30s ,72ħ延伸30s ,共25个循环;72ħ延伸5m i n ㊂所有样品均重复3次㊂盲肠短链脂肪酸,包括乳酸㊁乙酸㊁丙酸㊁丁酸㊁戊酸㊁异丙酸㊁异戊酸和支链脂肪酸(B C F A ),采用气相色谱法测定㊂生物胺,包括甲胺㊁色胺㊁腐胺㊁尸胺㊁酪胺㊁亚精胺和精胺,采用液相色谱法分析㊂氨态氮(N H 3-N ),按照试剂盒说明书进行定量㊂88013期张文翔等:过氧化氢酶对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及代谢物的影响1.5数据统计分析试验数据采用S P S S23.0软件进行单因素方差分析,表中数据表示为平均值和标准误(S E M)㊂组间差异采用T u k e y检验法进行多重比较,显著性水准设为P<0.05㊂其中每个重复的生产性能数据为该重复中20只鸡的平均值,血清指标和盲肠指标的数据为该重复5只解剖鸡的均值㊂2结果2.1生产性能和死亡率分析由表2可知,C A T各剂量组平均日增重和平均日采食量均显著高于C O N组(P<0.05),且与A n t i 组无显著差异(P>0.05),C A T各剂量组间也没有显著差异(P>0.05)㊂试验各组之间料重比和死亡率差异均不显著(P>0.05)㊂表2各组生产性能和死亡率比较分析T a b l e2C o m p a r i s o no n p r o d u c t i o n p e r f o r m a n c e a n dm o r t a l i t y i nd i f f e r e n t g r o u p s项目I t e m s对照组C O N抗生素组A n t i过氧化氢酶组C A TC A T1C A T2C A T3标准误S E MP值P-v a l u e初始体重I B W/g39.941.141.340.840.40.9230.896终末体重F B W/k g1.80b2.15a2.09a2.06a2.13a0.0260.031平均日增重A D G/(g/d)41.9b50.2a48.8a48.1a49.8a2.0120.029平均日采食量A D F I/(g/d)107b126a123a122a124a5.6700.041料重比F/G2.562.512.522.532.490.0840.607死亡率M o r t a l i t y/%4.172.502.503.333.330.7030.329同行数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05);肩标相同字母或无字母标注表示差异不显著(P>0.05)㊂下同I n t h e s a m e r o w,v a l u e sw i t hd i f f e r e n t l e t t e r s u p e r s c r i p t sm e a ns i g n i f i c a n td i f f e r e n c e(P<0.05);W h i l ew i t ht h es a m eo rn o l e t t e r s u p e r s c r i p t sm e a nn o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e(P>0.05).T h e s a m e a sb e l o w2.2血清抗氧化指标比较分析由表3可知,C A T各剂量组血清C A T和S O D 活性显著高于C O N组(P<0.05),且与A n t i组无显著差异(P>0.05),C A T各剂量组间也没有显著差异(P>0.05)㊂同时,血清抗氧化产物分析显示, C A T各剂量组M D A含量均显著低于C O N组(P<0.05),但是只有C A T3组降低幅度与A n t i组相当(P>0.05),且C A T各剂量组之间差异不显著(P>0.05);C A T各剂量组P C O含量显著低于C O N组(P<0.05),显著高于A n t i组(P<0.05),但是无剂量效应;C A T各剂量组8-O H d G水平显著低于C O N组(P<0.05),与A n t i组持平(P>0.05)㊂表3各组血清抗氧化能力比较分析T a b l e3C o m p a r i s o no n s e r u ma n t i o x i d a t i v e c a p a c i t y i nd i f f e r e n t g r o u p s项目I t e m s对照组C O N抗生素组A n t i过氧化氢酶组C A TC A T1C A T2C A T3标准误S E MP值P-v a l u e过氧化氢酶C A T/(U/m L)2.21b3.25a3.05a3.17a2.95a0.128<0.001超氧化物歧化酶S O D/(U/m L)26.3b32.2a30.6a33.0a34.5a0.8760.001谷胱甘肽过氧化物酶G P x/(U/m L)43248746747948525.250.768丙二醛M D A/(n m o l/m L)2.68a1.77c2.11b2.12b1.91b c0.065<0.001蛋白羰基P C O/(n m o l/m L)0.43a0.28c0.35b0.32b0.32b0.017<0.001 8-羟基脱氧鸟苷8-O H d G/(p g/m L)27.5a20.7b23.2b21.3b23.1b1.4260.0202.3盲肠微生物分析各试验组盲肠微生物分析见图1㊂图1A显示了各试验组盲肠微生物门水平数值,包括厚壁菌门(F r i m i c u t e s),分布范围在74.6%~82.6%(P<0.001);拟杆菌门(B a c t e r o i d e t e s),12.2%~14.0% (P=0.662);变形菌门(P r o t e o b a c t e r i a),0.5%~1.4%(P=0.002);放线菌门(A c t i n o b a c t e r i a), 1.4%~2.8%(P<0.001);其他菌门,1.5%~ 7.9%(P<0.001)㊂与C O N组相比,C A T各剂量组变形菌门的数量显著增加(P<0.05)㊂与A n t i 组相比,C A T各剂量组厚壁菌门数量显著减少(P<0.05),其他菌门数量增加(P<0.05)㊂C A T9801中 国 畜 牧 兽 医51卷各组之间门水平微生物差异不显著㊂图1B 为各组盲肠微生物属水平分布㊂其中,罕见小球菌属(S u b d o l i gr a n u l u m ),分布范围在10.9%~15.4%(P =0.056);瘤胃球菌属(R u m i n o c o c c u s ),5.2%~8.0%(P =0.067);乳杆菌属(L a c t o b a c i l l u s ),6.8%~15.2%(P <0.001);拟杆菌属(B a c t e r o i d e s ),10.7%~18.6%(P =0.142);粪杆菌属(F a e c a l i b a c t e r i u m ),6.2%~14.1%(P <0.001);梭菌属(C l o s t r i d i u m ),3.9%~11.8%(P <0.001);丁酸球菌属(B u t yr i c i c o c c u s ),0.5%~1.5%(P =0.052);链球菌属(S t r e p t o c o c c u s ),2.3%~2.8%(P =0.719);双歧杆菌属(B i fi d o b a c t e r i u m ),1.2%~2.3%(P =0.682);嗜热菌属(D e f l u v i i t a l e a ),0.38%~0.41%(P =0.546);其他菌属(o t h e r s ),25.9%~31.9%(P =0.149)㊂与C O N 组相比,C A T 各剂量组乳杆菌属和粪杆菌属显著增加(P <0.05),但是梭菌属显著降低(P <0.05)㊂C A T 各剂量组之间以及与A n t i 组间盲肠属水平微生物的差异均不显著(P >0.05)㊂图1 各组盲肠微生物的门水平(A )和属水平(B )分析F i g .1 A n a l y s i s o f c e c a lm i c r o b e a t t h e p h y l u m (A )a n d g e n u s l e v e l (B )i nd i f f e r e n t g r o u ps 2.4 盲肠微生物脂类代谢物分析试验各组盲肠微生物脂类代谢物比较分析见表4㊂由表4可知,与C O N 组相比,C A T 各剂量组盲肠内容物中乳酸和乙酸显著增加(P <0.05),但是戊酸含量显著降低(P <0.05);C A T 2和C A T 3组异戊酸含量显著降低(P <0.05),总短链脂肪酸显著增加(P <0.05);C A T 2组支链脂肪酸显著增加(P <0.05);与A n t i 组相比,C A T 各剂量组乳酸和乙酸显著提高,戊酸显著降低(P <0.05)㊂另外,C A T 2组乳酸和支链脂肪酸均显著高于C A T 1组(P <0.05)㊂表4 试验各组盲肠内容物短链和支链脂肪酸比较分析T a b l e 4 C o m p a r i s o no n c e c a l l i p i dm e t a b o l i t e s i nd i f f e r e n t g r o u p s μm o l /g 项目I t e m s 对照组C O N抗生素组A n t i过氧化氢酶组C A TC A T 1C A T 2C A T 3标准误S E MP 值P -v a l u e乳酸L a c t i c a c i d 5.03c4.59c7.56b 8.24a8.11a b 0.127<0.001乙酸A c e t a t e 46.4b36.2c51.7a53.4a56.6a1.113<0.001丙酸P r o p i o n a t e 19.6a b17.1b20.8a b22.2a21.7a1.0400.021丁酸B u t y r a t e 14.5a b12.4b16.3a b17.2a b16.8a b1.0720.037戊酸V a l e r a t e6.57a 5.28b4.36c4.19c4.08c 0.205<0.001异丁酸I s o b u t y r a t e 3.934.653.924.233.970.2910.325异戊酸I s o v a l e r a t e 6.02a5.99a5.60a b4.84b4.75b0.2340.001支链脂肪酸B C F A7.95b c6.94c8.41b c11.50a 9.03b0.437<0.001总短链脂肪酸T o t a l S C F A87.6b85.9b95.4a b103.0a107.0a 3.2230.0019013期张文翔等:过氧化氢酶对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及代谢物的影响2.5盲肠微生物胺类代谢物比较分析试验各组盲肠微生物胺类代谢物比较分析见表5㊂由表5可知,与C O N组相比,C A T各剂量组盲肠内容物甲胺㊁色胺㊁腐胺㊁尸胺和总胺的含量均显著降低(P<0.05);C A T2和C A T3组亚精胺含量显著降低(P<0.05)㊂与A n t i组相比,C A T各剂量组的甲胺㊁色胺㊁腐胺㊁尸胺和总胺均显著降低(P<0.05)㊂C A T剂量效应比较分析显示,C A T2和C A T3组腐胺㊁尸胺和总胺含量显著低于C A T1组(P<0.05)㊂各组间酪胺和氨态氮均无显著差异(P>0.05)㊂表5试验各组盲肠含氮代谢物比较分析T a b l e5C o m p a r i s o no n c e c a l n i t r o g e nm e t a b o l i t e s i nd i f f e r e n t g r o u p s项目I t e m s对照组C O N抗生素组A n t i过氧化氢酶组C A TC A T1C A T2C A T3S E MP值P-v a l u e甲胺M e t h y l a m i n e/(μg/g)7.71a7.44a5.53b4.64b5.41b0.237<0.001色胺T r y p t a m i n e/(μg/g)17.8a17.3a12.0b10.6b10.9b0.546<0.001腐胺P u t r e s c i n e/(μg/g)227a216a165b123c117c9.482<0.001尸胺C a d a v e r i n e/(μg/g)505a460a352b296c325b c12.63<0.001酪胺T y r a m i n e/(μg/g)19.717.015.915.716.31.0800.165亚精胺S p e r m i d i n e/(μg/g)33.5a30.3a29.5a22.6b23.7b1.206<0.001精胺S p e r m i n e/(μg/g)20.7a b20.6a b21.3a18.2b18.6a b0.7580.028总胺T o t a l a m i n e s/(μg/g)831a769b598c487d513d14.93<0.001氨态氮N H3-N/(m g/g)1.181.271.201.241.270.0380.3243讨论本研究中,3个C A T组(100㊁150和200U/k g)试验鸡的终末体重㊁平均日增重和平均日采食量均显著提高,且料重比显著降低,表明C A T能够改善肉鸡的同化作用和生长性能㊂从理论上,C A T是一个非常有潜力的抗氧化添加剂,但是这方面的研究刚刚起步,报道甚少㊂L i等[12]报道,断奶仔猪饲喂外源性C A T(120U/k g),35日龄后,料重比显著降低,日增重和日采食量有增高趋势,但没有达到显著水平㊂另外,本研究中这些生产性能方面的数据与A n t i组比较差异不显著,表明C A T具有与抗生素类似的促生长效果,但是此方面尚无报道,该效果有待后续研究验证㊂本研究中抗氧化能力分析显示,C A T组的血清S O D和C A T活性显著高于C O N组,且与A n t i组差异不显著;同时,饲粮中添加C A T显著降低了血清蛋白质㊁D N A和脂类的氧化产物,包括P C O㊁8-O H d G和M D A,但是C A T组对P C O和8-O H d G 的降低效果没有达到A n t i组同样的效果;这些数据表明饲粮中添加C A T对肉鸡的抗氧化能力有显著的提高作用㊂类似地,C A T组显著降低了乌苏里貉血清中尿素氮㊁脂多糖和肿瘤坏死因子α,显著增加了血清免疫球蛋白A㊁免疫球蛋白G[7]㊂饲粮中添加C A T显著提高了肉鸡㊁母猪和仔猪初乳肝脏和血清C A T活性㊁总抗氧化能力㊁S O D和G P x活性,降低了M D A含量[8-10,13]㊂但是,在脂多糖应激模型中,饲粮中添加C A T仅对血浆G P x活性有显著的提高作用,对血清C A T活性㊁总抗氧化能力㊁S O D 活性和M D A含量无显著效果[12]㊂可见,C A T应对病原毒素如脂多糖的能力尚有欠缺㊂这也与本研究一致,即C A T组的抗氧化能力多数指标亦未达到A n t i组同等水平㊂肠道微生态对畜禽健康㊁生产性能和产品品质具有重要调控作用[14-16]㊂本研究中,饲粮处理导致盲肠门水平微生物存在显著性差异的有厚壁菌门㊁变形菌门和放线菌门;其中,C A T组的变形菌门显著高于C O N组㊂属水平比较分析显示,乳杆菌属㊁粪杆菌属和梭菌属在组间有显著性差异,其中C A T 组乳杆菌属和粪杆菌属显著高于C O N组,而梭菌属显著低于C O N组㊂乳杆菌属和粪杆菌属多为发酵有益微生物,而梭菌属多属于条件性致病菌[17-19]㊂因此,本研究中这些盲肠微生物数据表明,饲粮中添加C A T对肉鸡肠道微生态具有有益调控作用㊂关于C A T对肠道微生物菌群的影响鲜有报道㊂在呕吐毒素诱导的肉鸡模型中,饲粮中添加C A T显著增加了有助于肠道抗氧化和形态学的微生物,包括乳酸杆菌㊁厌氧菌和厌氧杆菌;降低了有害菌群,如变形杆菌㊁伽马杆菌和肠杆菌[20]㊂Z h o u等[21]报道1901中国畜牧兽医51卷饲喂高表达C A T和S O D的益生菌能降低肠炎模型小鼠肠道活性氧和提高维持肠道稳态的重要微生物㊂这种通过益生菌产生抗氧化酶针对性地解决肠道炎症的思路,在畜禽健康养殖方面值得探讨㊂肠道有益细菌发酵碳水化合物产生的代谢物为短链脂肪酸,主要包括乳酸㊁乙酸㊁丙酸㊁丁酸和戊酸[22]㊂短链脂肪酸具有为机体提供能量㊁调节机体免疫㊁调控肠道细胞代谢㊁维持肠道电解质平衡并促进矿物质吸收利用和改善肠道菌群结构等多种生理功能[23-24]㊂本研究中,C A T组乳酸㊁乙酸㊁丙酸以及总短链脂肪酸含量显著提高,表明饲粮中添加C A T 促进了肠道菌群对碳水化合物的发酵,对机体的肠道微生态㊁营养和健康均具有潜在的调控作用㊂更重要的是,本研究中饲粮中添加C A T显著降低了盲肠胺类代谢物,包括甲胺㊁色胺㊁腐胺和尸胺㊂胺类物质是氨基酸代谢的残渣,是肠道主要的有害物质,这些残渣不仅有直接的毒理作用,还导致有害菌群的扩增,严重危害机体健康[25]㊂关于C A T以及抗氧化酶类添加剂对机体肠道微生物代谢的影响鲜有报道,本试验结果表明,C A T可以作为一种抗氧化酶类添加剂应用于动物生产,但是未来仍需要更多㊁更深层次的探讨㊂4结论本试验条件下,饲粮中添加150~200U/k g的C A T可显著提高肉鸡平均日增重㊁平均日采食量㊁血清C A T和S O D活性;增加盲肠中有益菌群如变形菌门㊁乳杆菌属和粪杆菌属的数量,提高盲肠中乳酸㊁乙酸㊁异戊酸以及总短链脂肪酸的含量,降低甲胺㊁色胺㊁腐胺㊁尸胺和总胺的含量㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1]刘琳,胡泽琼,乔嘉宁,等.家禽氧化还原平衡和炎症反应的营养调控研究进展[J].中国畜牧杂志,2023,59(1):1-9.L I U L,HU Z Q,Q I A OJN,e t a l.R e s e a r c h p r o g r e s so n n u t r i t i o n a l r e g u l a t i o n o f r e d o x b a l a n c e a n di n f l a m m a t o r y r e s p o n s e i n p o u l t r y[J].C h i n e s e J o u r n a lo f A n i m a lS c i e n c e,2023,59(1):1-9.(i nC h i n e s e)[2] A L K A D I H.A r e v i e w o n f r e e r a d i c a l s a n da n t i o x i d a n t s[J].I n f e c t i o u sD i s o r d e r s-D r u g T a r g e t s,2020,20(1):16-26.[3]乔凤云,陈欣,余柳青.抗氧化因子与天然抗氧化剂研究综述[J].科技通报,2006,22(3):332-336.Q I A OFY,C H E N X,Y U L Q.As u r v e r y:R e s e a r c ho n t h e a n t i o x i d a t i v e f a c t o r s a n d n a t u r a la n t i o x i d a n t s[J].B u l l e t i n o f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y,2006,22(3):332-336.(i nC h i n e s e)[4] N E HA K,HA I D E R M R,P A T HA K A,e t a l.M e d i c i n a l p r o s p e c t s o f a n t i o x i d a n t s:A r e v i e w[J].E u r o p e a nJ o u r n a lo f M e d i c i n a l C h e m i s t r y,2019,178:687-704.[5] G L O R I E U X C,C A L D E R O N P B.C a t a l a s e,ar e m a r k a b l ee n z y m e:T a r g e t i n g t h eo l d e s ta n t i o x i d a n te n z y m e t of i n dan e wc a n c e r t r e a t m e n t a p p r o a c h[J].B i o l o g i c a lC h e m i s t r y,2017,398(10):1095-1108.[6] S E P A S IT E H R A N IH,M O O S A V I-M O V A H E D I A A.C a t a l a s e a n d i t sm y s t e r i e s[J].P r o g r e s s i nB i o p h y s i c sa n d M o l e c u l a rB i o l o g y,2018,140:5-12.[7]刘欣,刘云,李虎,等.过氧化氢酶对生长前期乌苏里貉生长性能㊁消化代谢㊁血清生化和免疫指标的影响[J].饲料工业,2022,43(13):53-58.L I U X,L I U Y,L I H,e t a l.E f f e c t so fc a t a l a s eo ng r o w t h p e r f o r m a n c e,d i g e s t i o na n dm e t a b o l i s m,s e r u mb i oc h e m i c a l a n di m m u n ei nd i ce so fr a c c o o n d o g si ne a r l yg r o w t hs t a g e[J].F e e dI n d u s t r y,2022,43(13):53-58.(i nC h i n e s e)[8]唐明红.过氧化氢酶对黄羽肉鸡生长性能㊁肠道形态以及抗氧化能力的影响[J].动物营养学报,2021,33(7):4153-4161.T A N G M H.E f f e c t s o f c a t a l a s e o n g r o w t hp e r f o r m a n c e,i n t e s t i n a l m o r p h o l o g y a n d a n t i o x i d a n tc a p a c i t y i n Y e l l o w b r o i l e r s[J].C h i n e s eJ o u r n a lo fA n i m a l N u t r i t i o n,2021,33(7):4153-4161.(i nC h i n e s e)[9]陈嘉铭,张志东,战晓燕,等.母猪饲粮中添加过氧化氢酶对母猪及仔猪生长性能和抗氧化能力的影响[J].动物营养学报,2019,31(7):3268-3275.C H E NJM,Z HA N GZD,Z HA N X Y,e t a l.E f f e c t so f c a t a l a s e s u p p l e m e n t a t i o n i n d i e t s o f s o w s o ng r o w t h p e r f o r m a n c e a n da n t i o x i d a n t c a p a c i t y o f s o w sa n d p i g l e t s[J].C h i n e s e J o u r n a l o f A n i m a lN u t r i t i o n,2019,31(7):3268-3275.(i nC h i n e s e) [10]方锐,左建军,凌宝明,等.日粮中添加过氧化氢酶对断奶仔猪生长性能㊁肠道形态及抗氧化性能的影响[J].中国饲料,2017,1:23-27.F A NG R,Z U O JJ,L I N G B M,e t a l.E f f e c t s o fd ie t a r y a d d i t i o no fc a t a l a s eo n g r o w t h p e rf o r m a n c e,i n t e s t i n a l m o r p h o l o g y a n d a n t i o x i d a n t c a p a c i t y o fw e a n e d p i g l e t s[J].C h i n a F e e d,2017,1:23-27.(i nC h i n e s e)[11] WA N GJ,S I N G H A K,K O N G F,e t a l.E f f e c to fa l m o n dh u l l sa sa na l t e r n a t i v ei n g r e d i e n to nb r o i l e r29013期张文翔等:过氧化氢酶对肉鸡生产性能㊁抗氧化能力㊁盲肠微生物及代谢物的影响p e r f o r m a n c e,n u t r i e n t d i g e s t i b i l i t y,a n d c e c a lm i c r o b i o t a d i v e r s i t y[J].P o u l t r y S c i e n c e,2021,100(3):100853.[12] L I Y,Z HA O X,J I A N G X,e t a l.E f f e c t so fd i e t a r ys u p p l e m e n t a t i o n w i t he x o g e n o u sc a t a l a s eo n g r o w t hp e r f o r m a n c e,o x i d a t i v e s t r e s s,a n dh e p a t i c a p o p t o s i s i nw e a n e d p i g l e t s c h a l l e n g e dw i t h l i p o p o l y s a c c h a r i d e[J].J o u r n a l o f A n i m a lS c i e n c e,2020,98(3):s k a a067.[13]周天天.母猪日粮中添加过氧化氢酶对哺乳仔猪生长性能㊁抗氧化功能和肠道屏障的影响[D].北京:中国科学院大学,2022.Z H O U T T.E f f e c t so f c a t a l a s ea d d i t i o nt os o wd i e t so n g r o w t h p e r f o r m a n c e,a n t i o x i d a n t f u n c t i o n a n di n t e s t i n a l b a r r i e r o f n u r s i n g p i g l e t s[D].B e i j i n g:U n i v e r s i t y o f t h eC h i n e s eA c a d e m y o f S c i e n c e s,2022.(i nC h i n e s e)[14]丁嘉怡,吴涛,陈佳琪,等.基于肠道微生物探讨蛋鸡脂肪肝出血综合征的研究进展[J].中国畜牧兽医,2023,50(7):2888-2895.D I N G J Y,WU T,C HE N J Q,e t a l.R e v i e w o nr e s e a r c ho f f a t t y l i v e r h e m o r r h a g i c s y n d r o m e b a s e d o ng u t m i c r o b i o t a[J].C h i n a A n i m a l H u s b a n d r y&V e t e r i n a r y M e d i c i n e,2023,50(7):2888-2895.(i nC h i n e s e)[15]邱菲,韩依辛,魏琦麟,等.培养组学在动物肠道微生物应用的研究进展[J].中国畜牧兽医,2023,50(2):598-605.Q I U F,HA N YX,W E IQL,e t a l.R e s e a r c h p r o g r e s so nc u l t u r o m i c s a p p l i c a t i o n i n a n i m a l g u tm i c r o b e s[J].C h i n aA n i m a l H u s b a n d r y&V e t e r i n a r y M e d i c i n e,2023,50(2):598-605.(i nC h i n e s e)[16] K HA NS,MO O R ERJ,S T A N L E Y D,e t a l.T h e g u tm i c r o b i o t ao f l a y i n g h e n sa n di t s m a n i p u l a t i o n w i t hp r e b i o t i c sa n d p r o b i o t i c st oe n h a n c e g u th e a l t ha n df o o d s a f e t y[J].A p p l i e d a n d E n v i r o n m e n t a lM i c r o b i o l o g y,2020,86(13):e00600-20.[17] N E V E L I N G D P,D I C K S L M T.P r o b i o t i c s:A na n t ib i o t i cr e p l ac e m e n ts t r a t e g y f o r h e a l t h y b r o i l e r sa n d p r o d u c t i v e r e a r i n g[J].P r ob i o t ic s a n dA n t i m i c r o b i a lP r o t e i n s,2021,13(1):1-11.[18] MA R TÍN R,R I O S-C O V I A N D,HU I L L E T E,e t a l.F a e c a l i b a c t e r i u m:A b a c t e r i a l g e n u s w i t h p r o m i s i n gh u m a n h e a l t h a p p l i c a t i o n s[J].F E M S M i c r o b i o l o g yR e v i e w s,2023,47(4):f u a d039.[19]张金武,魏紫,冀禹彤,等.A型产气荚膜梭菌诱导黄羽肉鸡肠道氧化应激和炎性损伤研究[J].中国畜牧兽医,2023,50(5):2069-2081.Z HA N GJW,W E I Z,J IYT,e t a l.S t u d y o n o x i d a t i v es t r e s sa n di n f l a m m a t o r y i n j u r y i ni n t e s t i n a l t r a c to fY e l l o w-f e a t h e r e d c h i c k e n s i n d u c e d b y C l o s t r i d i u mp e r f r i n g e n s t y p eA[J].C h i n aA n i m a lH u s b a n d r y&V e t e r i n a r y M e d i c i n e,2023,50(5):2069-2081.(i nC h i n e s e)[20] WA N G W,Z HU J,C A O Q,e t a l.D i e t a r y c a t a l a s es u p p l e m e n t a t i o n a l l e v i a t e s d e o x y n i v a l e n o l-i n d u c e do x i d a t i v e s t r e s s a n d g u t m i c r o b i o t a d y s b i o s i s i nb r o i l e rc h i c k e n s[J].T o x i n s(B a s e l),2022,14(12):830.[21] Z H O U J,L I M,C H E N Q,e t a l.P r o g r a m m a b l ep r o b i o t i c sm o d u l a t e i n f l a m m a t i o na n d g u tm i c r o b i o t af o r i n f l a m m a t o r y b o w e l d i s e a s e t r e a t m e n t a f t e re f f e c t i v eo r a ld e l i v e r y[J].N a t u r e C o m m u n i c a t i o n s,2022,13(1):3432.[22]杨瑰桃,马继登,李学伟,等.短链脂肪酸调控骨骼肌生理功能研究进展[J].中国畜牧兽医,2023,50(6):2286-2295.Y A N G GT,MAJD,L IX W,e t a l.R e s e a r c h a d v a n c eo nr e g u l a t i o no fs k e l e t a lm u s c l e p h y s i o l o g y f u n c t i o nb y s h o r tc h a i n f a t t y a c i d[J].C h i n a A n i m a lH u s b a n d r y&V e t e r i n a r y M e d i c i n e,2023,50(6):2286-2295.(i nC h i n e s e)[23] A L IQ,MAS,L AS,e t a l.M i c r o b i a l s h o r t-c h a i n f a t t ya c i d s:Ab r i d g eb e t w e e nd i e t a r y f i b e r s a n d p o u l t r yg u th e a l t h A r e v i e w[J].A n i m a l B i o s c i e n c e,2022,35(10):1461-1478.[24] D A L I L E B,V A N O U D E N H O V E L,V E R V L I E T B,e t a l.T h er o l eo fs h o r t-c h a i nf a t t y a c i d s i n m i c r o b i o t a-g u t-b r a i n c o m m u n i c a t i o n[J].N a t u r e R e v i e w sG a s t r o e n t e r o l o g y a n d H e p a t o l o g y,2019,16(8):461-478.[25] WÓJ C I K W,ŁU K A S I E W I C Z M,P U P P E L K.B i o g e n i ca m i n e s:F o r m a t i o n,a c t i o n a n dt o x i c i t y Ar e v i e w[J].J o u r n a lo f t h e S c i e n c e o f F o o d a n dA g r i c u l t u r e,2021,101(7):2634-2640.(责任编辑戴晔)3901。
超氧化物歧化酶活性的测定
植物组织中超氧化物歧化酶和平测定方法【实验目的】1. 了解还原法测定抗氧化酶活性测定的原理方法。
2. 熟悉植物叶片中ROS 去除机制。
【实验原理】超氧化物歧化酶（SOD ）普遍存在于动植物与微生物体内。
SOD 是含金属辅基的酶。
高等植物有两种类型的SOD ：Mn-SOD 和Cu/Zn-SOD 。
SOD 能够清除超氧阴离子自由基 （O 2—），它与CAT 、POD 等酶协同作用来防御活性氧或其他过氧化物自由基对细胞膜系统的伤害，从而减少自由基对机体的毒害。
超氧阴离子自由基（O 2—）是生物细胞某些生理生化反应常见的中间产物。
SOD 能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧阴离子自由基，生成H 2O 2和O 2。
生成的H 2O 2可被过氧化氢酶分解为O 2和H 2O ：2 O 2—+ 2H + H 2O 2+O 2 2 H 2O 2 O 2+H 2O超氧自由基非常不稳定，寿命极短，一般用间接方法测定SOD 活性。
本实验依据SOD 抑制氮蓝四唑（NBT ）在光下的还原作用来确定酶活性的大小。
有氧化物质存在时，核黄素可在光照条件下还原。
被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O 2—。
当加入NBT 后，在光照条件下O 2—又可将NBT 还原为蓝色的甲腙，后者在560nm 处有最大光吸收。
当加入SOD 时，SOD 可通过清除O 2—，而抑制NBT 的光还原反应，使蓝色甲腙生成速度减慢。
于是，进行光还原反应后，反应液蓝色越深，说明酶的活性越低，反之酶的活性越高。
抑制NBT 光还原的相对百分率与酶活性在一定范围内呈正相关关系，据此可以计算出酶活性的大小。
常常将抑制50%的NBT 光还原反应时所需的酶量作为一个酶活性单位（U ）。
【器材与试剂】 1. 实验仪器与用具研钵、高速冷冻离心机、分光光度计、微量移液枪、刻度移液管、离心管、光照箱（光照度为4000lx ）、容量瓶（10ml ）、试管2. 实验试剂50mmol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）； 130mmol/L 甲硫氨酸（MET ）溶液； 750μmol/L 氮蓝四唑（NBT ）溶液； 100μmol/L EDTA- Na 2溶液；CATSOD20μmol/L 核黄素溶液；SOD 提取介质：50mmol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）内含1% PVP 。
过氧化物酶
植物体内过氧化物酶活性测定及同工酶电泳
过氧化物酶活性测定
一、原理
1. 过氧化物酶[perox idase, POD] ： 广泛存在于各种动物、植物和微生物 体内。催化由过氧化氢参与的各种还原剂的氧化反应: RH2+ H2O2→2H2O + R 2. POD 分子结构特点：POD 是一种由单一肽链与卟啉构成的血红素蛋白, 脱 辅基蛋白分子须与血红素结合才构成全酶。
3. POD的主要生理功能： ◆ 参与活性氧代谢过程； ◆ 参与木质素和木栓质的合成； ◆ 参与生长素的降解。
二、实验材料与试剂 1.材料：玉米幼苗
2.试剂： 0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH6.0）；0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.0） 愈创木酚； H2O2
三、实验步骤
1. 提取酶液：取样品1.0g，加入2ml的0.05mol/L pH5.5的磷酸缓冲液，冰浴研 磨，10000rpm，4℃离心后取上清，即为粗酶液。 2. 酶活性测定：采用愈创木酚比色法测定，对照为煮沸5分钟的粗酶液，反应 体系包括：0.05mol/L pH5.5的磷酸缓冲液2.9ml；0.05 mol/L愈创木酚1ml; 2%H202 1ml；粗酶液0.1 ml，反应1分钟后，立刻在470nm下，测定OD值。 以每分钟在470nm处吸光度的变化0.01为一个酶活单位。 3. 计算酶活性：选取OD值变化较均匀的一段数据，代入公式计算； 以每分钟OD值变化0.01作为1个过氧化物酶活力单位（U）。
二、材料、仪器设备及试剂
1.材料：玉米幼苗
2.仪器设备：稳流稳压电泳仪；冷冻离心机及离心管； pH试纸； 3.试剂： （1)分离胶缓冲液（pH8.9）：1mol/L HCl 48ml，Tris36.6g， TEMED0.23ml，加水定容 至100ml。 (2)分离胶贮液：30g丙烯酰胺，0.8g甲叉双丙烯酰胺，加水溶解并定容至100ml，过滤 后使用。 (3)过硫酸铵溶液：过硫酸铵0.2g，加水定容至100ml制胶时现配现用）。 (4)浓缩胶缓冲液：1mol/L HCl48ml＋Tris5.98g＋TEMED0.46ml，调pH6.7，并定容至 100ml。 (5)浓缩胶贮备液：丙烯酰胺10g，甲叉双丙烯酰胺2.5g,加水定容到100ml，使用前过滤。 (6)电极缓冲液：Tris 6.0g，Gly 28.8g， 用水定容至1000ml（pH8.3），用前稀释10倍。 (7)四甲基乙二胺（TEMED）。 (8)0.1％的溴酚蓝水溶液。 (9)联苯胺染色母液：联苯胺1g＋冰醋酸18ml＋H2O2ml溶解贮于棕色瓶中。
氧化还原酶过氧化物酶过氧化物酶 (2)
范围较宽。
酸性状态，过氧化物酶血红素和蛋白质部分分离 ，酶蛋白从天然状态转变到可逆变性状态，活力下降 ，且热稳定性低；
在中型和碱性状态，酶处于天然状态，蛋白质结 构含α－螺旋结构，稳定，酸化后α－螺旋结构破坏， 产生β－结构。
如青刀豆：pH5.0-5.4，有可溶态，离子结合， 共价结合。
（2）黄蛋白过氧化物酶：含有黄素腺嘌呤二核苷酸 作为辅基，这类酶存在于微生物和动物组织中。
1.３分布：
过氧化氢酶在植物细胞中以两种形式存在：
。 ①以可溶形式存在于细胞浆中 ②以结合形式在细胞中与细胞壁或细胞器
相结合
辣根是过氧化氢酶最重要的一个来 源。辣根中20%的过氧化氢酶（POD） 与细胞壁结合，用2mol/L NaCl(高离 子强度)才能提取出来。辣根中过氧化物 酶活力为569,000单位/g组织（蘑菇仅 240单位/g组织）。
3.２.最适温度 差异较大：35-60℃。 不同来源的过氧化物酶在最适作用温度 上存在着很大的差别。例如，马铃薯和 花菜（均浆）中过氧化物酶的最适温 度分别为55℃和35～40℃。
4过氧化物酶的热稳定性
4.1. 热失活概念 ①双向性：POD中含有不同的耐热性质 部分，不耐热部分在热处理时很快地 失活，而耐热部分在同样的温度缓慢 地失活。
① PPO的最佳底物并非和酶同时存在于同一植物 中。
② PPO只能催化在对位上有一个大于－CH2的取 代基的一元酚羟基化，即PPO对底物具有特异 性要求。
③ 不同的品种果蔬，同一品种不同部位中PPO具 有不同的底物特性。
④ 多酚氧化酶在植株幼嫩阶段及生长旺盛期活性 最高。
3 pH对多酚氧化酶活力的影响
过氧化物氧化酶
过氧化物氧化酶
过氧化物氧化酶（Peroxidase）是一类催化过氧化氢（H2O2）分解的酶。
它存在于细胞质和细胞壁中，广泛存在于真菌、植物和动物体内。
过氧化物氧化酶通过催化酶促反应将有机底物氧化，同时还能将过氧化氢还原为水。
其反应机理涉及到酶的两个反应中心（活性位点）：一个是运载电子的铁离子（Fe3+），另一个是共同提供电子的基团。
过氧化物氧化酶在生物体内起到重要的生理和防御作用。
它参与多种代谢途径中的氧化还原反应，如酚类、醛类和氨基酸的代谢。
它还能够参与细胞凋亡、免疫响应和抗氧化防御等重要生物学过程中。
在实验室中，过氧化物氧化酶也被广泛应用于生物化学和生物技术领域。
它可用作指示剂、催化剂和保护剂等，还可以作为一种检测方法或分析工具，用于测定物质的浓度、反应速率和分子结构等。
实验过氧化物酶活性的测
按照实验要求配制过氧化物酶试剂和磷酸盐缓冲液。
配制试剂
将比色皿、滴定管等仪器在实验前放置在冰箱中冷却。
预冷仪器
实验准备
实验操作流程
采集待测样本，如植物组织或细胞提取物。
样本准备
将样本与过氧化物酶试剂混合，在适宜的温度和pH条件下反应一段时间，记录反应过程中的吸光度变化。
酶活性测定
记录每个样本的吸光度变化，并计算过氧化物酶活性。
研究过氧化物酶活性有助于了解植物的抗病机制和筛选抗病品种
实验原理
02
实验材料
实验仪器
分光光度计：用于检测样品中的吸光度，从而计算过氧化物酶的活性。
磁力搅拌器：保持反应液的均匀混合。
酶标仪：可以同时检测多个样品，提高实验效率。
低温冰箱和超净工作台：储存和处理实验样品。
实验试剂
过氧化物酶标准品：用于制作标准曲线。
xx年xx月xx日
实验过氧化物酶活性的测
CATALOGUE
目录
实验简介实验材料实验步骤实验结果实验总结
01
实验简介
探究不同植物中过氧化物酶的活性差异
验证过氧化物酶活性与植物抗病性的关系
实验目的
1
实验背景
2
3
过氧化物酶是一种广泛存在于植物中的氧化还原酶
过氧化物酶在植物体内具有抗氧化、清除自由基的作用，有助于提高植物的抗病能力
数据记录
根据实验数据计算过氧化物酶活性的平均值、标准差等统计指标，并绘制相应的图表。
数据分析
03
结果展示
将实验结果以图表的形式展示，如柱状图、饼图等，以便更好地观察和分析实验结果。
数据记录与分析
01
数据记录表格
过氧化物酶体的发现,过氧化物酶(形态结构、功能反应)
过氧化物酶体的发现，过氧化物酶（形态结构、功能反应）过氧化物酶是由微生物或植物所产生的一类氧化还原酶,它们能催化很多反应. 过氧化物酶是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶。
主要存在于细胞的过氧化物酶体中,以铁卟啉为辅基,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
简介氧化还原酶的一种。
过氧化物酶是由微生物或植物所产生的一类氧化还原酶,它们能催化很多反应. 过氧化物酶是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶。
主要存在于细胞的过氧化物酶体中,以铁卟啉为辅基,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
过氧化物酶体过氧化物酶体是由一层单位膜包裹的囊泡, 直径约为0.5～1.0μm, 通常比线粒体小。
普遍存在于真核生物的各类细胞中,在肝细胞和肾细胞中数量特别多。
过氧化物酶体的标志酶是过氧化氢酶,它的作用主要是将过氧化氢水解。
过氧化氢(H2O2)是氧化酶催化的氧化还原反应中产生的细胞毒性物质,氧化酶和过氧化氢酶都存在于过氧化物酶体中,从而对细胞起保护作用。
植物体中含有大量过氧化物酶，是活性较高的一种酶。
它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有关系。
在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。
一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。
这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度，而且发现早衰减产的水稻根系中过氧化物酶的活性增加，所以过氧化物酶可作为组织老化的一种生理指标。
此外，过氧化物同工酶在遗传育种中的重要作用也正在受到重视.催化从底物移去电子，并转给过氧化氢反应。
即：供体+H2O2→氧化的供体+2H2O，是一种血红素蛋白(hemoprotein)。
如过氧化氢酶便是过氧化物酶的一种。
过氧化氢酶可与葡萄糖氧化酶配合使用，脱除蛋清中的葡萄糖，代替了传统的自然发酵的方法，从而提高产品质量，缩短生产周期。
在医学上，也可作为工具酶，用于检验尿糖和血糖。
过氧化物酶分布
过氧化物酶分布
过氧化物酶（peroxidase）是广泛分布于各种生物体和环境中的一种酶类，在植物、动物和微生物中均可有发现。
其分布主要有以下几个方面：
1. 在植物中，过氧化物酶是一种普遍存在的酶类，在各个组织和器官中均可有发现，如根、茎、叶、花和果实等。
过氧化物酶在植物中具有多种生物学功能，如参与细胞壁的形成、木质部的分化、植物防御反应等。
2. 在动物中，过氧化物酶分布于各种组织和器官中，如肝、脾、肺、肾、心脏、肌肉、血液等。
过氧化物酶在动物体内主要参与氧化还原反应和解毒作用，还具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎等多种生物学功能。
3. 在微生物中，过氧化物酶是一种广泛存在的酶类，包括细菌、真菌、原生动物和微藻等。
过氧化物酶在微生物中主要参与氧化还原反应和防御外界氧化剂的侵袭，同时也具有其他多种生物学功能。
总之，过氧化物酶的分布广泛，其在生物体内的作用也十分重要。
硒在羊生产中应用的研究进展
山东畜牧兽医2019年第40卷58硒在羊生产中应用的研究进展张永翠程光民何孟莲徐相亭*（山东畜牧兽医职业学院山东潍坊261061）中图分类号：S816.71 文献标识码：A 文章编号：1007-1733(2019)04-0058-02 硒是动物机体生长发育所必需的微量元素之一，参与动物营养、代谢、繁殖、免疫功能的发挥。
但我国约有2/3 以上地区饲料原料和牧草中硒的含量小于0.05mg/kg，不能满足动物的正常生理需求[1]。
导致动物不能从饲料中获取到足量的硒，引发羊的白肌病等。
因此，饲料中补硒成为一种必要的措施。
硒的化合物分为有机硒和无机硒两大类，长期以来，作为饲料中硒源的补充剂主要是以无机硒( 亚硒酸钠) 为主，无机硒在使用过程中存在易氧化、毒性大、吸收利用率低、氧化其他微量元素及维生素、污染环境等缺点，但是使用成本相对较低。
有机硒与无机硒相比，具有吸收率高、生物活性强、毒性低、环境污染小等优点。
有机硒的常见形态主要有硒代蛋氨酸、酵母硒，由于硒蛋氨酸的人工合成工艺复杂、成本高，不适用于批量生产实践，所以现在词料生产中应用的有机硒主要是酵母硒。
酵母硒是以酵母作为载体，将无机硒转化为有机硒的发酵产品，酵母细胞在发酵过程中可以将无机硒转化到细胞内的有机分子上，形成具有较高生物活性和较低毒性的有机硒。
两种形态的硒在动物生产中都发挥了重要的作用，硒在羊生产的作用主要体现在以下几个方面：1 硒与羊的抗氧化作用（1）硒作为动物体内各种过氧化物酶的辅助因子，对细胞抗氧化作用有活化作用。
例如，硒是构成谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和烟酸羟化酶的成分，参与辅酶Q和辅酶A的合成，同时又是一种与电子传递有关的细胞色素的成分。
谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶可通过催化氧化还原反应来保护细胞膜的结构和功能，加强维生素 E 的抗氧化作用，清除自由基。
Osame等[2]研究表明，缺硒和维生素Ｅ可导致羔羊患白肌病，使羔羊血液GPxs活性和血硒浓度显著降低。
酶活性的测定
计算公式
每克鲜叶APX的酶活性U= （X×7.5×1000×60×1000）/ （m×2.8×20×10） 上式中，X：OD值的变化；7.5：每克材料 提取7.5mL粗酶液；1000：将ml转化成µL； 60：将1min转化成60s；1000：将mmol转化 成µmol；m：鲜叶的重量，单位为g；2.8： 吸光系数mmol/L cm；20：用20µL酶液进行 活性测定；10：每10s记录吸光值的变化。
过氧化氢酶的应用：
被用于食品包装，防止食物被氧化。 在纺织工业中，被用于除去纺织物上的过氧化氢，以保证成品是不含 过氧化物的。 它还被用在隐形眼镜的清洁上：眼镜在含有过氧化氢的清洁剂中浸泡 后，使用前再用过氧化氢酶除去残留的过氧化氢。 近年来，过氧化氢酶开始使用在美容业中。一些面部护理中加入了该 酶和过氧化氢，目的是增加表皮上层的细胞氧量。 植物细胞中的过氧化物酶体参与了光呼吸（利用氧气并生成二氧化碳） 和共生性氮固定（将氮气(N2）解离为活性氮原子）。细胞被病原体 感染时，过氧化氢可以被用作一种有效的抗微生物试剂。 其活性也与粮食品质之间有一定的相关性，是一项衡量谷物品质的 重要指标。
方法比较：
研究认为，化学滴定法重复性差、紧密度 低、操作繁琐、检测线低，不适于大批量 的样品测定。其优点是不需要任何特殊的 仪器，适用性比较广泛。 紫外分光光度法具有重现性好，操作简单、 快速、检测线相对较低得到优点。但是对 于测定底物或产物改变量方面不太准确。
总结：
综上所述，过氧化氢酶活性测定的方法大都基于 过氧化氢酶催化过氧化氢的分解反应：根据反应 生成的氧气的量、反应剩余的过氧化氢的量或根 据反应时的电子的转移及电流的变化等。同时， 影响测定结果的因素很多，如过氧化氢的浓度、 酸度、温度及重金属的含量等；并且各种方法的 准确性和灵敏度也有一定差异。因此，在测定CAT 活性时，应该根据具体组织种类及测量要求选择 适合的测定的方法。
实验六 过氧化物酶活性的测定 (比色法)
实验六过氧化物酶活性的测定（比色法）过氧化物酶（peroxidase）是广泛存在于植物、动物和微生物体内的一种酶类。
它可以光催化、热催化或金属离子诱导形式存在。
过氧化物酶具有良好的实用性，因为它可以用于许多领域的生物学研究，例如生物化学、分子生物学和环境科学等领域。
本实验采用比色法测定过氧化物酶的活性，其原理是利用二氧化氢和过氧化氢作为试剂，测量其光吸光度能力。
其中，一种常用的受体是酚类化合物，如4-氨基联苯酚，其产生的有色化合物可以通过反应过程的光谱特性来检测光学密度变化。
实验原理当过氧化物酶在存在过氧化氢的情况下催化苯酚型受体的氧化反应时，产生的产物可在可见光区域吸收电磁能，并产生有色化合物。
比色法即是利用这种能力来检测催化作用在反应中的过氧化氢的活性。
该实验中，使用4-氨基联苯酚作为受体，在pH为6.0的琼脂糖基质中，在340nm处测量反应混合物的吸光度变化。
反应的一侧为过氧化氢，另一侧为受体，过氧化氢在过氧化物酶的催化下，氧化受体，产生的有色产物吸收可见光，从而形成比色反应。
过氧化氢的亲电性较大，能够与生物的活性系数发生相互作用。
因此，过氧化物酶的测量能力可以作为生物活性系数的一个指标。
实验材料1. 4-氨基联苯酚2. 过氧化氢4. 磷酸盐缓冲液（pH6.0）5. 琼脂糖实验步骤1. 将500μL的催化过程反应液与250μL的4-氨基联苯酚、250μL的磷酸盐缓冲液和50μL的琼脂糖混合，制备琼脂糖基质。
2. 分别添加20μL、40μL、60μL、80μL和100μL的过氧化物酶，混合后立即测量其吸光度。
3. 测量样品的吸光度变化，记录5次实验结果。
实验结果分析计算出反应液的吸光度，并绘制反应液中过氧化物酶催化下4-氨基联苯酚氧化反应过程的浓度关系曲线。
因为过氧化物酶的催化效率与其浓度成正比，所以可以用这种曲线来确定反应液中的过氧化物酶浓度。
实验注意事项1. 实验中的4-氨基联苯酚是有毒的，应严格遵守安全操作规程。
过氧化物酶体酰基辅酶a氧化酶
过氧化物酶体酰基辅酶a氧化酶
过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶（ACOX）是一种重要的酶，它
在动物体内参与脂肪酸氧化代谢过程中起着关键的作用。
ACOX主要
存在于细胞内的过氧化物酶体中，负责催化长链脂肪酸分解的第一
个步骤，将长链脂肪酸转化为丙酮酸，以供细胞能量代谢使用。
从功能角度来看，ACOX的活性对于维持机体脂肪酸代谢平衡至
关重要。
它参与调控脂肪酸的氧化代谢，对维持细胞内能量平衡和
脂质代谢具有重要作用。
此外，ACOX也与一些代谢性疾病如糖尿病、肝脏脂肪变性等密切相关，其功能异常可能导致脂质代谢紊乱和相
关疾病的发生。
从结构角度来看，ACOX是一种膜结合的酶，其活性部位位于过
氧化物酶体膜的内部。
其结构特征和催化机制对于深入理解脂肪酸
氧化代谢过程具有重要意义，也为相关药物设计和疾病治疗提供了
理论基础。
总的来说，过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶在细胞内脂肪酸代
谢中具有重要作用，其功能异常可能导致代谢性疾病的发生。
对于
这一酶的研究有助于深入理解脂质代谢的调控机制，为相关疾病的治疗和药物研发提供理论基础。
动物营养代谢病复习题
判断题答案1. （√）动物营养代谢病是新陈代谢障碍病和营养缺乏病的总称。
2. （√）动物营养代谢病造成的主要经济损失是生长发育受阻和生产性能下降。
3. （×）奶牛酮病在临床上主要是糖供给不足，脂肪大量分解所致，临床表现神经型和呼吸型两种。
4. （×）胆碱、含硫氨基酸缺乏是鸡脂肪肝和肾综合征发生的主要原因。
5. （√）生物素缺乏是鸡脂肪肝和肾综合征发生的主要原因。
6. （√）佝偻病是幼畜和幼禽的钙磷代谢障碍性疾病，其主要病理特征是成骨细胞钙化不足。
7. （×）佝偻病是一种骨营养不良性疾病，常在成年动物软骨内骨化作用完成后发生。
8. （×）饲料中临床推荐的合理的钙与磷供给比例一般为1:2。
9. （√）骨软病是一种骨营养不良性疾病，常在成年动物软骨内骨化完成后发生。
10.（×）微量元素是指动物体内含量不足百分之一的元素，在体内发挥重要的生物学作用。
11.（√）硒-维生素E缺乏在牛上可引起营养性肌营养不良和胎衣滞留。
12.（√）猪的桑葚心是由于硒-维生素E缺乏引起的。
13.（×）肝营养不良和桑葚心是羊硒-维生素E缺乏最常见的形式。
14.（√）雏鸡渗出性素质是由于饲料中缺乏硒和维生素E引起的。
15.（×）羔羊摆腰病是因为硒缺乏所引起的疾病。
16.（√）铜缺乏症的患畜，临床上表现以贫血、腹泻、运动失调和被毛褪色为特征症状。
17.（√）动物体内维生素A及胡萝卜素不足或缺乏可导致以上皮角化、夜盲和繁殖机能障碍为特征的维生素A缺乏症。
18..（×）猪食盐中毒表现明显的神经症状，主要是大脑血管周围有大量的淋巴细胞浸润，形成所谓的“袖套”现象。
19..（×）食盐中毒本质上是由Cl- 引起的中毒。
填空题答案1. 营养代谢病是新陈代谢障碍病和营养缺乏病的总称。
2. 奶牛酮病的临床特征是：酮血、酮尿、酮乳和低血糖。
3. 酮病发生的主要原因是糖供给不足。
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2.操作表
测定管
对照管
试剂一（ml)
2.4
2.4
试剂二应用液(ml)
0.3
0.3
试剂三应用液（ml) 0.2
双蒸馏水（ml)
0.2
样本
0.1
0.1
37℃水浴准确反应30分钟
试剂四（ml)
1.0
1.0
6、计算酶活性
选取OD值变化较均匀的一段数据，代入公式计算； 以每分钟OD值变化0.01ຫໍສະໝຸດ 为1个过氧化物酶活力单 位（U）。
/ 酶活力=（测定OD值-对照OD值）*反应总体积(ml)*1000 12*
比色光径（cm)*取样量(ml)*反应时间（30分钟）*匀浆蛋白浓度 (mgport/ml)
7.注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用， 酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验 误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用 排枪加样。。
5、实验步骤
1. 前处理
蝗虫幼虫匀浆的制备，准确称取幼虫的重量，按照重 量（g):体积（ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介 质（建议使用生理盐水或磷酸盐缓冲液：0.1mol/l PH 7~7.4) 冰浴下制备成10%的幼虫匀浆液，4000转/ 分离心10分钟后，取上清420nm处，1cm光径。 100ul进行OD值的测定
3、POD的主要生理功能
参与活性氧代谢过程；
注：除了与动物正常代谢和生长发育相关的 结构型POD 外, 很大部分POD的合成属于诱导 表达型。
4、实验材料与试剂
实验材料：
蝗虫的幼虫 420nm的分光光度计 恒温水浴箱
试剂
试剂一：60ml液体*4瓶，4℃保存6个月。
试剂二;粉剂*3瓶，4℃保存6个月。 试剂二应用液的配制：临用每瓶粉剂加入10ml的双蒸馏水溶 解，4℃保存避光 试剂三：5ml瓶液*1瓶 4℃保存6个月。 试剂三应用液的配制：临用前用蒸馏水15倍稀释，使得1cm 光径，双蒸馏水调零时A240保持在0.4左右，现用现配。若 A值太高，则加双蒸馏水稀释，若A值太低，则加入适量试 剂三。（一般在25倍左右稀释） 试剂四：50ml液体*2瓶，4℃保存6个月
动物体内过氧化物酶活性的测 定
廖百建
1、原理
过氧化物酶
过氧化物酶[perox idase, POD] 广泛存 在于各种动物体内。催化由过氧化氢参 与的各种还原剂的氧化反应:
RH2+ H2O2→2H2O + R 通过测定420nm处吸光度的变化得出酶的
活性
•2 POD 分子结构特点
POD 是一种由单一肽链与卟啉构成的血 红素蛋白, 脱辅基蛋白分子须与血红素结 合才构成全酶。