(精)仪器分析实验讲义

实验一722 型分光光度计的性能检测

一、目的

1、学会使用分光光度计

2、掌握分光光度计的性能检验方法

二、提要

1、分光光度计的性能好坏，直接影响到测定结果的准确性，因此新购仪器及使用一定时间后，均需进行检验调整。

2、利用KMnO4溶液的最大吸收峰值来检验波长的精度。

3、用同种厚度的比色皿，由于材料及工艺等原因，往往造成透光率的不一致，从而影响测定

结果，故在使用时须加以选择配对。

三、仪器与试剂

1、722 型分光光度计；

2、小烧杯；

3、坐标纸；

4、滴管；

5、擦镜纸；

6、KMnO4溶液；

四、操作步骤

1、吸收池透光率的检查（测定透光率）

吸收池透光面玻璃应无色透明，并应无水、干燥。

检查方法如下：以空气的透光率为100%，则比色皿的透光率应不低于84%，同时在450nm、650nm 处测其透光率，各透吸收池透光率差值应小于5%。

2、吸收池的配对性（测定透光率）

同种厚度的吸收池之间，透光率误差应小于0.5%。

检查方法如下：将蒸馏水分别注入厚度相同的几个吸收池中。以其中任一个比色皿的溶液做空白，在440nm 波长处分别测定其它各比色皿中溶液的透光率，然后选择相差小于0.5% 的吸收池使用。

3、重现性（光度重复性）（测定透光率）

仪器在同一工作条件下，用同种溶液连续测定7 次，其透光率最大读数与最小读数之差（极差）应小于0.5%。

检查方法如下：以蒸馏水的透光率为100%，用同一KMnO4溶液连续测定7 次，求出极差，如小于0.5%，则符合要求。

4、波长精度的检查（测定A）

为了检查分光系统的质量，可用KMnO4溶液的最大吸收波长525nm 为标准，在待检查仪器上测绘KMnO4溶液的吸收曲线。

检查方法如下：取3.0×10-5mol/L 的KMnO4溶液，以蒸馏水为空白，在460nm~580nm 范围内，分别测定460、480、500、510、520、522、524、525、526、528、530、540、550、560、570、580nm 波长处的吸光度，在坐标纸上绘出吸收曲线。若测得的最大吸收波长在525±10nm 以内，说明该仪器符合要求。

五、数据处理

2、吸收池的配对性

以吸收波长为横坐标，吸收度A 为纵坐标绘制吸收曲线。

六、思考题

1、在本实验中共用了几种空白溶液，分别是什么？

2、使用722 或721 型分光光度计时，应注意哪些问题？

1）仪器预热时应将光闸门处于关的位置，可避免光电倍增管照光，延长光电倍增管的使用寿命。

2）如果大幅度改变测试波长时，需要等数分钟，才能正常工作。因波长大幅移动时，光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢。

3）每台仪器上所配套的吸收池不能与其他仪器上的吸收池单个调换。

4）吸收池每次使用完毕后，应立即用蒸馏水洗净，用吸水纸擦干，存于吸收池盒内。

3、同种比色皿透光率的差异对测定有什么影响？

4、检查分光光度计的波长精度及重现性对测定有什么实际意义？

实验二药物中微量铁的测定

一、目的

1、掌握使用分光光度计

2、了解分光光度法测定药物及水中铁含量的操作方法及原理。

3、学会用工作曲线法测定样品含量。

二、提要

铁是药物和水中常见的一种杂质，含量大时易产生特殊气味，因此对药物和水中的铁要进行检查和测定。

亚铁离子与邻二氮菲生成稳定的橙红色配合物。

应用此反应可测定铁，当铁以Fe3+离子形式存在于溶液中时，可预先用还原剂盐酸羟胺将其还原为Fe2+离子。

2 Fe3++2NH2OH·HCl→2 Fe2++N2↑+2H2O+4H++2Cl-

显色时溶液PH 值应在2~9，若酸度过高（PH﹤2）显色缓慢而色浅；若酸度过低，二价铁离子易水解。最大吸收波长为508nm，ε =11100。

三、仪器与试剂

722 型分光光度计；容量瓶25ml 8 只；吸量管1ml，2ml，5ml，10ml 各1 只；吸收池、擦镜纸；洗耳球；小烧杯；万分之一天平；标准铁溶液（10µg.ml-1）；邻二氮菲水溶液（0.075%）；盐酸羟胺5%水溶液（用时配制）；NaAc（0.5mol·L-1）；HCl（6mol·L-1）。

四、操作步骤

1、标准曲线的制作

在 6 只25ml 容量瓶中，用吸量管分别加入0.0，1.0，3.0，5.0，7.0，9.0ml 铁标准液（10µg·ml-1），分别精密加入1ml盐酸羟胺，5ml NaAc溶液，2ml邻二氮菲，用水稀释至刻度后摇匀，放置10分钟。用1cm比色皿，以试剂为空白（即0.0ml铁标液），在508nm波长下，测量各溶液的吸光度。以铁含量为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制标准曲线。2、待测样测定

准确吸取待测样5.00ml，置25ml 容量瓶中。按上述制备标准曲线的方法配制溶液并测定吸光度，根据测得的吸光度求出水中总铁量。

据水样测得的吸光度计算水中铁含量。

以铁含量为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制标准曲线，并根据测得样品的吸光度，计算水中总铁量。

A

0.4

0 10 30 50 70 90 (μg/25mL)

C 未= X/5 = Y μg/ml

四、注意事项

1、测定时由低浓度至高浓度方向测定，可以直接省略蒸馏水润洗过程

2、吸收池中装样高度：至2/3 处即可。

五、思考题

1、本实验中采用的空白溶液为什么?

2、显色反应操作中，加入各标准溶液与样品的含酸量不同，对显色有无影响？

3、根据制备标准曲线测得的数据，判断本次实验所得浓度与吸光度间的线性好不好。分析其原因。