网织红细胞计数PPT演示文稿

实验三 网织红细胞计数
一、实验原理
网 织 红 细 胞 胞 浆 内 残 存 有 嗜 碱 性 的 RNA 物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后 RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结 合，凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状 或网状结构，可在显微镜下识别。计数1000 个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百 分比，或×红细胞计数结果报告其绝对值。
3. 低倍镜浏览，选取红细胞分布均匀网织红细胞染 色较好的部分（体尾交界处），滴香柏油转换至油 镜，在Miller窥盘下计数小方格中的RBC数和大方 格中的网织红细胞数（或数出整个视野中的RBC 总数和其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至 几个视野RBC总数>1000为止）。
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Miller窥盘
将Miller窥盘放在显 微镜目镜中,通过窥盘 中大小方格间的9比1 比例关系计算RBC数和 Ret数。
网织红细胞
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计数方法
1、普通光学显微镜法：活 体染色后推片镜检
2、网织细胞计数仪法：荧 光染色后用流式细胞术计数
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二、试剂器材
1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液 2、器材 毛细血管采血用具、小试管、
载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲 苯及擦镜纸、Miller窥盘或直径约20 mm （较目镜内径稍小）的圆形硬纸片（正 中央开一边长为3mm的菱形或正方形小 孔，置目镜光阑处，用于缩视野法计数）
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三、操作步骤
1. 染色：于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴， 任其自然凉干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于 已干燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合 （玻片法）；试管法取染液2滴入试管，加血2滴 混匀，封闭好，待15分钟以上时间，
2. 推片：取混合液1小滴于载玻片的一端，推制成薄 而均匀的血膜，
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外周血网织红细胞计数（百分数和绝对值）是一反映 骨髓红系增生活性的常用指标。许多学者先后提出应 用FCM和不同的RNA特异性荧光染料自动计数网织红 细胞的方法，如派若宁Y、AO、溴化乙啶、 thiazole orange等。 目前最普遍应用的是 thiazoie orange 染色法， 这种特异性RNA 的激发波（488nm）测量的特点，与 人工计数法相比，它不但能得到网织红细胞的百分数 和绝对值，而且还能获得网织红细胞成熟指数（RMI）。 RMI是一个检测骨髓功能的独立实验室指标，它与网织 红细胞内RNA含量成正比，RMI可成功地用于评价骨髓 移植的效果。
骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。
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（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，
早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功 能恢复后，又见上述指标依次上升。可指 导临床医师适时调整治疗方案，避免造成 严重的骨髓抑制。
2.染色时间一定要充足，混合后不能立即推片， 室温低时染色时间应适当延长，应覆以另一玻 片防止蒸发。
3.染液与血液比例以1：1为宜，贫血适当加血量。 4.涂片厚薄均匀适宜，弓形移动，多个区域计数 5.试剂应定期重配，以免变质沉淀。 6.与变性珠蛋白小体鉴别
10Βιβλιοθήκη 六、参考值成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） 新生儿：0.02-0.06（2%-6%） 儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%） 成人绝对值（24-84） 109/L
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网织红细胞（Ret）
是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间 的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞， 其 胞 浆 内 残 存 有 嗜 碱 性 的 RNA 物 质 。 嗜 碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与 颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。 分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。 （Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型）
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网织红生成指数（Reticulocyte production index,RPI）
• RPI=病人网织红细胞（%）/2 * 病人HCT/正常
人HCT（男0.45，女0.40）
• 临床应用： • ＞3提示溶血性贫血或急性失血性贫血；
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八、思考题
一溶血性贫血患者，红细胞计数 2.6x1012/L，血细胞比容0.29，网织红细 胞计数相对值为35%，如何报告网织红 细胞检测结果？
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目前，FCM检测网织红细胞主要用于 1）预测骨髓移植的效果； 2）解释各种红系增长低下性贫血的
发病原因; 3）评价某些新的重组生物制剂的治
疗效果。
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七、临床意义
（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 再障时，明显降低。绝对值低于5×109/L可 做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 正常、轻度升高或降低。
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（2）评价疗效
网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗2~3d后，网织 红细胞计数值开始上升，7~10d达到最高(10% 左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 血红蛋白开始升高。
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四、计算
ler窥盘法：网织红细胞（Retic） 百分率(%)= （大方格内Retic总数） /（小方格内RBC总数×9）×100%
2.直接计数法：网织红细胞（Retic）百 分率(%)= 多个视野内Retic总数/多 个视野内RBC总数×100%
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五、注意事项
1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发干燥 后，才能加血液，染色时应用推片角不停搅动， 使染料和血液混合，防止凝固。