酵母菌数的测定(直接计数)
实验(探究酵母菌数量变化)
☺关注本实验中的几个关键点：
♣ 酵母菌的计数 ►利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种 常用的微生物计数法，也叫做显微镜直接计数 法。 ►优点：直观、快速。 ►适用于稀释的菌悬液（或孢子悬液），即液体 培养基中菌体的计数。 ►此法计得的是活菌体和死菌体的总和，又称为 总菌计数法。
例1 :在用血球计数板（2mm×2mm方格）对某一稀释 50倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片 下的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为16，据此 估算10mL培养液中有酵母菌 2x107 个。
例2:酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球 计数板每个大方格容积为0.1mm3 ，由400个小 方格组成。现对某一样液进行检测，如果一个 小方格内酵母菌过多，难以计数，应先 稀释 后 再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格 中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母 菌总数有 2×108 个。
放大后的计数池
16个小格
25个中格
*
25X16 = 400小格
抽样检测： 5×16=80个小格 抽样检测： 4×25=100小格
* *
25个小格
每个计数室（大方格）共有400小格，总容积为0.1mm3
* *
16个中格
♣ 酵母菌的计数 （2）计算： 每毫升培养液中的酵母菌细胞数是多少？ 所数小方格中细胞总数x400x104x稀释倍数 酵母细胞个数/mL= 所数的小方格数
♣ 酵母菌的计数 （3）计数的操作 稀释：将酵母菌培养液进行适当的稀释 加样品：在清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌 细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴入一小滴 （将计数室充满即可），让菌液沿缝隙自行渗入计数室。 注意不可有气泡产生。
酵母计数的方法
三、实验原理 (一)酵母菌大小的测定原理 所有微生物的大小需要用刻有一定刻度的测微 尺来测量，先用绝对长度的物镜测微尺来校正不表 示绝对长度的目镜测微尺，计算后者每格所代表的 实际长度，然后放上待测的标本，用目镜测微尺测 定标本上微生物细胞占目镜测微尺的格数，就可计 算该微生物的大小。酵母菌的直径约8-10μ m。
五、思考题及实验作业 1.若更换不同放大倍数的目镜和物镜时，必须用物镜测 微尺标定目镜测微尺，这是为什么? 2.利用血球计数板时，注入的菌液为什么不能过多? 3.测定酵母细胞大小的结果。 (1)接目镜倍数是 ；低倍镜倍数 ；高倍镜倍数 。 (2)低倍镜下，接目镜测微尺 格=物镜测微尺 格。 目镜测微尺每格= μ m。 (3)高倍镜下，接目镜测微尺 格=镜台测微尺 格。 目镜测微尺每格= μ m。 (4)酵母菌测量结果填表 (5)酵母菌直接计数结果报告 每1ml样品含酵母细胞 个。
(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上 加盖专用的厚玻片。 (4)将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖 玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水 纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数 室内。 (5)计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要 按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格 （即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格 ×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需 再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
4.酵母菌大小的测定 (1)取下物镜测微尺，换上酵母菌水浸制片。 (2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格， 然后换算出菌体的实际长度。
酵母菌大小测定及显微镜直接计数[指南]
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实验一：酵母菌大小测定一、实验器材1、菌种：酵母菌液体培养物2、仪器和其他物品目镜测微尺，镜台测微尺，普通光学显微镜，擦镜纸，载玻片，滴管等。
二、实验目的及要求1、学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。
2、掌握对不同形态细菌大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识。
三、基本原理微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。
微生物大小测定需借助测微尺---目镜测微尺和镜台测微尺，两者配合使用。
镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每个小格10μm。
镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格地相对长度。
目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。
测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。
由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。
因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞实际大小。
四、操作步骤1、装目镜测微尺(换目镜)把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝上放在目镜镜筒内的格板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。
※双目显微镜的左目镜通常配有屈光度调节环，不能被取下，因此使用双目显微镜时目镜测微尺一般都安装在右目镜中。
2、校正目镜测微尺（1）放镜台测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。
（2）校正先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。
实验四：酵母菌形态观察及计数-文档资料
思考题: 一． 1、吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同， 对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析原因。 二． 2、在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区 别于一般细菌？ 三． 3、某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存 活率，请设计1-2种可行的检测方法。
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1ml菌液中的总数=N/5×25×10000×M=50000N×M（个）
16个中方格
1ml菌液中的总数=N/5×16×10000×M=32000N×M（个）
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细菌形态观察
5.计数原则
一． 1.在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀 释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有 5~10 个菌体为宜。 二． 2.每个计数室选 5 个中格（可选 4 个角和中央的 一个中格）中的菌体进行计数。 三． 3.位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。 四． 4.如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时， 即作为两个菌体计数。 五． 5.计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值 来计算样 品的含菌量。
氧化还原和电极电势
酵母菌形态观察及微生物直接计数法
自定义内容
细菌形态观察一、目的要求:来自1、观察酵母菌的形态特征及出芽方式。
2、了解血球计数板计数原理，掌握显微 计数的原理及方法 。
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二、实验原理:
细菌形态观察
1.酵母菌 酵母菌是单细胞真核生物，菌体比细 菌大且不运动。繁殖方式以无性为 （芽殖或裂殖）有性繁殖产生子囊和 子囊孢子。
hxjluzhcom2021610酵母菌形态观察及微生物直接计数法201010氧化还原和电极电势自定义内容酵母菌形态观察及微生物直接计数法2021610细菌形态观察1观察酵母菌的形态特征及出芽方式
酵母菌形态观察及微生物 直接计数法
酵母菌细胞数和发芽率的测定、微生物细胞大小的测定实验报告
酵母菌细胞数和发芽率的测定、微生物细胞大小的测定实验报告实验报告一、实验目的1.了解酵母菌的基本结构和特点，能够通过显微镜观察和测量微生物的大小。
2.了解酵母菌的生长规律和判断细胞数量的方法。
3.学习正确使用显微镜、计数盘等工具的方法和技能。
二、实验原理1.酵母菌细胞数量的测定酵母菌生长的过程中，细胞数量会不断增加。
在进行数量的测定时，可以使用计数盘的方法，将酵母菌培养液进行稀释后，挑取一定数量的细胞在计数盘中进行计数，从而得出总细胞数。
计算公式：N=Nv/(Vs某d)其中，N为总细胞数，Nv为计数盘中可数的细胞数，Vs为取自培养液的样品体积，d为稀释倍数。
2.酵母菌发芽率的测定酵母菌发芽率是指在特定条件下发芽的酵母菌占总酵母菌数量的百分比。
测定方法为：将稀释后的培养液分别在不同的温度和时间条件下进行培养，待观察到发芽的细胞数后再进行计算。
计算公式：G=Nf/Nt某100%其中，G为发芽率，Nf为观察到发芽的细胞数，Nt为总细胞数。
三、实验步骤1.酵母菌细胞数量的测定（1）将酵母菌液稀释至合适浓度，取出10μl滴于计数盘的盆2中。
（2）低倍镜下计数，计算得到总细胞数。
2.酵母菌发芽率的测定（1）将酵母菌液稀释至合适浓度，分别放置于不同的温度和时间条件下培养。
（2）观察不同条件下的发芽情况，计算得到发芽率。
四、实验结果与分析1.酵母菌细胞数量的测定（1）计算盘的小方格数为16，每个小方格的面积为0.010mm²。
（2）经过计数后得到的样品的平均值为32个/小方格，计算得到总细胞数为32某16/(0.01某10)=5120个/mL。
2.酵母菌发芽率的测定（1）在不同的温度条件下，观察到的发芽率分别为：30℃1h（90%）、35℃1h（75%）、40℃1h（60%）。
（2）在不同的时间条件下，观察到的发芽率分别为：30℃1h（90%）、30℃2h（80%）、30℃3h（70%）。
五、实验思考通过本次实验，我们了解到了酵母菌的基本结构和特点，学会了正确使用显微镜、计数盘等工具的方法和技能，并且能够通过显微镜观察和测量微生物的大小。
实验报告-探究培养液中酵母菌种群数量的变化
实验报告: 探究培养液中酵母菌种群数量的变化班级 姓名 小组 年 月 日一、实验目的：1、通过探究培养液中酵母菌种群数量的变化，来研究一个种群的数量变化情况，尝试构建种群增长的数学模型。
2、通过使用血球计数板掌握单细胞生物的计数方法。
二、实验原理：1、酵母菌可以用液体培养基来培养，培养液中的酵母菌种群的增长情况与培养液中的成分、空间、PH 、温度等因素有关，我们可以根据培养液中的酵母菌数量和时间为坐标轴做曲线，从而掌握酵母菌种群数量的变化情况。
2、利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的细胞计数法，这种方法可以直接测定样品中全部的细胞数目，所以一般用于单细胞微生物数量的测定，由于血球计数板上的计数室盖上盖玻片后的容积是一定的，所以可根据在显微镜下观察到的细胞数目来计算单位体积的细胞的总数目。
三、实验材料：酵母菌菌种，无菌马铃薯培养液或肉汤培养液。
四、实验用具：无菌水，试管，棉塞，恒温培养箱，显微镜，无菌滴管，无菌移液管，小烧杯或小试管，血球计数板(2mm×2mm×0.1mm)、纱布、滤纸、镊子、盖玻片。
五、方法步骤：1、取相同洁净试管若干支，分别加入5ml 马铃薯培养液，塞上棉塞。
2、用高压锅进行高压蒸汽灭菌后 ，标记甲、乙、丙等。
3、将酵母菌母液分别加入试管甲、乙、丙，各5ml ，摇匀后用血球计数板计数起始酵母液个数，做好记录。
4、将各试管送进恒温箱，25℃下培养7天。
5、每天 时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。
六、实验记录表根据表格数据绘图：七、实验结论：培养液酵母菌种群数量随时间呈 型增长变化。
数量 时间。
酵母菌数量的测定—显微镜直接计数法
五、数据处理
各中格中的菌数（个）
二室 平均
菌数
A
B
值 （个/
1
2
3
4
5
（个 mL）
） 第一
室 第二
室
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六、思考题 能否利用显微镜直接计数的方法测定
酵⺟菌菌液中的死细菌与活细菌？如果可 以，如何进行？如果不可以，请说明原 因。
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式1：总菌数（个/mL）=A/5×16×10000×B 式2：总菌数（个/mL）=A/5×25×10000×B
三、实验器材 血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管、 酿酒酵⺟菌液
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四、实验步骤
1、加样品
•取净洁干燥的血球计数板盖上盖玻片。 •将菌悬液适当稀释（稀释1倍），摇匀。
•用滴管吸取菌悬液，加1～2滴于盖玻片边 缘，让菌液靠毛细渗透作用进入计数室。 •放置5 min左右让计数室充满菌液。
• 如遇酵⺟出芽，芽体大小达到⺟细胞一般时，即作 为两个菌体计算。
• 计算一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来 计算样品的含菌量。
• 菌体在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下 才能看全，所以，观察时必须不断调节细螺用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷； •镜检观察是否清洗干净； •洗后干燥（晾干、吹干，或乙醇、丙酮等有 机溶剂脱水干燥）。
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血球计数板规格
计数室高度：0.1mm 大方格边⻓：1mm。 每个大方格分成400个小方格。
规格一：每个大方格分成16个中方格，每个中方格又分 成25个小方格。 规格二：每个大方格分成25个中方格，每个中方格又分 成16个小方格。
设五个中方格的总菌数为A，菌液的稀释倍 数为B，规格一、规格二计数板，分别采用式 1、式2计算。
酵母菌大小的测定和细胞计数
(二)酵母细胞计数原理 微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法 和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直 接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内。 后者是在乎板上长成菌落后再计数，反应较真实， 但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直接计 数。计数前需对样品做适当稀释，按照规定方法及 计算公式运算后，即可得出实际数值。
2.目镜测微尺的标定 (1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微 尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下， 再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度 的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆 圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺 的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜 测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相 重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测 微尺的格数。
(2)25格x16格的血球计数板计算公式： 酵母细胞数／ml=80小格内酵母细胞个数／ 80×400×104×稀释倍数
4.血球计数板的清洁 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬 物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95％ 的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。 通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。 若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。
4.酵母菌大小的测定 (1)取下物镜测微尺，换上酵母菌水浸制片。 (2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格， 然后换算出菌体的实际长度。
(3)在同一标本上测定5-10个菌体，求其平均值。
(二)酵母细胞数的测定操作方法 1.血球计数板的构造 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制 玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个 平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔 为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网 上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格 为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和 宽各为1m，深度为，其体积为0.1mm3。
04 酵母菌的形态观察和显微直接计数法
四、实验报告
绘出酵母菌在高倍镜下的视野图
操作录像
微生物的显微直接计数法
一 目的要求
1．明确血细胞计数板（血球计数板）计数的原理。 2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二 基本原理
计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四 个槽构成三个平台，中间的平台又由一短的横槽 隔成两半，其上各刻有一方格网，每个方格网共 分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生 物的计数就在计数室中进行。
二实验材料和用具酿酒酵母saccharomyescerevisiae斜面菌显微镜载玻片擦镜纸盖玻片接种环三操作步骤取005美蓝染色液12滴置载玻片中央并用接种环挑取少量酵母菌菌苔与染色液混匀染色23min加盖玻片注意不要产生气泡2在高倍镜下观察酵母菌个体形态区分其母细胞与芽体区分死细胞蓝色与活细胞不着四实验报告绘出酵母菌在高倍镜下的视野图操作录像微生物的显微直接计数法一目的要求1
三
试验材料
菌种：稀释103倍的啤酒酵母培养液 其他：显微镜、血球计数板、毛细管、盖玻片、 吸水纸、擦镜纸等。
四 操作步骤
1. 检查血球计数板 取血球计数板一块，先用显微镜检查计数板的计数室， 看其是否沾有杂质或干涸着的菌体。若有污物则用少量 脱脂棉沾95%酒精，轻轻擦洗，然后用水冲洗，再用吸水 纸吸干（切勿用火焰烘烤），最后用擦镜纸擦干净。镜 检清洗后的计数板，直至计数室无污物时才可使用。 2. 稀释样品 将培养后的酵母培养液振荡振摇混匀，然后作一定倍数 的稀释。稀释度选择以小方格中的分布的菌体清晰可数 为宜。一般以每小格内含4～5个菌体的稀释度为宜。
3. 加样 取出一块干净盖玻片盖在计数板中央。用毛细管取菌稀释悬 液注入盖玻片边缘，让菌液自行渗入，若菌液太多可用吸 水纸吸去。（如有气泡须重做，且盖玻片不能上浮，菌液 不能溢至盖玻片上方。）静置5—10分钟。 4. 镜检 待细胞不动后进行镜检计数。先用低倍镜找到计数室方格 后，再用高倍镜测数。一般应取上下及中央五个中格的总 菌数。每个样品重复计数3次（每次数值不应相差过大，否 则应重新操作），取其平均值，按公式计算出每毫升菌液 所含酵母细胞数。
实验二 酵母菌大小的测定与细胞计数-PPT课件
四、操作方法
(一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片， 其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50格， 实际每格等于100μm。刻度的大小是随使用的接目 镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用物镜测微 尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的载 玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将长 1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm，如 图。
(二)酵母细胞计数原理 微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法
和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直 接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内。 后者是在乎板上长成菌落后再计数，反应较真实， 但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直接计 数。计数前需对样品做适当稀释，按照规定方法及 计算公式运算后，即可得出实际数值。
纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数 室内。
(5)计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要 按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格 （即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格 ×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需 再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
(6)当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大 方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方 和左方线上的酵母细胞)。 (7)对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公 式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
3.计算方式 (1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微 尺格数×10／两个重叠刻度间目镜测微尺格数
(2)以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定测微 尺上每格的实际长度。 目镜测微尺( )格=物镜测微尺( )格 目镜测微尺每格=( )
酵母菌计数法的公式
酵母菌计数法的公式酵母菌计数法是一种技术，它可以快速测定采样中的真菌群落的多样性和分布。
它通过提取有效的数据，从而简化了微生物检测中的复杂和耗时的过程。
这种方法可以用来测定各种种类的真菌，包括酵母菌、黑粉菌和灰指线菌。
它使用一种叫做强多样性指数（Diversity index）的指标来测量真菌群落的多样性，强多样性指数是根据物种丰富度和随机性确定的。
酵母菌计数法的公式大体可以分为三步：一、计算真菌群落的物种丰富度：DS = (N/∑n) * 100其中，DS表示物种丰富度；N表示采样中的真菌数量；∑n表示采样中所有样本中真菌的总数量。
二、计算真菌群落的强多样性指数：DI = ln[N(N-1)/(∑ni(ni-1))]其中，DI表示强多样性指数；N表示采样中的真菌种类数量；∑ni表示采样中每一种真菌种类的数量。
三、计算真菌群落的抗性和相关度：Rc = (1/N-1) *ni(ni-1)(ni-2)/[N(N-1)(N-2)]其中，Rc表示真菌群落的抗性和相关度；N表示采样中的真菌种类数量；∑ni表示采样中每一种真菌种类的数量。
酵母菌计数法的公式也是一个重要的方法，它可以用来检测各种类型环境中真菌群落的多样性。
它可以帮助我们了解环境中真菌群落的情况，发现真菌群落发生变化的原因，以及相应的影响程度，从而更好地保护环境。
综上所述，酵母菌计数法是一种重要的微生物分析方法，它可以帮助我们分析真菌群落的多样性和分布，简化环境中的微生物检测过程，为环境保护和管理提供有效的数据。
通过酵母菌计数法的公式，我们可以准确测定环境中真菌群落的多样性，从而从宏观层面理解环境变化，为环境问题的研究提供有效资料。
酵母菌计数法的公式也可以用来检测和识别各种真菌变种。
它可以用来识别和分类各种酵母菌，以及其它黑粉菌和灰指线菌。
它可以帮助我们精确分类微生物，更有效地开发出针对不同特性的真菌的治疗剂或栽培方案。
总之，酵母菌计数法的公式是一项重要的技术，它可以帮助我们准确测定真菌群落的多样性和分布，简化微生物检测中的复杂耗时过程，为环境保护和管理提供有效的数据，从而更好地推动环境保护和可持续发展。
酵母菌数的测定(直接计数)
实验直接计数法及酵母菌数的测定一、目的要求1、了解血球计数板测定微生物数量的原理。
2、了解血球计数板的结构，学习并掌握利用血球计数板进行酵母菌记数的方法，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。
二、实验原理微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法和间接计数法。
前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值。
后者是在平板上长成菌落后再计数，反应较真实，但费时太长。
三、实验器材菌种：酵母菌液仪器：显微镜，血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸等四、操作方法酵母细胞数的测定操作方法1、血球计数板的构造血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。
玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。
计数室通常有两种规格。
一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。
（本实验用）2、酵母菌数量的测定(1) 取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。
(2) 将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。
也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。
(3) 静置约5分钟，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。
(4) 计数时用16中格的计数板，要按对角线方位，取左上、左下、右上、右下的4个中格(即100小格)的酵母菌数。
如果是25中格计数板。
除数上述四格外，还需数中央1中格的酵母菌数(即80小格)。
由于菌体在计数室中处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗漏。
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实验直接计数法及酵母菌数的测定
一、目的要求
1、了解血球计数板测定微生物数量的原理。
2、了解血球计数板的结构，学习并掌握利用血球计数板进行酵母菌记数的方法，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。
二、实验原理
微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法和间接计数法。
前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值。
后者是在平板上长成菌落后再计数，反应较真实，但费时太长。
三、实验器材
菌种：酵母菌液
仪器：显微镜，血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸等
四、操作方法
酵母细胞数的测定操作方法
1、血球计数板的构造
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。
玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。
计数室通常有两种规格。
一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。
（本实验用）
2、酵母菌数量的测定
(1) 取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。
(2) 将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。
也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。
(3) 静置约5分钟，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。
(4) 计数时用16中格的计数板，要按对角线方位，取左上、左下、右上、右下的4个中格(即100小格)的酵母菌数。
如果是25中格计数板。
除数上述四格外，还需数中央1中格的酵母菌数(即80小格)。
由于菌体在计数室中处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗漏。
如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
(5) 凡酵母菌的芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。
每个样品重复分数2-3次(每次数值不应招差过大，否则应重新操作)，取其平均值，按下述公式计
算出每毫升菌液所含酵母菌细胞数。
每毫升菌液含菌数＝每小格酵母细胞数×4000×1000×稀释倍数
(6) 血球计数板用后，在水龙头上用水柱冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。
洗净后自行晾干或吹风机吹干。
四、实验报告
将实验结果填入下列表格
五、思考题
根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少？。