酵母菌数的测定(直接计数)

实验直接计数法及酵母菌数的测定

一、目的要求

1、了解血球计数板测定微生物数量的原理。

2、了解血球计数板的结构，学习并掌握利用血球计数板进行酵母菌记数的方法，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。

二、实验原理

微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值。后者是在平板上长成菌落后再计数，反应较真实，但费时太长。

三、实验器材

菌种：酵母菌液

仪器：显微镜，血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸等

四、操作方法

酵母细胞数的测定操作方法

1、血球计数板的构造

血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。

计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。（本实验用）

2、酵母菌数量的测定

(1) 取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。

(2) 将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。

(3) 静置约5分钟，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。

(4) 计数时用16中格的计数板，要按对角线方位，取左上、左下、右上、右下的4个中格(即100小格)的酵母菌数。如果是25中格计数板。除数上述四格外，还需数中央1中格的酵母菌数(即80小格)。由于菌体在计数室中处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗漏。如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。

(5) 凡酵母菌的芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复分数2-3次(每次数值不应招差过大，否则应重新操作)，取其平均值，按下述公式计

算出每毫升菌液所含酵母菌细胞数。

每毫升菌液含菌数＝每小格酵母细胞数×4000×1000×稀释倍数

(6) 血球计数板用后，在水龙头上用水柱冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或吹风机吹干。

四、实验报告

将实验结果填入下列表格

五、思考题

根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少？