基因工程思考题
分子生物学与基因工程 课程实验 思考题
《分子生物学与基因工程》课程实验思考题一1、移液器使用方法及注意事项。
2、离心机、高压灭菌锅、电子天平使用方法及注意事项。
二1、提取缓冲液中各药品作用、预冷乙醇、酚、氯仿、异戊醇的作用。
2、基因组总DNA提取中如何保证DNA的完整性？3、如果想专门获取核基因组DNA或某种细胞器基因组DNA该如何进行？三1、影响电泳迁移率的因素。
2、条带不整齐、拖尾的原因。
3、载样缓冲液的成分及各成分的作用。
4、常见的凝胶电泳有哪些？举例说明普通电场电泳、脉冲电场电泳、变性凝胶电泳的应用。
5、什么是指示剂？常见的指示剂有哪些？6、变性凝胶电泳如何做到DNA变性？四1、紫外光吸收法测定核酸含量的原理。
2、为什么OD260/OD280的比值：在1.8-2.0表明DNA的纯度较高，>2.0可能存在RNA的污染，<1.8可能存在蛋白质的污染？3、假设你体内DNA的含量和小麦体内DNA的含量的比例关系一致，请根据实验四估算的结果估算你体内的DNA的总量。
五1、双酶切反应要求两种酶各自需要的缓冲环境要相同，如果两种酶各自需要的缓冲环境不同（如：pH、离子强度等）应如何进行双酶切？2、说明Ⅱ型限制性内切酶的识别序列和切割特点。
3、影响DNA酶切效率的因素有哪些？分别如何影响？4、一段20Kb的线性DNA，用BamHⅠ酶切后得到3Kb，8Kb，9Kb三条片段，用EcoRⅠ酶切后得到2Kb,5Kb,13Kb三条片段，用BamHⅠ+ EcoRⅠ双酶切后得到1Kb2Kb,4Kb,5Kb,8Kb五条片段，请绘制该DNA的BamHⅠ、EcoRⅠ限制图谱。
六1、细菌DNA连接酶和T4连接酶的活性特点。
2、DNA连接反应的影响因素有哪些？3、如何将经BamHⅠ切割的载体和经EcoRⅠ消化的外源DNA片段成功的重组在一起？七1、如果质粒电泳后出现2-3条带，请解释可能的原因。
2、为什么双酶切产物和连接产物电泳后会出现多个条带。
3、酶切和连接产物检测时各应设置怎样的对照？哪些是阳性对照？哪些是阴性对照？八1、碱裂解法提取质粒的原理。
《基因工程原理》期末复习思考题
《基因工程原理》期末复习思考题《医用基因工程》复习思考题第一章基因和基因组及基因工程的概念一、名词概念①移动基因(插入序列；转位子)；②断裂基因；③ RNA剪辑；④内含子(间隔序列)与表达子；⑤重叠基因；⑥重复序列；⑦假基因；⑧启动子与终止子；⑨起始位点、终止位点。
二、讨论题1.什么叫基因何谓基因的新概念基因的主要功能是什么2.一种基因一种酶的提法妥否3.基因密码子三联体间是否存在着逗号4.基因表达的产物中，氨基酸序列相同时，基因密码子是否一定相同为什么5.何谓转位子和转位作用转位的后果如何6.基因中最小的突变单位和重组单位是什么7.基因工程应包括哪些内容何谓基因工程的四大里程碑和三大技术发明8.真核细胞基因组中常有内含子存在，能否在原核细胞获得表达能，为什么不能，为什么第二章基因工程中常用的工具酶1.什么是限制性核酸内切酶2.什么是R/M现象如何解释3.II型核酸内切酶的基本特点有哪些4.影响II型核酸内切酶活性的因素有哪些如何克服和避免这些不利因素5.DNA连接酶有哪两类有何不同6.甲基化酶有哪两类有何应用价值7.什么叫同尾酶、同裂酶在基因工程中有何应用价值8.平末端连接的方法有哪些(图示)9.Klenow酶的特性和用途有哪些举例说明。
10.反转录酶的特性有哪些有何应用价值11.列举碱性磷酸酶BAP/CAP的应用之一。
12.列举末端核苷酸序列转移酶的应用之一。
13.质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率14.基因片段与载体的平末端连接的方法有哪些15.用寡核苷酸和衔接物DNA的短片段连接时为使基因内部的切点保护，常用何种办法解决第三章基因克隆载体1.基因工程常用的载体有哪5种其共同特性如何2.什么是质粒质粒分哪几种有哪两种复制类型，质粒的分子生物学特性有哪些3.质粒存在的三种形式是什么4.分离质粒的基本步骤有哪些5.分离纯化质粒的方法有哪几种简述CsCl密度梯度(浮密度)分离法、碱变性法的原理，如何选择合适的分离方法6.作为理想质粒载体的基本条件有哪些7.什么叫插入失活，举例说明之。
生物技术思考题2
生物技术概论思考题1、基因工程的理论依据是什么？简述基因工程操作的基本技术路线。
理论依据：（1）不同基因具有相同的物质基础。
所有生物的DNA组成和基本结构都是一样的。
（2）基因是可切割的。
基因直线排列在DNA分子上。
除少数基因重叠排列外，大多数存在着间隔序列。
可以完整的一个一个地从DNA分子上切割下来。
（3）基因是可以转移的。
携带基因的DNA分子可以在不同生物体之间转移，或者在生物体内的染色体DNA上转移，还可以在不同染色体间跳跃，插入到靶DNA分子之中。
多肽与基因之间存在对应关系。
基因的转移或重组可根据其表达产物多肽的性质来考虑。
（4）多肽与基因之间存在对应关系。
一种多肽就有一种对应的基因（5）遗传密码是通用的。
一系列三连密码子同氨基酸之间的对应关系，在所有生物中都相同。
（6）基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。
经重组的基因一般来说是能传代的，可获得稳定的转基因生物。
路线2、阐述基因工程的科学意义、应用价值及发展前景。
利用生物技术知识分析转基因食品为什么可能存在风险。
阐述基因工程的科学意义、应用价值及发展前景：基因工程是生物工程的一个重要分支，它和细胞工程、酶工程、蛋白质工程和微生物工程共同组成了生物工程。
它是用人为的方法将所需要的某一供体生物的遗传物质——DNA大分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，把它与作为载体的DNA分子连接起来，然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源物质在其中“安家落户”，进行正常的复制和表达，从而获得新物种的一种崭新技术。
它克服了远缘杂交的不亲和障碍。
基因工程可应用于农牧业、食品工业、环境保护、医学等多个领域。
科学界预言，21世纪是一个基因工程世纪。
可能存在风险：1.基因技术采用耐抗菌素基因来标识转基因化的农作物，在基因食物进入人体后可能会影响抗生素对人体的药效，作物中的突变基因可能会导致新的疾病；2.转基因技术中的蛋白质转移可能会引起人体对原本不过敏的食物产生过敏，分割重组后的新的蛋白质性状是否完全符合我们设想的需求有待考证；3.基因的人工提炼和添加，有可能增加和积聚食物中原有的微量毒素，不可预见的生物突变.甚至会使原来的毒素水平提高，或产生新的毒素；4.对于生态系统而言，转基因食品是对特定物种进行干预，人为使之在生存环境中获得竞争优势，这必将使自然生存法则时效性破坏，引起生态平衡的变化，且基因化的生物、细菌、病毒等进入环境，保存或恢复是不可能的，其较化学或核污染严重，危害更是不可逆转。
基因工程实验思考题
基因工程实验课程思考题1.如何正确使用微量移液器？2.如何准备基因操作中的吸头、eppendorf管等器具，在使用使这些东西时应注意什么？3.提染色体DNA的基本原理是什么？在操作中应注意什么？4.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？5.进行DNA抽提，为什么用pH8.0的Tris水溶液饱和苯酚，显红色的苯酚可否使用，如何保护苯酚不被空气氧化？6.在基因工程操作中酚、氯仿的作用是什么？7.如何检测和保证DNA的质量？8.如果电泳中发现DNA几乎不移动，你认为可能是什么原因？9.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？10.如何制备核酸琼脂糖凝胶，操作中应注意什么？11.核酸电泳中上样缓冲液主要成分与作用是什么？12.进行RNA凝胶电泳时应注意什么问题？13.说明在RNA电泳中添加甲醛的目的。
14.如何判断RNA的完整性？15.质粒的基本性质有哪些？质粒载体与天然质粒相比有哪些改进？16.抽提质粒的基本原理是什么？17.在碱法提取质粒DNA操作过程中应注意哪些问题？18.质粒抽提实验中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各有什么作用。
19.什么是质粒多克隆位点（MCS）？20.从溶液中回收DNA时，可以用酒精或异丙醇进行DNA的沉淀，酒精或异丙醇沉淀DNA各有什么不同。
21.用氯仿/异戊醇除去蛋白等作用时，其中异戊醇起什么作用？22.克隆质粒与表达质粒有什么异同点。
23.你认为抽提质粒的关键步骤是哪几步？24.在进行DNA重组实验中，有一同学试图利用提取染色体DNA的试剂和方法从细菌细胞中提取质粒。
利用你现有的知识，请你给他参谋一下，他的这种设想是否可行？如果采用提取染色体DNA的试剂和方法，最后得到的是什么样品？25.有人利用转接后2小时的培养物进行质粒的提取，你认为会出现什么问题？26.什么是穿梭质粒，在遗传结构上有何特点？27.使用溴化乙锭时应注意什么？28.根据OD260/OD280值如何来判断DNA溶液的纯度？29.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？30.细菌产生的限制性内切酶，为什么不对自己的DNA发生切割作用呢？31.影响限制性内切酶酶切的因素有哪些？在使用工具酶使应注意些什么？32.如果一个DNA酶解液在电泳后发现DNA未被切动，你认为可能是什么原因？33.简述II型限制性内切酶的命名与写法以及在基因工程中作用及特点。
基因工程复习思考题带答案(中国药科大学生物工程所有课件)
第一章基因工程复习思考题一．专业符号Tet r四环素抗性 R/M体系寄主控制的限制和修饰现象Amp r氨苄青霉素抗性 pBR322 质粒载体M13 单链噬菌体载体 cosmid 科斯质粒IPTG 异丙基-β-D硫代半乳糖苷 DNA ligase DNA连接酶EcoRI 一种限制酶 host 宿主Plasmid 质粒 Ori 复制起始位点vector 载体 cDNA 互补DNAsouthern blot DNA印迹转移技术 MCS 多克隆位点二．名词解释生物工程bioengineering：利用生物有机体（包括微生物和动、植物）或其组成部分（包括器官、组织、细胞、细胞器）和组成成分（包括DNA、RNA、蛋白质、酶、多糖、抗体等），形成新的技术手段来发展新产品和新工艺的一种技术体系。
也是采用先进生物学和工程学技术，有目的、有计划定向加工制造生物产品的一个新兴技术领域。
基因工程：基因工程是指按照人们的意愿，在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其他载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之转入到原先没有这类分子的宿主细胞内，形成能持续稳定繁殖的新物种。
其目的是为人类提供有用产品及服务。
R/M体系：大多数的细菌对于噬菌体的感染都存在一些功能性障碍，即所谓的寄主控制的限制(restriction)和修饰(modification)现象，简称R/M体系。
回文结构：核苷酸顺序通常呈双重旋转对称结构，即呈回文结构。
如：同裂酶：识别顺序与切割方式均相同者，谓之同裂酶。
同尾酶：来源各异，识别的靶子序列也各不相同，但都产生出相同的粘性末端，称为同尾酶。
同聚物加尾法：利用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)转移核苷酸的特殊功能，将同种核苷酸（dNTP)加到DNA 分子单链延伸末端的3‘-OH上。
如果在目的基因两侧加polydA，则在载体两侧加polydT。
衔接物：指用化学方法合成的一段由10~12个核苷酸组成，具有一个或数个限制酶识别位点的平末端的双链寡核苷酸段片断。
厦门大学基因工程课后思考题
第一章核酸的制备1.名词解释：脱氧核糖核酸：核糖核酸：ccc-DNA：当两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构时，称为共价闭合环形DNA（cccDNA）oc-DNA：如果两条核苷酸链中只有一条保持着完整的环形结构，另一条链出现一至数个缺口时，称为开环DNA（ocDNA）l-DNA,：发生双链断裂而形成线性分子（L—DNA），L构型DNA变性：双联变成单链DNA复性：单链又变成双链PCR, 模板，引物2.分别阐述用CTAB裂解法，SDS裂解法，碘化钠裂解法以及蛋白酶K裂解法和溶菌酶裂解法裂解细胞的依据。
溶菌酶：破坏细胞的细胞壁肽聚糖骨架，在内部渗透压的作用下使得细胞胀破。
CTAB裂解法：CTAB作为离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚SDS裂解法：利用中性去污剂NP-40破坏全血的红细胞膜，离心弃去溶血液，收集白细胞沉淀，加入去污剂SDS以破坏白细胞核膜，并使核蛋白解离，再加入高浓度的NaCl使DNA溶解，同时使蛋白盐析。
通过离心收集水相，加2——2.5倍体积的无水乙醇，沉淀DNA碘化钠裂解法：低渗破坏细胞，碘化钠破坏核膜蛋白酶K裂解法：蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解3.用于检测样品纯度和浓度的方法有哪些？简述个各方法的基本原理。
电泳、OD值、荧光定量法第二章基因工程工具酶1.名词解释：限制性内切核酸酶：在DNA上核苷酸的特定连接处以特定的方式把DNA双链切开DNA连接酶：催化DNA上裂口两侧(相邻)核苷酸裸露的3＇羟基和5＇磷酸之间形成共价结合的磷酸二酯键，使断开的DNA•裂口连接起来逆转录酶：依赖于RNA的DNA聚合酶DNA聚合酶：是一类催化DNA合成的酶类，酶的作用需要DNA或RNA作为模板，合成DNA链的序列与模板的序列互补Klenow片段（Klenow酶）：大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理,获得N端三分之二的大肽段,即Klenow 酶限制性图谱（物理图谱）：描述染色体上限制性内切酶切割位点之间距离和顺序的图谱，通常以DNA的长度来代表距离，因此为遗传物质提供了物理图谱。
基因工程简答题总结
基因工程原理复习题思考题5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。
同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。
同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。
不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。
）6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？类型：DNA连接酶和RNA连接酶异同点：相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA复制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。
7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。
（传说中的网上答案）1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。
2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。
这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
3、足够多的载体和插入片段是最重要的。
4、平端的连接对于离子浓度很敏感5、尽可能缩小连接反应的体积6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好8、基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？1）大肠杆菌DNA聚合酶2）Klenow fragment3）T7 DNA聚合酶4）T4 DNA聚合酶5）修饰过的T7 DNA聚合酶6）逆转录酶7）Taq DNA聚合酶第四章基因克隆的载体系统1、作为基因工程载体，其应具备哪些条件？具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；具有合适的筛选标记；具有较高的外源DNA的载装能力；具有多克隆位点（MCS）；具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。
3、载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。
这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。
内蒙古大学基因工程大实验思考题
内蒙古大学基因工程大实验思考题本科生基因工程实验(记录及课后思考题)姓名:学号:专业:完成日期:2012年9月9日指导老师:一、质粒DNA的小量制备1.影响最终质粒产量的主要因素有哪些？①与菌的生长状况有关②和提取时的温度有关，需要低温③加溶液Ⅱ、Ⅲ时操作要温和④要用酚和氯仿的混合液多次抽提去除蛋白质⑤要用冰乙醇沉淀2.提取到的质粒纯度将直接影响到以后的酶切效果，如何操作才能尽可能的避免蛋白质的污染？加入酚：氯仿：异戊醇去除蛋白质，氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离。
二、质粒DNA电泳鉴定1.泳道的质粒DNA有几条带？为什么？质粒可能会有超螺旋构型，环状构型和线性构型。
这三种构型中，迁移率最快的应该是超螺旋的，其次是线性和环状。
通常观察到的是超螺旋和环状质粒。
2.溴酚蓝的迁移率相当于多少bp的DNA？在0.7%、1%、1.4%、2%的琼脂糖凝胶电泳中，溴酚蓝的迁移率分别与1000bp、600bp、200bp、150bp的双链线性DNA片段大致相同3.影响本实验结果的因素有哪些？DNA的长度，结构，胶的浓度，电压等会对实验结果造成影响。
三、质粒DNA的酶切1.酶切反应混合物的体积是否对酶切效果有影响？为什么？有影响加入反应的酶体积不超过反应总体积的1/10，避免限制酶活性受到甘油的影响。
大多数限制酶贮存在50％甘油溶液中，以避免在-20℃条件下结冰。
2.如何估计DNA用量和酶的用量？DNA样品的浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/10001U酶切割1ug的质粒，酶的量不要超过酶切体系的1/10。
3.在吸取内切酶的时候如何操作才能避免浪费？将枪头不要插入液体很深部位，刚过液面且可以吸取所需的体积的液体。
四、PCR扩增制备目的基因1.复性温度是根据什么确定的？可以根据公式：2（A + T）+ 4（C + G），再减5-10度,一般为55℃-60℃当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR 退火温度是必需的。
基因工程思考题答案
基因工程思考㼵答案一、填空题1．702．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择4．限制性酶切图谱5．属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名6．(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积7．EcoK；EcoRl8．GGCC；异源同工酶（同裂酶）9．枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶10．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团11．Ca2+13．DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平15．核酸水解酶H；RNA16．质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体17．复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入18．质粒消除(或治愈)19，pMBl；pSCl01；pSF2124(R质粒)20．1000kb；300kb21. 严紧22．pBR322和M13；pMBl；转座子23．它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如λ噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽24．没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记25．质粒；λ噬菌体；4526．(1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记27．复制区；IG区28．75％～105％29．螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性30．中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力31．(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析32．T—载体33．第二链合成时形成的发夹环34．乙醇使DNA分子脱水35．(1)保持正确的可读框(2)能够使其转录的启动子(3)具有翻译的起始和终止信号36．接受外源DNA的生理状态37．(1)黏性末端连接；(2)平末端连接；(3)同聚物接尾连接；(4)接头连接法38．基因组DNA克隆；基因组DNA文库39．cDNA克隆；cDNA文库40．聚合酶链式反应(PCR)41．0︒C；42︒C42．(1)遗传学方法；(2)物理筛选法；(3)核酸杂交法；(4)表达产物分析法43．插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选44．基因组DNA；cDNA45．Klenow酶填补的方法；T4DNA聚合酶46．(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针；(3)用不对称PCR合成单链DNA探针47．外源基因是否进行了转录48．两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因49．Northern印迹50．Southern印迹51．5’→3’合成酶；3’ →5’外切核酸酶52．(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子53．(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件54．(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合；(3)抗体能够被标记二、选择题(单选或多选)1．c；2．c；3．b；4．b 5．b，C，d，e；6．c；7．b；8．d；9．d；10．B；11．a；12．a；13．d；14．b 15．d；16．c；17．a，b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C；23．b；24．C；25．d；26．a，C，d；27．b；28．c；29．b；30．a；31．c；32．a,c,d,e，33．a，b，c；34．b；35．c；36．c；37．d；38．b；39．c；40．a；41．c；42．a，b，c；43．b；44．b；45．d；46．a；47．a；48．c；49．c；50．b；51．c；52．c；53．b；54．a,c,d；55．a；56．b；57．a，b；58．c；59．a；60．d；61．b；62．c；三、简答题1．答：Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上：(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5'端向3'端聚合(DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程)；(2)可延伸的引物必须能提供游离的3'羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3'羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。
基因工程试题
答案：基因操作。
将在细胞外产生的核酸（物质）分子插入到病毒，质粒或其它载体系统中，再整合到特定的宿主中，从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。
名词解释问题： Interrupted genes参考答案：间断基因。
序列中间插入有与氨基酸编码无关的 DNA 间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。
我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。
名词解释问题： Promotor参考答案：启动子。
DNA 分子可以与 RNA 聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。
名词解释问题： Subcloning参考答案：亚克隆。
当初始克隆中的外源 DNA 片段较长，含有许多目的基因以外的 DNA 片段时，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，将目的基因所对应的一小段 DNA 找出来，这个过程叫“亚克隆”。
填空题问题：基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning）， gene cloning 的基本要点有（），（）和（）。
参考答案：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择填空题问题：（）是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（）参考答案：基因；连续；DNA；存在于染色体之外（如质粒，噬菌体等）填空题问题：基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。
参考答案：表达；调控；检测；改造填空题问题：启动子（Promotor）是指（）。
通常一个 Gene 是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。
在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。
参考答案：基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA 聚合酶填空题问题：原核生物的 RNA polymerase 主要由两部分组成：（）和（），其中σ-因子并不参与 RNA 的合成，它的作用主要是（）。
《基因工程综合实验》思考题
《基因工程综合实验》思考题实验一：植物总DNA提取1、描述植物总DNA提取的基本过程。
2、植物总DNA主要包括哪些成分？3、在植物总DNA提取过程中，蛋白质、RNA及多糖等杂质的去除，常采用什么方法？5、植物总DNA提取与纯化过程中应注意事项。
实验二：目的基因的PCR扩增1、什么是PCR技术？描述PCR扩增的基本过程（循环阶段）。
2、 PCR过程中退火时，为什么引物与模板杂交，而模板双链不复性？3、PCR扩增产物的特异性不好或产量过低，应如何调整？4、根据已知的序列设计引物。
实验三：琼脂糖凝胶电泳技术1、常用的凝胶电泳技术有哪些？各有什么作用？2、阐述电泳的基本原理。
3、电泳中，加入溴化已锭（EB）的作用是什么？凝胶载体缓冲液（loading buffer）的作用是什么？4、 DNA 琼脂糖凝胶电泳中，常用的电泳缓冲液有哪些？各有什么特点？实验四：外源DNA片段与质粒载体的重组连接1、常用的DNA连接酶主要有哪些？2、描述T4 DNA连接酶催化DNA连接反应的过程。
3、根据连接片段末端类型的不同，连接方法有哪些？4、分子克隆中用的载体通常都具备什么特点？实验五：大肠杆菌感受态的制备及质粒DNA分子的导入1、质粒DNA向大肠杆菌中转化主要有哪些？2、描述Cohen方法中大肠杆菌感受态制备的基本过程。
3、质粒DNA分子向大肠杆菌导入中，造成转化效率低的原因及解决办法？4、制备高感受态细胞取决于哪些因素？5、感受态细胞概念。
实验六：质粒DNA的提取及酶切鉴定1、质粒DNA提取，主要包括哪些基本的步骤？2、简述大肠杆菌的染色体DNA与质粒DNA之间的主要的性质差异。
3、提取质粒时，细菌的培养过程中，对于拷贝数较低的质粒（如pBR322）应如何处理？为什么？4、纯化质粒DNA时，通常使用的方法利用质粒DNA哪些性质？少量制备的质粒DNA，如何纯化？5、提取的质粒DNA分子通常具有哪几种构型？有何电泳特性？6、质粒的去磷酸化在哪些情况下被推荐使用？实验七：外源基因在大肠杆菌中的表达及其检测1、简述SDS-PAGE的原理及测定的方法。
基因工程思考题答案
基因工程思考题答案【篇一：基因工程习题及答案】选题1. 在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（b）a ． i 类限制酶 b. ii 类限制酶 c. iii 类限制酶 d. 核酸内切酶e. rnaase2. 下列关于同裂酶的叙述错误的是 (b )a. 是从不同菌种分离到的不同的酶 , 也称异源同工酶。
b. 它们的识别序列完全相同。
c. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。
d. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。
e. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。
3. 多数限制酶消化 dna 的最佳温度是（a）a. 37 ℃b.30 ℃c.25 ℃d.16 ℃e.33 ℃4. 下列关于限制酶的叙述错误的是 (b)a. i 类限制酶反应需要 mg2+ 、 atp 和 s- 腺苷蛋氨酸。
b. ii 类限制酶反应需要 mg2+ 、 atp 。
c. iii 类限制酶反应需要 mg2+ 、 atp ， s- 腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。
d. i 、 iii 类限制酶对 dna 有切割和甲基化活性， ii 类限制酶对dna 只有切割活性而无甲基化活性。
e.ii 类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。
5. 如果一个限制酶识别长度为 6bp , 则其在 dna 上识别 6bp 的切割概率为 ( d )a. 1/44b. 1/66c. 1/64d.1/46e. 1/1066. 多数 ii 类限制酶反应最适 ph 是 (c )a. ph:2-4b. ph:4-6c. ph:6-8d. ph:8-10e. ph:4-107. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( d)a.限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。
b.许多限制酶对线性 dna 和超螺旋 dna 底物的切割活性是有明显差异的。
c.有些限制酶对同一dna 底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
《基因工程》思考题
基因工程》双语课每章思考题第一章1什么是基因工程？2基因工程的操作步骤有哪些？3基因工程的应用范围？基因操作可以应用在哪些领域？4什么是GMO?5在基因工程领域有重要贡献的科学家有哪些？试例举三位及其贡献。
6基因工程的三个发展阶段？第二章1 DNA、RNA勺主要区别？2 DNA (or RNA )的组成？3 DNA变性概念及诱发因素。
4中心法则的主要内容。
5遗传密码子的概念。
6基因的概念、类型。
7基因的表达。
8原(真)核生物基因的结构及区别。
9遗传物质及其相互联系。
10某研究小组对一个克隆的DNA序列(非模板)进行测序，其碱基顺序(假定)如下：5* ・CCGGCGGCAATGGCGGCGTCGGCGACCCAGGAGGCCGACTAA'CGGACCG ・3(1 )请写出模板链的碱基顺序及转录的碱基序列(2) 翻译从何处开始、何处结束(3) 可能编码的氨基酸序列(4) 如果基因突变，那部分区段变异会影响该基因编码和蛋白质功能(密码子见下表)1 DNA提取的三个基本条件。
2在DNA提取中，酚/仿提抽的目的是什么?3纯化DNA或RNA时，通常将DNA溶解在哪种物质中，为什么?4利用紫外分光光度比值来确定提取的DNA或RNA纯度时：当A26O=1时，相当于』有g?ml dsDNA或卩g?ml ddDNA'当AQ60/A280=1 .8时，为较纯的，当A260/ A 280 =2.0时，为纯当A260/ A 280>2.0有杂质，当A260/ A 280<1 .8有残留的物质5请简述Southern杂交的原理和过程6 请简述Southern Blotting、Northern Blotting 和Western Blotting 的区别？7请简述核酸电泳的原理。
第四章1限制性核酸内切酶三种类型的特点？为什么基因工程中需选II型酶。
2 Type II restriction endonucleases 的命名原则。
基因工程朱旭芬教材思考题
基因工程朱旭芬教材思考题
1.什么是基因工程?它有哪些基本步骤?
2.为什么说基因工程是一种强大的工具?它有哪些应用?
3.基因工程中的“载体”是什么?它有哪些类型?它们各有什么优缺点?
4.什么是“限制性酶切反应”?它在基因工程中的作用是什么?如何进行筛选?
5.基因工程中的“克隆”是什么意思?如何实现克隆?
6.基因工程中的“表达”是什么意思?如何实现基因的表达?
7.基因工程中的“转基因生物”是什么意思?它们有哪些应用?
8.基因工程中的“安全性问题”有哪些?如何解决这些问题?
9.基因工程在农业、医学和其他领域中的应用有哪些?
10.基因工程的发展趋势和未来展望是什么?。
基因工程课后思考题
基因工程原理课后思考题第一篇：基因操作原理第一章：基因工程概述P（12）：1 简述基因操作，基因重组和基因工程的关系？2 为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物？3 简述基因的结构组成对基因操作的影响？第二章：分子克隆工具酶P（38）：1 限制性内切酶可分为哪几种类型，各有何特点？2 哪些酶可用于DNA片段的末端标记？3 DNA聚合酶有哪些类型，各有什么活性？4 在分子克隆中所用的酶主要作用于哪些底物？第三章：分子克隆载体P（69）：1 作为一个最基本载体，它必须具备哪些功能元件？2 何为α-互补，在载体构建中有何作用？3 请简要描述λ噬菌体溶原状态和裂解循环的基因调控模式及其在构建载体中的作用？4 简述M13KO7辅助噬菌体的遗传学特性和生物学功能及其在制备单链DNA中的作用？第四章：人工染色体载体P（84）：1 大容量克隆载体有哪些种类，各有何特点？2 简述用Y AC克隆载体构建基因文库的原理？3 BAC克隆载体有哪些显著的优点？第六章：基因工程操作中大分子的分离和分析P（116）：1 在基因工程操作中有哪些检测核酸和蛋白质相对分子量的常规方法？2 印迹分子杂交有哪些种类，并说明在什么情况下需要使用这些方法？3 核酸分子的标记有哪些方法，各有何特点？4 DNA转化有哪些方法，各有何优点？第七章：基因芯片技术P（132）：1 基因芯片技术与传统的Northern杂交技术相比有何异同？2 简述DNA在芯片上的固定原理及基因芯片的制作过程？3 简述mRNA反转录标记方法的类型及特点？4 结合自己的专业试述cDNA芯片技术的用途及前景？第八章：PCR技术及其应用P（154）：1 如何理解PCR扩增的原理和过程？2 通过PCR技术扩增已知序列侧翼的未知序列的关键问题是什么？用PCR作染色体步查有何特点？3 PCR产物的克隆与一般的DNA片段克隆有何异同点？4 为什么在定量PCR中要引入Ct值的概念？第十章：DNA诱变P（186）：1 DNA诱变有哪些种类，各有何特点？2 什么叫有性PCR？有性PCR导致DNA重组的分子机制与体内重组有何异同？3 简述Kunkel定点诱变的基本原理？第十一章：DNA文库的构建和目的基因的筛选P（209）：1 基因组DNA文库有哪些类型？其相关的特点是什么？2 构建大片段基因组文库过程中需要注意哪些问题？3 均一化cDNA文库构建的基本原理是什么？4 扣除cDNA文库构建的基本原理是什么？主要用途是什么?5全长cDNA文库构建的基本原理和基本类型是什么？6 基因克隆筛选的几种方法和相关技术特征有哪些？第十二章：基因组研究技术P（225）：1 简要叙述真核生物基因组物理图的构建方法和原理？2 鸟枪法和克隆重叠群法这两种基因组测序法各自有何优缺点，适用范围有何不同？3 如何对基因组测序获得的序列进行注解以确定哪些序列为编码序列？对这些预测的基因如何进行功能鉴定？4 讨论基因组研究作为平台技术在基因工程中的应用?5基因组工程利用了哪些技术手段？第二篇：基因工程应用第十三章：植物基因工程P（225）：1 什么叫植物基因工程？试比较植物基因工程与常规植物育种的异同点？2 试阐述植物基因工程快速发展的原因？3 简述植物基因工程的方法及其原理和优缺点？4 转基因植株的鉴定方法有哪些，作为一组完整的转基因植株鉴定的数据至少包含哪些参数？5植物基因工程的发展向世界展现出了一幅壮丽画面，试进行阐述？第十四章：动物基因工程P（272）：1 简述反转录病毒在动物基因工程中的作用？2 试述基因敲除与基因敲入的区别？3 质粒载体和病毒载体有何异同？4 试述转基因动物的鉴定方法？5谈谈你对转基因动物生物安全性的看法？6 真核细胞转染有哪些方法？7 简述转基因小鼠的制备过程？。
基因工程简答题总结
基因工程简答题总结第一篇：基因工程简答题总结基因工程原理复习题思考题5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。
同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。
同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。
不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。
）6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？类型：DNA连接酶和RNA连接酶异同点：相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA复制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。
7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。
（传说中的网上答案）1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。
2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。
这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
3、足够多的载体和插入片段是最重要的。
4、平端的连接对于离子浓度很敏感5、尽可能缩小连接反应的体积6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好8、基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？1）大肠杆菌DNA聚合酶 2）Klenow fragment 3）T7 DNA聚合酶 4）T4 DNA 聚合酶5）修饰过的T7 DNA聚合酶 6）逆转录酶7）Taq DNA聚合酶第四章基因克隆的载体系统1、作为基因工程载体，其应具备哪些条件？具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；具有合适的筛选标记；具有较高的外源DNA的载装能力；具有多克隆位点（MCS）；具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。
3、载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。
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《基因工程》思考题第一章绪论1. 简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。
2. 为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物？3. 简述基因的结构组成对基因操作的影响。
4. 谈谈你对gene的认识，并简要说说gene概念的演变过程.5. 如何理解gene及其产物的共线性和非共线性？6. 试从理论和技术两个方面谈Gene Engineering诞生的基础.第二章基因工程的基本原理与支撑技术1. 试比较原核基因组与真核基因组的结构和功能特点2. 试比较原核基因和真核基因表达调控的主要方式和特点3. 分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点？4. 琼脂糖凝胶电泳中，简述影响DNA在凝胶中迁移速率的因素.5. 小量制备质粒DNA，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？6. 在基因操作实践中有哪些检测核酸和蛋白质分子量的常规方法？7. 印迹分子杂交有哪些种类，并说明在什么情况下需要使用这些方法。
8. 核酸分子的标记有哪些方法，各有何特点？9. 由mRNA反转录成cDNA和DNA的PCR扩增是两个完全不同的酶催化反应过程，如何将两个过程联系在一起，实现由mRNA起始扩增出DNA？10. Primer是PCR反应体系的四大要素之一，PCR的许多应用都是通过primer设计来实现的，请问primer设计的一般原则是什么？11. 在PCR反应的后期，或者循环次数过多时，反应体系中就会出现一种所谓的平台效应（Plateau effect），请问什么叫Plateau effect？产生Plateau effect的原因有哪些？12. 在对PCR产物进行电泳检测时，有时会出现拖带或非特异性扩增条带，请分析其原因？如果检测结果是看不到DNA带或DNA带很弱，那又是为什么？13. 通过双向蛋白质电泳发现某蛋白质与某植物的一种表型密切相关，若要利用编码该蛋白质的基因来转基因植物，试问如何分离得到该基因？14. 现有一序列已知的DNA片段和一序列未知的DNA片段，你分别如何设计测序策略？15. 设想一下在什么情况下你希望知道一个基因或一段DNA的序列？16. 什么叫有性PCR？有性PCR导致DNA重组的分子机制跟体内重组有何异同？17. Explain the PCR. List the steps in carrying it out; include all the components and special conditions, explaining why each one is used. Illustrate the process with appropriate labels. Use the correct scientific terminology in your explanation.第三章基因工程操作的基本条件1. 试指出影响限制性内切核酸酶（Restriction endonuclease）切割效率的因素.2. 在酶切缓冲液中，一般需加入BSA，请问加入BSA的作用是什么？并简述其原理？3. 何谓Star activity？简述Star activity的影响因素及克服方法.4. 某DNA序列中存在DpnI酶切位点，以此DNA为模板，在体外合成DNA序列，当用该酶进行酶切时，发现切割不动，试分析可能原因？5. 天然的质粒载体（plasmid vectors）通常需经改造后才能应用，包括去除不必要的片段，引入多克隆位点等。
试问在此过程中如何增减酶切位点？6. 当向细菌培养基中加入氯霉素时，可以使细菌质粒的拷贝数得到扩增，试分析其原理.7. 抗性基因（Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理.8. 常用的受体细胞有哪些? 各有什么特点?9. 在基因工程中,选择受体细胞时要考虑什么问题?第四章基因工程的基本操作过程1. 简述大肠杆菌的经典转化操作过程。
2. 用作电转化的宿主细胞也必须处于“感受态”，这种感受态与传统的感受态有何不同？3. 电转化技术还有哪些应用？4. DNA转化有哪些方法，各有何优点？5. Explain what restriction enzymes are, what they do and why they were key to starting the genetic engineering revolution. Show how restriction enzymes produce sticky and blunt end cuts. Draw a typical restriction enzyme site and explain what a palindromic site is.6. 基因克隆的筛选方法主要有哪些？它们的技术特征是什么？7. List the basic steps involved in GENETIC ENGINEERING and describe what each component does. Draw a picture showing the various steps in cloning the Insulin gene.8. 抗性基因（Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理.9. 何为α-complement？如何利用α-complement来筛选插入了外源DNA的重组质粒？10. 以pUC18系列为载体，外源基因经酶切和载体连接后，将其导入处于感受态的宿主细胞中，筛选菌落，设计一个实验证明外源基因能在宿主细胞中转录表达。
第五章目的基因的克隆和基因文库的构建1. 简述目的基因的克隆策略。
2.采用同聚物加尾的方法进行dscDNA克隆，一般采用dC/dG而不采用dA/dT，简述其原因？3.克隆cDNA常见的问题是什么？4.如何使用Methylase对克隆DNA进行保护？此步骤有什么意义？5. cDNA法克隆目的基因的局限性表现在哪里？6.构建大片段基因组文库过程中需要注意哪些问题？7.均一化cDNA文库构建的基本原理是什么？8. 何谓基因组DNA文库？何谓cDNA文库？两者有何区别？9. 在构建基因组文库的过程中，最需要注意的问题是什么？如何解决？10. 何谓基因文库的代表性？在构建基因文库的过程中，要提高文库的代表性，通常采用什么策略？第六章基因表达体系及其应用1. 试比较外源基因在细菌中三种表达方式（融合蛋白、分泌蛋白、包涵体）的优缺点。
2. 试述细菌基因工程的发展现状及前景。
3. 工程酵母和工程细菌在表达外源蛋白时有何显著的区别？4. 举例说明酵母基因工程相对于大肠杆菌基因工程的优势与不足。
5. 一个酵母表达载体应包括哪些基本元件？6. 简述附加型表达载体和整合型表达载体在表达外源基因上的区别。
7. 如何改善酵母工程菌的表达质量？8. 酿酒酵母表达系统的不足之处表现在哪里？9. 如何实现酵母工程菌高效表达外源蛋白？第七章基因工程菌的大规模培养1. 与普通的微生物发酵相比，基因工程菌发酵有何特点？2. 基因工程菌的不稳定性表现在哪里？如何改善？3. 常见的深层培养方式有哪些?有什么特点?4. 根据目前啤酒生产存在的问题，你认为基因工程技术在改良啤酒生产菌株方面有哪些可做的工作？综合:专业术语解释1. marker gene2. genetically modified organisms3. Insertional inactivation4. Competent cell5. gene6. gene cloning7. In situ colony hybridization8. complementary DNA cloning9. cloning vector10. gene library11. clone12. genetic engineering13. Southern blot14. expression vector15. Polymerase chain reaction16. restriction enzyme17. selectable marker18. gene probe19. recombinant DNA technology20. plasmid1. 试以pUC18为例说明pUC系列质粒在基因工程中得到最广泛应用的原因。
2. 试述利用α-complement筛选重组子的原理。
3. 试述提高外源基因在大肠杆菌细胞中表达水平的措施及其依据。
4. 如何获得目的基因？其策略和选择原则是什么?5. 试以pBR322为例说明一个理想的质粒载体必须具备的条件.6.试述影响限制性内切酶活性的因素及对策。
7. 试述核酸分子杂交的基本原理。
8. 试比较原核基因组和真核基因组的结构与功能特点。
9.写出利用毕赤酵母生产乙肝表面抗原的技术过程,并与酿酒酵母表达系统相比较，评价其经济性。
10. 试述利用大肠杆菌生产分泌型人胰岛素的两条技术途径,并对其优越性进行评价。
11. 写出从细菌基因组中克隆糖化酶基因并通过微生物基因工程技术生产糖化酶的基本步骤。
12.试对人血清白蛋白的市场现状和前景进行分析,并比较不同酵母细胞表达人血清白蛋白的优劣.13. 基因工程载体应具备什么条件？。
14. 试述构建基因组文库的目的和意义15. 与真核表达系统相比，原核表达系统的基因表达有何特点？16. 如何科学地看待基因工程技术对人类社会的影响？1. 第四次工业大革命（1）医药：抗病毒剂、抗癌因子、新型抗生素、疫苗、抗衰老保健品、心脑血管药物、生长因子、诊断试剂等（2）轻工食品产业：氨基酸、助鲜剂、甜味剂、淀粉酶、纤维素酶等（3）能源：二次采油、燃料乙醇（4）环境保护：生物材料、超级降解细菌（5）信息产业：生物芯片、生物电脑第二次农业革命（1）生物农药（2）抗除草剂、抗病虫害农作物（3）高产、优质新品种（4）抗逆（抗寒、抗旱、耐盐）农作物（5）家畜品种改良（6）生物固氮第四次医学大革命-----基因疗法基因工程技术可能给自然环境和人类健康带来潜在威胁（1）生态安全：植物杂草化、益虫减少（2）食品安全：毒理作用、过敏反应、激素污染、抗生素抗性（3）产业安全2. 对生物安全性的担忧生物安全一般是指由现代生物技术开发和应用所能造成的对生态环境和人体健康产生的潜在威胁，以及对其所采取的一系列有效预防和控制措施17. 试述应对外源基因过量表达带来不利影响的策略及其依据。