抗坏血酸氧化酶和多酚氧化酶活性的测定(精)

+
1 2
抗坏血酸氧化酶
O2
O O H
C C C C H O
+
H2O
H
HO
C
C H
HO
CH2OH
抗坏血酸
CH2OH
脱氢抗坏血酸
利用碘液滴定剩余抗坏血酸
O
C HO HO H HO C C C C H O + C O C C C C H O O
I2
O H HO
+
2HI
CH2OH 抗坏血酸
CH2OH 脱氢抗坏血酸
抗坏血酸氧化物酶和多酚氧化 酶活性的测定
制作人： 车永梅
单 位： 生命科学学院
一、实验目的:
掌握测定抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶活性的方法，
使学生理解诸如：果实受伤、组织变褐的原因等。
二、实验原理
利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量 表示抗坏血酸氧化酶的活性：
O C HO HO C C O C O
利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量 利 用 间接表示多酚氧化酶的活性：
多酚氧化酶
儿茶酚＋O2
儿茶醌＋H2O
儿茶醌+抗坏血酸→儿茶酚＋脱氢抗坏血酸
三、实验材料
梨果肉
四、实验步骤
1．酶液提取 2．酶活性的测定（按下表配制反应体系）
瓶 号 1 2 3 4 5 6
缓冲液 4 4 4 3 3 3
六、思考题
1.多酚氧化酶活性测定实验中计算多酚氧化酶活性
时为什么要减去抗坏血酸氧化酶活性？
2.测定多酚氧化酶和抗坏血酸氧化酶活性时加入偏
磷酸的作用是什么？
来自百度文库
(2)多酚氧化酶活性： 多酚氧化酶活性[氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重· 分)] =[(V″( V3 +V4 ))/2-(V′-(V1+V2))/2]×0.44×(V/a)/(W×t) 式中，V〞＝滴定6号空白用去的碘液毫升数； V3 ＝滴定4号瓶用去的碘液毫升数； V4 ＝滴定5号瓶用去的碘液毫升数； 其余符号意义同前。
抗坏血酸 焦儿茶酚 偏磷酸 2 2 2 2 2 2 1 1 1 1 1
酶溶液 2 2 2 2 2 2
偏磷酸 (保温一定时间后) 1 1 1 1 1 1
五、试验结果
(1)抗坏血酸氧化酶活性按下式计算： 抗坏血酸氧化酶活性[氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重· 分)] =[ V′-( V 1- V 2)] ×0.44 (V/a)/(w×a) 式中：V′=滴定3号空白所用去的碘液毫升数； V1=滴定1号瓶所用去的碘液毫升数； V2=滴定2号瓶所用去的碘液毫升数； 0.44=每毫升5/6mmol碘液氧化抗坏血酸毫克数； V=提取液总体积（ml）； a=测定时所用提取液的ml数 w＝样品鲜重(g) t＝测定时间(分)。