茯苓多糖提取分离方法共31页
茯苓多糖的提取及含量测定
茯苓多糖的提取及含量测定目的:建立茯苓多糖的含量测定方法。
方法:用水提醇沉法提取茯苓多糖,酚-硫酸法紫外分光光度法测定茯苓多糖的含量。
一、仪器与试药1、仪器：UV2754 紫外分光光度计2、试剂与样品样品：云苓、葡萄糖对照品苯酚、浓硫酸（1）5 %苯酚试剂的配制取苯酚加热蒸馏收集182 ℃的馏分,吸取此馏分10ml 加水至200ml 置棕色瓶内,放冰箱备用。
（2）对照品溶液的配制精密称取105 ℃干燥恒重的葡萄糖50mg 加水溶解并定容至1000ml 量瓶中,即得。
（3）供试品溶液的配制精密称取茯苓提取物50mg ,加水溶解并定容至500ml 量瓶中,过滤,滤液备用,即得。
二、提取准确称取茯苓500g ,切成碎片,加入4～6 倍量的水,回流提取 3 次,时间分别是3 ,2 和1h。
合并 3 次提取液滤过,除去不溶性杂质,得2000ml 滤液。
取600ml减压蒸馏浓缩成76ml ,在搅拌下加入乙醇,使含醇量达到80 % ,静置12h ,离心,收集沉淀,加蒸馏水60ml 溶解煮沸,趁热滤除不溶物,滤液在搅拌下再加入乙醇,使含醇量达到80 % ,放置,析出褐色沉淀后,低温干燥,即得茯苓多糖粗品。
3、吸收波长的选择精密吸取对照品溶液1. 0ml ,和供试品溶液1. 0ml ,分别置于20ml 的试管中,各精密加入5 %的苯酚液1. 0ml ,然后缓慢精密加入 5. 0ml 浓硫酸,摇匀,放置30min后,在分光光度仪上测定波长从400～524nm之间的吸收度,两者均在490nm处有最大吸收,故选择490nm波长测定。
4、重现性实验分别吸取对照品溶液0. 5ml 5 份置试管中,同前操作,吸光度为:0. 614 ,0. 612 ,0. 614 ,0. 613 和0. 615 ,结果RSD = 0. 199 %( n = 5) 。
5 、样品含量测得吸取供试品溶液 1. 0ml 3 份,分别置于20ml 试管中,加入5 %苯酚溶液2. 0ml ,混合后加入浓硫酸6. 0ml ,放置30min ,在490nm处分别测得其吸收度 A 值:A1 =0. 871 ,A2 = 0. 872 ,A3 = 0. 876 ,根据回归方程求出百分含量为74. 16 % , 74.27 %和74. 62 % , 平均含量74. 35 %。
茯苓多糖的提取实验报告
一、实验目的1. 掌握茯苓多糖的提取方法；2. 熟悉茯苓多糖的理化性质；3. 了解茯苓多糖的提取工艺及其影响因素。
二、实验原理茯苓多糖是一种天然高分子化合物，具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗病毒、调节免疫等。
本实验采用水提法提取茯苓多糖，通过调节提取温度、时间、pH值等条件，提高茯苓多糖的提取率。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：茯苓菌核、蒸馏水、95%乙醇、无水硫酸钠、盐酸、氢氧化钠等；2. 实验仪器：电子天平、电热恒温水浴锅、旋转蒸发仪、真空干燥箱、磁力搅拌器、离心机、pH计、分光光度计等。
四、实验步骤1. 茯苓菌核预处理：将茯苓菌核粉碎，过100目筛，备用；2. 水提法提取茯苓多糖：（1）称取一定量的茯苓菌核粉末，加入适量蒸馏水，搅拌均匀；（2）调节pH值至6.0；（3）在恒温水浴锅中加热提取，温度为80℃，时间为2小时；（4）提取液过滤，取滤液；（5）将滤液加入95%乙醇，静置过夜；（6）沉淀物用蒸馏水洗涤，再用无水硫酸钠干燥；（7）干燥后的沉淀物称重，计算茯苓多糖提取率；3. 茯苓多糖纯化：（1）将干燥后的沉淀物溶解于蒸馏水中；（2）通过离心分离，去除杂质；（3）使用透析袋去除小分子物质；（4）将透析后的溶液冷冻干燥，得到纯化的茯苓多糖；4. 茯苓多糖理化性质测定：（1）测定茯苓多糖的分子量；（2）测定茯苓多糖的紫外吸收光谱；（3）测定茯苓多糖的溶解度；（4）测定茯苓多糖的抗氧化活性。
五、实验结果与分析1. 茯苓多糖提取率：根据实验结果，在提取温度80℃，时间2小时，pH值6.0的条件下，茯苓多糖的提取率为1.23%；2. 茯苓多糖纯化：经过纯化处理后，茯苓多糖的纯度达到90%以上；3. 茯苓多糖理化性质：（1）分子量：茯苓多糖的分子量为5.2×10^5；（2）紫外吸收光谱：茯苓多糖在200-400nm范围内具有较强紫外吸收；（3）溶解度：茯苓多糖在水中的溶解度为1.5mg/mL；（4）抗氧化活性：茯苓多糖的抗氧化活性较强，IC50值为25.8μmol/L。
茯苓多糖的提取分离方法研究
上清液
残渣
DEAE-Sdphadx 离心，4℃，0.5MNaOH 提取
PC2
上清液 PC3
残渣 离心，甲酸提取，水沉
多糖进一步降解研究做先期准备。 １ 材料与方法
上清液 PC4 残渣（弃去）
1.1 材料：新鲜茯苓。
图 1 茯苓多糖的提取分离流程图
1.2 实验主要仪器及试剂 离心机(Beckman J2 - HS)，微型高
参考文献
色粉末 PC1，棕色粉末 PC2 和白色粉末 PC3、PC4。提取如图 1。 1.4 茯苓多糖的鉴定 将淡黄色粉末 PC1，棕色粉末 PC2 和
白色粉末 PC3、PC4 四种提取产物分别溶于水，溶于碱和二甲基亚
[1]中国药科大学主编. 中药辞海(第二卷)[M]. 第一版.北京:中国医药 科技出版社,1996.1272-1278.
眩悸，脾虚食少，心神不安，惊悸失眠等病症[1，2]。但近年来最受人
茯苓粗粉
药
关注的是其抗肿瘤作用。
物
茯苓中的主要成分为茯苓聚糖(Pachyman)，含量很高。茯苓聚
乙醚和丙酮脱脂 4 小时，加入 0.9%NaCl 溶液放置过夜
与
临 床
糖本身无抗肿瘤活性，若切断其所含的 β-(1→6)吡喃葡萄糖支链， 成为单纯的 β-(1→3)葡萄糖聚糖［称为茯苓次聚糖(Pachymaran)或 上清液 PC1
作者单位 ４１３５００ 湖南安化 安化县人民医院皮肤科（王敏）
[3]G. Chihara, J. Hamuro, Y. Maeda, et al. Antitumor polysaccharide derived chemically from natural glucan (pachyman). Nature ，1970（225）：943 -944.
茯苓多糖的提取技术
茯苓多糖的提取技术作者：周琳来源：《农民致富之友》2013年第22期[中图分类号] S-1 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650 （2013）11-0182-01一、引言茯苓多糖为我国传统中药茯苓的主要有效成分，具有抗肿瘤、抗病毒、增强机体免疫力、抗氧化、降血糖血脂、保肝、催眠等作用，可用于医疗、保健等领域，具有广阔的开发应用前景。
二、材料与方法1.茯苓多糖的提取方法2.均匀设计实验对超声波提取茯苓多糖提取工艺2.1器材及药品茯苓，数控超声波清洗器，紫外分光光度计，电子分析天平。
葡萄糖标准品，苯酚，浓硫酸和铝片等。
2.2.方法2.2.1药材粉碎度的选择参照文献条件，取不同粒度茯苓药材，在乙醇浓度50%，提取温度45℃条件下超声提取20 min，。
实验结果表明，药材粒度为20～60目时，提取时提取率较好。
2.2.2提取次数的选择取20～60目粒度茯苓药材，在2.2.2.1条件下分别提取1，2，3次，结果表明，超声波提取1次后，茯苓多糖即已提取完全。
2.2.3 茯苓提取物中多糖含量的测定方法2.2.3.1 4%苯酚溶液的配制取苯酚100 g，加鋁片0.1 g和碳酸氢钠0.05 g，蒸馏并收集182 ℃馏分，称取4 g，在100 ml容量瓶加水溶解至刻度线，然后放冰箱内冷藏备用。
2.2.3.2制备标准曲线精密称取置五氧化二磷减压干燥器中干燥12 h以上的无水葡萄糖标准品15 mg，置25 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀置室温下（约24℃）备用（浓度为0.6 mg/ml）。
精密量取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别置于100 ml容量瓶中，并加水至刻度，摇匀。
精密量取上述各溶液2 ml，置具塞试管中，分别加入4%的苯酚溶液1 ml，混匀后迅速加入浓硫酸7.0 ml，摇匀，并于45℃水浴中保温30 min后取出，置冰水浴中5 min后取出。
然后以第1份为空白对照组，用分光光度计在490 nm的波长处测定其吸收度A，以吸光度（A）为纵坐标，溶液浓度C为横坐标。
茯苓多糖的提取
茯苓多糖的提取技术作者：周琳班级：食品0931班【摘要】茯苓多糖为我国传统中药茯苓的主要有效成分，具有抗肿瘤、抗病毒、增强机体免疫力、抗氧化、降血糖血脂、保肝、催眠等作用，可用于医疗、保健等领域，具有广阔的开发应用前景。
为进一步优化茯苓多糖的提取工艺，促进其开发应用，文章参考大量国内外文献，对近几年茯苓多糖的提取及其应用作一综述。
【关键词】茯苓多糖，提取，超声波法1.引言自从20世纪60年代研究发现酵母细胞壁多糖(zymosan)具有免疫增强以及抗肿瘤作用以来，人们对多糖的研究产生了极大的兴趣，尤其是其生物活性方面的研究。
茯苓多糖到底是什么呢？它有什么作用呢？茯苓多糖是近年来研究较多的一种真菌多糖，来源于多孔菌科真菌茯苓的菌核，约占整个茯苓菌核干重的70%～90%［1］，其化学组成为（1→3）-β-D- 葡聚糖［2］。
茯Poria cocos (Schw.) Wolf又称茯菟、茯灵、松薯等, 为多孔菌科(Polyporaceae) 真菌茯苓的干燥菌核，在我国资源丰富，全国各地均自从20世纪60年代研究发现酵母细胞壁多糖具有免疫增强以及抗肿瘤作用以有栽培，主产于云南、安徽、湖南等省。
茯苓是一味使用历史悠久的中药，在《神农本草经》中被列为上品，谓其“主胸胁逆气，利小便，久服安魂宁神，不饥延年。
”《本草纲目》也记载：茯苓“治头风虚眩，暖腰膝，主五劳七伤。
”历代医家均肯定茯苓既有滋补强身作用，又有渗湿利水、益脾和胃、宁心安神之功。
茯苓药性缓和，补而不峻，利而不猛，既能扶正，又可祛邪，能治疗脾胃虚弱、遗精早泄、心悸失眠、健忘多梦、小便不利、呕吐腹泻等症。
其主要有效成分茯苓多糖是一种非特异性免疫促进剂，其不仅能够提高机体的抗病能力，还有较强的抗癌作用。
其性味甘、淡、平，归脾胃肺肾经，有利水渗湿、益脾宁心之功效。
主治气虚劳伤、水肿、痰饮、呕吐、腹泻、热淋、遗精、惊悸、健忘等证。
茯苓多糖是茯苓的有效部位之一，为灰白色粉末，味微咸，无臭，略有吸湿性。
茯苓多糖的提取纯化及应用研究进展
四、结论与展望
茯苓多糖作为一种天然的生物活性物质，具有广泛的应用前景。在医药领域 中,茯苓多糖对机体各方面表现出多种生理功能,具重要的药理活性,在临床治疗 及药物开发方面展现出了广阔的前景；在食品领域中,茯苓多糖可以作为食品添 加剂改善食品口感和质地,同时也可以作为生产保健食品的原料；
在化妆品领域中,茯苓多糖具有保湿和抗氧化等作用,可以用于生产化妆品提 高产品的性能。然而,对于如何充分发挥其潜在的药用价值,还需要进行深入的研 究与探讨,在实际应用过程中也需要不断进行工艺优化以提高产品的质量和产量, 使茯苓这一传统中药中的有效成分更好地服务于人类健康和生活。
3、超声波辅助法
超声波辅助法是一种利用超声波的振动作用加速茯苓中多糖成分的释放的方 法。该方法具有操作简单、提取时间短、提取效率高等优点。在超声波的作用下， 茯苓组织的细胞壁被破坏，多糖成分更容易释放出来。同时，超声波的振动作用 还可以加速溶剂的渗透和扩散，进一步提高了提取效率。然而，超声波辅助法也 存在一些缺点，如超声波的噪音较大、对设备的要求较高等。
二、茯苓多糖的提取纯化方法
1、溶剂提取法
溶剂提取法是提取茯苓多糖的常用方法之一。该方法主要是利用多糖在不同 溶剂中的溶解度不同，将多糖从茯苓中分离出来。常用的溶剂包括水、醇类和酮 类等。其中，水是常用的提取溶剂，因为多糖在水中的溶解度较大。然而，水提 取法也存在一些缺点，如提取时间长、需要大量的水等。因此，一些研究人员尝 试使用其他溶剂进行提取，如醇类和酮类等。
多糖纯化技术
多糖的纯化技术主要包括沉淀法、色谱法、电泳法和膜分离法等。其中，沉 淀法操作简单，但纯化效果较差；色谱法能够实现高效分离，但成本较高；电泳 法能够分离出具有电泳活性的多糖，但不适用于大规模生产；膜分离法能够实现 分子级别的分离，但膜的制备和清洗成本较高。近年来，一些新的纯化技术，如 亲和色谱法、免疫分离法和纳米膜分离法等也逐渐应用于多糖的纯化。