鳗弧菌卵黄抗体的制备[设计+开题+综述]
嗜水气单胞菌亚单位成分卵黄抗体在鳗鲡养殖中应用的开题报告
嗜水气单胞菌亚单位成分卵黄抗体在鳗鲡养殖中应用的开题报告一、研究背景鳗鲡是一种重要经济鱼类，其肉质鲜美，深受市场欢迎。
但是，鳗鲡养殖过程中，常受到各种细菌和病毒的侵袭，严重威胁养殖效益和生产能力。
因此，寻找有效的预防和治疗方法显得尤为重要。
嗜水气单胞菌是一种常见的水产细菌，常常导致鱼类的感染。
根据以往的研究，卵黄抗体可以有效地抑制嗜水气单胞菌的生长和感染。
因此，本研究将探讨嗜水气单胞菌亚单位成分卵黄抗体在鳗鲡养殖中的应用。
二、研究目的1. 提取嗜水气单胞菌亚单位成分。
2. 制备卵黄抗体。
3. 检测卵黄抗体对嗜水气单胞菌的抑制作用。
4. 将卵黄抗体应用于鳗鲡养殖中，研究其预防和治疗效果。
三、研究内容和方法1. 提取嗜水气单胞菌亚单位成分选取常见的嗜水气单胞菌菌株进行培养，并采用离心法获得细菌菌体沉淀。
将菌体沉淀与去离子水混合，震荡后超声离解，离解液中含有嗜水气单胞菌的亚单位成分。
2. 制备卵黄抗体将采集的鸡蛋卵黄分离出来，加入亚单位成分离解液进行混合和提取。
采用硫酸铵分级沉淀和酵母蛋白A亲和层析法进行纯化，获得具有高抗体活性的纯化卵黄抗体。
3. 检测卵黄抗体对嗜水气单胞菌的抑制作用采用琼脂扩散法和生物测定法进行检测，确认卵黄抗体是否对嗜水气单胞菌有抑制作用。
4. 将卵黄抗体应用于鳗鲡养殖中，研究其预防和治疗效果将卵黄抗体喂养给鳗鲡，观察鳗鲡的存活率和病情，研究卵黄抗体对鳗鲡的预防和治疗效果。
四、研究意义本研究旨在寻找一种新型的鳗鲡养殖方法，尝试通过卵黄抗体来预防和治疗嗜水气单胞菌病，提高养殖效益和产能。
研究成果可为其他鱼类的养殖提供借鉴和推广，有极大的经济和社会意义。
抗鳗利斯顿氏菌鸡卵黄抗体制备及其活性研究
较大疫病（ 包括新城疫 、 传染 陛法氏囊病 、小鹅瘟 、 鸭病毒性肝炎及脑脊髓炎 、 犬瘟热 、 猪瘟 、 泌乳期 牛的乳房炎 、 牛腹泻 、 产肠毒素性大肠杆菌引起的 仔猪腹泻等） 的防治上已有成功的尝试【 ． Ｊ 并有
进行 了体 内、外抑茵与吞噬调理活性研 究： 分别将抗 Ｌ ａｇ ｉ ｒｍ 的 Ｉ ． ｎｕ ｌ ｕ ｌ ａ ｇ Ｙ、由普通鸡蛋 ＩＹ与 ｇ
Ｌ ａｇ ｉａｕ （０ Ｃ Ｕ・ 等体积 混合 后 注射 克 氏原螯 虾（ｒｃｍ ａｕ ｌｒｉ） ． ｎ ｕｌ ｒｍ １ Ｆ ｍＬ ） ｌ Ｐ ｏａ ｂ ｒｓｃａｋａ，计算 成活 率；
鳗利斯顿 氏菌 ＆ｏｅ ａ ａｇ ｉ ｒｍ 可感染 ｔ ｌ ｎｕｌ ｕ ） ｎｌ ｌ ａ 淡、 海水鱼 、 、 、贝等， 虾 蟹 其引起 的疾病 在世 界 范 围 内流 行，造成了巨大的经济损失 【 Ｊ 随着水 ｌ． 产养殖业 的不断发 展， 水体生态环境恶化和养殖
服用简便等优点． 针对 Ｉ ｇ Ｙ专一 陛强的特点， 以 可 制备不同病原的 ＩＹ 对症下药， ｇ， 达到全面防治的 效果．ｇ ＩＹ在许多疾病， 尤其是烈性 、 急性 、 危害性
规模 、密度不断提高， 病害频发， 越来越多的养殖 户进入 了 “ 抗生素怪圈”， 即大量使用抗生素． 这
不仅诱发耐药性和机体应激， 亦破坏生态平衡， 反 过来又成为疾病发生 的诱 因， 实为 因治病而致病 ． 此外， 抗生素 、化学药物的滥用还存在药物残 留， 危害产品的食用安全性 ， 污染环境等 问题． 针对细
１ 材 料 与方 法 １１ 材 料 ．
鳗 利 斯 顿 氏 菌 菌 种 ：由香 鱼 （ｌ ｏ ｌ ｓｓ Ｐｅ ｇｏ ｕ ｃ ｓ ａ ｉ ｌ） 分离 、 ｌ ｅｓ ｔ ｉ ｖ 纯化 、 鉴定后超低温冰箱保存； 海 兰 白蛋ｇ（ｙ ｎ ｈ ｅｌ ｉ ｅｓ 购于宁波益大 ￣ ｉ －ｈ ｌ ｅｗ ｉ ｙ ｇｈｎ） ｔ ａｎ ：
【开题报告】自制鳗弧菌卵黄抗体抑菌效果研究
开题报告生物技术自制鳗弧菌卵黄抗体抑菌效果研究一、选题的背景与意义鳗弧菌（Vabrio anguallanim）是一种对水产鱼类危害严重的细菌病原，其流行区域广泛，能引起世界范围内的淡、海水鱼类及其它养殖动物发生弧菌病，常给水产养殖业造成巨大的经济损失。
它还可通过食物链感染人类，使人发生较严重的疾病。
因此对该病原进行深入的研究，寻找防止和减少该病爆发的方法，对于为人类提供高质量的水产品具有重要的意义。
卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin,IgY）是从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是一种具有较强免疫功能的蛋白质，多为IgG。
禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯度免疫球蛋白G（IgG），其对疫病具有明显治疗和紧急预防作用。
用于人、畜、禽类疫病防治方面的有很多成功的研究报道，且已有产品应用于生产中，如用于紧急预防和治疗传染性法氏囊病（IBD）、新城疫（ND）等疫病的IgY,效果很好。
在水产动物方面，只对鳖有少量研究，在对其他细菌病方面则未见研究报道。
本研究的目的是借鉴陆生畜禽相关研究的成功经验，以纯培养的鳗弧菌作为抗原,探讨鳗弧菌IgY的制备技术,并研究其抑菌效果，以期为鳗弧菌引起的疾病的生物防治工作奠定基础，创造社会、经济及生态效益。
二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：本研究通过自制的抗鳗弧菌卵黄抗体进行体外抑菌试验和体内抑菌（即动物保护试验），研究其抑菌效果。
拟解决的主要问题：抑菌效果的研究方法。
三、研究的方法与技术路线：1．体外抑菌效果的研究：根据实验设计的浓度比，将卵黄抗体与鲜鳗弧菌菌悬液的混合，并在不同时间下培养后，涂布在培养基上培养。
然后进行菌落计数，对比、分析各组结果。
2．体内抑菌效果（即动物保护试验）①对将一定浓度的鳗弧菌菌悬液注射入克氏原螯虾体内进行攻毒，观察死亡情况。
②中和试验：将卵黄抗体与鳗弧菌等比例混合并中和一段时间后，注射入试验动物体内，观察试验动物的发病以及死亡情况。
卵黄抗体的制备实验报告
卵黄抗体的制备实验报告
实验目的：
本实验旨在制备出卵黄抗体，为后续的生物学研究提供基础。
实验原理：
卵黄抗体是指针对卵黄中特定抗原的抗体。
制备卵黄抗体的过程中，首先需要将卵黄分离出来，并进行纯化处理。
接着将纯化后的卵黄制成免疫原，并将其注射到动物体内，使其产生相应的抗体。
最后，用相应的方法将卵黄抗体分离出来。
实验步骤：
1.卵黄的分离与纯化
将新鲜鸡蛋打开，分离出卵黄，并将其放入离心管中。
然后，用生理盐水将卵黄稀释，离心，去除卵黄中的杂质。
最后，用离心法或沉淀法将卵黄纯化。
2.卵黄免疫原的制备
将纯化后的卵黄用PBS缓冲液稀释至适当浓度，加入适量的胶体铝溶液并搅拌混合，静置一段时间，使胶体铝与卵黄充分结合。
最后，用PBS缓冲液将其稀释至适当浓度，以备注射。
3.动物的免疫注射
将制备好的卵黄免疫原注射到小鼠或兔子等适宜的动物体内。
注射后，需要进行多次免疫，以增强动物产生抗体的能力。
4.卵黄抗体的分离
将免疫动物的血清收集，离心去除红细胞，得到血清。
接着，用卵黄抗原进行免疫沉淀或免疫吸附，分离出卵黄抗体。
实验结果：
经过以上步骤，我们成功制备出了卵黄抗体，并用酶联免疫吸附实验对其进行了检测。
检测结果显示，卵黄抗体的纯度和活性均较高，可以用于后续的生物学研究。
实验结论：
本实验成功制备出了高纯度、高活性的卵黄抗体，为后续的生物学研究提供了基础。
同时，本实验也展示了免疫学的基本原理和操作方法，对我们深入了解生物学研究具有重要意义。
用于制备抗鳗利斯顿氏菌的卵黄抗体的灭活疫苗制法[发明专利]
![用于制备抗鳗利斯顿氏菌的卵黄抗体的灭活疫苗制法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1a8917240c22590103029d74.png)
专利名称：用于制备抗鳗利斯顿氏菌的卵黄抗体的灭活疫苗制法
专利类型：发明专利
发明人：张晓君,毕可然,陈丽,闫斌伦,秦国民
申请号：CN201210335928.6
申请日：20120912
公开号：CN102836431A
公开日：
20121226
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种用于制备抗鳗利斯顿氏菌的卵黄抗体的灭活疫苗制法，该方法先将病原鳗利斯顿氏菌BH1菌株灭活、离心得灭活菌体；然后制得黄芪浸出液；再由白油、硬脂酸铝、司班80制得油相，灭活菌体与黄芪浸出液混合制得疫苗水相；最后将油相和水相按体积比2:1混合乳化研磨5min，制得黄芪和白油为联合佐剂的副溶血弧菌油乳剂灭活疫苗。
该疫苗可以得到抗鳗利斯顿氏菌的高免卵黄抗体，高免卵黄抗体的使用能增强半滑舌鳎等海水鱼类对病原鳗利斯顿氏菌的免疫力，提高其成活率，增加其产量，提高半滑舌鳎等海水鱼类养殖生产的经济效益。
从根本上解决了目前半滑舌鳎等海水鱼类养殖生产过程中易发生鳗利斯顿氏菌所致疾病的问题。
申请人：淮海工学院
地址：222000 江苏省连云港市新浦区苍梧路59号淮海工学院海洋学院张晓君转
国籍：CN
代理机构：南京众联专利代理有限公司
代理人：刘喜莲
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鳗弧菌菌蜕疫苗的初步制备
鳗弧菌菌蜕疫苗的初步制备刘丹阳;李超;张敏;姜光朋;周顺【摘要】菌蜕作为一种新型疫苗,较好的保留了细菌的原有形态及膜蛋白结构,能够诱导机体产生体液免疫反应及细胞免疫反应.为制备鳗弧菌菌蜕疫苗,本实验通过基因重组技术,构建了含噬菌体PhiX174裂解酶基因E(Lys-isE)及温控表达系统cIts857的重组载体pRK-857-E,通过结合转移技术,将重组表达载体转移至鳗弧菌,成功构建鳗弧菌菌蜕.结果表明,42℃升温诱导后,菌体OD600于1h时开始下降,3h 后趋于平稳,表示细菌裂解基本完成.平板涂布结果显示,活菌数由诱导前的8.21×107CFU/mL,下降至诱导后的2.31×103CFU/mL,裂解效率接近99.999％.电镜对比观察诱导前后的细菌,发现诱导后的鳗弧菌形态未发生变化,可观察到直径为100～300nm的跨膜裂解孔洞,且有细胞质流出.本研究成功构建鳗弧菌菌蜕疫苗,并对其裂解效果进行检测,为弧菌菌蜕疫苗的开发奠定了基础.【期刊名称】《青岛农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(035)004【总页数】6页(P316-321)【关键词】鳗弧菌;裂解;菌蜕【作者】刘丹阳;李超;张敏;姜光朋;周顺【作者单位】青岛农业大学海洋科学与工程学院,山东青岛266200;青岛农业大学海洋科学与工程学院,山东青岛266200;青岛农业大学海洋科学与工程学院,山东青岛266200;青岛农业大学海洋科学与工程学院,山东青岛266200;青岛农业大学海洋科学与工程学院,山东青岛266200【正文语种】中文【中图分类】Q939.91伴随着人口数量的增加，人们对水产品的需求量越来越多，水产养殖业蓬勃发展。
在中国居民水产品的消费中，70%水产品来源于水产养殖，水产养殖业已成为我国农业四大支柱之一[1]。
但随着养殖规模、密度的不合理增加，病害爆发率呈上升趋势，给海水养殖业带来巨大经济损失。
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开题报告生物技术鳗弧菌卵黄抗体的制备一、选题的背景与意义鳗弧菌是一种对水产鱼类具有严重危害性的细菌病原。
目前，鳗弧菌引起的水产养殖动物疾病在世界范围内广泛流行，可感染鱼、虾、鳖类，并常给水产养殖业造成巨大的经济损失。
鳗弧菌在危及水产鱼类的同时，也会通过食物链危害人类健康。
因此，研究由鳗弧菌等弧菌引起的细菌性疾病的相关治疗方法具有重要的意义。
目前在动物细菌性疾病防治上使用抗生素过多，造成药物残留。
破坏环境的同时极大的打击了消费者的信心。
而近些年来卵黄抗体的发展为弧菌病的治疗提供了良好建议。
卵黄抗体，是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体。
当用某种抗原免疫产蛋母鸡时，母鸡经免疫应答后，可从其不断产出的鸡卵黄中得到大量均一高效的卵黄抗体IgY。
它能预防和治疗多种细菌性和病毒性疾病,无任何毒副作用,在很大程度上可替代抗生素和化学合成药物,同时还具有促生长的作用。
卵黄抗体已成为特异性抗体最方便、最廉价的来源，在动物疾病防治上取得了喜人成绩。
本实验的目的是借鉴陆生人、畜、禽相关研究的成功经验，以纯培养的鳗弧菌作为抗原，探讨鳗弧菌卵黄抗体的制备技术,并研究其对人工感染的保护作用，以期对水产鱼类的细菌性疾病提供良好的治疗建议，并为水产鱼类的养殖生产提供指导意义。
二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：基本内容：1、培养鳗弧菌，制作灭活疫苗。
2、用鳗弧菌疫苗对蛋鸡多点注射，经初免和加强免疫后，收集鸡蛋。
3、由收集的鸡蛋纯化卵黄抗体4、检测纯化的卵黄抗体效价；拟解决的问题：借鉴陆生畜禽病原相关研究的成功经验，经多次免疫制备出抗鳗弧菌的高免鸡蛋，建立简易、高效的由鸡蛋纯化鳗弧菌卵黄抗体的技术，建立ELISA鳗弧菌卵黄抗体的技术。
三、研究的方法与技术路线：1、取实验室已分离、鉴定后保存的鳗弧菌菌种,经活化后扩大培养，离心沉淀、用PBS清洗后悬浮、计数；2、用甲醛对鳗弧菌进行灭活，经涂板检测确定灭活即为抗原鳗弧菌卵黄抗体的制备；3、选择健康蛋鸡，用上述抗原多点注射免疫，免疫3-4次；4、收集高免鸡蛋，用水稀释法和硫酸铵沉淀法纯化卵黄抗体；5、用ELISA进行卵黄抗体的效价检测。
技术路线：四、研究的总体安排与进度：2010.10-2010.12 查阅资料，撰写开题报告和综述。
2011.01-2011.02 抗原的制备、蛋鸡免疫。
2011.03-2011.04 抗鳗弧菌卵黄抗体的纯化和效价检测。
2011.04-2011.05 实验数据的整理、分析，撰写论文，结题、答辩。
五、主要参考文献：[1]杨菲菲．卵黄抗体研究进展及应用［J］．现代农业科技，2008，（20）：231－232．[2]王金洛，徐福州．卵黄抗体研究进展［J］．农业新技术，2003，（06）：36－38．[3]张心如，杜干英．卵黄抗体的应用与问题［J］．四川畜牧兽医，1996，（01）：51－52．[4]陈连颐．卵黄抗体的特性、应用及开发前景［J］．中国禽业导刊，2007，24（21）：36－37．[5]易全茂，谢艳霞．鸡卵黄抗体研究进展［J］．动物科学与动物医学，2004，21（02）：44－45．[6]闫佩毅，张立煌．卵黄抗体及其在抗感染中的应用［J］．国际流行病学传染病学杂志，2006，33（06）：406－408．[7]谢献胜，周新民，王锋．免疫鸡卵黄抗体研究进展［J］．中国家禽，2005，27（10）：41－42．[8]朱晓东，陈大健，郭永刚等．卵黄抗体的提纯及应用［J］．家禽科学，2007，（03）：41－43．[9]房祥军，邹晓庭．卵黄抗体的特性及其在仔猪腹泻防治上的应用［J］．中国兽药杂志，2005，（394）：24－27．[10]李沁光，李孟潮，姚金水．用免疫方法防治仔猪黄、白痢效果［J］．福建畜牧兽医，1997，5：7．[11]雷勇，徐有良，李文平．WSSV卵黄抗体的制备及在螯虾中的应用［J］．河北渔业，2006，（05）：15－16．[12]詹丽娥，乔忠，孙世兴．鸡三联蛋黄抗体研制及应用［J］．中国兽医科技，1994，24 （11）：30－31．[13]汪铭书，程安春，陈孝跃．应用高免卵黄抗体防治鸭病毒性肝炎的研究［J］．中国畜禽传染病，1997，5：14－16．[14]张毓金，吕殿红，黄庚明．番鸭花肝病高免卵黄抗体试验初报［J］．广东畜牧兽医科技， 2000(1)：24－25．[15]李肖梁，马有智，方维焕．特异性卵黄抗体添加剂对中华鳖摄食和生长的影响［J］．水产学报，2006，（03）：425－428．[16]周常义，陈晓凤，刘章锦．牛蛙嗜水气单胞菌病的病原研究［J］．集美大学学报（自然科学版）2003，8（4）：317－321．[17]Polson A.Isolation of viral IgG antibodies from yolk of immunizedhens[J]. Immunol Commun,1980,9(5):475.[18]杨帆，张连峰．卵黄抗体的分离提取和纯化方法［J］．中国比较医学杂志，2007，（11）：6－7．[19]kim H, Nakai S.Simple separation of immunoglobulin from egg yolk by ultrafiltration[J] . J FoodSci,1998,63(3):485-490.[20]陈天豹．一步洗脱离子交换色谱分离纯化蛋黄中IgY［J］．福州大学学报，2000，28（2）：8－11．毕业论文文献综述生物技术卵黄抗体的研究进展摘要：卵黄抗体(IgY)是从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，它是一种具有较强免疫功能的蛋白质，目前已被广泛应用于动物疾病的诊断及防治。
本文对卵黄抗体的形成、性质、作用机理、分离提纯方法及其在检测诊断上和疾病防治方面的应用情况进行了综述，可以预见，随着研究的进一步深入，卵黄抗体的应用将不断扩大。
关键词：卵黄抗体；应用；研究进展0 引言卵黄抗体(Egg Yolk Immunoglobauli 简称IgY)指母鸡所产蛋的蛋黄中含有的免疫球蛋白。
卵黄抗体的研究始于19世纪末至20世纪初[1]，自1893年Klemperer首次报道鸡蛋中存在抗体以来,人们对卵黄抗体(IgY)的研究越来越多,认识也越来越深入,应用也日益广泛。
目前它已被广泛地用于许多疾病,尤其是近几年来,在家禽传染病的防治上得到广泛应用。
现阶段在卵黄抗体的形成、生物学特性等方面已研究的比较清楚，并且卵黄抗体作为诊断试剂和防治药物的研究愈来愈受到关注。
本文就卵黄抗体的形成、生物学特性、作用机理、提纯方法以及应用等作一综述。
1 卵黄抗体的形成禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。
当机体受到外来抗原刺激后，产生一系列免疫应答反应，法氏囊内的B 细胞分化成为浆细胞，浆细胞分泌大量特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体[2，3]。
2 卵黄抗体的特性与哺乳动物相比, 产蛋母鸡生产抗体具有快速、成本低、效率高、产量高的特点。
有证据表明, 卵黄原抗体对比哺乳动物原抗体有更好的生物学优势[4]。
IgY在结构上类似于哺乳动物的IgG,但在化学结构上有许多不同点。
IgY的分子量为180kDa,即67-70 kDa的重链和22-30kDa的轻链，沉降系数为7S，等电点接近5.2[5]。
而IgG 分子量为150kDa ,即50 kDa的重链和22～23 kDa的轻链。
IgY由于结构中比IgG重链多了一个恒定区,但却没有IgG特有的铰链区,所以IgY的摆动性、柔韧性下降, 但IgY的分子量较IgG大,所以稳定性较高。
IgY具有较强的耐热、耐酸能力,在pH4～9 的环境中稳定,在65 ℃下可保持活性24h 以上。
与哺乳类IgG相比, IgY有更多的疏水性分子,这恰好使它更适于脂类含量丰富的卵黄环境[6]。
卵黄抗体IgY相对于传统哺乳动物的抗体IgG具有以下优点:（1）IgY不与哺乳动物补体、Fc受体结合，也不与葡萄球菌蛋白A（SPA）或链球菌蛋白G（SPG）结合；IgY 还不与血清中的类风湿因子（RF）结合，因而用IgY 检测可避免假阳性结果，提高免疫学检测的准确性[2]。
（2）产生免疫反应所需的抗原剂量小，由于禽类与哺乳动物在种系发生史上距离较远,IgY 抗体与抗原亲和力高,产生有效免疫应答所需的抗原剂量较小,且不易与哺乳动物的免疫球蛋白发生交叉反应[6]。
（3）每个蛋大约含100mg以上的IgY，一个月可达3g，相当于兔子的10-20倍；卵黄中没有其他的Ig，易于提纯[5]。
（4）在实际生产中，动物的采血不仅对动物本身是极大的应激，而且费时、费工，大规模生产是不切实际的，而利用蛋鸡生产抗体要方便的多[1]。
3 卵黄抗体的作用机理特定病原菌的卵黄抗体能直接黏附于病原菌的细胞壁上，改变病原细胞的完整性，直接抑制病原菌的生长；卵黄抗体可黏附于细菌的菌毛上，使之不能黏附于肠道黏膜上皮细胞；一部分卵黄抗体在肠道消化酶作用下，降解为可结合片段，这些片段含有抗体的可变小肽（Fab）部分，这些小肽很容易被肠道吸收，进入血液后能与特定的病原菌黏附因子结合，使病原菌不能黏附易感细胞而失去致病性，而IgY的稳定区（Fe部分）留在肠内[7]。
4 卵黄抗体的分离、提纯方法卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪，其比例为1：2。
大部分蛋白质都是脂蛋白质，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，只有卵黄球蛋白（α、β、γ）是水溶性的，而IgY是γ卵黄球蛋白。
因此IgY的分离纯化首先需有效地去除卵黄中的脂类，从水溶性蛋白中分离IgY[4]。
4.1 卵黄抗体的粗提近二十几年来, 已建立了许多较为高效而经济的方法, 如聚乙二醇沉淀法、氯仿抽提法、水稀释法、辛酸沉淀法(CA法)等。
4.1.1 聚乙二醇（PEG）沉淀法PEG是非离子型水溶性聚合物,高浓度不引起蛋白质变性,沉淀时间比硫酸铵和乙醇都短,不影响离心处理。
该法最早由Polson 报道[17]。
一般用PBS或TBS作缓冲液将卵黄液稀释5倍,加入3.5%的PEG 6000或硫酸葡聚糖,10 000r/min 低温离心25min后取上清,可得卵黄抗体粗提物。
4.1.2氯仿抽提法Ntakarutimana在15mL的蛋黄液中加入40mL TBS和40mL氯仿,以10 000 r/min低温超速离心25min后保留水层。
中间层再用40mL TBS萃取一遍。
两步得到的水层均为WSF。
有些人还用丙酮作为萃取液。
此法去除脂类比较彻底,上清液澄清透明,抗体回收率高,但上清液中残留有机溶剂,对抗体活性有影响,同时有机溶剂造成的环境污染比较严重,因而此法仅适合实验室少量制备。